저자는 어떤 승인이 없습니다.

1. TTFields In Vitro Application System -베이스 플레이트 및 접시 유지 관리 <ol><li> 흐르는 수돗물에서 접시와 접시 커버를 헹구십시오. 그런 다음 탈 이온수로 헹구고 공기가 마른면이 아래를 향합니다. </li><li> 이전의 실험에서 화학 요법 제 / 약물을 접시에 첨가 한 경우, 각 접시에 5 %의 가벼운 세제 용액을 채우고 밤새도록 두십시오. <ol><li> 접시 안의 세제가 묻지 않도록 흐르는 수돗물에서 철저히 헹구십시오. 접시와 접시 커버를 탈 이온수로 헹구고 공기가 마른면이 아래로 향하게합니다. </li></ol></li><li> 뚜껑이있는 깨끗하고 건조한 접시를 멸균 봉투에 넣습니다. 봉인하고 접시를 아래로 향하게하여 봉투를 고압 증기 멸균기에 넣으십시오. 121 ° C 이하에서 30 분간 오토 클레이브합니다. </li><li> 건식 프로그램에 오토 클레이브를 넣고 오토 클레이브 도어를 열고 30 분 동안 접시를 말립니다. </li><li> 70 % 에탄올로 가볍게 적신 천으로 밑판을 닦으십시오. </li> &lt;/ OL&gt; 2. 실험 설정 참고 :이 프로토콜에서 사용되는 모든 장비 및 재료는 재료 목록에 설명되어 있습니다. 멸균 조건이 유지되는 동안 모든 단계 이하 층류 캐비닛 내부에서 수행되어야한다. <ol><li> 섹션 1에서 설명 된 바와 같이 깨끗하고 멸균 TTFields 요리 및 커버를 준비 가볍게 70 % 에탄올로 적신 천으로 기판을 닦아 낸다. </li><li> 접시에 가볍게 누르면서 상기베이스 플레이트의 핀에 세 접시 잠금 가장자리까지 약 5mm 시계 방향으로 회전하여 기판 상에 덮개와 TTFields 요리를 설치한다. 각 접시의 바닥에 멸균 22 mm의 커버 슬립 (처리 된 플라스틱 또는 유리)를 놓는다. </li><li> 완전 성장 배지에서 세포 현탁액 (U-87 MG 및 F98에 대한 둘 베코 변성 이글 배지를 준비;를 RPMI A2780 및 OVCAR-3]에 기재된 바와 같이 보충 재료 목록). 참고 : CE1 농도는 세포 유형과 실험 기간에 따라 다르며, 80 % -90 %의 합류 세포 성장은 실험이 끝날 때까지 초과되어서는 안됩니다. 주의 : 사람의 세포주는 생물학적 위험을 나타낼 수 있으므로 적절한 안전 조치를 취해야합니다. </li><li> 접시의 뚜껑을 덮고 각 coverslip의 중심에 드롭으로 세포 현탁액 (배증 시간에 따라 72 시간 실험 200 μL에 일반적으로 5,000-20,000 셀) 200 μL를 놓으십시오. </li><li> 세포가 고착 될 때까지 CO2 배양기에서 37 ° C로 인큐베이션하십시오. 이 단계에서 하룻밤 배양이 가능합니다. </li><li> 200 또는 1,000 μL 피펫을 사용하여 액체 방울을 토출하십시오. </li><li> 부드럽게 각 접시를 채우기 위해 완벽한 성장 매체 2 ML 피펫. 멸균 팁을 사용하여 피펫 팅하고 부드럽게 슬라이드 아래에 붙잡힌 기포를 풀어 coverslip 가장자리를 누릅니다. </li><li> 그들의 뚜껑을 가진 접시를 덮고 그 (것)들을 안으로 두십시오TTFields 처리 개시까지 37 ° C에서 CO 2 인큐베이터 IDE. </li></ol> 3. TTFields 응용 프로그램 <ol><li> 냉장 CO 2 인큐베이터에 부착 TTFields 요리베이스 플레이트를 옮긴다. 참고 : 체외 TTFields 응용 프로그램이 열을 발생시킵니다에서; 따라서, 냉장 인큐베이터는 요리의 온난화 보상하기 위해 필요합니다. TTFields 높은 강도는 더 많은 열을 생성하며 배양기 낮은 주위 온도를 (표 1 참조)를 필요로한다. TTFields 애플리케이션 인큐베이터 온도는 18-30 ℃의 범위에있을 때, 임상 적 TTFields 강도를 얻을 수있다. </li><li> 베이스 플레이트에 플랫 케이블의 암 커넥터를 연결합니다. 에 TTFields 발생기를 전환합니다. </li><li> 생체 응용 시스템 소프트웨어의 TTFields를 시작하고 실험 설정을 선택합니다. <ol><li> 새로운 실험을 정의합니다. 특급의 이름을 입력컴퓨터 화면의 소프트웨어 사용자 인터페이스에서 실험 주체와 실험자를 선택합니다. 각 접시 또는베이스 플레이트의 주파수 및 목표 온도를 조정하십시오. </li></ol></li><li> 소프트웨어를 사용하여 TTFields 응용 프로그램을 시작하십시오. </li><li> 모든 요리가 제대로 연결되고 모니터에 하늘색으로 표시되는지 확인하십시오. 접시에 빨간색 프레임이 원을 그리면 (제대로 연결되어 있지 않음을 의미) 부드럽게 아래로 누르고 연락처가 복원되고 접시가 하늘색으로 나타날 때까지 앞뒤로 천천히 회전합니다. </li><li> TTFields 체외 진단 시스템을 최대 24 시간 동안 작동 상태 로 두십시오. </li><li> 실험이 종점에 도달하면 소프트웨어에서 END EXPERIMENT 버튼을 클릭하여 실험을 중지하고 5 단계로 진행합니다. 그렇지 않은 경우 PAUSE 실험을 클릭합니다. </li><li> 베이스 플레이트에서 플랫 케이블 커넥터를 분리하십시오. 인큐베이터의 접시로 바닥 판을 층류 캐비닛으로 옮긴다. </li><li> 모든 접시에 매체를 넣으십시오.ES마다 24 시간 및 냉장 인큐베이터로 기판을 반환. 플랫 케이블을 사용하여 발생기에베이스 플레이트를 연결합니다. 계속 버튼을 클릭하여 실험을 계속합니다. </li></ol> 4. 제어 샘플 참고 : TTFields 응용 프로그램을 제외한 TTFields 처리 된 세포와 유사한 조건에서 대조군 세포를 성장. <ol><li> 동일한 서스펜션과 TTFields 처리 된 샘플을 도금에 사용되는 유사한 표면 플레이트 대조 시료. </li><li> 37 ℃에서 CO2 인큐베이터에서 제어 요리를 놓는다. </li><li> 요리의 매체에게 TTFields 처리 접시 매체 환경에 맞는 24 시간마다 교체합니다. </li></ol> 5. 실험 종료 <ol><li> 최종 실험을 클릭하면, 시스템에서 모든 레코드를 검색하기 위해 소프트웨어를 기다리고 컴퓨터에 기록을 저장합니다. </li><li> 온도, 전류, 저항 로그 F를 검토 보고서 버튼을 사용하여각베이스 플레이트 세틸 모든 음식이 실험 계획에 따라 처리되었는지 확인한다. 참고 : 모든 보고서 및 로그 실험이 끝난 후 컴퓨터에 저장되어 언제든지 검토 할 수 있습니다. </li><li> TTFields 생성기를 끕니다. </li><li> 상기베이스 플레이트로부터 플랫 케이블을 분리하고 배양기로부터 제거한다. </li><li> 아래 세라믹 접시 눌러 제거하고베이스 플레이트에서 잠금을 해제 시계 반대 방향으로 접시를 돌립니다. </li><li> 층류 캐비닛에 요리를 가지고 무균 커버 슬립을 제거합니다. 상기 검사 및 평가를위한 신선한 배지 또는 인산 완충 식염수 (PBS)를 함유하는 페트리 접시를 멸균로 전송. </li></ol> TTFields 효과의 평가 6 참고 : TTFields &#39;효과는 여러 가지 방법으로 측정 할 수있다. 처리되지 않은 대조군 세포에 처리 한 세포를 비교하려면 다음 방법 중 하나 이상을 사용합니다 : <ol><li> 셀 수<ol><li> 각 coverslip - 포함 접시에서 매체 / PBS를 제거합니다. </li><li> 각 접시에 0.25 % 트립신 / EDTA 0.5 ML을 추가하고 CO 2 배양기에서 37 ° C에서 최대 10 분 ( 즉, 세포가 coverslip 표면에서 분리 시작할 때까지)에 품어. </li><li> 트립신을 중성화하고 위아래로 부드럽게 pipetting하여 세포를 다시 일시 중지 완전한 성장 매체 0.5 ML을 추가합니다. </li><li> 낮은 세포 농도 ( 즉, 약 20,000 세포 / ML) 계산과 호환되는 표준 세포 계수 기술을 사용하여 세포를 세십시오. </li></ol></li><li> 클로 론젠 지아 분석법 <ol><li> 신선한 완전한 성장 매체의 2 ML을 포함하고 새로운, 살균 페트리 접시 또는 6 잘 접시에 각 접시에서 세포 (접시 당 100-500 셀)의 비슷한 번호를 접시. </li><li> ~ 50 세포로 구성된 식민지가 형성 때까지 1-3 주 (각 세포 라인의 속성에 따라) 37 CO 2 배양기에서 품어 ° C. 세포 평가광학 현미경에 의한 식민지 당 번호입니다. </li><li> 매체를 제거하고 PBS로 씻어. </li><li> PBS를 제거하고 빙냉 메탄올 (1ml)에 추가한다. 10 분 이상 -20 ° C에서 품어. </li><li> 메탄올을 제거합니다. </li><li> 크리스탈 바이올렛 용액 (0.1 % w / 물 25 % V / V의 메탄올 V)를 첨가하고, 20 분 동안 배양한다. 주의 : 크리스탈 바이올렛은 잠재적 인 발암 물질; 크리스탈 바이올렛과 함께 작업하는 동안 장갑을 사용합니다. </li><li> 상기 크리스탈 바이올렛을 분리, 탈 이온수로 3 회 세척하고, 공기 건조. </li><li> 각각의 접시에 형성 식민지를 계산합니다. </li></ol></li></ol>

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Porat Yaara, Giladi Moshe, Schneiderman S. Rosa, Blot Roni, Shteingauz Anna, Zeevi Einav, Munster Mijal, Voloshin Tali, Kaynan Noa, Tal Orna 및 Kirson D. Eilon D는 이스라엘의 Novocure Ltd에서 유급 직원입니다. Weinberg Uri는 Luzern의 Novocure GmbH의 유급 직원입니다. Yoram Palti는 NY의 Novocure Ltd의 주주입니다.

TTFields는 1 , 2 , 8 , 9 , 10 , 17 번 전기장을 적절하게 조정 한 지속적인 응용을 바탕으로하는 새로운 항 종양 치료법입니다. 항 종양 효능을 극대화하는 것은 모든 치료 양식에있어 바람직한 결과입니다. 따라서 암세포 성장 억제의 모든 추가 백분율에 대한 &quot;싸움&quot;은 환자의 장기적인 임상 결과에 유의 한 영향을 미칠 수 있습니다. 이것은 TTFields 응용 프로그램의 필수 연속 특성 및 그 결과 누적 효과 때문입니다. TTFields 적용 극대화는 여러 가지 방법으로 달성 할 수 있습니다. (1) 전계 강도를 높이고 (1), (2) 치료 기간을 길게하십시오 ( 5) , (3) 가장 효과적인 조합을 찾는 것최적의 주파수 1 , 2 , 4 , 6 , 7을 정의하는 다른 치료 양식 18 , 19 , (4)를 사용하십시오. 종양 부위의 전계 강도를 최대화하는 것은 환자 피부에서 어레이의 위치를 ​​최적화함으로써 달성된다; 이것은 환자의 개별적인 해부학에 근거하여 종양에 최대 전계 강도를 전달할 수있게 해줍니다. 치료 기간 연장은 대부분 환자의 치료법 준수에 달려 있습니다 (하루 18 시간 이상). 다른 치료법과 적절한 조합을 찾고 최적의 빈도를 결정하는 것은 현재 TTFields 치료 결과에 대한 유효성이 입증 된 마커가 없기 때문에 시험 관내 결과에 크게 의존합니다. 이 작업에서 우리는 실험적 procedures는 TTFields 체외 응용 시스템을 이용하여 암 세포주에 대한 최적 TTFields 주파수를 결정하는 데 필요한. 여기에 설명 된 방법은 잠재적 TTFields 다른 암 치료 방법 (예를 들어, 화학 요법 제 또는 방사선)의 조합을 선별하고, 각 특정 조합 치료 TTFields 관리에 대한 최적의 주파수를 결정하는 데 사용될 수있다. 이전의 간행물에 맞춰, 여기 나타낸 결과는 양쪽 교종 세포 및 난소 암 세포의 치료를위한 최적의 주파수가 200 kHz의 1, 7임을 보여준다. 본 연구에서 우리는 클론 원성 잠재 성을 감소시키는 최적 TTFields 주파수가 최대 세포 독성 효과를 유도하는 주파수와 관련되는 것을 처음으로 보여 주었다. 이 연구에서 사용되는 방법은 TTFields의 영향을 정량화하는 (즉, 세포 독성 및 클론 원성)을치료 결과를 평가할 수있는 가능한 많은 표준 종료점 분석 중 단지 2 가지만을 사용하십시오. 추가 치료 결과 검사는 다음을 포함합니다 : (1) 고정, 염색 및 세포 내 구조의 시각화를 위해 현미경 위에 세포가 도금되는 coverslips 장착; (2) TTFields 자체 또는 새로운 일회용 접시에 coverslip을 옮긴 후에 단백질 및 RNA 추출물의 분석을 수행합니다. 및 (3) 유동 세포 계측법 분석을 위해 염색 된 세포를 트립신 처리한다. 주의 깊은 실험 계획은 TTField를 전달한 후 치료 결과에 영향을 줄 것입니다. 중요한 단계는 민감한 세포주에 적용될 때 너무 높은 강도로 인해 실험을 통해 세포 증식이 지나치게 성장하지 않고 적절한 전계 강도를 사용하도록 보장하는 것입니다. 최적의 주파수. 반대로, TTField는 매우 낮은 강도로 적용됩니다.덜 민감한 세포주에서는 고유 한 변이에 의해 가려 질 수있는 작은 영향을 초래할 수 있습니다. 치료 로그는 실험 전반에 걸쳐 각 접시에 대한 온도 안정성, 전류 및 저항에 대한 중요한 정보를 조사해야합니다. 치료 시작시 결함있는 접시를 교체하고 원하는 치료 매개 변수를 충족시키지 못한 접시에서 데이터를 제외하면 복제 간 변동성을 최소화 할 수 있습니다. 요약하면, TTFields는 임상 설정 8 , 9 , 10 에서 이미 효능과 안전성을 입증 한 새로운 항암 치료 요법입니다. 여기에 설명 된 프로토콜을 사용하여 시험관 환경 에서 TTField를 테스트하면 임상 환경에서 TTFields 치료 매개 변수를 최적화 할 수 있으며 기본 메커니즘에 대한 이해를 넓힐 수 있습니다.

종양 치료 필드 (TTFields)은 교 모세포종의 홍반 및 잠재적으로 다른 암 종류의 치료를위한 항 유사 분열 양상이다. 필드는 암 (1, 2)의 영역에 교번 전계를, 저 강도의 연속 프로그램 (1-3 V / cm) 중간 주파수 (100 내지 500 kHz에서)를 통해 전달된다. 시험 관내 및 생체 내 TTFields 애플리케이션은 다양한 암 세포주의 성장 및 여러 동물 종양 모델 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7에서 종양의 진행을 모두 억제하는 것으로 나타났다. 아교 모세포종과 비소 세포 폐암을 포함하여 고형 종양 환자에서 파일럿 임상 시험 더 큰 무작위 연구 demonst이연속 TTFields 응용 프로그램 8, 9, 10의 안전성과 효능을 평가. TTFields의 효능 인 것으로 밝혀졌다 : (1) 주파수 별 상이한 기원 1, 2, 4, 5, 6에서 세포주의 세포 수의 최대 감소로 이어지는 특정 최적의 주파수를 갖는, 7; (2) 전계 강도 의존성 약 1 V / cm보다 더 강력한 강도 1, 2, 7, 11 활동 최소 임계치와; 처리 시간은 5 이상이었을 때 (3) 개선; (4) 더 높은 2 방향 TTFields 각 OTH 수직으로인가 될 때ER, 단일 방향 (1)로부터인가 전계에 비해. 위의 연구 결과를 바탕으로, TTFields 종양 침대 (12), (13)의 전기장 강도를 극대화하기 위해 환자의 피부에 국소 트랜스 듀서 어레이의 2 개 세트를 사용하여 오랜 기간에 대한 환자에게 적용 할 수 있습니다. 체외에서 암 세포에 TTFields의 효과를 공부하는 것은 현재 특정 종양 유형에 적용 할 수있는 최적의 주파수를 결정하는 유일한 방법을 제공합니다. 최적의 주파수에 대한 테스트는 세포 배양에 (RMS) 제곱 평균 100 ~ 500 kHz의 범위의 상이한 주파수의 애플리케이션에 대한 최대 3 V / cm의 강도를 루트로 할 수있는 장치가 필요하다. TTFields 응용 프로그램이 열을 발생로서, 응용 시스템은 온도에 엄격한 제어를 유지하면서 과도한 열을 방출 할 수있는 능력이 필요합니다. 여러 가지 장치 WER수년에 걸쳐 개발 된 전자는 세포 배양 1, 2, 5, 14, 15, 16 TTFields 응용 프로그램을 허용합니다. 이러한 모든 장치에서 사용되는 전극 등의 전자 전극 표면에서 교환 매체 (1)에 유독 금속 이온의 방출과 같은 전도성 전극의 사용과 관련된주의 사항을 방지하기 위해 절연 하였다. 시험 다양한 TTFields 응용 시스템의 주요 차이점은, 예를 들어 절연체 (2), 14, 15, 16의 얇은 필름 또는 고 유전율 재료로 절연 된 금속 배선으로 이루어지는 하나의 전극 (함께 사용될 전극 절연막의 유형 납 마그네슘 나이 오 베이트 - 납 titanate (PMN-PT)) 6 . 절연 와이어 전극은 TTField 애플리케이션에 비교적 간단하고 비용 효율적인 솔루션을 제공하지만 1V / cm 임계 값 이상의 유효 전계 강도를 달성하고 셀 도금에 사용할 수있는 표면에 필요한 고전압, 전극 사이의 거리가 상대적으로 작기 때문이다. 고 유전 상수 물질을 사용하여 절연 된 전극을 기반으로 한 시스템은 특별한 설계 및 제조 기능을 필요로하지만, 고전압을 필요로하지 않으며 전극 사이의 세포 성장을위한보다 넓은 영역을 제공 할 수 있습니다. 이 연구 에서 사용 된 TTFields in vitro 응용 시스템은 후자의 시스템 계열에 속하며 핵심 단위는 고유 전율 세라믹 (PMN-PT)으로 구성된 페트리 접시 (TTFields dish, 그림 1 참조)입니다. 두 쌍의 전극이 외벽에 수직으로 인쇄됩니다.2 방향에서 전기장을 가할 수 있도록 TTFields 접시가 있습니다. 전극은 정현 파형 발생기와 증폭기에 연결되어 50-500 kHz의 주파수 범위에서 TTField를 적용 할 수 있습니다. 과도한 열을 분산시키기 위해, TTFields 요리는 접시 온도의 지속적인 모니터링과 시스템에 의해 적용된 전압 조정을 사용하여 수행되는 중온 조절과 함께 냉각 된 인큐베이터 내부에 보관됩니다. 실제로, 인큐베이터를보다 낮은 온도로 설정하면, 시스템은 접시 내의 목표 온도가 달성 될 때까지 전압을 증가시키기 때문에,보다 높은 전계 강도를 유도 할 것이다. 접시 내의 온도와 인큐베이터 온도의 차이는 온도 구배에 따라 약간의 증발을 유발할 수 있습니다. 따라서 적절한 성장 조건을 유지하기 위해 매 24 시간마다 배지를 교체해야합니다. 아래의 프로토콜셀에서의 최대 감소를 계산하고 생존 한 세포의 가능성의 감소가 달성된다 콜로니 형성하기 때문에 암 세포에 TTFields 주파수의인가를 최적화하기 위해 실험 절차를 설명한다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>inovitro system and software</td>
			<td>Novocure</td>
			<td>ITG1000 and IBP1000</td>
			<td>Each unit contains 1 TTFields generator, 1 base plate, 8 TTFields dishes with covers and 1 flat cable.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilization bags</td>
			<td>Westfield medical</td>
			<td>24882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic cover slides</td>
			<td>Thermo Scientific (NUNC)</td>
			<td>174977</td>
			<td>Pre treated and sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cover slides</td>
			<td>Thermo Scientific (Menzel-Gl&#228;ser)</td>
			<td>CB00220RA1</td>
			<td>Sterilize if necessary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium</td>
			<td>Biological Industries (Israel)</td>
			<td>01-055-1A</td>
			<td>Warm in 37 &#176;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21875-034</td>
			<td>Warm in 37 &#176;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Biological Industries (Israel)</td>
			<td>04-007-1A</td>
			<td>Warm in 37 &#176;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200mM (100X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep (10000 U/mL Penicillin, 10000 &#181;g/mL Streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate solution 100 mM&#160;</td>
			<td>Biological Industries (Israel)</td>
			<td>03-042-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes buffer 1M</td>
			<td>Biological Industries (Israel)</td>
			<td>03-025-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insuline solution from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10516-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% Trypsin/EDTA</td>
			<td>Biological Industries (Israel)</td>
			<td>03-050-1B</td>
			<td>Warm in 37 &#176;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.06009.2511</td>
			<td>Cool to -20 &#176;C in the freezer before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal violet</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>120M1445</td>
			<td>Harmful. Prepare 0.1% w/v crystal violet solution in 25% Methanol 75% water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light detergent</td>
			<td>Alcononx</td>
			<td>242985</td>
			<td>Prepare 5% solution in water, or according to manufacurer&#39;s instrutions.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Biological Industries (Israel)</td>
			<td>02-023-1A</td>
			<td>Without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A2780</td>
			<td>ECACC</td>
			<td>93112519</td>
			<td>Grow in RPMI 1640 supplemented with FBS (10%), pen/strep (100 U/mL / 100 &#181;g/Ml), sodium pyruvate (1 mM) and Hepes buffer (12mM).&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F98</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2397</td>
			<td>Grow in&#160; Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium supplemented with FBS (10%), pen/strep (100 U/mL / 100 &#181;g/Ml), sodium pyruvate(1 mM) and glutamine (2mM).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovcar-3</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-161</td>
			<td>Grow in RPMI 1640 supplemented with FBS (20%), pen/strep&#160; (100 U/mL / 100 &#181;g/Ml), sodium pyruvate (1 mM), Hepes buffer (12 mM) and insuline (10 &#181;g/mL).&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-87 MG</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-14</td>
			<td>Grow in&#160; Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium supplemented with FBS (10%), pen/strep (100 U/mL / 100 &#181;g/Ml), sodium pyruvate(1 mM) and glutamine (2mM).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>refrigirated CO2 incubator</td>
			<td>CARON</td>
			<td>7404-10-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar flow cabinet</td>
			<td>ADS Laminair</td>
			<td>Bio12 and VSM12</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determining the optimal inhibitory frequency for cancerous cells using tumor treating fields (ttfields)

종양 치료 필드 (TTFields)는 수백 KHz의 주파수 범위에서 저 강도 (1-3 V / cm)의 교류 전계를 연속적이고 비 침습적으로 적용하여 효과적인 치료 방법입니다. 조직 배양에서 TTField의 연구는 높은 유전 상수 (≥ 5,000)를 갖는 세라믹 페트리 접시에 다양한 주파수와 강도의 전기장을 적용 할 수있는 TTFields in vitro 응용 시스템을 사용하여 수행됩니다. 세라믹 페트리 접시의 바닥에있는 coverslips에 도금 암세포 라인은 세포 카운트 및 clonogenic assays와 같은 치료 결과 테스트를 용이하게하기 위해 다양한 주파수에서 두 개의 직각 방향으로 전달되는 TTField에 적용됩니다. 이 보고서에 제시된 결과는 난소 및 신경 교종 세포 모두에서 세포 수와 clonogenic assay와 관련하여 TTField의 최적 빈도가 200kHz임을 보여줍니다.

<html> 상이한 주파수를 스캔 TTFields인가 후의 결과는 이러한 특수 높은 벽 TTFields 내부에 배치 된 Boyden 챔버를 이용하여 침입하는 세포의 수의 변화에 ​​세포 수, 비색 분석법, 클론 원성 분석 및 검사 등 다양한 분석에 기초하여 정량화 될 수있다 세포 배양 접시. 미리 정해진 세포 배가 시간에 따라 신중하게 실험 계획은 세포 따라서 치료 결과를 극대화 치료 기간 동안 유사 분열 이벤트의 최대 수에 도달 할 수 있습니다. (즉, 래트 신경 교종 세포 7 및 F-98 (도 2a 즉, 인간 난소 암 세포)도 2는 평균 세포 수 (즉, 세포의 수) 및 A2780의 클론 원성 분석을위한 전형적인 주파수 스캔 결과를 나타낸다;&quot;&gt;도 2B) 1 (두 방향 TTFields 처리 주파수 범위 : 100 내지 500 ㎑의, RMS는 1.7 V / cm, 및 인큐베이터 온도 :. 18 ° C) 결과를 보여주기 모두에서의 세포 수의 현저한 감소는 주파수를인가 (다중 비교 단방향 ANOVA) 테스트 한 모든 세포주를 200 kHz에서의 최대 감소. 클론 원성 포텐셜 최대 감소로 이어지는 최적 주파수는 모두 A2780 및 F98 세포 (도 2B와 C)에서 동일했다 . 셀 번호, 각 주파수에서의 클론 원성 효과 사이의 피어슨 상관 계수는 0.967 (P = 0.002) 각각 A2780 및 F98에 대한 0.755 (p = 0.083)가 있었다. 도 3은 OVCAR-3에 대한 평균 세포 수에 대한 주파수 스캔 결과를 보여준다 (즉, 인간 난소 암 세포가도 3A) 및 U-87 MG (즉, 인간의 신경 교종 세포;도 3b) 세포는 다양한 농도에서 TTFields의 양방향 처리 (RMS : 1.7, 1.3, 및 1.0 V / cm 각각과 인큐베이터 온도 : 18 ° C, 24 ° C, 28 ° C 각각). 효과는 세포를 처리했을 때 얻은 결과에 비해 상대적으로 작다 : 결과는 여전히 1.3 V / ㎝의 TTFields 치료 (24 ° C 배양기 온도) 이후 OVCAR-3 세포 수의 현저한 감소가있을 것으로 보여 1.7 V / cm로 (인큐베이터 온도 : 18 ° C). U-87 MG 세포를 1.0 V / ㎝의 TTFields 처리 (인큐베이터 온도 : 28 ℃) 1.7 V / cm로 처리 할 때와 같은 세포 수의 감소에 비슷한 경향을 보여, 아직 그 효과는 더 낮은 농도에서 유의하지 않았다 . <img alt="그림 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55820/55820fig1.jpg" /> 으로 나뉘어진다전자 1. TTFields 요리는 기판 부 상에 설치된 평면 TTFields 제어 케이블에 접속되었다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55820/55820fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55820/55820fig2.jpg" /> 그림 2. (A) A2780 및 (B) F98 세포 최적 TTFields 억제 주파수의 결정에 대한 주파수 스캔. 셀은 서로 다른 주파수의 TTFields (1.7 V / cm 및 100 ~ 500 kHz로)로 72 시간 동안 처리 하였다. TTFields 치료의 효과는 세포 수 및 클론 원성 분석을 사용하여 추정 하였다. 화살표는 최적의 주파수를 나타낸다. 결과는 시험 주파수마다 적어도 6 회 반복에 기초하여 평균 ± SD를 나타낸다. (C)에 클론 원성 (S)의 대표 이미지<html> 다양한 주파수에서 TTFields 처리 다음 A2780 세포의 urvival. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55820/55820fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55820/55820fig3.jpg" /> 그림 3. (A) 및 OVCAR-3 (B)에 대한 최적 TTFields 억제 주파수의 결정에 대한 주파수 스캔 U-87 MG 세포. 셀은 서로 다른 주파수 (100 내지 500 kHz에서) 및 강도의 TTFields로 72 시간 동안 처리 하였다 (OVCAR-3 : 1.3 내지 1.7 V / cm, U-87 MG 1.0 1.7 V / cm)를. TTFields 치료의 효과는 세포 수를 사용하여 추정되었다. 화살표는 최적의 주파수를 나타낸다. 결과는 각 시험 주파수에서 적어도 6 회 반복에 기초하여 평균 ± SD를 나타낸다.페이지 &quot;target =&quot;_ blank &quot;&gt; 검색이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 주위 온도를 인큐베이터 </td><td> 예상 TTFields 강도 </td></tr><tr><td> (기음) </td><td> (V / cm의 RMS) </td></tr><tr><td> (18) </td><td> 1.62 </td></tr><tr><td> (19) </td><td> 1.55 </td></tr><tr><td> (20) </td><td> 1.48 </td></tr><tr><td> (21) </td><td> 1.41 </td></tr><tr><td> (22) </td><td> 1.33 </td></tr><tr><td> (23) </td><td> 1.26 </td></tr><tr><td> (24) </td><td> 1.19 </td></tr><tr><td> (25) </td><td> 1.12 </td></tr><tr><td> (26) </td><td> 1.04 </td></tr><tr><td> (27) </td><td> 0.97 </td></tr><tr><td> (28) </td><td> 0.9 </td></tr><tr><td> (29) </td><td> 0.83 </td></tr><tr> &lt;td&gt; 30 </td><td> 0.76 </td></tr></tbody></table> 표 1. TTFields 요리 내부의 인큐베이터 주변 온도 및 예상되는 TTField 강도.

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Determining the Optimal Inhibitory Frequency for Cancerous Cells Using Tumor Treating Fields TTFields

종양 치료 필드 (TTFields)은 낮은 강도, 중간 주파수, 전기장을 교류의 연속적인 비 관혈적 애플리케이션을 통해 전달되는 효과적인 항암 치료 방법이다. TTFields 체외 응용 시스템을 이용하여 세포주 TTFields 애플리케이션 세포 수의 높은 감소를 유도하는 최적의 주파수의 결정을 허용한다.

필드를 치료 종양을 사용하여 암 세포에 대한 최적의 억제 주파수 (TTFields를) 결정

Tumor Treating Fields (TTFields) are an effective treatment modality delivered via the continuous, noninvasive application of low-intensity (1-3 V/cm), ...

determining-optimal-inhibitory-frequency-for-cancerous-cells-using

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Determining the Optimal Inhibitory Frequency for Cancerous Cells Using Tumor Treating Fields (TTFields)

14.8K 조회수.  Novocure Ltd., Haifa, Israel.  종양 치료 필드 (TTFields)은 낮은 강도, 중간 주파수, 전기장을 교류의 연속적인 비 관혈적 애플리케이션을 통해 전달되는 효과적인 항암 치료 방법이다. TTFields 체외 응용 시스템을 이용하여 세포주 TTFields 애플리케이션 세포 수의 높은 감소를 유도하는 최적의 주파수의 결정을 허용한다. 

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Capture and Release of Viable Circulating Tumor Cells from Blood

We demonstrate a method for size based capture of viable circulating tumor cell (CTC) from whole blood, along with the release of these cells from chip for downstream analysis and/or culture. The strategy employs the use of a novel Parylene C membrane slot pore microfilter to capture CTC and a coating of poly (N-iso-propylacrylamide) (PIPAAm) for thermoresponsive viable release of the captured CTC. The capture of live cells is enabled by leveraging the design of a slot pore geometry with specific dimensions to reduce the shear stress typically associated with the filtration process. While the microfilter exhibits a high capture efficiency, the release of these cells is non-trivial. Typically, only a small percentage of cells are released when techniques such as reverse flow or cell scraping are used. The strong adhesion of these epithelial cancer cells to the Parylene C membrane is attributable to non-specific electrostatic interaction. To counteract this effect, we employed the use of PIPAAm coating and exploited its thermal responsive interfacial properties to release the cells from the filter. Blood is first filtered at room temperature. Below 32 &#176;C, PIPAAm is hydrophilic. Thereafter, the filter is placed in either culture media or a buffer maintained at 37 &#176;C, which results in the PIPAAm turning hydrophobic, and subsequently releasing the electrostatically bound cells.

A protocol to utilize a poly(N-iso-propylacrylamide) (PIPAAm) coated microfilter for effective capture and thermoresponsive release of viable circulating tumor cells (CTC) is presented. This method allows capture of CTC from patients&#39; blood and subsequent release of viable CTC for downstream off-chip culture, analyses and characterization.

캡처 및 혈액에서 실행 가능한 순환 종양 세포의 릴리스

We demonstrate a method for size based capture of viable circulating tumor cell (CTC) from whole blood, along with the release of these cells from chip ...

연구

암 연구학

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the context of a whole organism. Sophisticated techniques to generate genetic mosaics facilitate induction of visually marked, genetically defined clones surrounded by normal tissue. The clones can be analyzed through diverse molecular, cellular and omics approaches. This study describes how to generate fluorescently labeled clonal tumors of varying malignancy in the eye/antennal imaginal discs (EAD) of Drosophila larvae using the Mosaic Analysis with a Repressible Cell Marker (MARCM) technique. It describes procedures how to recover the mosaic EAD and brain from the larvae and how to process them for simultaneous imaging of fluorescent transgenic reporters and antibody staining. To facilitate molecular characterization of the mosaic tissue, we describe a protocol for isolation of total RNA from the EAD. The dissection procedure is suitable to recover EAD and brains from any larval stage. The fixation and staining protocol for imaginal discs works with a number of transgenic reporters and antibodies that recognize Drosophila proteins. The protocol for RNA isolation can be applied to various larval organs, whole larvae, and adult flies. Total RNA can be used for profiling of gene expression changes using candidate or genome-wide approaches. Finally, we detail a method for quantifying invasiveness of the clonal tumors. Although this method has limited use, its underlying concept is broadly applicable to other quantitative studies where cognitive bias must be avoided.

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

This protocol demonstrates how to generate fluorescently marked, genetically defined clonal tumors in the Drosophila eye/antennal imaginal discs (EAD). It describes how to dissect the EAD and brain from the third instar larvae and how to process them to visualize and quantify gene expression changes and tumor invasiveness.

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a better understanding of tumor heterogeneity and thus facilitate the selection of patients for personalized treatment. However, this is hampered because of the rarity of CTCs. We present an innovative approach for sampling a high volume of the patient blood and obtaining information about presence, phenotype, and gene translocation of CTCs. The method combines immunofluorescence staining and DNA fluorescent-in-situ-hybridization (DNA FISH) and is based on a functionalized medical wire. This wire is an innovative device that permits the in vivo isolation of CTCs from a large volume of peripheral blood. The blood volume screened by a 30-min administration of the wire is approximately 1.5-3 L. To demonstrate the feasibility of this approach, epithelial cell adhesion molecule (EpCAM) expression and the chromosomal translocation of the ALK gene were determined in non-small-cell lung cancer (NSCLC) cell lines captured by the functionalized wire and stained with an immuno-DNA FISH approach. Our main challenge was to perform the assay on a 3D structure, the functionalized wire, and to determine immuno-phenotype and FISH signals on this support using a conventional fluorescence microscope. The results obtained indicate that catching CTCs and analyzing their phenotype and chromosomal rearrangement could potentially represent a new companion diagnostic approach and provide an innovative strategy for improving personalized cancer treatments.

We present a new approach to characterize tumor cells. We combined immunofluorescence with DNA fluorescent-in-situ-hybridization to evaluate cells captured by a functionalized medical wire capable of in vivo enriching CTCs directly from patient blood.

순환 종양 세포를 캡처에 대 한 의료 와이어를 사용 하 여 종양 세포의 특성: 면역 형광 DNA 물고기 기반으로 3 차원 접근

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including osteosarcoma--one of the most frequent primary non-hematologic malignancies in the childhood and adolescence. Therefore, LFS provides an ideal model to study this malignancy. Taking advantage of iPSC methodologies, LFS-associated osteosarcoma can be successfully modeled by differentiating LFS patient iPSCs to mesenchymal stem cells (MSCs), and then to osteoblasts--the cells of origin for osteosarcomas. These LFS osteoblasts recapitulate oncogenic properties of osteosarcoma, providing an attractive model system for delineating the pathogenesis of osteosarcoma. This manuscript demonstrates a protocol for the generation of iPSCs from LFS patient fibroblasts, differentiation of iPSCs to MSCs, differentiation of MSCs to osteoblasts, and in vivo tumorigenesis using LFS osteoblasts. This iPSC disease model can be extended to identify potential biomarkers or therapeutic targets for LFS-associated osteosarcoma.

Here, we present a protocol for the generation of induced pluripotent Stem Cells (iPSCs) from Li-Fraumeni Syndrome (LFS) patient derived fibroblasts, differentiation of iPSCs via mesenchymal stem cells (MSCs) to osteoblasts, and modeling in vivo tumorigenesis using LFS patient-derived osteoblasts.

Li Fraumeni 증후군 환자에서 파생 된 유도 만능 줄기 세포를 사용 하 여 다리를 모델링

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as tumors. Because digital polymerase chain reactions (PCR) enable the precise quantification of DNA copy number variants, they are becoming an essential tool for detecting rare genetic variations, such as drug-resistant mutations. It is expected that molecular diagnoses using digital PCR (dPCR) will be available in clinical practice in the near future; thus, how to efficiently conduct dPCR with human genetic material is a hot topic. Here, we introduce a method to detect Adenomatous polyposis coli (APC) somatic mosaicism using dPCR with the chip-in-a-tube format, which allows eight dPCR reactions to be simultaneously conducted. Care should be taken when filling and sealing the reaction mixture on the chips. This article demonstrates how to avoid the over- and underestimation of positive partitions. Furthermore, we present a simple procedure for collecting the dPCR product from the partitions on the chips, which can then be used to confirm the specific amplification. We hope that this methods report will help promote the dPCR with the chip-in-a-tube method in genetic research.

Digital polymerase chain reaction (PCR) is a useful tool for the high-sensitivity detection of single nucleotide variants and DNA copy number variants. Here, we demonstrate key considerations for measuring rare variants in the human genome using digital PCR with the chip-in-a-tube format.

튜브에 칩 형식을 사용 하 여 산발적 인 가족 용 대 환자에 있는 유전 변이 대 한 디지털 중 합 효소 연쇄 반응 분석 결과

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

The Clinical Application of Tumor Treating Fields Therapy in Glioblastoma

Glioblastoma is the most common and lethal form of brain cancer, with a median survival of 15 months after diagnosis and a 5 year survival rate of only 5% with current standard of care. Tumors often recur within 9 months following initial surgery, radiation and chemotherapy, at which point treatment options become limited. This highlights the pressing need for the development of better therapeutics to prolong survival and increase the quality of life for these patients.
Tumor Treating Fields (TTFields) therapy was developed to take advantage of the effect of low frequency alternating electrical fields on cells for cancer therapy. TTFields have been demonstrated to disrupt cells during mitosis and slow tumor growth. There is also growing evidence that they act through stimulating immune responses within exposed tumors. The advantages of TTFields therapy include its noninvasive approach and increased quality of life compared to other treatment modalities such as cytotoxic chemotherapies. The Food and Drug Administration approved TTFields therapy for the treatment of recurrent glioblastoma in 2011 and for newly diagnosed glioblastoma in 2015. We report on the effects of TTFields during mitosis, the results of electric fields modeling, and proper transducer array placement. Our protocol outlines the clinical application of TTFields on a patient post-surgery, using the second-generation device.

Glioblastoma is the most common and aggressive primary brain malignancy in adults, with most tumors recurring after initial treatment. Tumor Treating Fields (TTFields) therapy is the newest treatment modality for glioblastoma. Here, we describe the proper application of TTFields-transducer arrays on patients and discuss theory and aspects of treatment.

종양 세포종 필드 치료 치료의 임상 적용

Glioblastoma is the most common and lethal form of brain cancer, with a median survival of 15 months after diagnosis and a 5 year survival rate of only 5% ...

Measuring Bone Remodeling and Recreating the Tumor-Bone Microenvironment Using Calvaria Co-culture and Histomorphometry

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength and flexibility and allows it to fulfill its functions. Bone is continuously exposed to a variety of stimuli, which in pathological conditions can deregulate bone remodeling. To study bone biology and diseases and evaluate potential therapeutic agents, it has been necessary to develop in vitro and in vivo models.
This manuscript describes the dissection process and culture conditions of calvarias isolated from neonatal mice to study bone formation and the bone tumor microenvironment. In contrast to in vitro and in vivo models, this ex vivo model allows preservation of the three-dimensional environment of the tissue as well as the cellular diversity of the bone while culturing under defined conditions to simulate the desired microenvironment. Therefore, it is possible to investigate bone remodeling and its mechanisms, as well as the interactions with other cell types, such as the interactions between cancer cells and bone.
The assays reported here use calvarias from 5-7 day old BALB/C mice. The hemi-calvarias obtained are cultured in the presence of insulin, breast cancer cells (MDA-MB-231), or conditioned medium from breast cancer cell cultures. After analysis, it was established that insulin induced new bone formation, while cancer cells and their conditioned medium induced bone resorption. The calvarial model has been successfully used in basic and applied research to study bone development and cancer-induced bone diseases. Overall, it is an excellent option for an easy, informative, and low-cost assay.

The ex vivo culture of bone explants can be a valuable tool for the study of bone physiology and the potential evaluation of drugs in bone remodeling and bone diseases. The presented protocol describes the preparation and culture of calvarias isolated from newborn mice skulls, as well as its applications.

Calvaria 공동 배양 및 조직 학을 사용하여 뼈 리모델링 및 종양 - 뼈 미세 환경 재현

Bone is a connective tissue constituted of osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts and a mineralized extracellular matrix, which gives it its strength ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of patients with advanced cancer. Adoptive T cell transfer (ACT) of highly enriched tumor antigen-specific T cells has been shown to cause durable regression of metastatic cancer in some patients. However, during expansion, these cells may become exhausted or senescent, limiting their effector function and persistence in vivo. Induced pluripotent stem cell (iPSC) technology may overcome these obstacles by leading to in vitro generation of large numbers of less differentiated tumor antigen-specific T cells. Human iPSC (hiPSC) have the capacity to differentiate into any type of somatic cell, including lymphocytes, which retain the original T cell receptor (TCR) genomic rearrangement when a T cell is used as a starting cell. Therefore, reprogramming of human tumor antigen-specific T cells to hiPSC followed by redifferentiation to T cell lineage has the potential to produce rejuvenated tumor antigen-specific T cells. Described here is a method for generating tumor antigen-specific CD8&#945;&#946;+ single positive (SP) T cells from hiPSC using OP9/DLL1 co-culture system. This method is a powerful tool for in vitro T cell lineage generation and will facilitate the development of in vitro derived T cells for use in regenerative medicine and cell-based therapies.

This article describes a method to generate functional tumor antigen-specific induced pluripotent stem cell-derived CD8&#945;&#946;+ single positive T cells using OP9/DLL1 co-culture system.

종양 항원 특이적 T 세포의 생성을 위한 인간 유도 만능 줄기 세포를 사용하여

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous metastasis models are available. Thus, the experimental metastasis model involving tail-vein injection of suitable cell lines is a mainstay of metastasis research. When cancer cells are injected into the lateral tail-vein, the lung is their preferred site of colonization. A potential limitation of this technique is the accurate quantification of the metastatic lung tumor burden. While some investigators count macrometastases of a pre-defined size and/or include micrometastases following sectioning of tissue, others determine the area of metastatic lesions relative to normal tissue area. Both of these quantification methods can be exceedingly difficult when the metastatic burden is high. Herein, we demonstrate an intravenous injection model of lung metastasis followed by an advanced method for quantifying metastatic tumor burden using image analysis software. This process allows for investigation of multiple end-point parameters, including average metastasis size, total number of metastases, and total metastasis area, to provide a comprehensive analysis. Furthermore, this method has been reviewed by a veterinary pathologist board-certified by the American College of Veterinary Pathologists (SEK) to ensure accuracy.

Intravenous injection of cancer cells is often used in metastasis research, but the metastatic tumor burden can be difficult to analyze. Herein, we demonstrate a tail-vein injection model of metastasis and include a novel approach to analyze the resulting metastatic lung tumor burden.

종양 세포의 측면 꼬리 정맥 주입 다음 폐 전이의 병리학 적 분석

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Generation of Zebrafish Larval Xenografts and Tumor Behavior Analysis

Zebrafish larval xenografts are being widely used for cancer research to perform in vivo and real-time studies of human cancer. The possibility of rapidly visualizing the response to anti-cancer therapies (chemo, radiotherapy, and biologicals), angiogenesis and metastasis with single cell resolution, places the zebrafish xenograft model as a top choice to develop preclinical studies.

The zebrafish larval xenograft assay presents several experimental advantages compared to other models, but probably the most striking is the reduction of size scale and consequently time. This reduction of scale allows single cell imaging, the use of a relatively low number of human cells (compatible with biopsies), medium-high-throughput drug screenings, but most importantly enables a significant reduction of the time of the assay. All these advantages make the zebrafish xenograft assay extremely attractive for future personalized medicine applications.

Many zebrafish xenograft protocols have been developed with a wide diversity of human tumors; however, a general and standardized protocol to efficiently generate zebrafish larval xenografts is still lacking. Here we provide a step-by-step protocol, with tips to generate xenografts and guidelines for tumor behavior analysis, whole-mount immunofluorescence, and confocal imaging quantification.

Here, we provide a step-by-step protocol, with tips to generate xenografts and guidelines for tumor behavior analysis, whole-mount immunofluorescence, and confocal imaging quantification.

제브라피시 애벌레 제노이식 및 종양 행동 분석의 생성

Zebrafish larval xenografts are being widely used for cancer research to perform in vivo and real-time studies of human cancer. The possibility of rapidly ...