이 작품은 ELSE Kröner 재단에 의해 지원 되었다 그리고 DFG (도이치 가운데, 독일 연구 재단) SFB 854 (Sonderforschungsbereich, 공동 연구 센터). 특별 기술 지원에 대 한 한스-홀거 Gärtner, Audiovisuelles Medienzentrum, 오토 폰 Guericke 대학 마그데부르크, 마그데부르크, 독일, 감사 합니다.

우리의 연구 동물 보호에 대 한 독일 법의 섹션 8에 따라 작센-안할트, Landesverwaltungsamt 할리 상태의 권한으로 수행 되었다. (§ 8, 18.05.2016-BGBI에서에서 동물 보호에 대 한 독일 법의 단락 1. 나 S. 1206, 1313, 13.08.2013에서 § 31 TierSchVersV).
 참고: 여기 실험에 대 한 8 12 주 오래 된 남성 BALB/c 마우스 사용 되었다, 및 혈액 기증자 로부터 인간 monocytes intravital 현미경 검사 법을 통해 monocytes의 시각화를 위해 사용 되었다.
 1. 셀 준비 참고: monocytes의 격리를 참조 하십시오 우리의 이전 게시 된 비디오 정돈에 지침에 대 한: &#34; 절연 및 정 맥 주입의 Murine 골 파생 Monocytes &#34; 바그너 외. 여 4 참고: 때 셀 모든 단계 작업 것이 오염을 피하기 위하여 살 균 되어야 합니다.
<ol><li>셀 3, 3으로 얼룩 &#39;-Dioctadecyloxacarbocyanine 과염소산염 <ol><li>Resuspend 1 x 10 6 셀/mL의 농도와 혈 청 무료 문화 매체에 셀. 
		참고:만 혈 청 자유로운 매체 수는 효율적인 얼룩, 닥터지 염료 이미 혈 청의 질 성 구성 요소에 의해 캡처 그렇지 않으면 것 때문.</li>
		<li>1 m m 3, 3의 추가 5 µ L &#39;-Dioctadecyloxacarbocyanine 과염소산염 dimethylformamide 셀 서 스 펜 션의 1 ml에 신중 하 게 resuspend와.</li>
		<li>품 20 분 동안 37 ° C에서 셀 솔루션</li>
		<li>37 ° C에서 5 분에 대 한 500 x g 세포를 원심</li>
		<li>는 상쾌한을 꺼내 려 하 고 37 ° C 따뜻한 태아 종 아리 보충 하는 혈 청 매체와 셀 resuspend.</li>
		<li>1.1.4와 1.1.5 단계를 반복 하 여 두 번.</li>
		<li>수식 가진 셀의 개수: 
		<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56290/56290eq1.jpg" /></li> <li>150 µ L 살 균 0.9 %NaCl 용액으로 세포를 resuspend.</li>
		<li>꼬리 정 맥에 주입 셀.</li>
	</ol></li></ol> 2. 마 취 <ol><li>흡입 마 취 <ol><li>isoflurane 화학 안전 후드 닫힌된 빈에 5%의 농도 사용 하 여 기화 기의 도움으로 증발.</li>
		<li>마우스를 신중 하 게 처리 하 고 빈에 넣어.</li>
		<li>이동 중지 되었습니다 후 후부 목의 피부에 의해 동물 처리.</li>
	</ol></li> <li>복 마 취 참고: 사용 isoflurane 마 취, 단계 2.1, 복 주사를 수행 하려면 아래 설명 된. 빠른 복구와 isoflurane 마 취의 짧은 연기 마약 효과, 마우스를 처리 하 여 복 마 취 주사 쉽습니다.
	<ol><li>2.4 mL 마 취 제 (10%), 0.8 mL Xylazine (2%), 및 6.8 mL NaCl (0.9%)의 솔루션을 사용 하 여 복 주입을 위해.</li>
		<li>무게 동물 마 취 제를 적용 하기 전에. 
		참고: 마 취에 대 한 공식 이다: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56290/56290eq2.jpg" /></li> <li>30g 바늘 1 mL 인슐린 주사기를 사용 하 여 왼쪽된 하복 부에 주입 솔루션.</li>
		<li>마우스의 장에 놓고 마약 효과 기다립니다. 
		참고: 마약 효과 일반적으로 나타납니다 5 분 이내 주사 된 경우. 마 취의 정확한 깊이 뚜껑 반사 또는 발가락을 꼬집어, 반응 없는 호흡의 일반, 제어 속도 의해 결정 수 있습니다.</li>
	</ol></li></ol> 3. 지하실 막 같은 매트릭스의 주입 참고:이 메서드는 monocyte 주입 후 종양 혈관 신생 연구 우리의 그룹에 의해 사용 됩니다. 실험에 따라 성장 요인 지하실 막 같은 매트릭스를 추가할 수 있습니다. 우리는 마우스의 측면에서 종양을 주입 하기 전에 대 퇴 동맥 결 찰을 수행. 매트릭스는 주입을 위해 4 ° C의 온도가지고 있어야 합니다. 이 온도에, 행렬은 액체; 젤은 체온 (37 ° C)에 고체를 견고 하 게. 피하 매트릭스의 더 나은 시정을 위한 플러그, 사출 사이트에서 마우스의 피부를 면도.
 참고: 옵션: 추가 100 ng 기본적인 섬유 아 세포 성장 인자, 300 ng 혈관 내 피 성장 인자, 및 지하실 막 같은 매트릭스를 무 균 조건 하에서 26 I.U. 덤플링을.
<ol><li>30 G 인슐린 주사기를 얼음에 저장소 사용까지 매트릭스의 1 mL 로드.</li>
	<li>동물 테이블에 누워 누르고 있으면 마우스의 피부 측면에 주사 부 옆.</li>
	<li>지하실 막 같은 매트릭스의 500 µ L를 피하 주사. 
	주: 실제적인 이유를 위해 그것은 피하 분산을 피하기 위해 한 위치에서 조밀 하 게 지하실 막 같은 매트릭스를 삽입 하는 데 필요한. 실험의 끝에 마우스를 희생 후 조직에서 인공 종양을 꺼내 려 하는 것이 쉬울 것 이다.</li>
</ol> 4. 정 맥 주입 꼬리 참고: 꼬리 정 맥 주입 실험 하기 전에 시험 동물에 NaCl 솔루션 연습. Monocytes는 적절 하 게 꼬리 정 맥에 주입 수 없습니다, 아무 조직의 효과 담보에 있을 것입니다. 이 프로토콜에서 2.5 백만 monocytes 주입 하 고. Bodyweight의 더 이상 5 µ L/g를 주사 하려고.
<ol><li>준비 단계 1.1.8 2.5 백만 monocytes를 포함 하는 monocyte 솔루션을 사용 하 여.</li>
	<li>30g 바늘과 1 mL 인슐린 주사기를 사용 하 여 주입을 위해.</li>
	<li>신중 하 게 마우스를 처리, restrainer에서 동물을 제 지 하 고 마우스 감염 되지 및 호흡에 대 한 충분 한 공간이 있는지 확인 하십시오.</li>
	<li>꼬리 접시에 게 연락할 수 있도록 난방 패드는 restrainer 넣어.</li>
	<li>꼬리 정 맥, 꼬리의 측면에 있는 식별.</li>
	<li>90 °, 꼬리 꼬리 정 맥 꼬리의 위 부분에 나타나도록 설정.</li>
	<li>주입 사이드는 monocytes를 주입 하기 전에 소독.</li>
	<li>세를 직면 하는 바늘의 경사와 평면 각도에 monocyte 솔루션을 주입 하려고 
	참고: 중지 주사 물집이 나타나면 이것이 실패 한 주입의 징조. 절차를 다시 시도 더 proximally.</li>
	<li>주사 사이트에서 약 60에 대 한 꼬리에 부드러운 압력을 적용 하 여 출혈을 멈추게.</li>
	<li>을 조직의 부작용에 대 한 모니터링 마우스 그것의 감 금에 있는 동물에는 완 치 후 30 분 동안 동물 관찰.</li>
</ol> 5. Intravital 현미경 <ol><li>준비 <ol><li>접착 테이프를 가진 일정 한 온도 유지 하 고 자리에는 발을 해결을 열 패드 (37 ° C)에 마 취 마우스를 놓습니다.</li>
		<li>다리 또는 현미경에 사용 되는 측면의 사이트에서 피부를 소독.</li>
		<li>머리 간섭을 유발 하지 않도록 더 나은 처리에 대 한 관심의 영역을 면도.</li>
		<li>삭제할 살 균 메스와 0.5 x 0.5 cm의 사각형 영역에 미세 집게 피부. 
		참고: 그것은 촉촉한; 관심 영역을 유지 하는 것이 중요 그렇지 않으면, 이미지와 조직의 품질 손상 될 것 이다. NaCl 솔루션 영역을 축 축 하 게 사용할 수 있습니다.</li>
		<li>두 조정 가능한 우표 사이 다리를 놓고 우표 위에 커버 글라스를 위치.</li>
		<li>조직과 젖어 유리 접촉 확인.</li>
		<li>Inj혈관의 더 나은 시정을 위한 정 맥 체계로 요법 50 µ L rhodamine dextran retrobulbar.</li>
		<li>현미경 검사 법을 시작 하 고 필요한 경우 다리의 위치를 조정.</li>
	</ol></li> <li>Intravital 현미경 설정 <ol><li>현미경, 컴퓨터, 전자 인터페이스와 레이저.</li>
		<li>보육 실의 난방 단위 설정 또는 난방 (플레이트/패드), 무대 설정 온도 37 ° c.</li>
		<li>수집 소프트웨어를 시작합니다. 현미경 공명 스캐너를 갖춘 경우이 빠른 스캐닝 모드 선택.</li>
		<li>온도가 일정 수준 (35-37 ° C) 도달할 때까지 기다렸다가 
		참고: 안정 온도 대 한 중요 하다: (a) 마우스, 마 취의 밑에 그것의 온도, 및 (b) 피하 또는 적어도 최소화 초점 드리프트를 제어할 수 없습니다. 이 주변 조건 (예를 들어, 에어컨 시스템 및 사람들을 포함 한 방에 열원 수)에 따라 몇 시간 1 시간을 걸릴 수 있습니다. 침수 목적 사용 하는 경우 렌즈와 커버 유리 (또는 조직) 사이의 접촉 영역 불안정의 전형적인 소스입니다. 렌즈는 객관적인 히터 난방 도움이 될 수 있습니다; 또는, 자동 초점 시스템 현미경 좋습니다.</li>
		<li>실험의 확인 요구 사항을 충족 높은 숫자 조리개와 확대 렌즈 선택 (이 섹션의 끝에 참고).</li>
		<li>이득, 채널 설정, 검사 속도, 픽셀 해상도, 깊이 볼륨, 스텝 크기 및 단계에 실험 동물을 배치 하기 전에 평균 현미경 설정을 최적화.</li>
		<li>수집 시간을 줄이기 위해 양방향으로 스캔.</li>
		<li>현미경에는 안정적인 상태에 도달 했습니다 및 설정을 dummy의 도움으로 테스트 후 마 취 마우스 prewarmed 현미경 스테이지에 배치.</li>
		<li>관심 영역 지하실 막 같은 매트릭스 내의 초점으로 밝은 빛 조명 사용 하 여 가져오고 간단히 적용된 fluorophores에 대 한 적절 한 필터 설정으로 자외선에 의해 모 세관 검사.</li>
		<li>스캐닝 모드; 전환 낮은 해상도 256 x 256 모드에서 검색을 시작 하 고 이득을 강화 하 고 레이저 출력 신호 모니터에 관찰 때까지.</li>
		<li>관심의 구조에 초점입니다. 모든 세부 사항을 볼 수 있습니다 때까지 확대.</li>
		<li>정의 &#34; 시작 &#34; 및 &#34; 끝 &#34; 축 방향에 위치.</li>
		<li>검색 중지.</li>
		<li>스테핑 크기 (예를 들어, 0.5 µ m) 및 초점 비행기 (예를 들어, 10-20)의 수 정의.</li>
		<li>스위치 이동 subcellular 구조 또는 셀 선택 검사의 속도 따라 최종 픽셀 해상도 (512 x 512 또는 1024 x 1024) 속도 (스캔 주파수) 움직임에 가장 맞는. 스택의 인수를 고정 권장 양방향 검색. 
		참고: 충분 한 이미지 품질을 제공 하는 검색의 높은 스캔 속도 선택 합니다. 전형적인 포인트 스캐너 400 Hz 및 1.4 kHz 사이 속도 제공합니다. 공 진 스캐너 추가 8 kHz 또는 12 kHz를 제공합니다. Y-방향으로 줄 수를 줄이면, 스캔 속도 증가 될 수 있다 추가 (일반적인 값은 512 x 512, 512 x 256 또는 512 x 200 픽셀 해상도). 신호 대 잡음 비율에 따라 하나 2와 4 사이 평균 라인을 추가 하 여 이미지 품질을 개선 하기 위해 시도할 수 있습니다. 일반적으로, 8 KHz 공명 스캐너; 양방향 모드에서 18 ms의 인수 시간/프레임에 결과 없이 평균 512 x 200의 설정 512 x 200과 x 평균 4 프레임 당 56 ms 아래로 느려집니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Volz, K. S., Miljan, E., Khoo, A., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+pluripotent+stem+cells+for+vascular+therapy.">Development of pluripotent stem cells for vascular therapy.</a> Vascular pharmacology. 56 (5-6), 288-296 (2012).</li><li>Henry, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VIVA+trial:+Vascular+endothelial+growth+factor+in+Ischemia+for+Vascular+Angiogenesis.">The VIVA trial: Vascular endothelial growth factor in Ischemia for Vascular Angiogenesis.</a> Circulation. 107 (10), 1359-1365 (2003).</li><li>Wagner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+intravenous+injection+of+murine+bone+marrow+derived+monocytes.">Isolation and intravenous injection of murine bone marrow derived monocytes.</a> Journal of visualized experiments JoVE. (94), (2014).</li><li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+monocytes:+a+novel+strategy+for+in+vivo+augmentation+of+collateral+vessel+growth.">Transplantation of monocytes: a novel strategy for in vivo augmentation of collateral vessel growth.</a> Human gene therapy. 15 (1), 1-12 (2004).</li><li>Ito, W. D., Arras, M., Scholz, D., Winkler, B., Htun, P., Schaper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+but+not+collateral+growth+is+associated+with+ischemia+after+femoral+artery+occlusion.">Angiogenesis but not collateral growth is associated with ischemia after femoral artery occlusion.</a> The American journal of physiology. 273 (3 Pt 2), H1255-H1265 (1997).</li><li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetanus+toxoid-pulsed+monocyte+vaccination+for+augmentation+of+collateral+vessel+growth.">Tetanus toxoid-pulsed monocyte vaccination for augmentation of collateral vessel growth.</a> Journal of the American Heart Association. 3 (2), e000611 (2014).</li><li>. Matrigel Matrix Available from: <a target="_blank" href="https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html">https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html</a> (2017)</li><li>Eubank, T. D., Galloway, M., Montague, C. M., Waldman, W. J., Marsh, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M-CSF+induces+vascular+endothelial+growth+factor+production+and+angiogenic+activity+from+human+monocytes.">M-CSF induces vascular endothelial growth factor production and angiogenic activity from human monocytes.</a> Journal of immunology (Baltimore, Md. 1950). 171 (5), 2637-2643 (2003).</li><li>Fridman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+tumor+growth+of+both+primary+and+established+human+and+murine+tumor+cells+in+athymic+mice+after+coinjection+with+Matrigel.">Enhanced tumor growth of both primary and established human and murine tumor cells in athymic mice after coinjection with Matrigel.</a> Journal of the National Cancer Institute. 83 (11), 769-774 (1991).</li><li>Woodman, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caveolin-1+knockout+mice+show+an+impaired+angiogenic+response+to+exogenous+stimuli.">Caveolin-1 knockout mice show an impaired angiogenic response to exogenous stimuli.</a> The American journal of pathology. 162 (6), 2059-2068 (2003).</li><li>Francke, A., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C., Herold, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+bone+marrow+derived+monocytes:+a+novel+approach+for+augmentation+of+arteriogenesis+in+a+murine+model+of+femoral+artery+ligation.">Transplantation of bone marrow derived monocytes: a novel approach for augmentation of arteriogenesis in a murine model of femoral artery ligation.</a> American journal of translational research. 5 (2), 155-169 (2013).</li><li>Houthuys, E., Movahedi, K., Baetselier, P., de Van Ginderachter, J. o. A., Brouckaert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+isolation+and+purification+of+mouse+peripheral+blood+monocytes.">A method for the isolation and purification of mouse peripheral blood monocytes.</a> J. Immunol. Methods. 359 (1-2), 1-10 (2010).</li><li>Berthold, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+monocytes+by+Ficoll+density+gradient+centrifugation.">Isolation of human monocytes by Ficoll density gradient centrifugation.</a> Blut. 43 (6), 367-371 (1981).</li></ol>

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

여기 설명 하는 방법을 부수적인 동맥의 개발이이 선박에 monocytes의 동작 및 arteriogenesis의 과정에 빛이 나. 이 프로토콜을 적용 하기 위한 단계는 쉽게 학습과 과학의 다른 분야에서 사용 될 수 있습니다. 이러한 장점에도 불구 하 고 몇 가지 단점이 있다. 예를 들어, 현미경 장비 설명된 기법을 실행 해야 합니다. 한 실험에 대 한 장비를 얻는 하는 것은 장치를 공유 하는 다른 기관과 협력 하는 것이...

심혈 관 질환, 관상 동맥 심장 질환 또는 말 초 동맥 질환을 포함 하 여 죽음의 가장 일반적인 원인은 세계적으로1. 세포 치료 외과 중재를 받을 수 없는 사람들을 위해 특히 심혈 관 질환을 치료 하는 유망한 접근 이다. 치료 도구2,3는 관류를 개선 하 고 허 혈 성 및 underperfused 조직의 기능을 유지 하는 전반적인 목표와 셀 또는 그들의 secreted를 사용 하 여 여러 접근이 있다. 이 목표를 달성 하기 위해 한 시도 arteriogenesis, 부수적인 동맥의 개발을 향상을 향상 시킬 것입니다. Monocytes는 담보와 관련 한 중요 한 세포 유형입니다. 우리의 그룹 허 혈 및 후속 염증6유도 hindlimb 허 혈 모델을 사용 하 여 특히 염증4,5의 분야에서 monocytes의 효과 연구에 집중 했다. Monocytes 염증의 지역를 담보7의 개발을 이끌어 내는 복잡 한 조직 반응 일으킬 합니다.
Intravital 현미경 검사 법의 사용, 우리는 이러한 세포에 vivo에서 의 동작을 연구 하 고 염증의 지역에 주입된 monocytes의 추적 관찰 수 있습니다. 대부분의 이전 연구는만 사후 분석, 조직학 아티팩트 및 준비에 필요한 동물의 많은 수의 소개를 포함 하 여 단점을 보유 하 고 있는 설명 합니다. 우리의 접근, 우리 면역 프로세스를 조사할 수와 여러 시간 점에서 통해 부수적인 형성 라이브 이미징.
부수적인 동맥 허 혈 성 지역에서의 개발 이외 monocytes는 또한 종양의 성장 영향. 이러한 프로세스를 조사, 우리 Engelbreth-Holm-떼 마우스 육 종, 종양 세포 외 기질 단백질8, 풍부한에서 추출한 지하실 막 같은 매트릭스를 주사 하 고 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 분석. 이 행렬은 내 피 세포 네트워크 형성 또는 신생 억제;을 통해 항 암 치료에 대 한 스크린 테스트 분자에 사용 이 경우에, 우리는 세포 치료9,,1011monocytes의 종양 신생 잠재력을 평가할 것입니다.
이 프로토콜의 목표는 vivo에서 모델에서 허 혈에 의해 발생 하는 면역 과정을 공부 하는 간단 하 고 효율적인 방법을 보여 줍니다. 우리는 사후 근육 조직의 조직학 검사 결과에 비해 더 현실적인 테스트 환경을 생성할 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1433">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:304px;">10% fetal calf serum (FCS)</td>
			<td style="width:495px;">Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:456px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1% penicillin/streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1mL Omnifix -F insuline syringe</td>
			<td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 ml syringe&#160;</td>
			<td>Fresenius Kabi AG, Bad Homburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Injectomat- syringe 50 ml with canule</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-well-ultra-low-attachement-plates</td>
			<td>Corning Incorporated, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">8- 12 week old, male, C57BL/6, BalbC mice&#160;</td>
			<td>Charles River, Sulzfeld, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Adhesive tape</td>
			<td>TESA SE, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition Software</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Deutschland&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Leica Application Suite Advanced Fluorescence (LAS AF); Version: 2.7.3.9723</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Canules</td>
			<td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>29G, 30G</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture dish</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture medium</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Medium199, 10% Fetal calf serum, 1% Antibiotic (penicillin/streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter GmbH, Krefeld, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Allegra X-15R centrifuge</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Depilatory cream</td>
			<td>Veet, Mannheim, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DiO</td>
			<td>Invitrogen Eugene, Oregon, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disinfection agent</td>
			<td>Sch&#252;lke&#38;Mayr GmbH, Norderstedt, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable scalpel No.10&#160;</td>
			<td>Feather safety razor Co.Ltd, Osaka, Japan&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EDTA</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Erlenmeyer flask</td>
			<td>GVB, Herzogenrath, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 70%</td>
			<td>Otto Fischar GmbH und Co KG, Saarbr&#252;cken, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Calf Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fine Forceps</td>
			<td>Rubis, Stabio, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flurophor/Rhodamindextran</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA USA</td>
			<td>Katalognummer: D-1819</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gloves</td>
			<td>R&#246;sner-Matby Meditrade GmbH, Kiefersfelden, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Heating pad&#160;</td>
			<td>Labotect GmbH, G&#246;ttingen, Germany&#160;</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Hot Plate 062</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Human macrophage-colony stimulating factor</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td>SRP3110&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Humane leucocyte filters</td>
			<td>Blood preservation</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Incubator</td>
			<td>Ewald Innovationstechnik GmbH, Bad Nenndorf, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane</td>
			<td>Baxter Deutschland GmbH, Unterschlei&#223;heim, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamine (10%)</td>
			<td>Ketavet, Pfizer Deutschland GmbH, Berlin , Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leukocyte separation tubes (tubes with filter)&#160;</td>
			<td>Bio one GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light microscope&#160;</td>
			<td>Carl Zeiss SMT GmbH, Oberkochen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Axiovert 40 C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lymphocyte separation medium LSM1077</td>
			<td>GE Healthcare, Pasching, Austria</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel&#160;</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, New Jersey, USA</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Medium M199&#160;</td>
			<td>PAA Laboratories GmbH, Pasching, Austria</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microbiological work bench</td>
			<td>Thermo Electron, LED GmbH, Langenselbold, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Hera safe</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope slide</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG, Karlsruhe</td>
			<td>Art. Nr. 1879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope stand with incubator and heating unit</td>
			<td>&#160;Leica DMI 6000, Pecon, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Monocyte wash buffer</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>PBS, 0,5% BSA, 2mM EDTA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse restrainer</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multi-photon microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Deutschland&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Leica SP5 Confocal microscope, Cameleon, Coherent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl (0,9%)</td>
			<td>Berlin Chemie AG, Berlin, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neubauer counting chamber&#160;</td>
			<td>Paul Marienfeld GmbH und Co.KG, Lauda-K&#246;nigshofen, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Objective</td>
			<td>Leica, Wetzlar, Deutschland&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Leica HC PL APO 10x/0.4 CS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>Life technologies GmbH, Darmstadt, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>ph 7,4 sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Percoll</td>
			<td>Manufactured by our group with single components</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>90 % Percoll, 10% 1,5M NaCl, &#961;= 1,064 g cm-3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Percoll solution</td>
			<td>GE Healthcare, Bio-Science AB, Uppsala, Sweden</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipettes</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>10&#181;L/100&#181;L/200&#181;L/1000&#181;L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipettes serological</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>&#160;Cellstar2ml, 5ml, 10ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipetting heads</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pipetus</td>
			<td>Eppendorf AG, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polystyrol tube</td>
			<td>Cellstar, Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scissor</td>
			<td>Word Precision Instruments, Inc., Sarasota, USA</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scale</td>
			<td>Mettler PM4800 Delta Range, Mettler-Toledo GmbH, Gie&#223;en, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Suction unit</td>
			<td>Integra bioscience, Fernwald, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>Vacusafe comfort</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical scissors</td>
			<td>Word Precision Instruments, Inc., Sarasota, USA</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypan blue solution 0,4 %</td>
			<td>Sigma Aldrich, Hamburg, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tubes with cap</td>
			<td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td>15ml, 50ml Cellstar</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine (2 %)</td>
			<td>Ceva Tiergesundheit GmbH, D&#252;sseldorf, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravital microscopy of monocyte homing and tumor-related angiogenesis in a murine model of peripheral arterial disease

주변 동맥 질환과 허 혈 성 심장 질환에 대 한 치료 목표 hemodynamic 협 착 증으로 인 한 허 혈 성 영역에 혈액 흐름을 증가 하는. 혈관 수술은 가능한 옵션을 선택한 경우에만 통증, 중요 한 사지 허 혈, 또는 생활에 주요 중단 휴식 또는 작업 진행 등 수술을 위한 표시 없이 환자에 대 한, 그들의 질병을 완화 하기 위해 몇 가지 가능성이 있다. 부수적인 형성의 자극을 통해 관류 monocyte 강화 통해 세포 치료 비-침략 적 몇 가지 옵션 중 하나입니다.
우리의 그룹 hindlimb 허 혈 모델을 사용 하 여 마우스에 monocyte 이식 후 arteriogenesis을 검사 합니다. 이전에 우리 hindlimb 관류 syngeneic monocyte 파상풍 자극이 식을 사용 하 여 향상을 증명 하고있다. 부수적인 형성에 효과 뿐만 아니라 종양의 성장 뿐만 아니라이 치료에 의해 영향을 받을 수 있습니다. 이러한 효과 조사, 우리 후 대 퇴 동맥의 폐색, 마우스의 측면에 Engelbreth-Holm-떼 육의 기질을 주입 하 여 지하실 막 같은 매트릭스 마우스 모델을 사용 합니다.
인공 종양 연구 후 우리를 vivo에서 종양-신생 및 부수적인 동맥 내에서 귀환 하는 monocyte intravital 현미경 검사 법을 사용. 이전 연구는 사후 아티팩트에 후속 분석을 전제로 동물 모델의 조직학 검사를 설명 했습니다. 우리의 접근 지역 실시간으로 시퀀스에서 담보의 monocyte 유도 시각화, 수행, 쉽게 arteriogenesis 및 종양 혈관 신생 비보의 과정을 조사 하 고.

Intravital 현미경 종양 성장과 부수적인 선박 monocytes에 의해 실행의 시험에 대 한 종양 혈관 신생 및 arteriogenesis의 분자 메커니즘에 새로운 측면을 보여줄 수 있습니다. 셀 준비 되어야 하 고 신중 하 게 프로토콜의 단계를 사용 하 여 주입. 차이 단일 실험 사이 변이 발생할 수 있습니다. 정 맥 시스템 (그림 1) 조직의 효과 유지 하 고 주입 동맥 시스템에...

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Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

Monocytes는 주변 동맥 질병의 맥락에서 arteriogenesis의 중요 한 중개자. 지하실 막 같은 매트릭스 및 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여,이 프로토콜 대 퇴 동맥 결 찰 murine 모델에 monocyte 주입 후 monocyte 유도 및 종양 관련 신생을 조사 합니다.

Intravital 현미경 Monocyte 유도 및 주변 동맥 질병의 Murine 모델에서 종양 관련 신생의

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

intravital-microscopy-monocyte-homing-tumor-related-angiogenesis

Research

JoVE Journal

Medicine

7.1K 조회수.  University of Magdeburg. Monocytes는 주변 동맥 질병의 맥락에서 arteriogenesis의 중요 한 중개자. 지하실 막 같은 매트릭스 및 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여,이 프로토콜 대 퇴 동맥 결 찰 murine 모델에 monocyte 주입 후 monocyte 유도 및 종양 관련 신생을 조사 합니다.

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Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

나트륨 히알루 론산의 망막 주사 설치류에있는 망막 박리 모델

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

연구

의학

A Murine Model of Arterial Restenosis: Technical Aspects of Femoral Wire Injury

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to atherosclerotic plaque development or the rupturing of established plaques, interrupts normal blood flow leading to various morbidities such as myocardial infarction and stroke. In the clinic endovascular procedures such as angioplasty are commonly performed to reopen the lumen. However, these treatments inevitably damage the vessel wall as well as the vascular endothelium, triggering an excessive healing response and the development of a neointimal plaque that extends into the lumen causing vessel restenosis (re-narrowing). Restenosis remains a major cause of failure of endovascular treatments for atherosclerosis. Thus, preclinical animal models of restenosis are vitally important for investigating the pathophysiological mechanisms as well as translational approaches to vascular interventions. Among several murine experimental models, femoral artery wire injury is widely accepted as the most suitable for studies of post-angioplasty restenosis because it closely resembles the angioplasty procedure that injures both endothelium and vessel wall. However, many researchers have difficulty utilizing this model due to its high degree of technical difficulty. This is primarily because a metal wire needs to be inserted into the femoral artery, which is approximately three times thinner than the wire, to generate sufficient injury to induce prominent neointima. Here, we describe the essential surgical details to effectively overcome the major technical difficulties of this model. By following the presented procedures, performing the mouse femoral artery wire injury becomes easier. Once familiarized, the whole procedure can be completed within 20 min.

The mouse femoral artery wire injury model of restenosis is technically challenging. In this protocol we show the key technical details essential for successfully performing wire injury to induce consistent&#160;neointima for studies of restenosis.

동맥 재 협착의 쥐 모델 : 대퇴 와이어 부상의 기술적 측면

Cardiovascular disease caused by atherosclerosis is the leading cause of death in the developed world. Narrowing of the vessel lumen, due to ...

Reproducible Arterial Denudation Injury by Infrarenal Abdominal Aortic Clamping in a Murine Model

Percutaneous vascular interventions uniformly result in arterial denudation injuries that subsequently lead to thrombosis and restenosis. These complications can be attributed to impairments in re-endothelialization within the wound margins. Yet, the cellular and molecular mechanisms of re-endothelialization remain to be defined. While several animal models to study re-endothelialization after arterial denudation are available, few are performed in the mouse because of surgical limitations. This undermines the opportunity to exploit transgenic mouse lines and investigate the contribution of specific genes to the process of re-endothelialization. Here, we present a step-by-step protocol for creating a highly reproducible murine model of arterial denudation injury in the infrarenal abdominal aorta using external vascular clamping. Immunocytochemical staining of injured aortas for fibrinogen and &#946;-catenin demonstrate the exposure of a pro-thrombotic surface and the border of intact endothelium, respectively. The method presented here has the advantages of speed, excellent overall survival rate, and relative technical ease, creating a uniquely practical tool for imposing arterial denudation injury in transgenic mouse models. Using this method, investigators may elucidate the mechanisms of re-endothelialization under normal or pathological conditions.

Understanding the cellular and molecular mechanisms of re-endothelialization following arterial denudation injury is of paramount importance in preventing thrombosis and restenosis of arteries. Here we describe a protocol for reproducible arterial denudation injury of the infrarenal abdominal aorta. The procedure was developed to investigate the underlying mechanisms that regulate endothelial regeneration using mouse models.

쥐 모델에서 Infrarenal 복부 대동맥 클램핑에 의해 재현 동맥 발가 벗김 부상

Percutaneous vascular interventions uniformly result in arterial denudation injuries that subsequently lead to thrombosis and restenosis. These ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions between cellular and non-cellular blood components during thrombus formation, reliable studies of the physiology and pathophysiology of thrombosis can only be performed in vivo. Therefore, this article presents an ear model in hairless mice and focuses on the in vivo analysis of microcirculation, thrombus formation, and thrombus evolution. By using intravital fluorescence microscopy and the intravenous (iv) application of the respective fluorescent dyes, a repetitive analysis of microcirculation in the auricle can easily be performed, without the need for surgical preparation. Furthermore, this model can be adapted for in vivo studies of different issues, including wound healing, reperfusion injury, or angiogenesis. In summary, the ear of hairless mice is an ideal model for the in vivo study of skin microcirculation in physiological or pathophysiological conditions and for the evaluation of its reaction to different systemic or topical treatments.

The ear model of the hairless SKH1-Hrhr mouse enables intravital fluorescence microscopy of microcirculation and phototoxic thrombus induction without prior surgical preparation in the examined microvascular bed. Therefore, the ear of the hairless mouse is an excellent in vivo model to study the complex interactions during microvascular thrombus formation, thrombus evolution, and thrombolysis.

털이 마우스의 귓불에서 생체 내에 현미경 및 혈전 유도

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

Ultrasound-guided Intracardiac Injection of Human Mesenchymal Stem Cells to Increase Homing to the Intestine for Use in Murine Models of Experimental Inflammatory Bowel Diseases

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have immunosuppressive potential and have been shown to suppress inflammation in mouse models of intestinal inflammation, even though the route of administration can limit their homing and effectiveness 1,3,4,5. Local application of MSCs to colonic injury models has shown greater efficacy at ameliorating inflammation in the colon. However, there is paucity of data on techniques to enhance the localization of human bone marrow-derived MSCs (hMSCs) to the small intestine, the site of inflammation in the SAMP-1/YitFc (SAMP) model of experimental Crohn&#39;s disease. This work describes a novel technique for the ultrasound-guided intracardiac injection of hMSCs in SAMP mice, a well-characterized spontaneous model of chronic intestinal inflammation. Sex- and age-matched, inflammation-free AKR/J (AKR) mice were used as controls. To analyze the biodistribution and the localization, hMSCs were transduced with a lentivirus containing a triple reporter. The triple reporter consisted of firefly luciferase (fl), for bioluminescent imaging; monomeric red fluorescent protein (mrfp), for cell sorting; and truncated herpes simplex virus thymidine kinase (ttk), for positron emission tomography (PET) imaging. The results of this study show that 24 h after the intracardiac administration, hMSCs localize in the small intestine of SAMP mice as opposed to inflammation-free AKR mice. This novel, ultrasound-guided injection of hMSCs in the left ventricle of SAMP mice ensures a high success rate of cell delivery, allowing for the rapid recovery of mice with minimal morbidity and mortality. This technique could be a useful method for the enhanced localization of MSCs in other models of small-intestinal inflammation, such as TNF&#916;RE6. Future studies will determine if the increased localization of hMSCs by intra-arterial delivery can lead to increased therapeutic efficacy.

Murine studies in models of colonic inflammation have demonstrated that a small percentage (1 - 5%) of mesenchymal stem cells (MSC) injected intravenously or intraperitoneally home to the inflamed colon1,2. This study shows that ultrasound-guided intracardiac injections of MSCs result in increased localization to the intestine.

초음파 유도 Intracardiac 주입 실험 선 동적인 장 질병의 Murine 모델에 사용 하기 위해 내장을 추적 증가 인간 중간 엽 줄기 세포의

Crohn&#39;s disease (CD) is a common chronic inflammatory disease of the small and large intestines. Murine and human mesenchymal stem cells (MSCs) have ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently labelled structures in large biological specimens, and is down to cellular resolution. Meanwhile, the constant refinement of underlying protocols and the enhanced availability of specialized commercial systems enable us to investigate the microstructure of whole mouse organs and even allow for the characterization of cellular behavior in various live-cell imaging approaches. Here, we describe a protocol for the spatial whole-mount visualization and quantification of the CD45+ leukocyte population in inflamed mouse hearts. The method employs a transgenic mouse strain (CD11c.DTR)that has recently been shown to serve as a robust, inducible model for the study of the development of fulminant fatal myocarditis, characterized by lethal cardiac arrhythmias. This protocol includes myocarditis induction, intravital antibody-mediated cell staining, organ preparation, and LSFM with subsequent computer-assisted image post-processing. Although presented as a highly-adapted method for our particular scientific question, the protocol represents the blueprint of an easily adjustable system that can also target completely different fluorescent structures in other organs and even in other species.

Here, we describe a light-sheet microscopy approach to visualize the cardiac CD45+ leukocyte infiltrate in a murine model of aseptic fulminant myocarditis, which is induced by the intratracheal diphtheria toxin treatment of CD11c.DTR mice.

Light Sheet Microscopy에 의한 심근 성 심근염의 Murine 모델에서의 백혈구 침윤의 정량적 시각화

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard therapy, a considerable number of CLI patients are not suited for either surgical or endovascular revascularization. Angiogenic therapies are emerging as an option for these patients but are currently still under investigation. Before application in humans, those therapies must be tested in animal models and its mechanisms must be clearly understood. An animal model of hindlimb ischemia (HLI) has been developed by the ligation and excision of the distal external iliac and femoral arteries and veins in mice. A comprehensive panel of tests was assembled to assess the effects of ischemia and putative angiogenic therapies at functional, histologic and molecular levels. Laser Doppler was used for the flow measurement and functional assessment of perfusion. Tissue response was evaluated by the analysis of capillary density after staining with the anti-CD31 antibody on histological sections of gastrocnemius muscle and by measurement of collateral vessel density after diaphonization. Expression of angiogenic genes was quantified by RT-PCR targeting selected angiogenic factors exclusively in endothelial cells (ECs) after laser capture microdissection from mice gastrocnemius muscles. These methods were sensitive in identifying differences between ischemic and non-ischemic limbs and between treated and non-treated limbs. This protocol provides a reproducible model of CLI and a framework for testing angiogenic therapies.

Here, a critical hindlimb ischemia experimental model is presented followed by a battery of functional, histologic and molecular tests&#160;to assess the effectiveness of angiogenic therapies.&#8203;

힌들보 리 허 혈의 뮤린 모델에서 치료 혈관 신생 평가

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

In Vitro Model of Coronary Angiogenesis

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects in these vessels represent severe health risks such as in atherosclerosis, which can lead to myocardial infarctions and heart failures in patients. Consequently, coronary artery disease is one of the leading causes of death worldwide. Despite its clinical importance, relatively little progress has been made on how to regenerate damaged coronary arteries. Nevertheless, recent progress has been made in understanding the cellular origin and differentiation pathways of coronary vessel development. The advent of tools and technologies that allow researchers to fluorescently label progenitor cells, follow their fate, and visualize progenies in vivo have been instrumental in understanding coronary vessel development. In vivo studies are valuable, but have limitations in terms of speed, accessibility, and flexibility in experimental design. Alternatively, accurate in vitro models of coronary angiogenesis can circumvent these limitations and allow researchers to interrogate important biological questions with speed and flexibility. The lack of appropriate in vitro model systems may have hindered the progress in understanding the cellular and molecular mechanisms of coronary vessel growth. Here, we describe an in vitro culture system to grow coronary vessels from the sinus venosus (SV) and endocardium (Endo), the two progenitor tissues from which many of the coronary vessels arise. We also confirmed that the cultures accurately recapitulate some of the known in vivo mechanisms. For instance, we show that the angiogenic sprouts in culture from SV downregulate COUP-TFII expression similar to what is observed in vivo. In addition, we show that VEGF-A, a well-known angiogenic factor in vivo, robustly stimulates angiogenesis from both the SV and Endo cultures. Collectively, we have devised an accurate in vitro culture model to study coronary angiogenesis.

In vitro models of coronary angiogenesis can be utilized for the discovery of the cellular and molecular mechanisms of coronary angiogenesis. In vitro explant cultures of sinus venosus and endocardium tissues show robust growth in response to VEGF-A and display a similar pattern of COUP-TFII expression as in vivo.

관상 동맥 혈관 신생의 체외 모델

Here, we describe an in vitro culture assay to study coronary angiogenesis. Coronary vessels feed the heart muscle and are of clinical importance. Defects ...

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging study, with an abdominal imaging window, enabled visualization of the cellular dynamics in abdominal organs in vivo. However, due to the soft sheet-like architecture of the mouse pancreas that can be easily influenced by physiologic movement (e.g., peristalsis and respiration), it was difficult to perform stabilized longitudinal in vivo imaging over several weeks at the cellular level to identify, track, and quantify islets or cancer cells in the mouse pancreas. Herein, we describe a method for implanting a novel supporting base, an integrated pancreatic intravital imaging window, that can spatially separate the pancreas from the bowel for longitudinal time-lapse intravital imaging of the pancreas microstructure. Longitudinal in vivo imaging with the imaging window enables stable visualization, allowing for the tracking of islets over a period of 3 weeks and high-resolution three-dimensional imaging of the microstructure, as evidenced here in an orthotopic pancreatic cancer model. With our method, further intravital imaging studies can elucidate the pathophysiology of various diseases involving the pancreas at the cellular level.

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

In vivo high-resolution imaging of the pancreas was facilitated with the pancreatic intravital imaging window.

췌장 인트라바이탈 이미징 창이 있는 뮤린 모델에서 췌장의 생체 내 세포 수준 시각화안정화

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...