우리는 진심으 세포 배양 및 이미징 작업에 그들의 공헌에 대 한 이미징 핵심 시설 중서부 대학 (MWU)와 [Chanmoly 셍, 크리스토퍼 Dipollina, 대 릴 Giambalvo, 그리고 케이시 Sigerson] 학생의 그룹에 감사 합니다. 이 연구 작업은 MWU의 Intramural 교부 V.T. M.F. 및 연구 시작 자금에 의해 지원 되었다

동물의 사용을 포함 한 모든 절차는 제도적 검토 보드 승인 프로토콜 (IACUC 중서부 대학)에 의해 승인 되었습니다.
1. 마우스 배아에서 DRG 수확
<ol><li>
잘린 뒤 질 식 방법 (CO2)에 의해 성인 쥐 안락사 즉시 수술 척추 열 제거를 진행 합니다.
	<ol>
<li>Dorsally 좋은 위를 사용 하 여 피부 레이어 아래로 절단 하 여 척추 열을 노출 합니다. 동물의 나머지에서 척추 열을 구분 하는 천 골을 통해 열의 양쪽에 있는 갈비뼈를 절단 하 여 척추 열을 격리 합니다.</li>
		<li>바늘/핀을 사용 하 여 수술 매트에 척추 칼럼 (복 부 쪽)를 탑재 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>좋은 위 만들기를 사용 하 여 double 척추 운하의 복 부 측 폭로 척추의 양쪽에 잘라.</li>
	<li>현미경 수술 (배율 X 4로 설정)가 위를 사용 하 여 부드럽게 contralateral 등 쪽 척추 뿌리를 노출 하 고 주변 신경의 지 뿌리 따라 DRG를 찾으려고 편이 척수를 이동. 각 절의 척추 foramina 안에 부분적으로 숨겨집니다.</li>
	<li>DRG, 수확 한 집게 (척수와 사이 DRG) 지 루트 꼬집어 고 부드럽게 척추 구멍에서 DRG를 꺼내.</li>
	<li>DRG에 주변 척추 신경에 두 번째 집게를 배치 하 고 척추 신경 및 척추 루트 DRG를 당겨.</li>
	<li>수집된 DRG 35mm 차가운 혈 청 자유로운 미디어 (SFM)34의 3 mL를 포함 하는 배양 접시에에서 놓습니다.</li>
	<li>마른 유리 샬레에에서 각 개별 DRG 전송, 수술 현미경 청소 하 고 트림 초과 섬유와 여전히 DRG는 블레이드를 사용 하 여에 연결 하는 결합 조직. DRG는 흰색 척추 신경/루트 따라 불 룩 한 투명 구조로 쉽게 식별. 종종는 DRG를 둘러싼 혈관 발견 된다.</li>
	<li>얼음 처럼 차가운 SFM 미디어를 포함 하는 새로운 페 트리 접시에 청소 DRG를 놓습니다.</li>
	<li>젤라틴 단백질 혼합물을 희석 ( 재료의 표참조)에 얼음 처럼 차가운 SFM (1:1).</li>
	<li>DRG 비보 전 12-잘 접시에 접시 미리 젤라틴 단백질 혼합물의 10/20 µ L로 코팅 하 고 30-60 분에 대 한 37 ° C, 5% CO2 배양 기 안에 그들을 설정 합니다.</li>
	<li>부드럽게 커버 전체 explant 및 유지 조건 (37 ° C, 5% CO2) 경작에서 explants 문화 시스템에 SFM의 1.5-2 mL를 추가 합니다. 참고: 이것은 중요 한 단계는 DRG 유리 요리만 생산 젤라틴 단백질 혼합물에 의해 고정 되어 있기 때문 에입니다. 중 합 및 pipetting 능력의 시간 부동 피하기 위해 중요 하다.</li>
	<li>성장 DRG 마다 72 h의 매체 변경 하 고 필요한 만큼 성장 하는 DRG를 하자.</li>
</ol>2. 격리 DRG에서 단일 셀 신경
<ol><li>모든 DRG 콜라 IV의 1.25 mg/mL를 포함 하는 F12 미디어의 1.2 mL 살 균 1.5 mL 튜브에 수집 하 고 37 ° C, 5% CO2 45 분에서 그것을 품 어 또 다른 45 분에 대 한 첫 번째 부 화 후이 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>30 분에 대 한 트립 신 (0.025%)를 포함 하는 37 ° C, 5% CO2에 콜라 IV 치료 후 즉시 F12 미디어의 2 mL와 explants 취급 합니다.</li>
	<li>15 분 동안 37 ° C, 5% CO2 태아 둔감 한 혈 청 (FBS, 33%)를 포함 된 F12 미디어 2 mL와 함께 품 어.</li>
	<li>Explants F12 미디어의 2 mL로 세 번 세척 하 고 기계적으로 해리 그들 유리 피 펫과 미디어 흐린 변할 때까지 계속 합니다. 참고:이 절차는 이전 섹션에 설명 된 대로 동물에서 청소/손질 DRG의 컬렉션을 포함 한다. Explants의 기계적 분리를 수행할 때 부드러운 고 흘림 및 작업 자료의 손실을 발생할 수 있습니다 이후 과도 한 무력을 사용 하지 마십시오.</li>
	<li>0.22 μ m 필터 어떤 불순물 및 과도 결합 조직 제거를 통해 해리 세포 배양을 필터링 합니다. 필터링 된 셀 (2500 x g)에서 lysate 원심 2 분.</li>
	<li>제거는 상쾌한 고 셀 펠 릿 신경 문화 (1x), 항생제 혼합 (1x), L-글루타민 산 염 (0.5 m m)에 대 한 보충을 포함 하는 neurobasal 미디어의 500 µ L에서 resuspend 및 신경 성장 인자 (5 µ g/mL) ( 재료의 표참조).</li>
	<li>기본 셀 밀도 laminin 코팅 커버 슬라이드 (50 µ g/mL, 참조 테이블의 재료)에 천연된 셀 접시. 셀 카운터를 사용 하 여 셀 밀도 결정 합니다. 참고: 우리가 도금 25000 셀/커버 슬라이드에 세포. 이 기술은 신경 그리고 glial 위성 세포의 분리 수 있습니다. Pseudounipolar 신경와 공동 경작 glial 구성 요소 신경 생존을 위해 중요 한 역할을 한다.</li>
</ol>3. HSV-1 감염 DRG Explants의 DRG 파생 해리 셀
참고:이 작업 엄격 하 게는 우리는 완벽 하 게 갖춘된 실험실 중서부 대학 biosafety 위원회에 의해 승인 되는 biosafety 수준 2 (BSL-2) 요구에 따라 이루어졌다. HSV-1에의 KOS 스트레인이이 연구에 사용 되었다. 바이러스 긴장을 사용 하는 경우 적절 한 측정 및 현지 기관 지침에 따라 안전 조치 보시기 바랍니다.
<ol><li>확인 하 고 바이러스 감염 모델 SFM 미디어에 올바른 희석에 준비. 이 연구에 사용 된 바이러스는 HSV-1에의 KOS 긴장 했다. DRG 파생 작업 셀 해리 때 감염, 바이러스 같은 셀의 수 수를 의미에 대 한 다양 한 감염 (MOI)의 1 단위를 사용 합니다.</li>
	<li>Explants DRG를 감염 하는 경우 셀에는 explant의 정확한 수를 확인할 수 없으므로 virions (예를 들어, 10000 virions)의 수를 사용 합니다.</li>
	<li>Explant/셀 수 바이러스에 감염 된 살 균 셀 접시 또는 SFM 미디어와 바이러스의 혼합물을 포함 하는 튜브에 놓습니다. 참고: 우리는 25000 셀 (1 나)를 포함 하는 커버 슬라이드에 대 한 25000 virions를 사용. explant 감염, 우리는 10000 virions를 사용 합니다.</li>
	<li>열릴; 감염에 대 한 37 ° C에서 셀 플레이트 또는 관 배치 바이러스 노출 시간 바이러스 infectivity 따라 달라질 수 있습니다. 참고: 바이러스 항목 직교-nitrophenyl-β-galactoside (ONPG) 및 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactopyranoside (X-gal) 분석 실험26사용 하 여 확인 되었다.</li>
</ol>4입니다. 면역 형광 검사
<ol><li>버퍼링 하는 인산 염 (PBS)에 4% 포 르 말린에 explants 및 단일 셀 샘플을 수정. PBS에서 3 시간 10 분 대 한 샘플을 씻으십시오.</li>
	<li>원하는 기본 항 체 (안티-β-tubulin, 안티-peripherin, 안티-heparan 황산 염 (HS), 또는 반대로 당단백질 D (gD) 항 체, 희석에 대 한 참조 테이블의 자료 ) 0.3% 버퍼 PBS에에서 희석 된 샘플을 품 어 트리톤-X (PBST) 및 10 % 정상 염소 혈 청입니다. 밤새 4 ° C에서 샘플을 저장 합니다.</li>
	<li>3 번 10 분 각 PBS 가진 대 한 샘플을 씻으십시오. 1 h 적절 한 이차 항 체에 대 한 실 온에서 샘플을 품 어 (488 또는 Cy3; 희석에 대 한 재료의 표 참조) PBS에 희석.</li>
	<li>3 번 10 분 각 PBS 가진 대 한 샘플을 씻으십시오. 설치 단계 전에 20 분에 대 한 PBS에 Hoechst 염료 (1.5 µ M)와 샘플을 품 어.</li>
	<li>형광 장착 매체와 coverslip를 사용 하 여 유리 슬라이드에 샘플을 탑재 합니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Muratori, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+new+neurons+in+dorsal+root+Ganglia+in+adult+rats+after+peripheral+nerve+crush+injury.">Generation of new neurons in dorsal root Ganglia in adult rats after peripheral nerve crush injury.</a> Neural Plast. , 860546 (2015).</li><li>Dellarole, A., Grilli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+dorsal+root+ganglia+sensory+neurons+express+the+early+neuronal+fate+marker+doublecortin.">Adult dorsal root ganglia sensory neurons express the early neuronal fate marker doublecortin.</a> J Comp Neurol. 511 (3), 318-328 (2008).</li><li>Devor, M., Govrin-Lippmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+adult+rat+dorsal+root+ganglia.">Neurogenesis in adult rat dorsal root ganglia.</a> Neurosci Lett. 61 (1-2), 189-194 (1985).</li><li>Farel, P. B., Boyer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+effects+of+nerve+injury+on+estimates+of+sensory+neuron+number+in+juvenile+bullfrog.">Transient effects of nerve injury on estimates of sensory neuron number in juvenile bullfrog.</a> J Comp Neurol. 410 (2), 171-177 (1999).</li><li>Geuna, S., Borrione, P., Poncino, A., Giacobini-Robecchi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+morphometrical+changes+in+dorsal+root+ganglion+neurons+innervating+the+regenerated+lizard+tail.">Morphological and morphometrical changes in dorsal root ganglion neurons innervating the regenerated lizard tail.</a> Int J Dev Neurosci. 16 (2), 85-95 (1998).</li><li>La Forte, R. A., Melville, S., Chung, K., Coggeshall, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+neurogenesis+of+adult+rat+dorsal+root+ganglion+cells.">Absence of neurogenesis of adult rat dorsal root ganglion cells.</a> Somatosens Mot Res. 8 (1), 3-7 (1991).</li><li>Pannese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+on+the+Ultrastructural+Changes+of+the+Spinal+Ganglion+Neurons+in+the+Course+of+Axon+Regeneration+and+Cell+Hypertrophy+I.+Changes+during+Axon+Regeneration.">Investigations on the Ultrastructural Changes of the Spinal Ganglion Neurons in the Course of Axon Regeneration and Cell Hypertrophy I. Changes during Axon Regeneration.</a> Z Zellforsch Mikrosk Anat. 60, 711-740 (1963).</li><li>Popken, G. J., Farel, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+neuron+number+in+neonatal+and+adult+rats+estimated+by+means+of+stereologic+and+profile-based+methods.">Sensory neuron number in neonatal and adult rats estimated by means of stereologic and profile-based methods.</a> J Comp Neurol. 386 (1), 8-15 (1997).</li><li>Tandrup, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbiased+estimates+of+number+and+size+of+rat+dorsal+root+ganglion+cells+in+studies+of+structure+and+cell+survival.">Unbiased estimates of number and size of rat dorsal root ganglion cells in studies of structure and cell survival.</a> J Neurocytol. 33 (2), 173-192 (2004).</li><li>Sarikcioglu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+severe+crush+injury+on+axonal+regeneration:+a+functional+and+ultrastructural+study.">Effect of severe crush injury on axonal regeneration: a functional and ultrastructural study.</a> J Reconstr Microsurg. 23 (3), 143-149 (2007).</li><li>Varejao, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+morphological+assessment+of+a+standardized+rat+sciatic+nerve+crush+injury+with+a+non-serrated+clamp.">Functional and morphological assessment of a standardized rat sciatic nerve crush injury with a non-serrated clamp.</a> J Neurotrauma. 21 (11), 1652-1670 (2004).</li><li>Hanack, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+blocks+pathological+but+not+acute+TRPV1+pain+signals.">GABA blocks pathological but not acute TRPV1 pain signals.</a> Cell. 160 (4), 759-770 (2015).</li><li>Pagadala, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+NR1+subunit+of+NMDARs+in+primary+sensory+neurons+leads+to+hyperexcitability+and+pain+hypersensitivity:+involvement+of+Ca(2+)-activated+small+conductance+potassium+channels.">Loss of NR1 subunit of NMDARs in primary sensory neurons leads to hyperexcitability and pain hypersensitivity: involvement of Ca(2+)-activated small conductance potassium channels.</a> J Neurosci. 33 (33), 13425-13430 (2013).</li><li>Zhang, X. L., Albers, K. M., Gold, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation-induced+increase+in+nicotinic+acetylcholine+receptor+current+in+cutaneous+nociceptive+DRG+neurons+from+the+adult+rat.">Inflammation-induced increase in nicotinic acetylcholine receptor current in cutaneous nociceptive DRG neurons from the adult rat.</a> Neuroscience. 284, 483-499 (2015).</li><li>Zhu, Y., Lu, S. G., Gold, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+inflammation+increases+GABA-induced+depolarization+of+rat+cutaneous+dorsal+root+ganglion+neurons+in+vitro.">Persistent inflammation increases GABA-induced depolarization of rat cutaneous dorsal root ganglion neurons in vitro.</a> Neuroscience. 220, 330-340 (2012).</li><li>Amir, R., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+cross-excitation+between+afferent+A-+and+C-neurons+in+dorsal+root+ganglia.">Functional cross-excitation between afferent A- and C-neurons in dorsal root ganglia.</a> Neuroscience. 95 (1), 189-195 (2000).</li><li>Kim, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupled+Activation+of+Primary+Sensory+Neurons+Contributes+to+Chronic+Pain.">Coupled Activation of Primary Sensory Neurons Contributes to Chronic Pain.</a> Neuron. 91 (5), 1085-1096 (2016).</li><li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly.">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li><li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-Region-Specific+Organoids+Using+Mini-bioreactors+for+Modeling+ZIKV+Exposure.">Brain-Region-Specific Organoids Using Mini-bioreactors for Modeling ZIKV Exposure.</a> Cell. 165 (5), 1238-1254 (2016).</li><li>Lowery, L. A., Van Vactor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+trip+of+the+tip:+understanding+the+growth+cone+machinery.">The trip of the tip: understanding the growth cone machinery.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10 (5), 332-343 (2009).</li><li>Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+axon+guidance.">Molecular mechanisms of axon guidance.</a> Science. 298 (5600), 1959-1964 (2002).</li><li>Miller, C., Shanks, H., Witt, A., Rutkowski, G., Mallapragada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oriented+Schwann+cell+growth+on+micropatterned+biodegradable+polymer+substrates.">Oriented Schwann cell growth on micropatterned biodegradable polymer substrates.</a> Biomaterials. 22 (11), 1263-1269 (2001).</li><li>Clark, P., Connolly, P., Curtis, A. S., Dow, J. A., Wilkinson, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topographical+control+of+cell+behaviour:+II.+Multiple+grooved+substrata.">Topographical control of cell behaviour: II. Multiple grooved substrata.</a> Development. 108 (4), 635-644 (1990).</li><li>Antinone, S. E., Smith, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+axon+transport+of+herpes+simplex+virus+and+pseudorabies+virus:+a+live-cell+comparative+analysis.">Retrograde axon transport of herpes simplex virus and pseudorabies virus: a live-cell comparative analysis.</a> J Virol. 84 (3), 1504-1512 (2010).</li><li>Holland, D. J., Miranda-Saksena, M., Boadle, R. A., Armati, P., Cunningham, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterograde+transport+of+herpes+simplex+virus+proteins+in+axons+of+peripheral+human+fetal+neurons:+an+immunoelectron+microscopy+study.">Anterograde transport of herpes simplex virus proteins in axons of peripheral human fetal neurons: an immunoelectron microscopy study.</a> J Virol. 73 (10), 8503-8511 (1999).</li><li>Sharthiya, H., Seng, C., Van Kuppevelt, T. H., Tiwari, V., Fornaro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HSV-1+interaction+to+3-O-sulfated+heparan+sulfate+in+mouse-derived+DRG+explant+and+profiles+of+inflammatory+markers+during+virus+infection.">HSV-1 interaction to 3-O-sulfated heparan sulfate in mouse-derived DRG explant and profiles of inflammatory markers during virus infection.</a> J Neurovirol. 23 (3), 483-491 (2017).</li><li>Zerboni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Herpes+simplex+virus+1+tropism+for+human+sensory+ganglion+neurons+in+the+severe+combined+immunodeficiency+mouse+model+of+neuropathogenesis.">Herpes simplex virus 1 tropism for human sensory ganglion neurons in the severe combined immunodeficiency mouse model of neuropathogenesis.</a> J Virol. 87 (5), 2791-2802 (2013).</li><li>Koyuncu, O. O., Hogue, I. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus+infections+in+the+nervous+system.">Virus infections in the nervous system.</a> Cell Host Microbe. 13 (4), 379-393 (2013).</li><li>Swanson, P. A., McGavern, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+diseases+of+the+central+nervous+system.">Viral diseases of the central nervous system.</a> Curr Opin Virol. 11, 44-54 (2015).</li><li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+viral+infections+of+the+central+nervous+system:+part+2.">Emerging viral infections of the central nervous system: part 2.</a> Arch Neurol. 66 (9), 1065-1074 (2009).</li><li>Preston, C., Efstathiou, S., Campadelli-Fiume, G., Arvin, A., Mocarski, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch+33.">Ch 33.</a> Human Herpesviruses Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis. , (2007).</li><li>Roizman, B., Whitley, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inquiry+into+the+molecular+basis+of+HSV+latency+and+reactivation.">An inquiry into the molecular basis of HSV latency and reactivation.</a> Annu Rev Microbiol. 67, 355-374 (2013).</li><li>Whitley, R., Kimberlin, . D. W., Prober, C. G., Arvin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis. , (2007).</li><li>Fueshko, S., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LHRH+cells+migrate+on+peripherin+fibers+in+embryonic+olfactory+explant+cultures:+an+in+vitro+model+for+neurophilic+neuronal+migration.">LHRH cells migrate on peripherin fibers in embryonic olfactory explant cultures: an in vitro model for neurophilic neuronal migration.</a> Dev Biol. 166 (1), 331-348 (1994).</li><li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+heparan+sulphate+in+inflammation.">The role of heparan sulphate in inflammation.</a> Nat Rev Immunol. 6 (9), 633-643 (2006).</li><li>Zhang, X., Wang, B., Li, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implications+of+heparan+sulfate+and+heparanase+in+neuroinflammation.">Implications of heparan sulfate and heparanase in neuroinflammation.</a> Matrix Biol. 35, 174-181 (2014).</li><li>Du, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+GABAergic+signaling+within+sensory+ganglia+controls+peripheral+nociceptive+transmission.">Local GABAergic signaling within sensory ganglia controls peripheral nociceptive transmission.</a> J Clin Invest. 127 (5), 1741-1756 (2017).</li><li>Hughes, C. S., Postovit, L. M., Lajoie, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel:+a+complex+protein+mixture+required+for+optimal+growth+of+cell+culture.">Matrigel: a complex protein mixture required for optimal growth of cell culture.</a> Proteomics. 10 (9), 1886-1890 (2010).</li></ol>

저자 없다 공개.

Ex vivo DRG 모델 두 신경 그리고 glial 대사37에 있는 microenvironment의 효과 뿐 아니라 신경 명과 상호 작용 등의 다양 한 스펙트럼을 조사 하기 위해 매우 유용 합니다. 또한, DRG 모델 병원 성 메커니즘 및 급성 만성 및 잠재성 단계 감염 또는 특정된 질병에 대 한 ex vivo 시스템 개발 하 여 마커를 관련 된 관련 된 질문을 해결 하기 위해 비용 효율적인 도구로 사용 될 수 있?...

이 원고에서 우리를 PNS 모욕 신경 폐해에서 배열에 생물학 응답의 넓은 범위를 조사 하는 보존된 조직 같은 microenvironment로 파생 된 마우스 DRG 모델 시스템의 organotypic ex vivo 모델을 받는 방법을 보고합니다 상호 작용, neuroplasticity, 염증 성 마커, 바이러스 성 감염. 또한, 우리는 더 DRG 파생 한 감각 신경 및 위성 세포의 기본 공동 문화를 만들려는 프로토콜 개발.
DRG는 위성 회색-문제-단위 척추 신경의 등 쪽 척추 뿌리 따라 중앙 신경 시스템 (CNS) 밖에 위치 해 있습니다. DRG, 척추 foramina의 근접에 있는 pseudounipolar 감각 뉴런 하며 위성 glial 세포. Pseudounipolar 신경 셀 시체 주변 대상에서 체세포와 내장 입력을 들고 주변 프로세스 및 CNS에 세포 체에서 감각 정보를 전송 하는 중앙 프로세스에 분할 단일 neurite 기능. 연결 캡슐 정의 CNS에서 신경 그리고 glial 세포의 주변이 클러스터를 분리 하 고. DRG에서 출생 후 셀 마이그레이션 없음 설명 적 이며 지방 줄기 세포 틈새 생활1에 걸쳐 발생 하는 neurogenic 이벤트에 대 한 책임. 따라서,이 모델은 특히 성체, axonogenesis, 외상 성 병 변, 및 세포 죽음2,3,,45,6,7 공부에 적합 ,,89 .
Neuroregeneration의 분야에는 DRG vivo에서 에서 수확 explanted 시험관에서 재현 axonotmesis, 신경 세포 체는 축 삭은 완전히 절단에 부상 상태 innervated 대상10에서 분리 ,11. 그것은 잘 알려져 주변 신경 상해는 DRG에 감소 및 증가 유전자 발현을 발생할 수 있습니다 및 이러한 변경의 많은 재생 프로세스의 결과 있지만 많은 비 신경 세포에서 면역 반응 또는 다른 결과 수도 있습니다. 비보 전 을 사용 하 여이 복잡성의 일부 고립 된 DRG의 시스템을 제거 하 고 기계적 경로 보다 쉽게 조사 수 있습니다.
CNS, 많은 신경 전달 물질 GABA12,13,,1415 신경 소마의 수준에서를 포함 하 여에 대 한 수용 체의 풍부에 감각 입력을 전달에 중앙의 역할 외에도 interneuronal 크로스-여기의 증거는 DRG 감각 입력16,17의 정교한 예비 통합자는 제안할 수 있습니다. 이러한 새로운 결과 부여 DRG explant에 비슷한 신경 조직 특정 organoids의 광범위 한 실험 분야에 사용 되는 다른 "미니 두뇌" 모델 및 치료 미니 신경 네트워크 시스템의 특성 신경 질환18,19에 접근. 이러한 증거는 사실은 DRG 연결 캡슐에 의해 포위 하는 신경 조직의 개별 및 잘 정의 된 클러스터 함께 비보 전 이식에 대 한 적합 한 장기 게.
자란 마우스 DRG 매력적인 다세포 옵션 종 간의 구조 및 유전적 유사성으로 인해 인간의 pathophysiologies 모델을 제공 합니다. 또한, 유전자 변형 마우스 긴장의 큰 저장소 미래 기계 론 적인 연구에 매우 도움이 되는. Neurite 확장 모두 개발 및 그 이후 부상 성장 콘 및 기판20,21사이 기계적인 상호 작용을 요구 한다. 나노 및 마이크로 패턴이 기판 neurite 결과와 그들의 microenvironments에서 지형 기능에 대응 하는 자신의 능력을 보여주는 도구로 사용 되었습니다. 뉴런, 준수, 마이그레이션, 생존과 기판22,23에 홈 같은 표면 기능 탐색에 그들의 축 삭의 방향을 표시 되었습니다. 그러나, 이러한 연구는 일반적으로 교양된 셀 라인 활용 하 고 어떻게 기본 신경 세포 지 예측 하기 어려운 비보 전또는 vivo에서 잘 정의 된, 물리적 신호에 응답.
마우스 사용이 제안에 대 한 DRG explant 모델 비보 전 진짜 셀 상호 작용 및 생 화 확 적인 신호 성장 축 삭을 둘러싼 모방 합니다. 많은 다른 neuroinflammation, axonal 재생, neurosphere 생산에서에서 배열 하는 실험적인 패러다임에서 DRG explant 가운데 모델 감각 내 바이러스 성 감염 및 대기 시간 측면을 조사 하는 유용한 도구 역할을 계속합니다 중추24,25,,2627.
신경 계통 (NS)는 일반적으로 바이러스 감염28,,2930에 대 한 대상입니다. 대부분 바이러스 감염 상피 그리고 내 피 세포 표면 그리고 주변 신경 통해 ns 표면 조직에서 그들의 방법을 감각 및 모터 섬유. 특히, 포진 심 플렉스 바이러스 타입 1 (HSV-1) 상피 세포에 초기 감염 감각 중추에 선호, 평생 대기 시간을 설정 후 PNS31,32의 DRG. PNS 감염 HSV-1 neuroptropic 기능 신경 질환33에 궁극적으로 지도 한다.

<table><tbody><tr><td>Adult Mice NIH/Swiss</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>35mm petri dish</td><td>Cell Treat</td><td>229635</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel ECM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1270</td><td>gelatinous protein mixture</td></tr><tr><td>F12 Media</td><td>Gibco</td><td>11765-054</td><td>*Part of SFM media</td></tr><tr><td>Collagenase IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6178</td><td></td></tr><tr><td>0.22um filter</td><td>BD Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal media</td><td>Gibco</td><td>10888-022</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement</td><td>Gibco</td><td>17504-044</td><td>Supplement for neuronal culture</td></tr><tr><td>PSN antibiotics</td><td>Gibco</td><td>15640-055</td><td>*Part of SFM media&lt;br/&gt; Antibiotic mixture</td></tr><tr><td>L-glutamate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td>*Part of SFM media</td></tr><tr><td>NGF</td><td>Alomone Labs</td><td>N-100</td><td>Nerve growth factor</td></tr><tr><td>Laminin coated coverslide</td><td>Neuvitro</td><td>GG-14-Laminin</td><td></td></tr><tr><td>ONPG subtrate</td><td>Pierce</td><td>34055</td><td></td></tr><tr><td>X-gal</td><td>Invitrogen</td><td>15520034</td><td></td></tr><tr><td>Antibody anti-B-tubulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8328</td><td>1:2000 dilution</td></tr><tr><td>Antibody anti-peripherin</td><td>Millipore</td><td>AB1530</td><td>1:1000 dilution</td></tr><tr><td>Hoechst dye</td><td>Thermo Fisher</td><td>62249</td><td>1.5 &amp;micro;M final concentration</td></tr><tr><td>Anti-heparan sulfate</td><td>US Biological</td><td>H1890-10</td><td>0.180555556</td></tr><tr><td>Anti gD antibody</td><td>Virostat</td><td>196</td><td>1:10 dilution</td></tr><tr><td>BSA&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153-100G</td><td>*Part of SFM media</td></tr><tr><td>BME</td><td>Gibco</td><td>21010-046</td><td>*Part of SFM media</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021-1KG</td><td>*Part of SFM media</td></tr><tr><td>KIT (Insulin-transferrin-Selenium-A)</td><td>Gibco</td><td>51300-044</td><td>*Part of SFM media</td></tr><tr><td>Vitamin-C</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4403</td><td>*Part of SFM media</td></tr><tr><td>Putrescine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7505</td><td>*Part of SFM media</td></tr><tr><td>488 (goat anti-mouse)</td><td>Life Technologies</td><td>A11029</td><td></td></tr><tr><td>Cy3 (goat anti-rabbit)</td><td>Jackson Immunoresearch laboratories</td><td>111-165-003</td><td></td></tr><tr><td>Normal Goat serum&amp;nbsp;</td><td>Vector</td><td>S-1000</td><td></td></tr><tr><td>Formalin Solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT5014-120ML</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-031</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9284-500ML</td><td></td></tr><tr><td>VectaShield</td><td>Vector</td><td>H-1500</td><td>Flurescence mount</td></tr><tr><td>Diamond White Glass Coverslides</td><td>Globe Scientific</td><td>1380-20</td><td></td></tr></tbody></table>

adult mouse drg explant and dissociated cell models to investigate neuroplasticity and responses to environmental insults including viral infection

이 프로토콜 지 루트 마우스 파생 중추 (DRG) explant 및 생체 외에서 DRG 파생 공동 문화 해리 감각 신경 그리고 glial 위성 세포의 비보 전 모델을 설명합니다. 이들은 다양 한 생물학 응답 neuroplasticity, 상호 작용 신경 폐해에서 이르는 말 초 신 경계 (PNS)의 생리 적 및 병 적인 상태와 관련 된 조사를 유용 하 고 다재 다능 한 모델 neuroinflammation, 그리고 바이러스 성 감염입니다. DRG explant의 사용은 여러 이유로 단순한 단일 셀 모델에 비해 과학적으로 유리 하다. 예를 들어, organotypic 문화, DRG explant 비보 전 모든 신경 그리고 glial 기능에 중요 한 역할을 재생 하는 세포 외 microenvironment를 포함 하 여 전체 신경 네트워크의 전송을 수 있습니다. 또한, DRG explants 또한 유지할 수 있습니다 비보 전 위해 몇 일 및 문화 조건으로 불안정 수 있습니다 원하는. 또한, 수확된 DRG 수 수 더 해리를 생체 외에서 공동 문화에 기본 감각 신경 그리고 glial 신경 상호 작용, neuritogenesis, axonal 콘 상호는 extracellular 조사 위성 glial 세포의 microenvironment, 그리고 더 일반적으로, 신경 물질 대사와 관련 된 모든 측면. 따라서, DRG explant 시스템 유연성을 다양 한 비용 효율적인 방식으로, 생리 적, 생물 학적 및 병 적인 조건에 관련 된 이벤트를 연구의 큰 거래를 제공 합니다.

Neuroplasticity 및 신경-환경 상호 작용의 여러 측면 DRG와 단일 해리 셀 문화 모델을 사용 하 여 조사 수 있습니다. 우리는 DRG explant와 DRG 파생 해리 셀 개요로 서 그림 1에 표시를 분리 하 여 연구를 시작 했다. 조직 및 단일 셀 모델은 다양 한 면역 형광 검사, 서쪽 오 점, 게놈 분석, 실험 설계 및 목표의 성격에 따라 다른 분석 기법 등 분자 기술 사용 하 여 분석할 수 있습니다. 첫...

Watch this Scientific Journal Video about Adult Mouse DRG Explant and Dissociated Cell Models to Investigate Neuroplasticity and Responses to Environmental Insults Including Viral Infection at JoVE.co

Adult Mouse DRG Explant and Dissociated Cell Models to Investigate Neuroplasticity and Responses to Environmental Insults Including Viral Infection

이 보고서에서 organotypic 문화와 지 루트 마우스 파생 중추의 해리 주 문화의 장점 다양 한 메커니즘 neuroplasticity, 상호 작용 신경 폐해와 관련 된 조사를 강조 표시 됩니다. neuroinflammation, 그리고 바이러스 성 감염에 응답입니다.

성인 마우스 DRG Explant와 해리 셀 모델 Neuroplasticity 바이러스 성 감염을 포함 한 환경 모욕에 대 한 응답을 조사 하

This protocol describes an ex vivo model of mouse-derived dorsal root ganglia (DRG) explant and in vitro DRG-derived co-culture of dissociated sensory ...

adult-mouse-drg-explant-dissociated-cell-models-to-investigate

Research

JoVE Journal

Neuroscience

21.3K 조회수.  Midwestern University. 이 보고서에서 organotypic 문화와 지 루트 마우스 파생 중추의 해리 주 문화의 장점 다양 한 메커니즘 neuroplasticity, 상호 작용 신경 폐해와 관련 된 조사를 강조 표시 됩니다. neuroinflammation, 그리고 바이러스 성 감염에 응답입니다.

비디오: Adult Mouse DRG Explant and Dissociated Cell Models to Investigate Neuroplasticity and Responses to Environmental Insults Including Viral Infection

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and Schwann cells in the peripheral nervous system (PNS). We use an in vitro myelination assay, an established model for studying CNS myelination in vitro. To do this, oligodendrocyte precursor cells (OPCs) are added to the purified primary rodent dorsal root ganglion (DRG) neurons to form myelinating co-cultures. In order to specifically interrogate the roles that particular proteins expressed by oligodendrocytes exert upon myelination we have developed protocols that selectively transduce OPCs using the lentivirus overexpressing wild type, constitutively active or dominant negative proteins before being seeded onto the DRG neurons. This allows us to specifically interrogate the roles of these oligodendroglial proteins in regulating myelination. The protocols can also be applied in the study of other cell types, thus providing an approach that allows selective manipulation of proteins expressed by a desired cell type, such as oligodendrocytes for the targeted study of signaling and compensation mechanisms. In conclusion, combining the in vitro myelination assay with lentiviral infected OPCs provides a strategic tool for the analysis of molecular mechanisms involved in myelination.

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Here we present protocols that offer a flexible and strategic foundation for virally manipulating oligodendrocyte precursor cells to overexpress proteins of interest in order to specifically interrogate their role in oligodendrocytes via the in vitro model of central nervous system myelination.

생산 및 선택적으로 형질 도입 기본 희소 돌기 아교 세포 전구체 세포에 렌티 바이러스의 사용을위한<em&gt; 체외</em&gt; 수초 분석

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

연구

발생학

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability to support axon growth and a hostile environment in the mature CNS1,2. In contrast, mature neurons in the peripheral nervous system (PNS) regenerate readily after injuries3. Adult dorsal root ganglion (DRG) neurons are well known to regenerate robustly after peripheral nerve injuries. Each DRG neuron grows one axon from the cell soma, which branches into two axonal branches: a peripheral branch innervating peripheral targets and a central branch extending into the spinal cord. Injury of the DRG peripheral axons results in substantial axon regeneration, whereas central axons in the spinal cord regenerate poorly after the injury. However, if the peripheral axonal injury occurs prior to the spinal cord injury (a process called the conditioning lesion), regeneration of central axons is greatly improved4. Moreover, the central axons of DRG neurons share the same hostile environment as descending corticospinal axons in the spinal cord. Together, it is hypothesized that the molecular mechanisms controlling axon regeneration of adult DRG neurons can be harnessed to enhance CNS axon regeneration. As a result, adult DRG neurons are now widely used as a model system to study regenerative axon growth5-7.
Here we describe a method of adult DRG neuron culture that can be used for genetic study of axon regeneration in vitro. In this model adult DRG neurons are genetically manipulated via electroporation-mediated gene transfection6,8. By transfecting neurons with DNA plasmid or si/shRNA, this approach enables both gain- and loss-of-function experiments to investigate the role of any gene-of-interest in axon growth from adult DRG neurons. When neurons are transfected with si/shRNA, the targeted endogenous protein is usually depleted after 3-4 days in culture, during which time robust axon growth has already occurred, making the loss-of-function studies less effective. To solve this problem, the method described here includes a re-suspension and re-plating step after transfection, which allows axons to re-grow from neurons in the absence of the targeted protein. Finally, we provide an example of using this in vitro model to study the role of an axon regeneration-associated gene, c-Jun, in mediating axon growth from adult DRG neurons9.

An in vitro model for genetic study of axon regeneration using cultured adult mouse dorsal root ganglion neurons is described. The method includes a re-suspension/re-plating step to allow axon re-growth from neurons undergoing genetic manipulation. This approach is especially useful for loss-of-function studies of axon regeneration using RNAi-based protein knockdown.

교양 성인 지느러미 루트 신경절의 신경 세포와 축삭 재생의 유전 연구

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

신경과학

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. Studying neurons in vivo can be challenging due to their complexity, their varied and dynamic environments, and technical limitations. For these reasons, studying neurons in vitro can prove beneficial to unravel the complex mysteries of neurons. The well-defined nature of cell culture models provides detailed control over environmental conditions and variables. Here we describe how to isolate, dissociate, and culture primary neurons from chick embryos. This technique is rapid, inexpensive, and generates robustly growing sensory neurons. The procedure consistently produces cultures that are highly enriched for neurons and has very few non-neuronal cells (less than 5%). Primary neurons do not adhere well to untreated glass or tissue culture plastic, therefore detailed procedures to create two distinct, well-defined laminin-containing substrata for neuronal plating are described. Cultured neurons are highly amenable to multiple cellular and molecular techniques, including co-immunoprecipitation, live cell imagining, RNAi, and immunocytochemistry. Procedures for double immunocytochemistry on these cultured neurons have been optimized and described here.

Cell culture models provide detailed control over environmental conditions and thus provide a powerful platform to elucidate numerous aspects of neuronal cell biology. We describe a rapid, inexpensive, and reliable method to isolate, dissociate, and culture sensory neurons from chick embryos. Details of substrata preparation and immunocytochemistry are also provided.

병아리 배아에서 분리 및 해리 감각 뉴런의 문화

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the study of nerve regeneration and myelination. The glial cells of the peripheral nervous system, Schwann cells (SC), are key facilitators of these processes; it is therefore crucial that the interactions of these cellular components are studied together. Direct contact between DRG neurons and glial cells provides additional stimuli sensed by specific membrane receptors, further improving the neuronal response. SC release growth factors and proteins in the culture medium, which enhance neuron survival and stimulate neurite sprouting and extension. However, SC require long proliferation time to be used for tissue engineering applications and the sacrifice of an healthy nerve for their sourcing. Adipose-derived stem cells (ASC) differentiated into SC phenotype are a valid alternative to SC for the set-up of a co-culture model with DRG neurons to study nerve regeneration. The present work presents a detailed and reproducible step-by-step protocol to harvest both DRG neurons and ASC from adult rats; to differentiate ASC towards a SC phenotype; and combines the two cell types in a direct co-culture system to investigate the interplay between neurons and SC in the peripheral nervous system. This tool has great potential in the optimization of tissue-engineered constructs for peripheral nerve repair.

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal root ganglia (DRG) are structures containing the sensory neurons of the peripheral nervous system. When dissociated, they can be co-cultured with SC-like adipose-derived stem cells (ASC), providing a valuable model to study in vitro nerve regeneration and myelination, mimicking the in vivo environment at the injury site.

루트 신경절 신경 세포와 차별화 된 지방 유래 줄기 세포를 이룬다 :<em&gt; 체외</em&gt; 공동 문화 모델은 주변 신경 재생을 연구하는

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral tissues, such as skin, muscle and visceral organs, as well as the spinal dorsal horn of the central nervous system. Sensory neurons transmit somatic sensation, including touch, pain, thermal, and proprioceptive sensations. Therefore, DRG primary cultures are widely used to study the cellular mechanisms of nociception, physiological functions of sensory neurons, and neural development. The cultured neurons can be applied in studies involving electrophysiology, signal transduction, neurotransmitter release, or calcium imaging. With DRG primary cultures, scientists may culture dissociated DRG neurons to monitor biochemical changes in single or multiple cells, overcoming many of the limitations associated with in vivo experiments. Compared to commercially available DRG-hybridoma cell lines or immortalized DRG neuronal cell lines, the composition and properties of the primary cells are much more similar to sensory neurons in tissue. However, due to the limited number of cultured DRG primary cells that can be isolated from a single animal, it is difficult to perform high-throughput screens for drug targeting studies. In the current article, procedures for DRG collection and culture are described. In addition, we demonstrate the treatment of cultured DRG cells with an agonist of neuropeptide FF receptor type 2 (NPFFR2) to induce the release of peptide neurotransmitters (calcitonin gene-related peptide (CRGP) and substance P (SP)).

Dorsal root ganglia (DRG) primary cultures are frequently used to study physiological functions or pathology-related events in sensory neurons. Here, we demonstrate the use of lumbar DRG cultures to detect the release of neurotransmitters after neuropeptide FF receptor type 2 stimulation with a selective agonist.

신경 전달 물질 방출 공부 하 느 루트 중추 절연 및 주 문화

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral ...

Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus infection in mice. As alphaherpesviruses are main invaders of the peripheral nervous system (PNS), this model is suitable to characterize the kinetics of viral replication, its spread from the PNS to CNS, and associated neuroinflammatory responses. The footpad inoculation model allows virus particles to spread from a primary infection site in the footpad epidermis to sensory and sympathetic nerve fibers that innervate the epidermis, sweat glands, and dermis. The infection spreads via the sciatic nerve to the dorsal root ganglia (DRG) and ultimately through the spinal cord to the brain. Here, a mouse footpad is inoculated with pseudorabies virus (PRV), an alphaherpesvirus closely related to herpes simplex virus (HSV) and varicella-zoster virus (VZV). This model demonstrates that PRV infection induces severe inflammation, characterized by neutrophil infiltration in the footpad and DRG. High concentrations of inflammatory cytokines are subsequently detected in homogenized tissues by ELISA. In addition, a strong correlation is observed between PRV gene and protein expression (via qPCR and IF staining) in DRG and the production of pro-inflammatory cytokines. Therefore, the footpad inoculation model provides a better understanding of the processes underlying alphaherpesvirus-induced neuropathies and may lead to the development of innovative therapeutic strategies. In addition, the model can guide research on peripheral neuropathies, such as multiple sclerosis and associated viral-induced damage to the PNS. Ultimately, it can serve as a cost-effective in vivo tool for drug development.

The footpad inoculation model is a valuable tool for characterizing viral-induced neuroinflammatory responses in vivo. In particular, it provides a clear assessment of viral kinetics and associated immunopathological processes initiated in the peripheral nervous system.

바이러스 유발 신경 염증 반응을 연구하는 마우스 풋패드 접종 모델

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus ...

면역학 및 감염병학

Coculture of Axotomized Rat Retinal Ganglion Neurons with Olfactory Ensheathing Glia, as an In Vitro Model of Adult Axonal Regeneration

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory bulb. Throughout adult life, they are key for axonal growing of newly generated olfactory neurons, from the lamina propria to the ONL. Due to their pro-regenerative properties, these cells have been used to foster axonal regeneration in spinal cord or optic nerve injury models.
We present an in vitro model to assay and measure OEG neuroregenerative capacity after neural injury. In this model, reversibly immortalized human OEG (ihOEG) is cultured as a monolayer, retinas are extracted from adult rats and retinal ganglion neurons (RGN) are cocultured onto the OEG monolayer. After 96 h, axonal and somatodendritic markers in RGNs are analyzed by immunofluorescence and the number of RGNs with axon and the mean axonal length/neuron are quantified.
This protocol has the advantage over other in vitro assays that rely on embryonic or postnatal neurons, that it evaluates OEG neuroregenerative properties in adult tissue. Also, it is not only useful for assessing the neuroregenerative potential of ihOEG but can be extended to different sources of OEG or other glial cells.

We present an in vitro model to assess olfactory ensheathing glia (OEG) neuroregenerative capacity, after neural injury. It is based on a coculture of axotomized adult retinal ganglion neurons (RGN) on OEG monolayers and subsequent study of axonal regeneration, by analyzing RGN axonal and somatodendritic markers.

축 축 하 재생의 시험관 내 모델로, 후각 천시 글리아와 축 축 절 망막 신경의 공동 문화

Olfactory ensheathing glia (OEG) cells are localized all the way from the olfactory mucosa to and into the olfactory nerve layer (ONL) of the olfactory ...

DRG 배양에서 신경 세포 과민증을 연구하기 위한 고급 체외 모델

Harvesting, Embedding, and Culturing Dorsal Root Ganglia in Multi-compartment Devices to Study Peripheral Neuronal Features

The most common peripheral neuronal feature of pain is a lowered stimulation threshold or hypersensitivity of terminal nerves from the dorsal root ganglia (DRG). One proposed cause of this hypersensitivity is associated with the interaction between immune cells in the peripheral tissue and neurons. In vitro models have provided foundational knowledge in understanding how these mechanisms result in nociceptor hypersensitivity. However, in vitro models face the challenge of translating efficacy to humans. To address this challenge, a physiologically and anatomically relevant in vitro model has been developed for the culture of intact dorsal root ganglia (DRGs) in three isolated compartments in a 48-well plate. Primary DRGs are harvested from adult Sprague Dawley rats after humane euthanasia. Excess nerve roots are trimmed, and the DRG is cut into appropriate sizes for culture. DRGs are then grown in natural hydrogels, enabling robust growth in all compartments. This multi-compartment system offers anatomically relevant isolation of the DRG cell bodies from neurites, physiologically relevant cell types, and mechanical properties to study the interactions between neural and immune cells. Thus, this culture platform provides a valuable tool for investigating treatment isolation strategies, ultimately leading to an improved screening approach for predicting pain.

저자 스포트라이트: 만성 통증 치료 효능을 향상시키기 위한 In vitro 및 In vivo 모델

This protocol provides a technique to harvest and culture explanted dorsal root ganglion (DRG) from adult Sprague Dawley rats in a multi-compartment (MC) device.

말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.

The most common peripheral neuronal feature of pain is a lowered stimulation threshold or hypersensitivity of terminal nerves from the dorsal root ganglia ...

성인 마우스 DRG Explant와 해리 셀 모델 Neuroplasticity 바이러스 성 감염을 포함 한 환경 모욕에 대 한 응답을 조사 하

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

생산 및 선택적으로 형질 도입 기본 희소 돌기 아교 세포 전구체 세포에 렌티 바이러스의 사용을위한

교양 성인 지느러미 루트 신경절의 신경 세포와 축삭 재생의 유전 연구

병아리 배아에서 분리 및 해리 감각 뉴런의 문화

루트 신경절 신경 세포와 차별화 된 지방 유래 줄기 세포를 이룬다 :

신경 전달 물질 방출 공부 하 느 루트 중추 절연 및 주 문화

바이러스 유발 신경 염증 반응을 연구하는 마우스 풋패드 접종 모델

축 축 하 재생의 시험관 내 모델로, 후각 천시 글리아와 축 축 절 망막 신경의 공동 문화

말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.

말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.

말초 신경 세포의 특징을 연구하기 위해 다중 구획 장치에서 등쪽 뿌리 신경절을 수확, 삽입 및 배양합니다.