이 작품 여 제휴에서 건강 연구 (NIHR) 생물 의학 연구 센터 (BRC) 대 한 제국 국가 연구소, NIHR 건강 보호 연구 단위 (HPRU)에 제국 대학 런던에서 호흡기 감염에서 자금 지원 자금: 공중 보건 영국 (PHE)와 NIHR 제국 환자 안전 변환 연구 센터. 표현 그 저자와 반드시 보 건국에서 NIHR, 보건 또는 공중 보건 영국 있습니다.

다음 프로토콜에 사용 되는 기법 있다 서쪽 런던 연구 윤리 위원회 (참조 번호 15/소호/0444)에 의해 승인 되었습니다.
1. 비 흡수 (없음)
<ol><li>
나 샘플링 이전 준비
	<ol>
<li>나를 들고 먼저 손을 씻고 고 장갑, 가급적 환자 앞에 넣어.</li>
		<li>머리 토치를 사용 하 여 비 강 검사 그리고 그들의 비 지배적인 엄지를 사용 하 여 코 구멍을 시각화 하는 환자의 코를 철회 하는 임상. 참고: 비 강 검 경 일반적으로 필요 하지 않습니다.</li>
		<li>비 강 및 샘플링 이전 비 등을 시각화. 참고: 네어스 (콧구멍) 횡단면에서 라운드 하지 않습니다 그리고 그들은 바로 뒤로 서. 일반적으로, 비 열 등 돌출 또는 측면 벽에는 콧구멍의 들여쓰기로 볼 수 있습니다 비 강 심장으로 형성 매끄러운, 평면 내측 벽. 우리가 하려는 열 등에서 샘플 비, 기본 상피 이기 때문에 호흡기44의 간단한 ciliated 상피.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
나 샘플링
	<ol>
<li>샘플링, 비 열 등에 대 한 평면 그것을 orientating는 콧구멍의 루멘을 부드럽게 나 샘을 전달.</li>
		<li>비 강 점 막에 샘을 집게 손가락을 사용 하는 기증자를 요구 하십시오. 나는 약간 격 이네요, 가능한 눈 급수와 MLF 흡수 될 수 있습니다. 참고: 성인, 우리 일반적으로 성능이 나 60 s.</li>
		<li>MLF의 흡수, 후는 콧구멍에서 나 장치를 제거 하 고 다시 원래 튜브에 넣어.</li>
		<li>실험실에서 즉시 샘플을 처리 하거나이 프로토콜의 뒷부분에 설명한 대로, 그들을 동결. 참고: 나는 다양 한 비 강 점 막 도전 모델, 그리고 다른 기도 질병 공부 되는. 그러나, 각 연구와 환자 인구에 대 한 다른 호흡기 샘플링 방법에 대 한 유효성 검사를 수행 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 기관지 흡수 (BA)
<ol><li>
바 샘플링 이전 준비 참고: 바 전문된 인력 상계 제품군에 의해 수행 됩니다.<ol>
<li>테 내려 바 장치를 배치 하기 전에 SAM은 압출 하 고 카 테 터로 다시 철수를 확인 합니다.</li>
		<li>바 환자에 실시, 사전 모의 바 상계 시뮬레이터에 실시 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
바 샘플링
	<ol>
<li>기도와 오른쪽 주 기관지 bronchoscope는 기관지 intermedius, 그냥 오른쪽 하단 및 오른쪽 중간 엽으로 사단을 인접의 수준에 전달 합니다. 참고: 우리가 일반적으로 샘플 기관지 intermedius에서 비록 기도 내의 다른 사이트를 샘플링할 수 있다. 카 테 터와 샘 관찰, 하나 bronchoscope 팁을 볼 수 없습니다. 우리는 bronchoscope 원하는 샘플링 사이트에 도달 했습니다 일단 바에 대 한 다음과 같은 간단한 단계를 관찰 합니다.</li>
		<li>화이트 팁 그냥 최대 1cm는 bronchoscope의 끝에 말 초 기도에 표시 될 때까지 아래로 카 테 터: 바 테는 bronchoscope의 동작 채널을 통해 삽입 합니다. 기도의 루멘의 중심에서 bronchoscope 및 카 테 터 팁을 유지. 카 테 터 팁과 마모는 점 막 하의 위험을 줄이기 위해 기관지 점 막의 접촉을 최소화 하기 위해 주의 해야 합니다.</li>
		<li>샘 아웃: SAM 오른쪽 중간 또는 오른쪽 하단 엽 기도의 루멘으로 돌출 되도록 핸들 바 장치의 우울. 직접 비전 않도록 하는 샘은 기도 벽에 MLF 접촉 bronchoscope의 끝을 구 부. 30 점 막 벽에 평면 기도, 내 샘을 두고 s.</li>
		<li>샘에: 습 한 샘 프로브는 되도록 직선과 하지 구부러진 카 테 터의 끝에 다시 bronchoscope을 통해 봐. 필요한 경우, 카 테 터와 bronchoscope 팁 SAM을 다시를 주어질 수 있다. 직접 비전, 카 테 터에 다시 직선 샘을 부드럽게 철회. 참고: 경우에 카 테 터에 다시 샘을 제거 하는 어려움, 샘과 전체 장치 철수 기도에서 다시 내밀 었 다.</li>
		<li>카 테 터:는 bronchoscope의 동작 채널에서 전체 카 테 터를 철수.</li>
		<li>샘을 잘라: SAM 멸 균가 위로 잘라 고 얼음에는 cryotube에 넣어. 이 샘플은 다양 한 방법으로,이 프로토콜에 나중으로 처리할 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3입니다. 나 및 바 샘플 처리
참고: 나와 바에서 발생 하는 샘플의 실험실 처리에 대 한 다양 한 옵션을 확인 하 고 있습니다. 이러한 프로토콜은 나중에 사용 하기 위해 샘플을 저장 하 고 SAM에서 MLF 샘플 elute 추구 합니다.
<ol><li>
NA, BA 샘플의 즉각적인 처리에 대 한 옵션
	<ol>
<li>옵션 1: 추가 처리 전에 몇 시간 동안 얼음에 습 한 샘을 저장 합니다.</li>
		<li>옵션 2: 즉시 딥 프리즈 나 SAMs 컬렉션에 관. 마찬가지로,가 위, 샘플링 장치에서 제거 후, 극저온 튜브에 바 SAMs 동결.</li>
		<li>옵션 3: 직접 또는 깊은 동결 처리 이전 차입 버퍼 (300 µ L)에서 분리 된 샘을 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
NA, BA 샘플에 대 한 차입 버퍼의 옵션 참고: MLF 샘플에서 분석 하는 것에 따라 차입 버퍼 선택 하 고 우리는 4 개의 주요 대안을 제안:<ol>
<li>미리 준비 된 분석 결과 버퍼 immunoassay 절차에 대 한 적합 한 사용. 이러한 버퍼 뿐만 아니라 단백질, 예를 들어, 소 혈 청 알 부 민 (BSA) 1% 적은 양의 세제 (0.05%)를 포함 해야 합니다.</li>
		<li>또는 사용 하 여 세제의 큰 금액을 포함 하는 버퍼 세포 세포의 용 해 발생 합니다. 참고: 우리는 1% 농도에서 트리톤 X 또는 NP40를 포함 하는 버퍼를 사용 합니다. 세포 세포의 용 해 버퍼 사용 하는 SAM에서 eluted 수 cytokines와 발산에에서 일반적으로 결과 세포내와 세포 외 cytokines. 이러한 버퍼 단백질, 포함 되어야 하 고 1 %BSA 함께 만들어집니다.</li>
		<li>바이러스 성 RNA 또는 측정 호스트 RNA의 양이 많은 PCR 같은 RNA 측정에 대 한 습 한 샘에 직접 RNA 추출 버퍼를 추가 합니다. 참고: Chaotropic RNA 추출 버퍼 guanidinium 변성 단백질을 포함. 대안은은 immunoassay 또는 세포 세포의 용 해 버퍼에 포함 된 eluted MLF 액체에 RNA 추출 버퍼를 추가 하는 것 이다.</li>
		<li>Trifluoroacetic 산 등의 유기 용 매를 사용 하 여 지질과 대사 산물, 질량 분석 평가 대 한의 추출. 참고: 이러한 모든 시이 약의 세부 자료 섹션에 포함 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
차입 기법
	<ol>
<li>위의 차입 기법 중 하나에 대 한 원하는 추출 버퍼 함께 2 mL 마이크로 원심 튜브에 SAM를 삽입 합니다.</li>
		<li>소용돌이 혼합 30에 대 한 샘플을 느슨하게 연결 된 체액 및 생체의 샘을 씻어 s.</li>
		<li>전체 샘플 복구를 보장 하기 위해, 습 한 샘 열을 추가 스핀 필터 미니에 사용 된 동일한 2 mL 마이크로 원심 분리기 튜브에 삽입 하 여 원심 차입을 수행 합니다. 참고: 두 가지 유형의 회전 필터 미니 열을 사용할 수 있습니다. 첫 번째 장소에서 SAM을 보유만 플라스틱 메쉬를 체액의 전체 차입을 허용 포함 되어 있습니다. 또는, 전염 성 재료를 사용 하는 경우 0.22 μ m 기 공 크기와 회전 필터를 사용 합니다. 이러한 필터 샘플을 소독 하 고 의심 Mycobacterial 감염 샘플에 적합. 그러나, 이러한 필터 버퍼, 일반적인 상호 작용을 통해 필터에 중재자의 바인딩을 최소화 하 미리 incubated 이어야 한다.</li>
		<li>소독된 집게를 사용 하 여 회전 필터에 습 한 샘을 전송. 집게를 오염을 방지 하기 위해 샘플 사이 변경 합니다.</li>
		<li>4 ° c 원심 분리기 샘플 미니 원심 분리기에서 16000 x g에서 20 분 동안 냉각</li>
	</ol>
</li>
	<li>
요약 예제 프로토콜
	<ol>
<li>실험실에서 라벨 2 mL 샘플 컬렉션에 대 한 마이크로 원심 튜브 및 차입 버퍼의 원하는 볼륨을 추가 (NA;에 대 한 일반적으로 300 µ L 바에 대 한 100 µ L). 뚜껑을 밀봉 하 고 얼음에 놓습니다.</li>
		<li>샘플링 (즉시 또는 실험실에서) SAM 다음 집게를 사용 하 여 핸들에서 제거 하 고 컬렉션 튜브 (이전 단계에서 생성)를 포함 하는 버퍼에 배치 됩니다. Microcentrifuge 튜브의 뚜껑은 안전 하 게 닫히고 얼음, 추가 처리를 위해 실험실에 샘플을 전송 확인 하십시오.</li>
		<li>30에 대 한 그들의 전송 컨테이너와 소용돌이 믹스에서 샘과 차입 버퍼를 포함 하는 튜브를 제거 s.</li>
		<li>소독 집게를 사용 하 여 샘을 제거 하 고 (또는 0.22 μ m 셀 루 로스 아세테이트 필터 없이) 스핀 열에 배치.</li>
		<li>컬렉션 튜브에서 차입 버퍼를 수집 하 고 유지.</li>
		<li>스핀 열, 샘, 원래 컬렉션 튜브 (또는 살 균 필터링 하는 경우 새로운 한 샘플링) 열 회전 컬렉션 버퍼를 추가. 이러한 방식으로 세척 액체 elute SAM에서 샘플을 수집 관으로 다시 회전 열을 통해 전달 합니다.</li>
		<li>뚜껑 봉인 (16000 x g, 20 분, 4 ° C) 샘플을 원심.</li>
		<li>원심 분리기에서 샘플을 제거 하 고 선반에 장소.</li>
		<li>튜브의 밀폐 뚜껑 열고 SAM를 포함 하는 스핀 열을 제거 합니다. 샘과 스핀 열에 적절 한 폐기물 컨테이너를 삭제 합니다.</li>
		<li>신중 하 게 약 수로 튜브 내에 포함 된 eluate 이라는 극저온 튜브 합니다. 각 약 수에 eluate의 총 볼륨 및 볼륨을 기록 합니다.</li>
		<li>-80 ° C 냉장고에 밀봉된 저온 관 전송 및 사용까지 똑바로 저장.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

기존 기도 샘플링 기법에서 결과 높은 변수;로 간주 다른 샘플링 기법 표준화 연구5이 분야 내에서 필요 합니다. NA, BA 비-침략 적 방식으로 MLF의 샘플링을 허가 있고 흥미로운 가능성이 건강 하 고 병 항공에 면역 반응 측정. 이 제공 하는 수많은 잠재적인 이점이 큰 내성, 샘플링의 속도, 샘플링, 자주 반복 하는 기능을 포함 하 여 기존 기술, 낮은 간 사용자 가변성, 기술과 면역 중재자5의 희석을 감소 . 기간 흡수 및 사용 처리 기술을 각 연구에 대 한 최적화와 샘플링 이벤트 사이 엄격 하 게 유지 있어야 합니다. 또한, 학사, 경우 기도 내에서 샘플링의 사이트 복제 되어야 합니다 신중 하 게 개인 사이.
나, 그리고 특히 바, 임상 연구에 대 한 여전히 비교적 새로운 기술이 있습니다. 그러나, 이러한 기술의 장점을 대체 기법5에 대 한 주의 유효성 검사를 포함 하 여 수많은 연구에 그들의 사용에서 이어지고 있다. 이 소자 들은 CE 표시 장치 호흡 연구에서 광범위 한 사용에 대 한 준비로 지금입니다. NA, BA 대체 샘플링 기법 보다 훨씬 작은 샘플 볼륨에서 결과, 반면 높은 획득된 농도 낮은 풍부한 면역 중재자에 대 한 감도 향상 될 수 있습니다.
원하는 다운스트림 응용 프로그램에 따라 NA, BA 샘플 수 직접 동결 이후 처리, 임상 연구 환경에서 연구 타당성을 강화. 샘플 처리에 대 한 프로토콜 특정 다운스트림 응용 프로그램에 맞게 적용할 수 있습니다. 제안된 처리 기술을 단백질 또는 지질 면역 중재자 또는 핵 산의 컬렉션에 사용할 수 있지만 각 연구에 대 한 최적화 되어야 합니다. 특히, MLF 다른 버퍼가 eluted 될 수 있습니다. 첫째, 점 막 cytokines, 발산, 및 항 체6,45측정 immunoassay 버퍼를 사용할 수 있습니다. 세제 상부와 버퍼 또한 세포내 cytokines의 포함을 허용 하는 세포 세포 발생을 보장 하기 위해 사용할 수 있습니다. 바이러스 성 감염, 바이러스 성 결정에 대 한 버퍼를 사용 한다 Chaotropic RNA 추출 로드, mRNA과 미생물. 또는, lipidomics 및 질량 분석에 대 한 유기 용 매를 사용할 수 있습니다.
결론적으로, 점 막 표면에서 직접 흡수 MLF의 호흡, 위장, 비뇨 생식 기, 및 다른 점 막 질환에서 잠재적인 사용 흥미로운 기술입니다. 그러나, 이러한 유망한 흡수 기술을 샘플링 및 개별 분석 (biomarkers) 각 질병에에서 대 한 기술 처리의 정확한 확인이 필요 합니다. 또한, 이러한 소설 정밀 점 막 샘플링 기법 혈액, 호흡, 및가 래와 같은 기존 샘플에 대 한 유효성 검사를 요구할 것 이다. 이러한 기법, MLF 미생물, cytokines, 발산, prostanoids, 및 항 체를 측정 하기 위해 사용할 수 있습니다.

대부분의 호흡기 질환 염증 반응, 원인과 알레르기 비 염, 바이러스 및 곰 팡이 감염, 결핵, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 폐에 호흡기 점 막 표면에서 샘플링에 대 한 긴급 한 필요가 있는 섬유 증 및 폐 암 1. 비인 두 aspirate (경찰청), 코 게 고 bronchoalveolar 게 (BAL) 위와 더 낮은 기도 샘플링에 대 한 일반적인 기술이 있습니다. 그러나, 이러한 기술은 현재 가난한 내성, 염증 성 중재자의 희석 및 샘플링2를 자주 반복 하는 무 능력을 포함 하 여 상당한 문제. 경찰청 샘플링 한 대안 면봉, 몰려들었다 나일론, 면의 사용 이다 또는 레이 온3,4, 하지만이 또한 한계를가지고, 이후 그들은 불편 하 고 비 강 상피, 그리고 일부 경우 돌이킬 수 없는 바인딩의 손상을 일으킬합니다 염증 성 중재자5. 이러한 기술은 일반적으로 한 시간 이상 연속적으로 반복 수 없습니다 그리고 대체 기술을 더 낮은 풍부 cytokines 및 발산5,6의 검출에 대 한 효과가 있을 수 있습니다. 또한, 이러한 기술과 관련 된 사용자 가변성 데이터를 더 큰 환자 동료의 요구의 결과로에 불일치를 생성할 수 있습니다.
또는, 천연 및 합성 스폰지를 사용 하 여 흡수 기술 점 막 표면에서 MLF 수집 하 사용 되었습니다. 안과 스폰지 천연 펄프 (예를 들어, Weck cel)의 구성 샘플 타 액, 자 궁 경부 및 질 분 비 물7에 사용 되었습니다. 또한, 폴 리 비닐 알코올 (PVA)에서 만든 합성 갯 솜 그리고 hydroxylated 폴 리 비닐 아세테이트 (HPVA) 활용된8되었습니다. 7 다른 흡수 성 물자 폴리우레탄 미니 스폰지 인간의 눈물10수집 하 사용 되었다 항 체9, 측정 전에 구두 액체를 샘플링에 대 한 비교 되어 있다.
필터 종이 면 식물에서 자연 섬유의 구성 된 알람 및 199211,12,,1314, 동료의 선구적인 종이부터 비 강 분 비 물 흡수에 널리 이용 되는 15,,1617. 필터 종이 디스크 필터 카드 (예: Shandon)에서 생산 되어 고 후 비 강 알레르기 문제를 제어와 자연 알레르기 노출18,19 histamines 및 cytokines를 측정 하기 위해 활용 ,,2021. 그러나, 필터 종이의 다른 배치 단백질 바인딩 및 cytokines를 풀어 몇 가지 실패의 그들의 정도에서 변화 한다. 합성 흡수 성 매트릭스 (SAM)를 사용 하 여 방법 따라서 개발된2,,2223되었습니다. SAMs는 지금 일반적으로 사용 코 MLF를 없음. 이 흡수 성 물자는 편안 하 게 사용 하 고 얻을 수 있습니다 MLF 염증된 코 에서도 자주 시간의 연장된 기간 동안.
비 흡수는 SAM을 사용 하 여 상부 기도에 MLF의 샘플링에 대 한 정밀 점 막 샘플링의 형태입니다. 나 장치 의료 등급 재료 클린 룸을 사용 하 여 의료 기기 CE 표시로 제조 되 고 먼지와 알레르기의 자유롭다. NA 샘플러 핸들 및 샘 메 마른 cryotube에 구성 됩니다. 고분자, 일반적으로 섬유, 이루어져 SAM 하지만 그것도 거품으로 사용할 수 있고 이러한 부드럽고 샘플 컬렉션에 대 한 신속한 wicking으로 흡수 되도록 선택 됩니다. SAMs는 흡수 비의 효율적인 차입 수 있도록 최소한의 단백질 바인딩. 나는 모든 나가의 기증자에 수행할 수 있는 매우 온화 하 고, 비-침략 적 기술입니다. 또한, 직렬 샘플링, 심지어 몇 분 마다 가능입니다. 나 샘플링 기법5 기존의 상부 기도 대 한 검증 및 반복적인 샘플링 알레르기23,,2425, 기도의 도전 다음 운동 데이터의 생성을 허용 했다 세균도26 그리고 바이러스 형 TLR 촉진제 (Jha, A. 외., 원고 준비에서). 나는 또한 유아 아 토 피27,,2829 의 자연의 역사를 조사 하 고 바이러스 성 기관지염30에 사용 되었습니다.
Bronchoscopic microsampling (BMS)은 올림푸스31,,3233에 의해 개발 된 더 낮은 기도에 MLF의 컬렉션에 대 한 절차입니다. 불행 하 게도,이 BMS 시스템은 일본에서 라이센스만. 두 BMS 시스템을 공급 하는 올림푸스: 섬유 hydroxylated 폴리에스터 (FHPE) 하나34,35,,3637, 프로브 및 하나는 목화와 함께 조사33,38, 39 , 40 , 41 , 42 , 43. 주요 걸림돌 블록 천식 환자에서 사용 하는 BMS 프로브 출혈, 혈액으로 오염 하는 모든 샘플의 절반 점 막 접촉 발생 되었습니다. 저자는 그것이 가능한 샘플 MLF 천식 환자43주변 항공에서이 BMS 시스템을 사용 하 여 결론을 내렸다.
대신, 바 이노6천식의 실험적인 감염 다음을 포함 하 여 더 낮은 기도의 bronchoscopic 조사 하는 동안 수행할 수 있는 부드러운 샘을 사용 하 여 개발 했습니다. 바 장치 구성: 외부 빈 카 테 테 르, 그 활성화에는 샘을 밀어냅니다 손을-조각 및 그것의 끝에 샘을 가진 중앙 플라스틱 가이드 와이어. 나, 서 바 키트 클린 룸을 사용 하 여 의료 등급 재료에서 제조 되 고 먼지와 알레르기의 자유롭다. 또한, 장치는 CE 표시 및 감마 방사선을 제공 됩니다. 샘 스트립, 흡수, 부드러운 이며 샘플 컬렉션에 대 한 신속한 wicking 있다. 그것은 또한 흡수 비의 효율적인 차입 수 있도록 최소한의 단백질 바인딩이 있다. 장치를 빠르게 사용할 수 있는 고 MLF는 기도 내 관심의 특정 사이트에서 샘플을 정확 하 게는 bronchoscope의 작업 채널을 통해 들어갈 수 있는. 발 또는 BMS와 달리 바 접촉 출혈 또는 수술 후 환자의 불편 함이 추가 되지는지 않습니다.
NA, BA 샘플의 처리에 신중한 고려를 주어져야 한다. 샘플 수 직접 냉동 고 일괄, 처리 또는 즉시 처리할 수 있습니다. 처리 유형 immunoassays cytokines, 발산 및 면역 글로불린, 또는 바이러스 성, 세균성, elutions를 포함 하 여 특정 다운스트림 응용 프로그램으로 맞출 수 있습니다 및 호스트 셀 RNA. 우리 임상 수집 및 연구소 임상 연구자에 대 한 가이드로 나 및 바와 관련 된 처리 기법 제시.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1562">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">Nasosorption (adult, 7mm width)</td>
			<td style="width:108px;">Hunt Developments</td>
			<td style="width:140px;">NSFL-FXI-11</td>
			<td style="width:1061px;">Different sizes are available for different patient groups/ages.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">Bronchosorption</td>
			<td style="width:108px;">Hunt Developments</td>
			<td style="width:140px;">BSFL-FXI-11</td>
			<td>Minimum bronchoscope channel size 2mm; Max working length 815mm</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">Corning&#160;Costar&#160;Spin-X&#160;centrifuge tube filters (without membrane)</td>
			<td style="width:108px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">CLS9301-1000EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">Corning&#160;Costar&#160;Spin-X&#160;centrifuge tube filters (0.22um membrane)</td>
			<td style="width:108px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">CLS8160-24EA</td>
			<td>For sterilisation of samples with infection risk.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:253px;">Assay (elution) buffer</td>
			<td style="width:108px;">Millipore</td>
			<td style="width:140px;">AB-33k</td>
			<td>Not listed on the Millipore website but available through enquiry or general lab supply companies, such as Cedarlane. Contains 0.05% Tween-20 and 1% BSA.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:253px;">NP-40 Cell lysis buffer</td>
			<td style="width:108px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:140px;">FNN0021</td>
			<td>Add bovine serum albumin to 1% (w/v). Can recover higher absolute mediator levels.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:253px;">Buffer RLT (RNA extraction)</td>
			<td style="width:108px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:140px;">79216</td>
			<td>Allows recovery of RNA from nasosorption and bronchosorption samples.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:253px;">Trifluoroacetic acid</td>
			<td style="width:108px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">302031-100ML-M</td>
			<td>For elution of samples to be used in HPLC applications</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:253px;">2.0ml micro-centrifuge tubes</td>
			<td style="width:108px;">Costar</td>
			<td align="right" style="width:140px;">3213</td>
			<td>2ml tubes are required for the Spin-X tube filters, traditional 1.5ml tubes will not fit these.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

absorption of nasal and bronchial fluids: precision sampling of the human respiratory mucosa and laboratory processing of samples

비 흡수 (NA)과 기관지 흡수 (바)의 방법 합성 흡수 성 행렬 (SAM)를 사용 하 여 인간의 호흡기의 점 막 내벽 유체 (MLF)을 흡수. 나, 비 열 등에서 액체를 흡수 하 고 최소한의 불편을 초래 하는 비-침략 적 기술입니다. 나는 상부 기도의 샘플링을 자주 반복 하는 기능 재현 가능한 결과 얻지 못했다.
비교 함으로써, 호흡기 점 막, 비인 두 포부 (경찰청) 등 기존의 보라고 샘플링의 대체 방법을 더 침략 적 이며 큰 데이터 변화 될 수 있습니다. 다른 방법 제한, 예를 들어, 생 검 및 기관지 절차는 침략 적가 래 포함 많은 죽은 죽어 세포 하며 액 화, exhaled 호흡 응축 (EBC) 포함 물과 타 액, 및 게 샘플은 희석과 변수입니다.
바 병원에 bronchoscope의 작업 채널을 통해 수행할 수 있습니다. 샘플링은 잘 용납 하 고 기도에 여러 사이트에서 수행할 수 있습니다. 바는 MLF 샘플 bronchoalveolar 게 (BAL) 샘플 보다 덜 묽 게 되 고 결과.
이 문서에서는 NA, BA의 기법 뿐만 아니라 원하는 다운스트림 biomarker 측정 되 고에 지 어질 수 있다 결과 샘플의 실험실 처리 합니다. 이러한 흡수 기술을 임상 호흡기 연구에 사용 되는 기존의 샘플링 기법 유용한 대안입니다.

없음은 쉽게 다양 한 연구에에서 이용 되어 고 비 접촉 측정 점 막 염증. 코에 알레르기의 관리, 다음 스타 글란 딘-d 2 (PGD2) 수준 상승 하 고 분 (그림 1), 돛대 세포 degranulation (트와 츠 외, 원고 준비 중) 맞춰가 관찰할 수 있습니다. 또한, 중재자 타입 II 염증, IL-5 (그림 2, 24에서 허가로 증 쇄 하는), 등의 비 강 알레르기 도전23,24다음 시간에 측정할 수 있습니다. 알레르기 천식과 건강 한 컨트롤의 실험적인 감염, 나는 7 일 (그림 3, 6에서 허가로 증 쇄 하는)의 과정을 통해 인터페론 감마 (IFN-γ)를 포함 하 여 중재자의 패널을 측정 하 사용 되었다. 또한, 유아의 자연 호흡 syncytial 바이러스 (RSV) 감염, 나 비-RSV 기관지염와 건강 한 컨트롤 ( 유아 상대적인 IFN-γ 등 염증 성 cytokines의 높은 수준의 연관 RSV를 시연 그림 4, 30의 허가 함께 재발급). 흥미롭게도, RSV와 비-RSV 기관지염이이 차별 시간 일치 경찰청 샘플 (그림 4)에 중요 했다.
바 이노와 알레르기 천식의 실험적인 감염 동안도 사용 되었다. 하루의 4 rhinovirus 감염, 레벨의 IFN-γ, CXCL11에서 IL-10과 IL-5 기준선 (그림 5;에서 상승 했다 A, B, C, D, 각각). 또한,이 기술은 건강 한 컨트롤 (그림 5D) (그림 5 6에서 허가로 증 쇄 하는)을 기준으로 라 이노 바이러스 감염 시 알레르기 천식의 낮은 기도에 높은 IL-5 레벨을 시연 했다.
이러한 대표적인 결과 eluted 0.05% 트윈-20 및 1 %BSA 포함 분석 결과 버퍼를 사용 하 여 샘플에서 생성 된 ( 재료의 표참조).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig1.jpg"> 그림 1 : 빠른 생성 및 비 강 알레르기 도전 다음 스타 글란 딘-d 2의. 디 모 데 잔디 꽃가루와 비 강 알레르기 도전 다음 직렬 샘플에 비 흡수 있다에서 스타 글란 딘-d 2 (PGD2)의 레벨 측정 (n = 5). 각 줄은 한 개인에서 데이터를 나타냅니다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig2.jpg"> 그림 2 : IL-5 비 강 알레르기 도전 다음의 운동 측정. 비 강 알레르기 도전 다음 직렬 비 흡수 샘플에서 IL-5의 생산. 3 알레르기 도전 연구를 실시 했다, 참가자와 함께 반복 (n = 19) 위약 (파란색)을 받고, 낮은 복용량 (10 mg) 경구 프레드 니 손 (오렌지), 또는 높은 복용량 (25mg) 경구 프레드 니 손 (빨간색) 알레르기 관리 이전 1 시간. 라인은 표시 하 고 오차 막대는 모든 참가자의 95% 신뢰 간격. (그림 2017 Leaker 외, 점 막 면역학에서 허가로 증 쇄). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig3.jpg"> 그림 3 : Rhinovirus 감염 시 인터페론-γ의 유도. 건강 한 성인의 감염 도전 중 (n = 11, 블루)와 알레르기 천식 (n = 28, 레드) 이노-16, 비 흡수 샘플링 인터페론-γ (IFN-γ)의 레벨을 측정 하기 위해 사용 되었다. 데이터는 interquartile 범위를 나타내는 오차 막대와 개인 및 B) 중간 레벨의 A) 원시 스파게티 플롯으로 표현 됩니다. (그림은 헨젤과 그 외 여러분 에서 허가로 증 쇄 6). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig4.jpg"> 그림 4 : Nasosorption 유아의 RSV 감염 연관 높은 인터페론-γ 차별. 비 흡수와 비인 두 열망 (경찰청) 기관지염 호흡 syncytial 바이러스 (RSV) 감염과 관련 된 유아의 인터페론-γ 수준을 측정 하는 데 사용 했다 (빨강, n = 12), 비-RSV 호흡기 병원 체 (녹색, n = 12), 그리고 건강 한 컨트롤 (블루, n = 9). 데이터 Kruskall-월리스 테스트를 사용 하 여 여러 비교를 Dunns 정정 분석 했다 (* * *p< 0.001). 라인 중간 값 나타냅니다 있으며 오차 막대 interquartile 범위. (트와 츠 외 허가 수정 그림 30). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig5.jpg"> 그림 5 : 기관지 흡수 샘플 rhinovirus 감염 동안에 염증 성 중재자. 건강 한 컨트롤의 이노 16 감염 다음 (n = 10, 파랑) 및 알레르기 천식 자원 봉사자 (n = 23, 레드), 기관지 흡수 기준선에와 감염의 날 4 D) IL-5, C) IL-10, B) CXCL11, A) IFN-γ의 수준을 측정 하는 데 사용 되었다. 데이터 Wilcoxon 분석 평가 테스트 (일치 샘플)와 맨-휘트니 테스트 (최고의 샘플) 서명. 헨젤 외 에서 허가로 증 쇄 하는 그림 6 <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples

이 원고는 위와 더 낮은 기도의 점 막 내벽 액체 (MLF)을 합성 흡수 성 행렬 (SAM)를 사용 하 여 특히 비 강 및 기관지 흡수 기술의 사용을 설명 합니다. 이 메서드는 더 나은 표준화 및 기존 호흡기 샘플링 기법 보다 내성 제공합니다.

비 강 및 기관지 체액의 흡수: 인간의 호흡기 점 막 및 실험실 처리 샘플의 정밀 샘플링

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the ...

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29.7K 조회수.  St Mary's Hospital. 이 원고는 위와 더 낮은 기도의 점 막 내벽 액체 (MLF)을 합성 흡수 성 행렬 (SAM)를 사용 하 여 특히 비 강 및 기관지 흡수 기술의 사용을 설명 합니다. 이 메서드는 더 나은 표준화 및 기존 호흡기 샘플링 기법 보다 내성 제공합니다.

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Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

세포 배양을위한 인간 감소 Mammoplasty과 유방 절제술의 조직의 처리

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

연구

의학

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

컬렉션, 격리, 인간 자궁 경부 샘플의 유세포 분석

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

A Component-resolved Diagnostic Approach for a Study on Grass Pollen Allergens in Chinese Southerners with Allergic Rhinitis and/or Asthma

Sensitization to grass pollen imposes a global risk for allergic airway diseases. Although prevention relies on local investigation of the pollen allergens, data on this topic are limited in southern China. Any available data were obtained by self-report questionnaires, skin prick tests, and total or specific IgE tests using crude extracts. For many reasons, these methods are unreliable. Serum sIgE reactivity to Bermuda grass, Timothy grass, and Humulus scandens allergens in a cohort of patients from Greater Guangzhou (southern China&#39;s largest city and its outskirts) with allergic rhinitis and/or asthma were examined using a fully-automated immunoassay analyzer as a component-resolved diagnostics (CRD) tool.
For the first time, a considerably high prevalence of Bermuda grass sIgE positivity was demonstrated in Chinese southerners with allergic rhinitis and/or asthma. In these patients, a subtle prevalence of sensitization to Timothy grass and Humulus scandens was also noted, which may arise from cross-reactivity, as the latter two are not common in the region. This was also supported by the detection of allergen components.
Fully-automated immunoassay analyzers may offer satisfactory consistency between regions, laboratories, and institutions and over time. The automaticity of the instrument may enable a standardized detection that would not have been readily revealed before the advent of CRD.
This is a study that uses a CRD approach to investigate sensitization to grass pollen allergens in southern China. It adds to current evidence in the literature. Future studies are needed to validate these findings. However, although CRD is a useful tool, the findings made with the fully-automated immunoassay analyzer should not substitute for other laboratory investigations, clinical evaluations, and physician expertise.

This work describes a protocol that uses a component-resolved approach to study sensitization to grass pollen allergens in a cohort of patients from southern China with allergic rhinitis and/or asthma.

알레르기 성 비염 및 / 또는 천식을 앓고있는 중국 남부의 잔디 꽃가루 알레르겐에 대한 연구를위한 성분 분석 진단법

Sensitization to grass pollen imposes a global risk for allergic airway diseases. Although prevention relies on local investigation of the pollen ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which is interesting in various respiratory diseases like asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), chronic cough, or idiopathic pulmonary fibrosis. This technique is well tolerated, safe and non-invasive, but is currently limited to research services and specialized centers in clinical practice because it is technically demanding, time-consuming, and requires trained staff. The success rate of sputum induction and analysis is about 80%.
Here, we describe the induction and laboratory processing of sputum samples. Sputum is induced by inhalation of hypertonic or isotonic saline with salbutamol. For the processing, we use the whole sputum technique. Dithiothreitol (DTT) is used to allow mucolysis of sputum samples. The primary aim of sputum processing is to obtain a differential cell count to study the cell types present in the airway lumen. Additional analyses may also be performed on sputum supernatant and sputum cells, which may allow further investigation into inflammatory processes and immune mechanisms. Examples include studying mediators in sputum supernatant and performing a large spectrum of analysis on sputum cells such as flow cytometry, genomics, or proteomics.
Finally, representative results of sputum analysis in healthy controls, asthmatics, and COPD patients are presented.

Here we describe the technique of sputum induction. This protocol also explains the sputum processing to perform a differential cell count and to collect sputum supernatant and cells for further analysis.

선 유도 및 실험실 방법론

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

샘플링 전략 및 돼지 생물 의학 모델에서 Biobank 조직 샘플의 처리

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a multitude of issues ranging from transportation, access, facilities, equipment, and communication to provider training. To address this need, we have developed an innovative, scalable, logistics-enhanced, mobile, laboratory facility for emergencies and epidemics in resource-constrained global settings. Utilizing a background in clinical operations as an academic medical center, we designed a rapidly-deployable, modular BSL-2 and BSL-3 facility with user-friendly software for tracking and management of drugs and supplies in remote regions during epidemics and outbreaks. Here, we present our intermodal, mobile, expandable shipping-container laboratory units. The design of the laboratory facilitates off-grid usage by minimizing power consumption and allowing alternate water sources. The unit's information communication technology (ICT) platform provides (i) user-friendly tablet-based documentation, (ii) enhanced tracking of patients and supplies, and (iii) integrated communication onsite with built-in telehealth capabilities. To ensure quality in remote environments, we have developed a checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for respiratory viral diagnosis using reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). As described, this innovative and comprehensive approach allows for the provision of laboratory capability in resource-limited global environments.

A rapidly-deployable, off-grid laboratory has been designed and built for remote, resource-constrained global settings. The features and critical aspects of the logistically-enhanced, expandable, multifunctional laboratory modules are explored. A checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for a respiratory viral diagnostic test are developed and presented.

원격 실험실 관리: 호흡기 바이러스 진단

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a ...

Evaluation of Capnography Sampling Line Compatibility and Accuracy when Used with a Portable Capnography Monitor

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment of end-tidal CO2 (ETCO2), its accuracy is commonly validated using commercial kits composed of a capnography monitor and its matching disposable nasal cannula sampling lines. The purpose of this study was to assess the compatibility and accuracy of cross-paired capnography sampling lines with a single portable bedside capnography monitor. A series of 4 bench tests were performed to evaluate the tensile strength, rise time, ETCO2 accuracy as a function of respiratory rate, and ETCO2 accuracy in the presence of supplemental O2. Each bench test was performed using specialized, validated equipment to allow for a full evaluation of sampling line performance. The 4 bench tests successfully differentiated between sampling lines from different commercial sources and suggested that due to increased rise time and decreased ETCO2 accuracy, not all nasal cannula sampling lines provide reliable clinical data when cross-paired with a commercial capnography monitor. Care should be taken to ensure that any cross-pairing of capnography monitors and disposable sampling lines is fully validated for use across respiratory rates and supplemental O2 flow rates commonly encountered in clinical settings.

The goal of this study was to evaluate the accuracy of capnography sampling lines used in conjunction with a portable bedside capnography monitor. Sampling lines from 7 manufacturers were evaluated for tensile strength, rise time, and ETCO2 accuracy as a function of respiratory rate or supplemental oxygen flow rate.

휴대용 Capnography 모니터와 함께 사용할 때 Capnography 샘플링 라인 호환성 및 정확도 평가

Capnography is commonly used to monitor patient&#8217;s ventilatory status. While sidestream capnography has been shown to provide a reliable assessment ...

Culture and Imaging of Human Nasal Epithelial Organoids

Individualized therapy for cystic fibrosis (CF) patients can be achieved with an in vitro disease model to understand baseline Cystic Fibrosis Transmembrane conductance Regulator (CFTR) activity and restoration from small molecule compounds. Our group recently focused on establishing a well-differentiated organoid model directly derived from primary human nasal epithelial cells (HNE). Histology of sectioned organoids, whole-mount immunofluorescent staining, and imaging (using confocal microscopy, immunofluorescent microscopy, and bright field) are essential to characterize organoids and confirm epithelial differentiation in preparation for functional assays. Furthermore, HNE organoids produce lumens of varying sizes that correlate with CFTR activity, distinguishing between CF and non-CF organoids. In this manuscript, the methodology for culturing HNE organoids are described in detail, focusing on the assessment of differentiation using the imaging modalities, including the measurement of baseline lumen area (a method of CFTR activity measurement in organoids that any laboratory with a microscope can employ) as well as the developed automated approach to a functional assay (which requires more specialized equipment).

A detailed protocol is presented here to describe an in vitro organoid model from human nasal epithelial cells. The protocol has options for measurements requiring standard laboratory equipment, with additional possibilities for specialized equipment and software.

인간 비강 상피 오가노이드의 문화와 이미징

Individualized therapy for cystic fibrosis (CF) patients can be achieved with an in vitro disease model to understand baseline Cystic Fibrosis ...

Collection, Expansion, and Differentiation of Primary Human Nasal Epithelial Cell Models for Quantification of Cilia Beat Frequency

Measurements of cilia function (beat frequency, pattern) have been established as diagnostic tools for respiratory diseases such as primary ciliary dyskinesia. However, the wider application of these techniques is limited by the extreme susceptibility of ciliary function to changes in environmental factors e.g., temperature, humidity, and pH. In the airway of patients with Cystic Fibrosis (CF), mucus accumulation impedes cilia beating. Cilia function has been investigated in primary airway cell models as an indicator of CF Transmembrane conductance Regulator (CFTR) channel activity. However, considerable patient-to-patient variability in cilia beating frequency has been found in response to CFTR-modulating drugs, even for patients with the same CFTR mutations. Furthermore, the impact of dysfunctional CFTR-regulated chloride secretion on ciliary function is poorly understood. There is currently no comprehensive protocol demonstrating sample preparation of in vitro airway models, image acquisition, and analysis of Cilia Beat Frequency (CBF). Standardized culture conditions and image acquisition performed in an environmentally controlled condition would enable consistent, reproducible quantification of CBF between individuals and in response to CFTR-modulating drugs. This protocol describes the quantification of CBF in three different airway epithelial cell model systems: 1) native epithelial sheets, 2) air-liquid interface models imaged on permeable support inserts, and 3) extracellular matrix-embedded three-dimensional organoids. The latter two replicate in vivo lung physiology, with beating cilia and production of mucus. The ciliary function is captured using a high-speed video camera in an environment-controlled chamber. Custom-built scripts are used for the analysis of CBF. Translation of CBF measurements to the clinic is envisioned to be an important clinical tool for predicting response to CFTR-modulating drugs on a per-patient basis.

This protocol describes nasal epithelial cell collection, expansion, and differentiation to organotypic airway epithelial cell models and quantification of cilia beat frequency via live-cell imaging and custom-built scripts.

섬모 박동 빈도의 정량화를 위한 1차 인간 비강 상피 세포 모델의 수집, 확장 및 분화

Measurements of cilia function (beat frequency, pattern) have been established as diagnostic tools for respiratory diseases such as primary ciliary ...

Evaluation of a Point-of-Care Testing Analyzer for Measuring Peripheral Blood Leukocytes

White blood cell (WBC) is an important indicator of inflammation in the body, and it can help distinguish between bacterial and viral infections. At present, most primary medical institutions in China have a poor percentage of adoption of blood-testing technology, and a hematology detection system with a high price to performance ratio and easy operation is urgently needed in primary healthcare centers. This paper introduces the principle and operation procedures of a point-of-care testing (POCT) card-based leukocyte analyzer (evaluated system), which was used to detect WBC indexes such as neutrophils, lymphocytes, and intermediate group cells (including eosinophils, basophils, and monocytes) in whole blood. The results from the evaluated system were compared to those from two commercial automatic hematology analyzers (reference system). The correlation and consistency between the evaluated system and the commercial reference systems were analyzed. The results showed that WBC count and number of granulocytes detected by the evaluated and reference systems showed a strong positive correlation (rs = 0.972 and 0.973, respectively), while the number of lymphocytes showed a relatively low correlation (rs = 0.851). A Bland-Altman plot showed that the major difference between the values detected by the evaluated system and the reference systems is within 95% limits of agreement (LoA), indicating that the two systems are in good agreement. In conclusion, the evaluated system has an excellent correlation, robust consistency, and a reliable comparison with the results of the widely used automatic hematology analyzers. It is ideal for WBC detection in primary medical institutions where a full-automatic five-category hematology analyzer is unavailable, especially during the COVID-19 normalized prevention and control period.

A protocol to measure peripheral blood leukocytes using a POCT card-based leukocyte analyzer is presented here. Same blood samples were tested by two automated hematology analyzers to evaluate the consistency and accuracy of the results. The results showed that the evaluated analyzer had a good correlation with the reference system.

말초 혈액 백혈구 측정을 위한 POS(Point-of-Care) 테스트 분석기 평가

White blood cell (WBC) is an important indicator of inflammation in the body, and it can help distinguish between bacterial and viral infections. At ...