이 작품은 국립 연구소의 건강 그랜트 (CA206157-22와 GM118066) 커트 대리석 암 연구 기금 Angelika 아 몬에 의해 코흐 연구소 지원 (코어) 부여 P30-CA 14051 국립 암 연구소에서 의해 부분에서 지원 되었다. Angelika 아 몬 하 워드 휴즈 의학 연구소와 생물 의학 연구에 대 한 글렌 재단의 조사 이기도합니다. S. S. 여는 미국 이탈리아 암 재단 (AICF), 마리 퀴리 작업 및 이탈리아 협회 대 한 암 연구 (AIRC), 암 연구에 협력 하 여 그리고 기 사도좌 암 연구 장학금에 의해 지원 되었다. 전자기장 하 워드 휴즈 의학 연구소에서 장학금에 의해 지원 되었다.

문화 조건
RPE 1 hTERT 셀 라인은 매체에 있는 Dulbecco의 수정이 글 (자료 테이블) 10% 보충 교양 소 태아 혈 청, 2 m L-글루타민, m 그리고 100 U/ml 페니실린/스. 셀 5% CO2 습도 환경에서 37 ° C에서 incubated 했다. 10 cm 요리를 사용 하 여 개발 되었습니다 아래에 설명 된 프로토콜을 모든 기술적인 세부 사항 보고 그 요리를 합니다. 다른 요리를 사용 하는 경우 확장 또는 그에 따라 아래로.
1입니다. RPE-1 셀의 동기화
<ol><li>모든 실험에 대 한 15 개 이상의 구절 하지 받은 갓 해 동된 셀을 사용 합니다. 1 일에 해 동 하 고 분배 ~2.5-10 cm 조직 문화 접시에 105 RPE 1 hTERT 셀 x 5.0. 표준 성장 매체의 8 mL을 추가 하 고 밤새 품 어. (예: hemocytometer) 표준 셀 카운터를 사용 하 여 셀 수를 결정 합니다. 참고: 셀 밀도 RPE-1 세포의 성장 상태를 말합니다. 성장 조건이 다른 셀 라인; 사이에서 다를 수 있습니다. 그에 따라 그들을 조정 하십시오.</li>
	<li>하루에 2, g 1/S 테두리에서 셀 일반 성장 매체를 발음 5mm 티 미 딘을 포함 하는 8 mL 매체를 추가 하 여 동기화 합니다. 참고: 티 미 딘 농도 치료의 길이 다른 세포 라인에 걸쳐 달라질 수 있습니다. 그것은 셀 라인 테스트를 위한 최상의 조건을 결정 하기 위해 파일럿 실험을 수행 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>당일 3, 티 미 딘 매체 (1.2 단계)를 추가한 후 24 h, 매체를 발음 하 고 세 번 1 x PBS로 세포 세척 하 여 티 미 딘 블록에서 놓습니다. 일반 성장 매체의 8 mL을 추가 하 고 인큐베이터에 접시를 반환 합니다.</li>
</ol>2.이 세대 Mitotic 키 Mps1의 활동을 방해 하 여 세포
<ol><li>에 티 미 딘 블록에서 하루 3, 출시 후 6 h (1.3; 단계 세포 유사 분열을 입력 하기 전에이 약 3-6 h는), 중간 발음, 1 x PBS로 한번 세척 하 고 500 nM reversine (Mps1 억제제)를 포함 하는 매체를 바꿉니다. 참고: RPE-1 세포는 유사 분열 9-12 h를 입력 후에 티 미 딘 워시 아웃10,11. 그러나, 세포 주기 론 다른 셀 라인 마다 다릅니다. 따라서, 그것은 (예를 들어, 콘텐츠를 통해 FACS DNA 분석 측정 하 여) 설립된 방법으로 세포 주기 분석을 수행 하 여 파일럿 실험에서 그 속도 결정 하는 중요 한. 또한, Mps1 억제제의 최적의 작업 농도 세포 사이 달라질 수 있습니다. 이전 실험 RPE1 셀을 사용 하 여 reversine를 사용 하 여 500 nM10,,1112의 작업 집중에 성공 했습니다. 그것은 셀 라인 테스트를 위한 최적의 농도 결정 하기 위해 파일럿 실험을 수행 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>하루에 4, reversine 처리 (후 세포 유사 분열에 약 6 h) 후 12 h, reversine 매체를 발음 하 고 세 번 1 x PBS 가진 세포를 씻어. 접시에 8 mL 일반 성장 매체를 추가 하 고 인큐베이터에 셀을 반환 합니다.</li>
</ol>3. Aneuploid 자전거 셀 및 ArCK 인구의 농축 제거
<ol><li>하루 6, 셀 입력 첫 번째 유사 분열 후 약 72 h에 (2.2; 단계 약 66 h reversine 워시 아웃 후, 해당 약 하는 이것이 2-3 세포 주기), 중간 발음, 1 x PBS로 한번 세척 하 고 300 nM nocodazole를 포함 하는 매체를 바꿉니다. 참고: 최근 작품 aneuploid karyotypes를 은닉 하는 RPE-1 셀 genomically 불안정 하 고 그들의 확산에 대 한 체포를 보이고 있다 2-3 세포 주기 후 첫 번째 잘못 된 유사 분열10. 그러나,이 활동은 다른 세포 사이에서 달라질 수 있습니다. 따라서, 그것은 aneuploid 순환 세포의 제거를 위한 적절 한 타이밍을 결정 하기 위해 파일럿 실험을 수행 하는 중요 한입니다.</li>
	<li>하루 7, nocodazole 처리 후 12 h 매체를 발음 하 고 플레이트 1 x PBS의 3 개 mL를 추가 합니다. 접시의 측면을 눌러 mitotic 세포를 흔들어. Mitotic 세포도 제거를 허용 하도록 각 탭 사이의 접시를 회전 합니다.</li>
	<li>Mitotic 세포의 완전 한 제거를 보장 하기 위해, 여러 라운드 (3-5 회 권장), 발음 및 각 라운드 사이 1 x PBS의 3 mL를 추가 쉐이크-오프 프로세스를 반복 합니다.</li>
	<li>쉐이크-오프, 부드럽게 액체는 뚜껑이 나 접시의 가장자리에 고착 하는 발음. 간단히, 10 배 확대에 현미경 플레이트를 확인 하십시오. 몇 mitotic 세포 관찰 된다 확인 합니다. 5 개 이상의 mitotic 세포 10 X 목표 아래 볼 수 있습니다, 쉐이크-오프의 또 다른 라운드를 반복 합니다. 참고: Mitotic 세포는 둥근 나타나고 쉐이크-오프 후 부분적으로 분리 될 수 있습니다. 그것은 nocodazole 치료의 다음 라운드에 세포를 노출 하기 전에 mitotic 세포의 완전 한 제거를 보장 하기 위해 중요 합니다. 이렇게 하지 않으면 mitotic 세포 죽음으로 이어질 및 tetraploid 세포의 생성 될 수 있습니다.</li>
	<li>마지막 악수-오프 후, 셀 1 x PBS의 5 mL로 한 번 씻는 다. 8 mL 매체 330 nM nocodazole를 포함 하는 접시에 추가 하 고 12 h에 품 어.</li>
	<li>아니 mitotic 세포 배양 후 관찰 하는 때까지 모든 12 h nocodazole 치료/동요-오프 (3.1-3.5 단계) 반복 합니다. 일반적으로, 치료/동요-오프의 4-5 라운드는 것이 좋습니다. 참고: 여기에 제공 된 정보는 RPE-1 셀에 참조 하십시오. 치료/동요-오프 라운드의 수는 다른 세포 사이에서 달라질 수 있습니다. Nocodazole 연장 하 고 불필요 한 노출을 피하기 위해 신중 하 게 결정, 파일럿 실험에서 aneuploid 자전거 셀의 효율적이 고 완전 한 제거에 필요한 라운드 수에 결정적 이다.</li>
	<li>4-5 라운드 후의 nocodazole 치료/쉐이크-(3.1-3.6 단계), 일반 성장 매체의 10 mL을 추가 하 고 품 어. 세포 조작 또는 분석 결과 장차 전에 12-24 h 동안 휴식을 하실 수 있습니다. 참고: 마지막 악수-오프 후, 접시에 남은 세포 세포 주기 검거 그리고, 같이 최근10, 항구의 복잡 한 karyotypes. 이 세포를 ArCK (복잡 한 Karyotype와 체포) 세포 라고 합니다. 그것은 격리 1 주일 이내 ArCK 인구에 분석 실험을 수행 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>필요에 따라 복잡 한 karyotypes 체포 셀의 비율을 평가 하기 위해 수집 하 고 각 쉐이크-오프 표준 셀 카운터를 사용 하 여에서 셀 키를 누릅니다.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57215/57215fig1.jpg"> 그림 1: 생성 하 고 복잡 한 karyotype (ArCK)와 대표 이미지 aneuploid 세포를 분리 하는 데 사용 하는 방법의 전체 회로도. (A) 회로도의 ArCK 세포 생성 및 격리 프로토콜. (B) RPE 1 hTERT 세포 치료의 각 단계에서의 대표 이미지. 마지막 패널 (빨간색으로 설명 된) 격리 ArCK 셀을 나타냅니다. 눈금 막대 100 µ m. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57215/57215fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
4입니다. ArCK 인구의 특성
<ol><li>다음 분석을 수행 하 여 ArCK 인구의 성공적인 분리를 확인 합니다.<ol>
<li>엉덩이 베타-galactosidase 얼룩 (노화의 마커)를 상업적으로 사용할 수를 사용 하 여 키트 (재료의 표 참조).</li>
		<li>상용 장비 (재료의 표 참조)를 채용 하 여 CCL2, 같은 프로 염증 성 cytokines의 분 비를 측정 합니다.</li>
		<li>세포 주기 억제제 p53, p21, 서쪽 오 점, p16의 증가 수준을 확인 합니다. 참고: 이러한 분석을 제대로 제어 하려면 ArCK 인구는 euploid와 aneuploid 자전거 셀에 비교할 수 한다. 전자는 낮은 통로, 야생-타입 RPE 1 hTERT 기 하 급수적으로 성장 하는 세포. 후자의 RPE 1 hTERT에 염색체 미 분리를 유도 하 고 수확 하는 첫 번째 탈 선 유사 분열 후 세포 72 h에 의해 얻어질 수 있다. 이렇게 하려면 단계 1.1 수확 셀 및 첫 번째 nocodazole 치료 (3.1 단계) 앞에서 설명한 프로토콜을 따릅니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>체포 셀의 karyotype를 평가 하기 위해 단일 셀 시퀀싱을 수행 합니다. 참고: 단일 셀 연속13단일 셀 수준 셀 인구에서 염색체 및 하위 염색체 변화를 확인 하려면 잘 설립 방법 이다. 단일 셀 시퀀싱을 수행 하는 방법에 대 한 자세한 절차 다른10을찾을 수 있습니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Santaguida, S., Amon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-+and+long-term+effects+of+chromosome+mis-segregation+and+aneuploidy.">Short- and long-term effects of chromosome mis-segregation and aneuploidy.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 16 (8), 473-485 (2015).</li><li>Pfau, S. J., Amon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomal+instability+and+aneuploidy+in+cancer:+from+yeast+to+man.">Chromosomal instability and aneuploidy in cancer: from yeast to man.</a> EMBO reports. 13 (6), 515-527 (2012).</li><li>Gordon, D. J., Resio, B., Pellman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Causes+and+consequences+of+aneuploidy+in+cancer.">Causes and consequences of aneuploidy in cancer.</a> Nature Reviews Genetics. 13 (3), 189-203 (2012).</li><li>Holland, A. J., Cleveland, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boveri+revisited:+chromosomal+instability,+aneuploidy+and+tumorigenesis.">Boveri revisited: chromosomal instability, aneuploidy and tumorigenesis.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 10 (7), 478-487 (2009).</li><li>Meena, J. K., Cerutti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+abrogates+aneuploidy-induced+telomere+replication+stress,+senescence+and+cell+depletion.">Telomerase abrogates aneuploidy-induced telomere replication stress, senescence and cell depletion.</a> The EMBO Journal. , 1-14 (2015).</li><li>Ohashi, A., Ohori, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneuploidy+generates+proteotoxic+stress+and+DNA+damage+concurrently+with+p53-mediated+post-mitotic+apoptosis+in+SAC-impaired+cells.">Aneuploidy generates proteotoxic stress and DNA damage concurrently with p53-mediated post-mitotic apoptosis in SAC-impaired cells.</a> Nature Communications. 6, 7668 (2015).</li><li>Passerini, V., Ozeri-Galai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+presence+of+extra+chromosomes+leads+to+genomic+instability.">The presence of extra chromosomes leads to genomic instability.</a> Nature Communications. 7, 10754 (2016).</li><li>Sheltzer, J. M., Blank, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneuploidy+drives+genomic+instability+in+yeast.">Aneuploidy drives genomic instability in yeast.</a> Science. 333 (6045), 1026-1030 (2011).</li><li>Zhu, J., Pavelka, N., Bradford, W. D., Rancati, G., Li, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Karyotypic+determinants+of+chromosome+instability+in+aneuploid+budding+yeast.">Karyotypic determinants of chromosome instability in aneuploid budding yeast.</a> PLoS Genetics. 8 (5), e1002719 (2012).</li><li>Santaguida, S., Richardson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+Mis-segregation+Generates+Cell-Cycle-Arrested+Cells+with+Complex+Karyotypes+that+Are+Eliminated+by+the+Immune+System.">Chromosome Mis-segregation Generates Cell-Cycle-Arrested Cells with Complex Karyotypes that Are Eliminated by the Immune System.</a> Developmental Cell. 41 (6), 638.e5-651.e5 (2017).</li><li>Santaguida, S., Vasile, E., White, E., Amon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneuploidy-induced+cellular+stresses+limit+autophagic+degradation.">Aneuploidy-induced cellular stresses limit autophagic degradation.</a> Genes &amp; Development. 29 (19), 2010-2021 (2015).</li><li>Santaguida, S., Tighe, A., D'Alise, A. M., Taylor, S. S., Musacchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+role+of+MPS1+in+chromosome+biorientation+and+the+spindle+checkpoint+through+the+small+molecule+inhibitor+reversine.">Dissecting the role of MPS1 in chromosome biorientation and the spindle checkpoint through the small molecule inhibitor reversine.</a> The Journal of Cell Biology. 190 (1), 73-87 (2010).</li><li>Gawad, C., Koh, W., Quake, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+genome+sequencing:+current+state+of+the+science.">Single-cell genome sequencing: current state of the science.</a> Nature Reviews Genetics. 17 (3), 175-188 (2016).</li><li>L&#243;pez-Soto, A., Gonzalez, S., L&#243;pez-Larrea, C., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosurveillance+of+Malignant+Cells+with+Complex+Karyotypes.">Immunosurveillance of Malignant Cells with Complex Karyotypes.</a> Trends in cell biology. , 1-4 (2017).</li><li>Watson, E. V., Elledge, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneuploidy+Police+Detect+Chromosomal+Imbalance+Triggering+Immune+Crackdown!.">Aneuploidy Police Detect Chromosomal Imbalance Triggering Immune Crackdown!.</a> Trends in genetics: TIG. , 1-3 (2017).</li></ol>

저자는 공개 없다.

생성 하 고 복잡 한 karyotypes (ArCK) 체포 된 셀에 대 한 풍부이 소설 메서드는 여러 염색체 이익 또는 손실이 있고 분할 중단 셀의 연구에 대 한 수 있습니다. 방법은 설치는 신속 하 고 안정적인 방식으로 ArCK 셀의 분리를 촉진 하기 위하여 설계 되었습니다.
이 분석 결과에서 가장 중요 한 단계는 약물 치료의 타임 라인 및, 가장 중요 한 것은, aneuploid 자전거 세포의 제거를 엄격 하 게 통제 하 고. 최적의 결과 얻으려면 nocodazole 치료와 쉐이크-오프 타이밍은 특정 중요 그들은 여전히 둥근 mitotic, g 1에 mitotic 세포 죽음 또는 지연의 가능성을 방지 하는 동안 자전거 셀 접시에서 제거 되도록 잠재적으로 만드는 tetraploid 인구. 동요-오프 타이밍 권장된 12 h nocodazole 외피에서 2 시간 이상 일탈 하지는 것이 좋습니다.
세포는 어떻게 복잡 한 karyotypes의 깊은 이해를 촉진 가능성이 ArCK 미래 연구 세포 생리학을 영향을 줍니다. 특히, 최근 연구는 면역 체계의 세포와 상호 작용 수 있습니다 및 ArCK의 트리거 면역 클리어런스 셀10설명 했다. 여기 설명 하는 방법을 기본 현상은 세포와 어떻게 종양 변화의 연구에서 면역 클리어런스 분자 메커니즘의 정화를 포함 하 여 ArCK 셀의 추가 특성에 대 한 훌륭한 출발점을 제공 이 감시 메커니즘, 필드14,15에서 중요 한 질문을 무시할 수 있습니다.

이수성, 단일 보완1,2,,34의 배수가 염색체 수에 의해 특징 조건이 염색체 분리 과정에서 오류가 발생할. 이 게놈 불안정성5,를 추가 생성 하는 트리거 복제 스트레스 karyotypes6,7,8,,910증가 karyotype 복잡도 및 궁극적으로 리드 셀10의 부분 모집단의 세포 주기 검거를. 여기에 제시 된 방법의 목적은 생성 및 세포 사이클 같은 부분 모집단을 별도 것입니다. 저렴 한 조직 배양 기법을 채용 하 여이 프로토콜 격리 및 복잡 한 karyotypes aneuploid 셀 세포 주기 검거의 특성화를 촉진 한다. 이러한 셀 ArCK (복잡 한 Karyotype와 체포) 세포와 컨트롤로 euploid 자전거 들을 이라고 합니다.
이 프로토콜은이 목적을 위해 설립 하는 첫 번째를 격리 허용 하 고 포함, 그들의 유도 노화 및 노화 관련 분 비 형 (SASP), 하 되이 국한 되지 않고 그들의 프로-염증 성 ArCK 라인의 진학 기능과 면역 세포와 함께 참여 하는 능력. 여기에 제시 된 방법 보내지고, 불멸 하 게 인간의 세포에서 개발 되었습니다 하지만 암 라인에서 아직 테스트 되지 않았습니다. 일부 변환 된 셀 하나 또는 여러 개의 경로;의 억제로 인해 세포 주기 검거에 민감한 있을 수 있습니다. 따라서, 추가 유효성 검사 다른 셀 라인에서 수행 되어야 합니다.

<table><tbody><tr><td>DMEM (Dulbecco&amp;rsquo;s Modified Eagle Medium)&amp;nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>11995-073</td><td></td></tr><tr><td>Thymidine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T1859</td><td></td></tr><tr><td>Reversine</td><td>Cayman Chemical Company</td><td>10004412</td><td></td></tr><tr><td>Nocodazole</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M1410</td><td></td></tr><tr><td>Anti-p53 antibody</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-126</td><td></td></tr><tr><td>Anti-p21 antibody</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-6246</td><td></td></tr><tr><td>Anti-p16 antibody</td><td>BD</td><td>554079</td><td></td></tr><tr><td>Senescence b-Galactosidase Staining Kit</td><td>Cell Signaling Technology&amp;nbsp;</td><td>9860</td><td></td></tr><tr><td>Proteome Profiler Human Cytokine Array Kit&amp;nbsp;</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>ARY005B</td><td></td></tr></tbody></table>

generation and isolation of cell cycle-arrested cells with complex karyotypes

염색체 미 분리 이수성, 조건이 있는 셀 항구 불균형 염색체 수를 이끌어 낸다. 여러 줄의 증거는 강하게 그 이수성 게놈 불안정성, 궁극적으로 그들의 확산을 체포 하는 복잡 한 karyotypes와 세포 생성을 유발 나타냅니다. 격리 및 복잡 한 karyotypes를 은닉 하는 세포의 세포 생리학에 불균형 염색체 수의 영향을 연구 하는 중요 한 있습니다. 날짜 하려면, 아무 방법 같은 aneuploid 셀을 안정적으로 설립 되었습니다. 이 문서 표준, 저렴 한 조직 배양 기법을 활용 하 여 복잡 한 karyotypes 농축 및 aneuploid 세포의 분석을 위한 프로토콜을 제공 한다. 이 프로토콜 등 그들의 유도 노화 관련 분 비 형, 프로-염증 성 속성, 능력을 면역 세포와 상호 작용 하는 복잡 한 karyotypes aneuploid 셀의 여러 가지 기능을 분석을 사용할 수 있습니다. 때문에 암 세포는 종종 불균형 염색체 수에 항구, 이수성 두는 pro 및 안티 tumorigenic 효과 잠복의 궁극적인 목표와 정상 세포에서 세포 생리학에 미치는 해독 결정적 이다.

이 메서드는 생체 외에서 조직 문화 시스템 그들의 확산을 체포 하는 복잡 한 karyotypes aneuploid 셀을 사용 합니다. 이 인구 (복잡 한 Karyotypes와 체포) ArCK 셀 이라고 합니다. 그림 1A 는 실험의 계획을 보여 줍니다. 야생-타입 자전거 RPE 1 hTERT 셀 티 미 딘 G1/S 국경에 동기화 되며 염색체 미 분리를 유도 하는 Mps1 억제제로 치료. 스핀 들 독 nocodazole 염색체 미 분리의 유도 후 72 h에 있는 셀에 추가 됩니다. nocodazole 치료, 증식 수 aneuploid 셀 후 12 h 유사 분열을 입력 하 고이 세포 주기 단계 microtubule 합 방해 때문에 갇혀 있다. 갇혀 이러한 셀은 다음 부드러운 쉐이크-오프에 의해 쉽게 제거. 동요-오프 과정이 반복된 3-5 회 순환 세포의 완전 한 제거를 보장 하기 위해입니다. 그림 1B 는 처리의 각 단계에서 RPE-1 셀의 대표 이미지를 보여 줍니다.
ArCK 셀 세포 주기 억제제, p53, p21, p16 그림 2A와 같이 euploid와이 셀, 자전거에 비해 등의 증가 수준을 표시 합니다. 또한, 그림 2B 긍정적인 β-galactosidase ArCK euploid 제어 세포에 비해 세포에서 세포 노화에 대 한 확고 마커 얼룩을 보여 줍니다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57215/57215fig2.jpg"> 그림 2: ArCK 셀을 활용 하는 대표적인 결과. ((A)) 서쪽 오 점 euploid,이 순환, 및 ArCK 세포에서 세포 주기 억제제 수준 평가. P53, p21, p16의 레벨은 서쪽 오 점 분석에 의해 결정 되었다. 말라 로드 제어로 제공. (B) β-galactosidase ArCK 세포에서 노화의 수준 평가 얼룩. 노화 관련 된 β-galactosidase (β-Gal) 활동 euploid 셀과 ArCK 셀에서 결정 되었다. 눈금 막대 100 µ m. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57215/57215fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
이 세포 주기 검거 대표 karyotype 분석 단일 셀 임의의 염색체 이득과 손실을 그림 3ArCK 셀 표시 여러, 시퀀싱에서 같이 복잡 한 karyotypes aneuploid 셀의 눈에 띄는 기능입니다. 이 발견 이전 보고서10완전 한 합의에 있다.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57215/57215fig3.jpg"> 그림 3: ArCK 셀의 대표 단일 셀 시퀀싱. 세그먼트화 6 대표 ArCK 셀의 karyotype를 보여주는 플롯 합니다. 세그먼트화 플롯 (야생 유형 RPE-1은 여성 근원의 2 중 셀 라인) 로그2 규모로 euploid 참조를 기준으로 x 1에서 모든 염색체의 복사본 수를 표시 합니다. 염색체 이득 녹색에서 빨간색, 염색체 손실에 강조 표시 됩니다. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57215/57215fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

이수성 게놈 불안정성, 결국 복잡 한 karyotypes 셀 세포 주기 검거를 이끌어 낸다. 이 문서 분할 중단 복잡 한 karyotypes aneuploid 셀을 간단 하 고 편리한 방법을 제공 합니다.

생성 및 복잡 한 Karyotypes 셀 세포 주기 검거의 절연

Chromosome mis-segregation leads to aneuploidy, a condition in which cells harbor an imbalanced chromosome number. Several lines of evidence strongly ...

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Research

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Cancer Research

10.4K 조회수.  Massachusetts Institute of Technology. 이수성 게놈 불안정성, 결국 복잡 한 karyotypes 셀 세포 주기 검거를 이끌어 낸다. 이 문서 분할 중단 복잡 한 karyotypes aneuploid 셀을 간단 하 고 편리한 방법을 제공 합니다.

비디오: Generation and Isolation of Cell Cycle-arrested Cells with Complex Karyotypes

Studying Cell Cycle-regulated Gene Expression by Two Complementary Cell Synchronization Protocols

The gene expression program of the cell cycle represents a critical step for understanding cell cycle-dependent processes and their role in diseases such as cancer. Cell cycle-regulated gene expression analysis depends on cell synchronization into specific phases. Here we describe a method utilizing two complementary synchronization protocols that is commonly used for studying periodic variation of gene expression during the cell cycle. Both procedures are based on transiently blocking the cell cycle in one defined point. The synchronization protocol by hydroxyurea (HU) treatment leads to cellular arrest in late G1/early S phase, and release from HU-mediated arrest provides a cellular population uniformly progressing through S and G2/M. The synchronization protocol by thymidine and nocodazole (Thy-Noc) treatment blocks cells in early mitosis, and release from Thy-Noc mediated arrest provides a synchronized cellular population suitable for G1 phase and S phase-entry studies. Application of both procedures requires monitoring of the cell cycle distribution profiles, which is typically performed after propidium iodide (PI) staining of the cells and flow cytometry-mediated analysis of DNA content. We show that the combined use of two synchronization protocols is a robust approach to clearly determine the transcriptional profiles of genes that are differentially regulated in the cell cycle (i.e. E2F1 and E2F7), and consequently to have a better understanding of their role in cell cycle processes. Furthermore, we show that this approach is useful for the study of mechanisms underlying drug-based therapies (i.e. mitomycin C, an anticancer agent), because it allows to discriminate genes that are responsive to the genotoxic agent from those solely affected by cell cycle perturbations imposed by the agent.

We report two cell synchronization protocols that provide a context for studying events related to specific phases of the cell cycle. We show that this approach is useful for analyzing the regulation of specific genes in an unperturbed cell cycle or upon exposure to agents affecting the cell cycle.

두 개의 상보적인 세포 동기화 프로토콜에 의한 세포주기 조절 유전자 발굴 연구

The gene expression program of the cell cycle represents a critical step for understanding cell cycle-dependent processes and their role in diseases such ...

연구

유전학

Preparation of Primary Acute Lymphoblastic Leukemia Cells in Different Cell Cycle Phases by Centrifugal Elutriation

The ability to synchronize cells has been central to advancing our understanding of cell cycle regulation. Common techniques employed include serum deprivation; chemicals which arrest cells at different cell cycle phases; or the use of mitotic shake-off which exploits their reduced adherence. However, all of these have disadvantages. For example, serum starvation works well for normal cells but less well for tumor cells with compromised cell cycle checkpoints due to oncogene activation or tumor suppressor loss. Similarly, chemically-treated cell populations can harbor drug-induced damage and show stress-related alterations. A technique which circumvents these problems is counterflow centrifugal elutriation (CCE), where cells are subjected to two opposing forces, centrifugal force and fluid velocity, which results in the separation of cells on the basis of size and density. Since cells advancing through the cycle typically enlarge, CCE can be used to separate cells into different cell cycle phases. Here we apply this technique to primary acute lymphoblastic leukemia cells. Under optimal conditions, an essentially pure population of cells in G1 phase and a highly enriched population of cells in G2/M phases can be obtained in excellent yield. These cell populations are ideally suited for studying cell cycle-dependent mechanisms of action of anticancer drugs and for other applications. We also show how modifications to the standard procedure can result in suboptimal performance and discuss the limitations of the technique. The detailed methodology presented should facilitate application and exploration of the technique to other types of cells.

This protocol describes the use of centrifugal elutriation to separate primary acute lymphoblastic leukemia cells into different cell cycle phases.

원심 Elutriation에 의해 다른 세포 주기 단계에서 기본 급성 림프 구성 백혈병 세포의 준비

The ability to synchronize cells has been central to advancing our understanding of cell cycle regulation. Common techniques employed include serum ...

암 연구학

Studying RNA Interactors of Protein Kinase RNA-Activated during the Mammalian Cell Cycle

Protein kinase RNA-activated (PKR) is a member of the innate immune response proteins and recognizes the double-stranded secondary structure of viral RNAs. When bound to viral double-stranded RNAs (dsRNAs), PKR undergoes dimerization and subsequent autophosphorylation. Phosphorylated PKR (pPKR) becomes active and induces phosphorylation of the alpha subunit of eukaryotic initiation factor 2 (eIF2&#945;) to suppress global translation. Increasing evidence suggests that PKR can be activated under physiological conditions such as during the cell cycle or under various stress conditions without infection. However, our understanding of the RNA activators of PKR is limited due to the lack of a standardized experimental method to capture and analyze PKR-interacting dsRNAs. Here, we present an experimental protocol to specifically enrich and analyze PKR bound RNAs during the cell cycle using HeLa cells. We utilize the efficient crosslinking activity of formaldehyde to fix PKR-RNA complexes and isolate them via immunoprecipitation. PKR co-immunoprecipitated RNAs can then be further processed to generate a high-throughput sequencing library. One major class of PKR-interacting cellular dsRNAs is mitochondrial RNAs (mtRNAs), which can exist as intermolecular dsRNAs through complementary interaction between the heavy-strand and the light-strand RNAs. To study the strandedness of these duplex mtRNAs, we also present a protocol for strand-specific qRT-PCR. Our protocol is optimized for the analysis of PKR-bound RNAs, but it can be easily modified to study cellular dsRNAs or RNA-interactors of other dsRNA binding proteins.

We present experimental approaches for studying RNA-interactors of double-stranded RNA binding protein kinase RNA-activated (PKR) during the mammalian cell cycle using HeLa cells. This method utilizes formaldehyde to crosslink RNA-PKR complexes and immunoprecipitation to enrich PKR-bound RNAs. These RNAs can be further analyzed through high-throughput sequencing or qRT-PCR.

공부 하는 단백질 키 니 아 제 RNA 포유류 세포 주기 동안 활성의 RNA 인터

Protein kinase RNA-activated (PKR) is a member of the innate immune response proteins and recognizes the double-stranded secondary structure of viral ...

생화학

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled by multiple mechanisms that include the Spindle Assembly Checkpoint (SAC). The SAC is part of a complex feedback system that is responsible for prevention of a cell progress through mitosis unless all chromosomal kinetochores have attached to spindle microtubules. Chromosomal lagging and abnormal chromosome segregation is an indicator of dysfunctional cell cycle control checkpoints and can be used to measure the genomic stability of dividing cells. Deregulation of the SAC can result in the transformation of a normal cell into a malignant cell through the accumulation of errors during chromosomal segregation. Implementation of the SAC and the formation of the kinetochore complex are tightly regulated by interactions between kinases and phosphatase such as Protein Phosphatase 2A (PP2A). This protocol describes live cell imaging of lagging chromosomes in mouse embryonic fibroblasts isolated from mice that had a knockout of the PP2A-B56&#947; regulatory subunit. This method overcomes the shortcomings of other cell cycle control imaging techniques such as flow cytometry or immunocytochemistry that only provide a snapshot of a cell cytokinesis status, instead of a dynamic spatiotemporal visualization of chromosomes during mitosis.

This protocol describes an easy and convenient method to label and visualize live chromosomes in mitotic cells using Histone2B-GFP BacMam 2.0 label and a spinning disc confocal microscopy system.

유사 분열 동안 염색체 분리의 라이브 셀 이미징

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

발생학

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

Although human embryonic stem cells (hESC) have been shown to present a stable diploid karyotype 1, many studies have reported that depending on culture conditions they become prone to acquire chromosomal anomalies such as addition of whole or parts of chromosomes. Indeed, during long-term culture, karyotypic alterations are observed when enzymatic or chemical dissociation are used 2,3,4, while manual dissection of colonies for passaging retains a stable karyotype 5. Besides, changes in the environment such as the removal of feeder cells also seem to compromise the genetic integrity of hESC 3,6. Once chromosomal alterations could affect cellular physiology, the characterization of the genetic integrity of hESC in vitro is crucial considering hESC as an essential tool in embryogenesis studies and drug testing. Furthermore, for future therapeutic purposes chromosomal changes are a real concern as it is frequently associated to carcinogenesis.
Here we show a simple and useful method to obtain high quality chromosome spreads for subsequent analysis of chromosome set by G-banding, FISH, SKY or CGH techniques 7,8. We recommend checking the chromosomal status routinely with intervals of 5 passages in order to monitor the appearance of translocations and aneuploidies
Priscila Britto and Rafaela Sartore contributed equally to the paper.

Karyotyping is a simple and useful technique widely used for detecting genetic alterations. Here we describe a step by step protocol for chromosome spread preparation of human embryonic stem cells for monitoring the chromosomal status of these cells maintained in culture.

Karyotyping를위한 인간 배아 줄기 세포의 염색체 확산 준비

Although human embryonic stem cells (hESC) have been shown to present a stable diploid karyotype 1, many studies have reported that depending on culture ...

생물학

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a robust and reliable method for isolating relatively large numbers of proliferative skeletal muscle cells from juvenile, adult or embryonic muscles as a source of skeletal muscle stem cells. The authors have used micro-dissected explant cultures to analyse the growth characteristics of skeletal muscle cells in wild-type and dystrophic muscles. Each of the components of tissue growth, namely cell survival, proliferation, senescence and differentiation can be analysed separately using the methods described here. The net effect of all components of growth can be established by means of measuring explant outgrowth rates. The micro-explant method can be used to establish primary cultures from a wide range of different muscle types and ages and, as described here, has been adapted by the authors to enable the isolation of embryonic skeletal muscle precursors.
Uniquely, micro-explant cultures have been used to derive clonal (single cell origin) skeletal muscle stem cell (SMSc) lines which can be expanded and used for in vivo transplantation. In vivo transplanted SMSc behave as functional, tissue-specific, satellite cells which contribute to skeletal muscle fibre regeneration but which are also retained (in the satellite cell niche) as a small pool of undifferentiated stem cells which can be re-isolated into culture using the micro-explant method.

The micro-dissected explants technique is a robust and reliable method for isolating proliferative skeletal muscle cells from juvenile, adult or embryonic muscles as a source of skeletal muscle stem cells. Uniquely, these cells have been clonally derived to produce skeletal muscle stem cell lines used for in vivo transplantation.

성인 및 배아 골격근의 Microexplant 문화 및 골격 근육 줄기 세포의 분리

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of cell proliferation underlies the pathology of diseases like cancer. As such there is great need to be able to investigate cell proliferation and quantitate the proportion of cells in each phase of the cell cycle. It is also of vital importance to indistinguishably identify cells that are replicating their DNA within a larger population. Since a cell&prime;s decision to proliferate is made in the G1 phase immediately before initiating DNA synthesis and progressing through the rest of the cell cycle, detection of DNA synthesis at this stage allows for an unambiguous determination of the status of growth regulation in cell culture experiments.
DNA content in cells can be readily quantitated by flow cytometry of cells stained with propidium iodide, a fluorescent DNA intercalating dye. Similarly, active DNA synthesis can be quantitated by culturing cells in the presence of radioactive thymidine, harvesting the cells, and measuring the incorporation of radioactivity into an acid insoluble fraction. We have considerable expertise with cell cycle analysis and recommend a different approach. We Investigate cell proliferation using bromodeoxyuridine/fluorodeoxyuridine (abbreviated simply as BrdU) staining that detects the incorporation of these thymine analogs into recently synthesized DNA. Labeling and staining cells with BrdU, combined with total DNA staining by propidium iodide and analysis by flow cytometry1 offers the most accurate measure of cells in the various stages of the cell cycle. It is our preferred method because it combines the detection of active DNA synthesis, through antibody based staining of BrdU, with total DNA content from propidium iodide. This allows for the clear separation of cells in G1 from early S phase, or late S phase from G2/M. Furthermore, this approach can be utilized to investigate the effects of many different cell stimuli and pharmacologic agents on the regulation of progression through these different cell cycle phases.
In this report we describe methods for labeling and staining cultured cells, as well as their analysis by flow cytometry. We also include experimental examples of how this method can be used to measure the effects of growth inhibiting signals from cytokines such as TGF-&beta;1, and proliferative inhibitors such as the cyclin dependent kinase inhibitor, p27KIP1. We also include an alternate protocol that allows for the analysis of cell cycle position in a sub-population of cells within a larger culture5. In this case, we demonstrate how to detect a cell cycle arrest in cells transfected with the retinoblastoma gene even when greatly outnumbered by untransfected cells in the same culture. These examples illustrate the many ways that DNA staining and flow cytometry can be utilized and adapted to investigate fundamental questions of mammalian cell cycle control.

Determining the cell cycle position of a population of cells, or understanding how signals affect proliferation, can be readily measured by flow cytometry using this protocol. We report a simple experimental approach to staining cells and quantifying their position in the cell cycle.

포유 동물 세포의 세포주기의 위치 분석

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating cells. Cell cycle division is an integral part of growth and reproduction and deregulation of key cell cycle components have been implicated in the precipitating events of carcinogenesis 1,2. Molecular agents in anti-cancer therapies frequently target biological pathways responsible for the regulation and coordination of cell cycle division 3. Although cell cycle kinetics tend to vary according to cell type, the distribution of cells amongst the four stages of the cell cycle is rather consistent within a particular cell line due to the consistent pattern of mitogen and growth factor expression. Genotoxic events and other cellular stressors can result in a temporary block of cell cycle progression, resulting in arrest or a temporary pause in a particular cell cycle phase to allow for instigation of the appropriate response mechanism. 
The ability to experimentally observe the behavior of a cell population with reference to their cell cycle progression stage is an important advance in cell biology. Common procedures such as mitotic shake off, differential centrifugation or flow cytometry-based sorting are used to isolate cells at specific stages of the cell cycle 4-6. These fractionated, cell cycle phase-enriched populations are then subjected to experimental treatments. Yield, purity and viability of the separated fractions can often be compromised using these physical separation methods. As well, the time lapse between separation of the cell populations and the start of experimental treatment, whereby the fractionated cells can progress from the selected cell cycle stage, can pose significant challenges in the successful implementation and interpretation of these experiments.
Other approaches to study cell cycle stages include the use of chemicals to synchronize cells. Treatment of cells with chemical inhibitors of key metabolic processes for each cell cycle stage are useful in blocking the progression of the cell cycle to the next stage. For example, the ribonucleotide reductase inhibitor hydroxyurea halts cells at the G1/S juncture by limiting the supply of deoxynucleotides, the building blocks of DNA. Other notable chemicals include treatment with aphidicolin, a polymerase alpha inhibitor for G1 arrest, treatment with colchicine and nocodazole, both of which interfere with mitotic spindle formation to halt cells in M phase and finally, treatment with the DNA chain terminator 5-fluorodeoxyridine to initiate S phase arrest 7-9. Treatment with these chemicals is an effective means of synchronizing an entire population of cells at a particular phase. With removal of the chemical, cells rejoin the cell cycle in unison. Treatment of the test agent following release from the cell cycle blocking chemical ensures that the drug response elicited is from a uniform, cell cycle stage-specific population. However, since many of the chemical synchronizers are known genotoxic compounds, teasing apart the participation of various response pathways (to the synchronizers vs. the test agents) is challenging. 
Here we describe a metabolic labeling method for following a subpopulation of actively cycling cells through their progression from the DNA replication phase, through to the division and separation of their daughter cells. Coupled with flow cytometry quantification, this protocol enables for measurement of kinetic progression of the cell cycle in the absence of either mechanically- or chemically- induced cellular stresses commonly associated with other cell cycle synchronization methodologies 10. In the following sections we will discuss the methodology, as well as some of its applications in biomedical research.

Tracking subtle changes in the progression and kinetics of cell cycle stages can be accomplished by use of a combination of metabolic labeling of nucleic acids with BrdU and total genomic DNA staining via Propidium Iodide. This method avoids the need of chemical synchronization of cycling cells, thereby preventing the introduction of non-specific DNA damage, which in turn affects cell cycle progression.

신진 대사 레이블 및 유동세포계측법와 세포주기 진행의 동력학 측정

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Chromosome Preparation From Cultured Cells

Chromosome (cytogenetic) analysis is widely used for the detection of chromosome instability. When followed by G-banding and molecular techniques such as fluorescence in situ hybridization (FISH), this assay has the powerful ability to analyze individual cells for aberrations that involve gains or losses of portions of the genome&#160;and rearrangements involving one or more chromosomes. In humans, chromosome abnormalities occur in approximately 1 per 160 live births1,2, 60-80% of all miscarriages3,4, 10% of stillbirths2,5, 13% of individuals with congenital heart disease6, 3-6% of infertility cases2, and in many patients with developmental delay&#160;and birth defects7. Cytogenetic analysis of malignancy is routinely used by researchers and clinicians, as observations of clonal chromosomal abnormalities have been shown to have both diagnostic and prognostic significance8,9.&#160; Chromosome isolation is invaluable for gene therapy and stem cell research of organisms including nonhuman primates and rodents10-13.
Chromosomes can be isolated from cells of live tissues, including blood lymphocytes, skin fibroblasts, amniocytes, placenta, bone marrow, and tumor specimens. Chromosomes are analyzed at the metaphase stage of mitosis, when they are most condensed and therefore more clearly visible. The first step of the chromosome isolation technique involves the disruption of the spindle fibers by incubation with Colcemid, to prevent the cells from proceeding to the subsequent anaphase stage. The cells are then treated with a hypotonic solution and preserved in their swollen state with Carnoy&#39;s fixative. The cells are then dropped on to slides and can then be utilized for a variety of procedures. G-banding involves trypsin treatment followed by staining with Giemsa to create characteristic light and dark bands. The same procedure to isolate chromosomes can be used for the preparation of cells for procedures such as fluorescence in situ hybridization (FISH), comparative genomic hybridization (CGH), and spectral karyotyping (SKY)14,15.

Chromosomes can be isolated from live cells such as lymphocytes or skin fibroblasts, and from organisms including humans or mice. These chromosome preparations can be further utilized for routine G-banding and molecular cytogenetic procedures such as fluorescence in situ hybridization (FISH), comparative genomic hybridization (CGH), and spectral karyotyping (SKY).

배양 세포에서 염색체 준비

Chromosome (cytogenetic) analysis is widely used for the detection of chromosome instability. When followed by G-banding and molecular techniques such as ...

A Cell Free Assay to Study Chromatin Decondensation at the End of Mitosis

During the vertebrate cell cycle chromatin undergoes extensive structural and functional changes. Upon mitotic entry, it massively condenses into rod shaped chromosomes which are moved individually by the mitotic spindle apparatus. Mitotic chromatin condensation yields chromosomes compacted fifty-fold denser as in interphase. During exit from mitosis, chromosomes have to re-establish their functional interphase state, which is enclosed by a nuclear envelope and is competent for replication and transcription. The decondensation process is morphologically well described, but in molecular terms poorly understood: We lack knowledge about the underlying molecular events and to a large extent the factors involved as well as their regulation. We describe here a cell-free system that faithfully recapitulates chromatin decondensation in vitro, based on mitotic chromatin clusters purified from synchronized HeLa cells and X. laevis egg extract. Our cell-free system provides an important tool for further molecular characterization of chromatin decondensation and its co-ordination with processes simultaneously occurring during mitotic exit such as nuclear envelope and pore complex re-assembly.

The molecular mechanisms of the decondensation of highly compacted mitotic chromatin are ill-defined. We present a cell-free assay based on mitotic chromatin clusters isolated from HeLa cells and Xenopus laevis egg extract that faithfully reconstitutes the decondensation process in vitro.

셀 무료 분석은 유사 분열의 끝에서 염색질 Decondensation을 공부하기

During the vertebrate cell cycle chromatin undergoes extensive structural and functional changes. Upon mitotic entry, it massively condenses into rod ...