노화, 세 쥐 식민지 (낸시 Nadon) 국립 연구소에서 14 개월 여성 CBA 생쥐의 관대 한 선물에 의해 그리고 유타 주립 대학, 수의학의 학교, 학과의 동물, 유제품이이 간행물에서 보고 된 연구 지원 고 수의 과학입니다.

여기에 설명 된 모든 방법 지침 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드에서 발견 하 고 유타 주립 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 된 국가 연구 위원회에서 개발 되었다.
참고: 난소 이식 절차 포함 수 있습니다 쥐 (긴장 CBA/J) 나이의 21 일에서 18 개월. CBA/J 긴장의 쥐 나이의 45 ~ 60 일 reproductively 능력과 나이의 10의 그리고 12 달 사이 재생산으로 노화 된다.
1. 세 쥐 그대로 난소의 이식
참고:이 첫 번째 프로토콜 전송 하는 동안 난소의 젊은 마우스 (나 두 일)에서 postreproductive 여성을 (12 개월 나이의) 같은 타고 난된 긴장의 사용 하는 프로시저를 설명 합니다. 동일한 절차는 어떤 두 여성 쥐 사이 난소 이식에 사용 됩니다.
<ol><li>무게 및 anesthetize 복 (I.P., 27가 바늘)에 의해 기증자 동물 주입, 케 타 민, xylazine 및 acepromazine의 칵테일을 사용 하 여 예 (65 밀리 그램/kg 케 타 민, 13 mg/kg xylazine 2.0 mg/kg, acepromazine; 칵테일 복용량-6.5 ml/kg). 때까지 마 취 효과 열띤된 홈 케이지를 동물을 반환 합니다.</li>
	<li>취, 일단 홈 케이지 및 온수 종이 타 올에 장소에서 동물을 제거 합니다. '패치' 헤어 스트립을 떠나 경향이 마우스의 양쪽에 약 2-3 cm 광장 갈비뼈 바로 아래 시작 distally 이동, 준비는 클리핑된 각 편이 중간에 옆 머리 몇 mm 클리퍼 스 (#40 블레이드 선호), 제거를 사용 하 여 약 1-2 cm는 중간을 취재입니다.</li>
	<li>가볍게 70% 에탄올으로 잘린된 영역을 닦 고, 면 기울 ㄴ 면봉으로 클리핑된 사이트에 betadine 솔루션을 적용.</li>
	<li>눈 보호를 위한 항생제 젤을 적용 하 고 피하 meloxicam (2.0 mg/kg)를 관리 (사우스 캐롤라이나, 27가 바늘) 수술 후 통증 완화를 위해 동물의 목의 옆 부분에.</li>
	<li>온수 메 마른 외과 분야에서 발생 하기 쉬운 위치에 동물을 놓고 70% 에탄올 배어 2 cm x 2 cm 면 거 즈로 잘린된 영역을 닦으십시오.</li>
	<li>1.0-1.5 c m paralumbar 절 개를 하 고 퉁 명 스럽게 기본 근 막에서 피부를 해 부. 간판을 통해 또 다른 절 개를 확인 합니다. 퉁 명 스럽게 해 부 옆이 근 막 아래 최대한으로 복 부 구멍에 도달할 때까지</li>
	<li>장소 (2 cm x 2 cm 거 즈에서 잘라) 절 개 그리고 젖은 멸 균 식 염 수와 드 레이프 작은 수술 주름 잡아 드리운 다.</li>
	<li>작은 집게를 사용 하 여 복 부 구멍에서 난소를 둘러싸는 지방 조직 그리고 부드럽게 지방 패드와 난소 추출 찾아서 젖은 거 즈 드 레이프에 배치. 난소 지방 패드 주변 지방 조직 보다 더 '화이트' 표시 됩니다.</li>
	<li>뚱뚱한 패드 (복용 하지 않도록 주의 난소 부르사 방해)에 1.5 인치 불독 클램프를 배치 절차 동안은 장소에서 개최.</li>
	<li>곳으로 해 현미경을 이동 하 고 명확 하 게 난소 부르사를 식별 합니다. 두 시계 집게와 부르사를 파악 하 고 노출 난소 난소 hilum 반대 난소 부르사 incise. 부르사의 의도 된 액세스 영역 나가도록 높은 경우 찢 어 시 출혈을 줄이기 위해 bursal 표면에 주사기와 피 네 프 린 (1: 100, 000)의 한 방울을 적용 됩니다.</li>
	<li>부드럽게 난소 부르사에서 난소를 제거 하 고 출혈을 방지 하기 위해 시계 집게와 난소 hilum에 클램핑 함으로써 난소를 삭제할.</li>
	<li>기증자 난소 4 ° C 살 균 염 분 가득한 시계 유리에, 느슨하게 커버 놓고 이식에 대 한 준비까지 따로 설정 합니다. 이상적으로, 난소 장악 될 수 있다 쉽게는 외과 의사에 의해 이식 시 되도록 추가 해 현미경 시계 유리를 놓습니다.</li>
	<li>이 시점에서, 안락사 하거나 이식된 난소, 조직, 세포 또는 나중 시간에 자리 표시자 유리 비드를 (지속적으로 모니터링 해야) 기증자 마우스를 따로 설정 합니다.</li>
	<li>깨끗 한 수술 필드와 악기, 위와 같이 받는 사람 동물을 ovariectomize. 더 오래 된 쥐 지방 조직의 양이 증가 하는 경향이 고 증가 마 취 복용량 (최대 20%까지) 하는 것을 요구할 수 있습니다.</li>
	<li>받는 사람에서 난소의 절제, 후 내부 출혈을 제어 및 응고에 도움이 노출된 사이트를 통해 식 염 수에 젖은 거 즈의 작은 조각을 배치 하 빈 부르사 hemostatic 거품 패드의 작은 조각을 넣으십시오.</li>
	<li>기증자의 난소 (또는 조직, 세포, 개체 틀 유리 구슬) 시계 집게를 한 손으로 고 현미경 시야의 이동으로 찾습니다. 반대 손에 다른 집게와 거 즈를 제거 하 고 동시에 부르사 내 새로운 난소를 배치 하면서 부르사에서 hemostatic 거품 패드를 제거 합니다.</li>
	<li>새로운 난소 내부 받는 사람 부르사 맞지 않으면, 절반 (1/3 또는 1/4) 기증자 난소를 잘라 고 조각에 버 합니다. 부르사 전체 난소를 완전히 커버 하지 않습니다, 경우 배치는 부르사, 난소 및 장소에는 난소를 부르사 통해 다시 봉합 (토론 섹션 참조). 참고: 유리 자리 표시자 구슬 시계의 집게와 처리 하기 어려울 수 있습니다.</li>
	<li>부르사 내부 유리 구슬 때, 큰 집게로 비드를 선택 하 고 난소 부르사 옆 지방 패드 위에 놓습니다. 부르사에 비드를 롤.</li>
	<li>Castroviejo 바늘 홀더 이미 로드 테이퍼 바늘 및 9-0 또는 10-0 monofilament 봉합 사를 선택 하 고 부르사의 찢어진된 가장자리를 찾아 하나 또는 두 개의 Halsted의 봉합을 사용 하 여 부르사를 닫습니다. 참고: 봉합 또는 수행할 수 있습니다 시계 또는 다른 작은 집게로.</li>
	<li>멸 균 식 염 수로 가볍게 사이트 관개, 지방 패드 클램프를 제거 하 고 복 부에 난소/지방 패드를 반환 합니다.</li>
	<li>에 드 레이프를 제거 하 고 6-0 크롬 창 자 또는 vicryl 복 벽을 닫습니다. 이 단계는 또는 현미경 없이 할 수 있습니다.</li>
	<li>옆으로 (만약 이전 단계에서 이동 하지) 현미경을 이동 하 고 9mm 상처 있는 피부를 닫습니다.</li>
	<li>빛에서 음영 온수 복구에에서 동물을 놓고 동물 마 취에서 회복까지 지속적으로 모니터링 합니다. 추가 meloxicam 표시 하는 경우에 post-operatively 24 시간 사용할 수 있습니다. Post-operatively 상처 클립 약 9 일 제거 합니다. 참고: 없음 면역 기술을 고용 하 고 후 이식 또는 죽음에서 이식-비교-호스트 질병의 증거가 발견 되었습니다.</li>
</ol>2. 세균 세포의 이식 그대로 쥐 난소 고갈.
참고:이 프로토콜 젊은, 생식 세포 고갈 마우스에서 postreproductive 여성 난소의 전송이 포함 됩니다. 이 프로토콜에서 난소 받는 사람 및 ovariectomy 및 이식 절차는 위의 예외의 원시 및 기본 모 공/세균 세포의 고갈 이식된 난소 화학적으로 되었습니다. 보조 및 antral 낭 나머지 모집/이 폐쇄 증 없는 생식 세포 난소를 떠나 받게 된다. 4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD)와 생식 세포 소모는 잘 설명된16. VCD는 독 소입니다. VCD 치료 난소 치료 비 마우스에 이식 되는, 때문에이 절차는 VCD의 독성 효과에 노출 되지 마우스에 VCD 치료 난소에서 혜택. 이 프로토콜에서는 젊은, 난소 기증자 생쥐 생식 세포 고갈에 대 한 절차를 설명합니다.
<ol><li>참 깨 오일 주입 및 4 ° C에서 저장소에 대 한 사용까지 VCD (64 mg/mL)을 희석.</li>
	<li>주사 난소 기증자는 하루에 한 번 VCD I.P. (160 mg/kg)와 15 일의 나 두 일에 시작. 참 깨 오일 같은 일정에 따라 통제 쥐를 주사.</li>
	<li>나이의 50 일에서 위와 같이 10 일 동안 VCD 처리 고 오일만 처리 마우스 생식 cyclicity의 중단을 확인 합니다. 나이의 60 일, VCD 치료 쥐 gonadal 입력의 cytological 증거가 표시 됩니다.</li>
	<li>60 일 된 쥐에서 난소를 복구 하 고 위와 같이 이식 합니다.</li>
	<li>난소 생식 세포 고갈의 성공적인 이식 생식 사이클의 부족과 androstenedione 순환의 증가 수준을의 검출 하 여 확인 합니다. 안 드로 겐: 에스트로겐 비율 VCD17생식 세포 고갈 후 크게 증가.</li>
	<li>Postoperatively 질 세포학 10-14 일을 시작 하 고 cyclicity의 정확한 결정을 위해 적어도 10 일 연속에 대 한 데이터를 수집 합니다.</li>
</ol>

<ol>
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저자는 공개 없다.

Ovariectomy 및 손상과 세균 세포 고갈 난소 이식 18 개월 21 일에서 배열 하는 생쥐에 실시 되었습니다. 수행 된 ovariectomy 난소 부르사를 그대로 유지 하는 것은 때 incising bursal 조직 배려를가지고 한다. 쥐 나이의 6 개월 이상, 부르사의 많은 액세스를 위해 사용할 수 있는 영역을 제한 하는 지방 패드와 중첩 된다. 이러한 경우에, 그것은 종종 지방 패드 국경 거의 오픈 부르사 눈물을. 이 메서드는 종종 ...

건강과 수명에 재생산의 영향력은 종종 실수로 생식 능력을 포괄 하는 기간에만 제한 된의 생각. 라이프 스타일 및 생활 스팬의 재생산으로 유능한 단계와 관련 된 고기는 쉽게 사전 및 postreproductive 단계에서 분화 된다, 하는 동안 생식 상태 수명의 모든 단계에 걸쳐 건강 영향. 생식 능력의 기간은 종종 생식 수명, 연대기 수명에서 자신을 차별화 라고 합니다. 이 용어 라는 현실에서 두 수명 지정의 인공 분리, 모두에 이벤트와 서로 밀접 하 게 묶인된에 영향을 미치는 한, 보다 더 자주는 아니지만, 뿐만 아니라 다른 영향을 미치는입니다.
지난 10 년간 증거 개인의 생식 상태 만성 건강 상태1을 개발의 위험 증가와 관련 있음을 나타냅니다. 한 연구는 남자2의 동료에 대 한 짧은 수명을 생식 실패 사이 연결을 문서화. 협회는 여성에서 더욱 눈에 띄는. 심혈 관 질환은 드문 premenopausal 여자3, 하지만 난소 실패 심장 혈관 질병5조기 난소 실패 젊은 여성, 폐 경4 에서 급격히 증가. 인슐린 저항6 와 뼈 손실 폐 경7 에 증가 하 고 거의 2/3 미국인의 Alzheimer의 질병과 여자8입니다. 난소 신호에 잘 정의 된 변화는 폐 경 후, 질병 부담 상태로 premenopausal, 질병 저항 상태에서 전환을 표시합니다. 이 안정적인 전환 메커니즘을 가속 노화 질병 위험을 식별 하는 기회를 선물 한다.
최근, cryopreserved 난소 조직 이식 생식 선 세포 화학 요법 등을 위태롭게 수 있는 의료 절차를 받아야 하는 여성 불 임 복원 사용 되었습니다. 난소 조직 이식 또한 난소 비 기반으로 불 임, 유전자 변형 마우스9를 포함 하 여 동물에 가능한 자손 생산을 사용할 수 있습니다. 난소 이식 생식 기능 또는 연대기 노화 se 당에서 생식 노화의 영향을 분리 하는 효율적인 방법입니다.
여성 건강의 여러 측면에서 난소 호르몬에 대 한 잘 설립 지원 역할에서 적극적으로 폐 경에서 위험 증가 질병의 주 원인으로 생식 세포, 순환 호르몬 생산의 손실 연루. 여성 건강에 난소 호르몬의 값은 의심, peri-및 폐 경 후 여성에서이 호르몬 대체 되었습니다 젊은 난소를 가진 젊은 여자에 의해 즐기 게 하는 효능의 복원에 신뢰할 수 있는. 이러한 건강 혜택 postreproductive 여성 쥐10,11,12,,1314젊은 난소의 heterochronic 이식 하 여 안정적으로 복원 됩니다.
이식 또는 ovariectomy 절차 이전 전후 모두 기증자와 받는 사람 쥐의 생식 상태를 결정 합니다. 나이의 12 개월에 수술 전에 gonadal 입력의 흔적을 표시 하는 추정 postreproductive 쥐이 실험에서 제외 됩니다. Gonadal 입력 질 세포학에 의해 결정 됩니다. 데이터 질 세포학에 적어도 10 일 연속 사전 수술 받는 사람 마우스에서 postreproductive 국가 기증자 쥐에서 난소 적극적으로 자전거를 위해 수집 됩니다. 날 로부터 기간 nucleated 상피 세포로 estrous 주기 정의 하나 표시 (즉, proestrus)는 leukocytic의 기간이 질 얼룩에 nucleated 상피 세포의 다음 모습을 앞에 존재 (즉, diestrus) 사이. 발 정기는 큰, 편평 상피 세포, 또는 핵 없이 존재에 의해 결정 됩니다. 전에 10 일 동안 또는 수술 했다 동안 gonadal 입력을 결정 후 마우스는 순환 활동이 표시 됩니다. 전에 10 일 동안 또는 수술 했다 동안 gonadal 입력을 결정 한 후 마우스를 하나 이상 전체 estrous 주기 표시 합니다. 여성 쥐 남성 쥐의 존재 유 숙 하거나 주기 유도 하는 자극에 일관 된 노출 되도록 남자의 케이지에서 더럽혀진된 침구에 노출 해야 합니다.
이러한 이식 절차는 기증자와 받는 사람 마우스에 동시에 작동 하는 두 명의 외과로 가장 효율적으로 수행 됩니다. 그러나, 절차는 쉽게 수행 한 외과 의사에 의해 가장 자주 받는 사람 마우스에서 ovariectomy 프로시저를 시작 하기 전에 복구 기증자 난소와 함께. 이 프로토콜에서는 단일 외과 의사에 대 한 절차를 설명합니다. 생식 관의 노출 및 사이트의 폐쇄는 일반적으로 없이 이루어집니다 현미경, 반면 제거 및 교체는 난소의 현미경으로 이루어집니다. 와 학습 어떤 수술, 절 개 사이트 더 큰 수 있습니다 수술 절차를 학습 하면서 더 오래 걸릴 수 있습니다 및 일반적으로 것입니다 경험을 가진 감소.

<table><tbody><tr><td>Dissecting microscope</td><td>Any dissecting scope with an adjustable working distance.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field.</td><td>Stryker/Gaymar</td><td>TP700</td><td>Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields.</td></tr><tr><td>Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract</td><td></td><td></td><td>Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific</td></tr><tr><td>Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure.</td><td></td><td></td><td>Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific</td></tr><tr><td>Suture material for abdominal wall</td><td>eSutures</td><td>G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18&quot; HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED</td><td></td></tr><tr><td>Suture material for ovarian bursa</td><td>eSutures</td><td>2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5&quot; BV130-5 TAPER</td><td>10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field.</td></tr><tr><td>Absorbable gelatin sponge</td><td>PFIZER.</td><td>Gelfoam- PFIZER 09-0315-08.</td><td>cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions.</td></tr><tr><td>Staples for skin closure</td><td>Becton Dickinson</td><td>MikRon Autoclip 9mm (BD 427631)</td><td></td></tr><tr><td>Eye ointment.</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>Puralube sterile opthalmic ointment</td><td></td></tr><tr><td>Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>BD 305536</td><td>27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml</td></tr><tr><td>Syringes for saline.</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>BD 309657.</td><td>3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle</td></tr><tr><td>Clippers/blade</td><td>Andis</td><td>Super AGR+&amp;trade; Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge&amp;reg; #40 blade.</td><td>Any clippers with a fine blade.</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>University chemical supply</td><td></td><td>dilute to 70% for use.</td></tr><tr><td>Betadine solution</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>003233</td><td></td></tr><tr><td>2x2 gauze pads</td><td>MWI Veterinary Supply Co.</td><td>003073</td><td>autoclaved with surgery packs</td></tr><tr><td>Borosilicate glass beads</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>Z273619</td><td>Autoclave in sintilation vials</td></tr><tr><td>4-vinylcyclohexene diepoxide</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>94956</td><td></td></tr><tr><td>Sesame oil</td><td>Sigma-Aldrich Co.</td><td>S3547</td><td></td></tr></tbody></table>

orthotopic ovarian transplantation procedures to investigate the life- and health-span influence of ovarian senescence in female mice

난소 이식 1963 년에 유타 주립 대학에서 처음 실시 되었다. 최근 작품에서 포유류 난소의 heterochronic 이식 젊은 여성에서 젊은 난소의 건강 보호 효과 조사 하기 위해 사용 됩니다. 현재 절차 allogenic 난소 난소 부르사에서 그들의 원래 위치에 다시 이식는 orthotopic 이식 메서드를 사용 합니다. 이것은 난소/난소 조직의 더 일반적으로 사용 되 heterotopic 이식 달리 피하 또는 신장 캡슐 아래입니다. 모든 3 개의 위치는 이식 조직의 효율적인 revascularization를 제공합니다. 그러나, orthotopic 이식 가장 자연 스러운 신호 환경으로 난소를 제공 하 고 post-operatively 자연스럽 게 재현 동물에 대 한 기회를 제공 하는 유일한 프로시저입니다. 하나 ovariectomy 절차 동안 모든 생 난소 조직을 제거를 주의 해야 합니다. 어떤 생 조직 유지 하는 경우, 하나의 난소를 제거 하는 경우에 이식된 조직을 기존 조직 노화 될 때까지 휴면 유지 됩니다. 이식 받는 상당한 양의 새로운 hypothalamic/뇌/gonadal/부 신 (HPG/A)를 축 하는 정권 관련는 이식 된 신호에 적응 하는 시간을 걸릴 수 있습니다 revascularization 이식된 난소의 매우 신속 하 게 발생 하는 동안 조직입니다. 이 일반적으로 마우스에 100 일 정도 걸립니다. 따라서, 이식 실험이 적응 기간에 맞게 설계 되어야 한다. 전형적인 결과 난소 이식으로 이식된 난소의 나이 보다는 받는 사람의 연대기 나이 반영 하는 받는 사람의 건강 변화 포함 됩니다.

Ovariectomy 21 일의 나이에 사춘기의 개시에 생식 시스템의 주요 업 규제를 피하기 위해 하 고 여성 생식 gonadal 호르몬의 직접 효과 또한 있을 다른 영향을 제거 것입니다. CBA/J 쥐에 생식 감소 일반적으로 8-10 개월에 불규칙 한 주기 시작합니다. 대부분 여성 쥐의이 라인에에 나이의 11 개월에서 12 개월에 의해 응답 oocytes의 완전 한 손실 생식 실패15 의 포인트...

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Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

여기에 설명 된 orthotopic 수정 난소 영향 받는 사람 마우스의 생리학에 대 한 난소 이식 프로토콜이 있습니다. 이 수술 난소 영향의 다양 한 종류를 여성 쥐를 노출 하는 데 사용 하 고 heterochronic 이식 및 이식 다양 한 비보 전 치료 받은 난소의 포함 될 수 있습니다.

여성 쥐에서 난소 노화의 수명 및 건강 영향 조사를 Orthotopic 난소 이식 절차

Ovarian transplantation was first conducted at Utah State University in 1963. In more recent work, heterochronic transplantation of mammalian ovaries is ...

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

10.7K 조회수.  Utah State University. 여기에 설명 된 orthotopic 수정 난소 영향 받는 사람 마우스의 생리학에 대 한 난소 이식 프로토콜이 있습니다. 이 수술 난소 영향의 다양 한 종류를 여성 쥐를 노출 하는 데 사용 하 고 heterochronic 이식 및 이식 다양 한 비보 전 치료 받은 난소의 포함 될 수 있습니다.

비디오: Orthotopic Ovarian Transplantation Procedures to Investigate the Life- and Health-span Influence of Ovarian Senescence in Female Mice

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all gynecologic malignancies among US women 1,2,3. Serous tumors are the most widespread forms of ovarian cancer and 4,5 the Tg-MISIIR-TAg transgenic represents the only mouse model that spontaneously develops this type of tumors. Tg-MISIIR-TAg mice express SV40 transforming region under control of the Mullerian Inhibitory Substance type II Receptor (MISIIR) gene promoter 6. Additional transgenic lines have been identified that express the SV40 TAg transgene, but do not develop ovarian tumors. Non-tumor prone mice exhibit typical lifespan for C57Bl/6 mice and are fertile. These mice can be used as syngeneic allograft recipients for tumor cells isolated from Tg-MISIIR-TAg-DR26 mice.
Objective: Although tumor imaging is possible 7, early detection of deep tumors is challenging in small living animals. To enable preclinical studies in an immunologically intact animal model for serous ovarian cancer, we describe a syngeneic mouse model for this type of ovarian cancer that permits in vivo imaging, studies of the tumor microenvironment and tumor immune responses.
Methods: We first derived a TAg+ mouse cancer cell line (MOV1) from a spontaneous ovarian tumor harvested in a 26 week-old DR26 Tg-MISIIR-TAg female. Then, we stably transduced MOV1 cells with TurboFP635 Lentivirus mammalian vector that encodes Katushka, a far-red mutant of the red fluorescent protein from sea anemone Entacmaea quadricolor with excitation/emission maxima at 588/635 nm 8,9,10. We orthotopically implanted MOV1Kat in the ovary 11,12,13,14 of non-tumor prone Tg-MISIIR-TAg female mice. Tumor progression was followed by in vivo optical imaging and tumor microenvironment was analyzed by immunohistochemistry.
Results: Orthotopically implanted MOV1Kat cells developed serous ovarian tumors. MOV1Kat tumors could be visualized by in vivo imaging up to three weeks after implantation (fig. 1) and were infiltrated with leukocytes, as observed in human ovarian cancers 15 (fig. 2).
Conclusions: We describe an orthotopic model of ovarian cancer suitable for in vivo imaging of early tumors due to the high pH-stability and photostability of Katushka in deep tissues. We propose the use of this novel syngeneic model of serous ovarian cancer for in vivo imaging studies and monitoring of tumor immune responses and immunotherapies.

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

To study in vivo tumor growth and tumor microenvironment, we used a syngeneic and orthotopic mouse model of ovarian cancer in immunocompetent animals. We transduced a mouse tumor cell line (MOV1) with Katushka fluorescent protein (MOV1KAT) and here we show its orthotopic implantation in ovary and in vivo imaging.

에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에</em종양 면역 응답> 종양 이미징 및 모니터링

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

연구

면역학 및 감염병학

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, regulation occurs at the hypothalamic-pituitary-gonadal axis level and on developing follicles in the ovary. Despite active studies, follicle development mechanisms are not clear because of the several steps involved from the dormant primordial follicle activation to ovulation, and because of the regulation complexity that differs at each follicular stage. To investigate the mechanisms of follicle development, and the dynamics of follicles throughout the estrus cycle, we developed a mouse ovarian tissue culture model that can be used to observe follicle development using a microscope. Systematic follicle development, periodical ovulation, and follicle atresia can all be reproduced in the cultured ovary model, and the culture conditions can be experimentally modulated. Here, we demonstrate the usefulness of this method in the study of the regulatory mechanisms of follicle development and other ovarian phenomena.

Ovarian tissue cultures can be used as models of follicle development, ovulation, and follicle atresia and indicate regulatory mechanisms of dynamic ovarian processes.

난소 조직 문화 현상을 마우스 난소에서 시각화 하

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

발생학

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

생물학

Whole Ovary Immunofluorescence, Clearing, and Multiphoton Microscopy for Quantitative 3D Analysis of the Developing Ovarian Reserve in Mouse

Female fertility and reproductive lifespan depend on the quality and quantity of the ovarian oocyte reserve. An estimated 80% of female germ cells entering meiotic prophase I are eliminated during Fetal Oocyte Attrition (FOA) and the first week of postnatal life. Three major mechanisms regulate the number of oocytes that survive during development and establish the ovarian reserve in females entering puberty. In the first wave of oocyte loss, 30-50% of the oocytes are eliminated during early FOA, a phenomenon that is attributed to high Long interspersed nuclear element-1 (LINE-1) expression. The second wave of oocyte loss is the elimination of oocytes with meiotic defects by a meiotic quality checkpoint. The third wave of oocyte loss occurs perinatally during primordial follicle formation when some oocytes fail to form follicles. It remains unclear what regulates each of these three waves of oocyte loss and how they shape the ovarian reserve in either mice or humans.
Immunofluorescence and 3D visualization have opened a new avenue to image and analyze oocyte development in the context of the whole ovary rather than in less informative 2D sections. This article provides a comprehensive protocol for whole ovary immunostaining and optical clearing, yielding preparations for imaging using multiphoton microscopy and 3D modeling using commercially available software. It shows how this method can be used to show the dynamics of oocyte attrition during ovarian development in C57BL/6J mice and quantify oocyte loss during the three waves of oocyte elimination. This protocol can be applied to prenatal and early postnatal ovaries for oocyte visualization and quantification, as well as other quantitative approaches. Importantly, the protocol was strategically developed to accommodate high-throughput, reliable, and repeatable processing that can meet the needs in toxicology, clinical diagnostics, and genomic assays of ovarian function.

Here, we present an optimized protocol for imaging entire ovaries for quantitative and qualitative analyses using whole-mount immunostaining, multiphoton microscopy, and 3D visualization and analysis. This protocol accommodates high-throughput, reliable, and repeatable processing that is applicable for toxicology, clinical diagnostics, and genomic assays of ovarian function.

Female fertility and reproductive lifespan depend on the quality and quantity of the ovarian oocyte reserve. An estimated 80% of female germ cells ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

마우스 난소 지방 패드 속으로 이식

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

의학

Cell-Specific Paired Interrogation of the Mouse Ovarian Epigenome and Transcriptome

Assessing cell-type-specific epigenomic and transcriptomic changes are key to understanding ovarian aging. To this end, the optimization of the translating ribosome affinity purification (TRAP) method and the isolation of nuclei tagged in specific cell types (INTACT) method was performed for the subsequent paired interrogation of the cell-specific ovarian transcriptome and epigenome using a novel transgenic NuTRAP mouse model. The expression of the NuTRAP allele is under the control of a floxed STOP cassette and can be targeted to specific ovarian cell types using promoter-specific Cre lines. Since recent studies have implicated ovarian stromal cells in driving premature aging phenotypes, the NuTRAP expression system was targeted to stromal cells using a Cyp17a1-Cre driver. The induction of the NuTRAP construct was specific to ovarian stromal fibroblasts, and sufficient DNA and RNA for sequencing studies were obtained from a single ovary. The NuTRAP model and methods presented here can be used to study any ovarian cell type with an available Cre line.

In this protocol, the translating ribosome affinity purification (TRAP) method and the isolation of nuclei tagged in specific cell types (INTACT) method were optimized for the paired interrogation of the cell-specific ovarian transcriptome and epigenome using the NuTRAP mouse model crossed to a Cyp17a1-Cre mouse line.

마우스 난소 후성유전체와 전사체의 세포 특이적 쌍 조사

Assessing cell-type-specific epigenomic and transcriptomic changes are key to understanding ovarian aging. To this end, the optimization of the ...

The Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Model as a Tool to Study Ovarian Tissue Transplantation

Ovarian tissue cryopreservation and transplantation is an effective strategy for preserving fertility but has one major drawback, namely massive follicle loss occurring shortly after reimplantation due to abnormal follicle activation and death. Rodents are benchmark models for investigating follicle activation, but the cost, time, and ethical considerations are becoming increasingly prohibitive, thus driving the development of alternatives. The chick chorioallantoic membrane (CAM) model is particularly attractive, being inexpensive and maintaining&#160;natural immunodeficiency up to day 17 postfertilization, making it ideal to study&#160;short-term xenografting of human ovarian tissue. The CAM is also highly vascularized and has been widely used as a model to explore angiogenesis. This gives it a remarkable advantage over in vitro models and allows the investigation of mechanisms affecting the early post-grafting follicle loss process. The protocol outlined herein aims to describe the development of a CAM xenografting model for human ovarian tissue, with specific insights into the effectiveness of the technique, the graft revascularization time frame, and the tissue viability across a 6 day grafting period.

The Chick Chorioallantoic Membrane CAM Model as a Tool to Study Ovarian Tissue Transplantation

Here, we describe a protocol for developing a chick chorioallantoic membrane (CAM) xenografting model for human ovarian tissue and demonstrate the effectiveness of the technique, the graft revascularization time frame, and the tissue viability across a 6 day grafting period.

난소 조직 이식을 연구하기 위한 도구로서의 병아리 맥락막 막(CAM) 모델

Ovarian tissue cryopreservation and transplantation is an effective strategy for preserving fertility but has one major drawback, namely massive follicle ...

난소절제술(Ovariecomized) 마우스 모델(Developing an Ovariectomized Mouse Model with Elevated FSH Level)

Exploring Independent Effects of Follicle-Stimulating Hormone In Vivo in a Mouse Model

During the transition from a reproductive to a nonreproductive phase (menopause), many women experience significant physiological and pathological changes, including decreased bone mass, increased blood lipids, and increased visceral adiposity. Levels of follicle-stimulating hormone (FSH) rise during the menopausal transition. Many studies have shown that FSH in various extragonadal tissues and organs is associated with the pathogenesis of multiple diseases. Thus, building an animal model that can help study the independent effects of FSH in vivo is particularly important. In this study, C57BL/6 female mice were ovariectomized and supplemented with estradiol valerate (OVX + E2) to eliminate the effect of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The OVX + E2 mice received solvent (N.S.) or different doses of recombinant FSH via intraperitoneal injection to create a mouse model (OVF) characterized by relatively stable estrogen and rising FSH levels. Thus, we successfully generated an experimental mouse model to mimic the early stage of menopause transition, characterized by elevated serum FSH levels. The OVF model has the advantages of being stable, low cost, and easy to operate, which is suitable for studies to explore the extragonadal actions of FSH. Here, we describe detailed protocols for the mouse OVF model.

저자 스포트라이트: FSH와 병태생리학적 변화의 관계 조사(Investigating the Relationship Between FSH and Pathophysiological Changes in Perimenopausal Women) - 생쥐 모델의 통찰력 

Follicle-stimulating hormone (FSH) in various extragonadal tissues and organs is associated with the pathogenesis of multiple diseases. The ovariectomized and FSH-treated mouse model (OVF) can be used to explore the extragonadal actions of FSH.

여성 쥐에서 난소 노화의 수명 및 건강 영향 조사를 Orthotopic 난소 이식 절차

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에 대한 면역 적격 마우스에 묽은 난소암의 Orthotopic 모델 생체내에 종양 이미징 및 모니터링

난소 조직 문화 현상을 마우스 난소에서 시각화 하

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

Whole Ovary Immunofluorescence, Clearing, and Multiphoton Microscopy for Quantitative 3D Analysis of the Developing Ovarian Reserve in Mouse

마우스 난소 지방 패드 속으로 이식

마우스 난소 후성유전체와 전사체의 세포 특이적 쌍 조사

난소 조직 이식을 연구하기 위한 도구로서의 병아리 맥락막 막(CAM) 모델

Exploring Independent Effects of Follicle-Stimulating Hormone In Vivo in a Mouse Model (생쥐 모델에서 모낭 자극 호르몬의 생체 내 독립 효과 탐색)

Exploring Independent Effects of Follicle-Stimulating Hormone In Vivo in a Mouse Model (생쥐 모델에서 모낭 자극 호르몬의 생체 내 독립 효과 탐색)

Exploring Independent Effects of Follicle-Stimulating Hormone In Vivo in a Mouse Model (생쥐 모델에서 모낭 자극 호르몬의 생체 내 독립 효과 탐색)