이 공동 번역 상 연구 보조금 샌디에고 C3 박찬호 페달에 의해 자금 원인 (#PTC2017) 작동 RRW 지원을 받고 있다.

모든 동물 실험 수행 다음이이 프로토콜 각 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인을 받아야 한다. 여기에서 설명한 모든 절차는 IACUC UCSD에 의해 승인 되었습니다.
1. 조달 받는 동물
참고: KPC 뤽 4580 셀 라인 LSL Kra에서 발생 하는 종양에서 설립 되었다G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL ROSA26 루크 / + 마우스 (KPC), C57BL/6 배경에 PC의 유전자 조작된 모델입니다. 이 셀 라인의 장점은 그것 constitutively orthotopic 모델에서 종양 모니터링 luciferase 활성화 표현 한다입니다. 그러나, 다른 셀 라인으로 그들은 받는 사람 쥐의 유전 배경와 호환 사용할 수도 있습니다.
<ol><li>사전에 실험 그룹 및 그룹 당 동물의 수를 결정 합니다.</li>
	<li>나이 (6-10 주 오래 된 마우스 권장)을 선택 하 고 섹스 가설 및 셀 선 사용 되는 동물의 사용.</li>
</ol>2. 문화 셀
<ol><li>사용 Dulbecco의 독수리 매체 (DMEM)을 수정: 영양소 혼합 F12 (50: 50) 미디어 KPC 뤽 4580 세포 성장 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 및 1% 페니실린 스 항생제 (완전 한 성장 매체).</li>
	<li>동결, 해빙 세포 종양 이식 전에 4 일.</li>
	<li>무 균 조건 하에서 5% CO2 와 95% 습도 37 ° C에서 세포 성장.</li>
	<li>0.25% 셀 trypsinize 37 ° c를 도달 하기 전에 5 분 동안 트립 신 > 80 %confluency 트립 신 완전 한 성장 매체의 볼륨을 두 번 추가 하 여 무력화. 참고: 이러한 셀 할 설정 하지 종양 효율적으로 쥐에 그들은 100 %confluency 사용 하는 경우 또는 그들은 이상 12 회에 대 한 passaged는 경우. 따라서, 그것은 최적의 confluency에서 이전 구절에서 세포를 고정 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>hemocytometer를 사용 하 여 셀의 개수 및 적절 한 숫자는 존재 하는 경우 종양 유도를 진행 (0.5-1 x 106 셀/마우스). 그렇지 않은 경우에 적절 한 세포 수는 때까지 한 더 많은 통로 대 한 셀을 확장.</li>
</ol>3입니다. 평방 종양의 유도
<ol><li>필요한 재료 준비: P1000 및 P100 펫, 팁, 1 mL 주사기 25 G 바늘, 지하실 멤브레인 매트릭스 (BMM) DMEM 기저 미디어, 1.5 mL 튜브 원심. 프로시저의 끝까지 모든 재료 살 균과 감기 (4 ° C)를 유지. 또한 발기를 유지 하 고 알코올 면봉 동물 사용에 대 한 준비.</li>
	<li>Trypsinize (에 의하여 2.4 단계) 하 고 셀, 2 배속 감기 DMEM의 107 셀/mL의 농도에서 그들을 resuspend.</li>
	<li>100%의 동일한 볼륨을 추가 50%에서 최종 세포 현 탁 액을 만들기 위해 BMM BMM. 마지막 볼륨 세포 현 탁 액 요구 각 마우스의 50 µ L를 도달 해야 한다. 주사기에 pipetting 오류에 대 한 죽은 공간에 맞게 초과에서 10%를 준비 합니다.</li>
	<li>Aliquot 1.5 mL 원심 분리기 튜브에 550 µ L 볼륨에 정지 얼음에 배치.</li>
	<li>동물 (6 주 오래 된 남성 C57BL/6 쥐)는 restrainer를 사용 하 여 억제 또는 수동으로. 참고: 또는, 쥐 수 수 anaesthetized 2.5 %isoflurane 정밀 기화 기를 사용 하 여 2 L/min의 유량에서 산소 가스에서와 함께.</li>
	<li>면도 선호 다리 위에 측면에 사용 하는 어 선 주사의 사이트. 알코올 면봉을 사용 하 여 두 번 주사의 사이트를 청소.</li>
	<li>감기 1 mL 주사기에 107 셀/mL x 1-2의 최종 농도에 세포 현 탁 액의 250 µ L 그리고 피스톤을 아래로 이동 하 여 모든 기포를 제거. 주사기에 25g 바늘을 연결 하 고 바늘 내 공간을 채우기 위해 확인 한다.</li>
	<li>조심 스럽게 옆구리, 복 막 구멍 또는 사지의 근육 바늘 피어스 하지 않습니다 확인 하 고 근처 시체에 30 ° 각도로 피부 밑에 바늘을 삽입 합니다.</li>
	<li>평행 본문, 바늘을 평평 하 게 피부에 주름을 평평 하 게. 세포 현 탁 액의 50 µ L를 천천히 주사. 10에 대 한 주입의 위치에 바늘을 잡고 어떤 누설을 방지 하기 위해 응고 BMM 있도록 s.</li>
	<li>천천히 그것을 유지 하는 어떤 측면 운동 없이 병렬 바늘 철회. 부드럽게 알코올 면봉과 주사의 사이트를 청소 하 고 그 주택에 마우스를 놓습니다. 참고: 마우스는 절차 동안 마 취를 하는 경우 그것은 righting 반사를 차릴 때까지 동물을 모니터링 합니다.</li>
	<li>직경에서 5mm를 도달할 때까지 정기적으로 캘리퍼스를 사용 하 여 종양의 성장을 모니터링 합니다.</li>
</ol>4입니다. 유도 Orthotopic 종양의
<ol><li>필요한 재료를 준비 합니다. 오토 클레이 브는 수술 도구 등 지적 scalpels, 바늘 드라이버가 위 및 평면 밀고 집게. 편리한 무 균 봉합 (흡수 6-0 및 비 흡수 4-0), 알코올 면봉, 헤어 클리퍼 스, depilatory 크림, 눈 윤 활 유, 면화 거 즈, 10 %povidone 요오드 솔루션, 수술 커튼, 난방 패드, buprenorphine, 및 마 취 에이전트 유지.</li>
	<li>(되도록이면 같은 배경 orthotopic 모델에 필요한)의 기증자 마우스를 안락사 느린 채우기 CO2 챔버를 사용 하 여 SQ KPC 종양을 들고. 소독 집게와 곧 orthotopic 이식 전에 microscissors를 사용 하 여 BSL-2 후드에서 무 균 조건 하에서 신중 하 게 평방 종양 삭제하시오 종양 절제 동안 복 막 구멍 찌를 세척 살 균 PBS의 2 교류와 즉시 종양을 주의.</li>
	<li>살 균 scalpels를 사용 하 여 1 m m3 조각으로 삭제 종양을 말하다, 그들 감기 균 DMEM 기저 미디어를 포함 하는 배양 접시에 놓고 이식까지 얼음에 저장.</li>
	<li>관리 받는 사람 마우스 0.05-1 mg/kg buprenorphine 진통제 SQ, 수술 전에 30 분.</li>
	<li>정밀 기화 기 (또는 다른 마 취 에이전트)를 사용 하 여 산소 (2 L/min)에서 2-3 %isoflurane 받는 사람 마우스 anesthetize 프로시저의 전체에 대 한 패드를가 열 하는 37 ° C에 마우스를 유지. 건조를 방지 하기 위해 눈에 윤활제를 적용 합니다. 놀라운 반사 처음의 부족에 의해 마 취의 깊이 테스트 하 고 부드러운 발가락 핀치에 페달 반사의 부족에 의해 외과 비행기 마 취를 확인 합니다. 전체 수술 중 마 취를 유지 합니다.</li>
	<li>그것의 뒤에 마우스를 놓고 부드럽게 복 부의 왼쪽 노출 되도록 그것의 오른쪽으로 설정 합니다. Depilatory 크림을 사용 하 여 마우스의 복 부를 제거 하 고 무료로 머리카락 복 부 게시물 절 개 입력 되도록 거 즈로 청소. 피부 소독에 알코올 잎사귀 뒤 10 %povidone 요오드의 3 주기를 사용 하 여 수술에 대 한 왼쪽된 복 부를 준비 합니다.</li>
	<li>살 균 메스를 사용 하 여 만들 1.5 c m 가로 또는 경사 절 개 피부, 흉 곽, 아래 중간의 왼쪽에 1 cm에서에서 비장을 약간 중간. 그런 다음, 복 부 근육, 미러링 overlying 표면 절 개를 통해 절 개를 확장 합니다.</li>
	<li>평면을 사용 하 여 비장 집게를 밀고 찾아서 부드럽게 복 부 구멍에서 그것을 외부화. 메 마른 면 주걱을 사용 하 여 비장을 철회 하 고 비장의 하단에 부착 된 췌 장의 꼬리를 찾을.</li>
	<li>평면 밀고 집게를 사용 하 여, 췌 장의 꼬리 옆으로 철회.</li>
	<li>소독 집게를 사용 하 여 위치를 벌금 (6-0) 살 균 suturing 바늘의 팁과 기증자 마우스에서 하나의 잘게 다진된 종양 조각 들고.</li>
	<li>동안 부드럽게 췌 장의 꼬리/몸 옆으로 축소, 췌 장의 꼬리에 종양 조각 포함 된 봉합 바늘을 삽입 합니다. 천천히 들고 췌 장 꼬리를 접촉 하 여 종양 조직을 통해 봉합을 전달 합니다. 조직에 관하여 단편의 방향에 따라 하나 또는 두 개의 추가 봉합을 적용 합니다.</li>
	<li>조직에서 바늘을 완전히 제거 하 고 췌 장/비장 추가 60 externalized 계속 출혈 또는 누출의 어떤 표시 든 지를 검사 하는 동안 s. 무딘 집게를 사용 하 여 복 부 구멍으로 그들을 부드럽게 internalize 다음.</li>
	<li>복 부 근육으로 6-0 흡수 봉합 사를 사용 하 여 연속 또는 중단 스티치 닫고 overlying 피부는 3-0 6-0 비 흡수 중단된 봉합 사를 사용 하 여 닫습니다. 이 시점에서 마 취를 중단 합니다.</li>
	<li>마우스와 음식 및 물의 홈 장에 복구를 허용 합니다. 회복을 촉진 하는 생리대에 케이지를 놓습니다. 복구 프로세스 동안 관류 등, 호흡 등 생체 신호를 모니터링 합니다.</li>
	<li>일단 마우스를 복구, 그리고 다음 반환 케이지 일반 주택 수 있는 반사를 righting의 징후를 확인 합니다.</li>
	<li>Buprenorphine 0.05-0.1 mg/kg를 관리, 수술 후 8-12 h 그리고 고통의 표시를 위해 필요에 따라 절차 후 모든 8-12 h.</li>
	<li>종양의 성장은 vivo에서 생물 발광 이미징 시스템을 사용 하 여 모니터링 ( 재료의 표참조).<ol>
<li>이미징 orthotopic 이식 후 4 일에 시작 하 여 종양의 성장에 따라 고 이미징 일주일에 두 번 수행 합니다.</li>
		<li>화상의 날 (복 주입) 관리 D-소는 마 취에 30 mg/kg (산소 (2 L/min)에서 2-3 %isoflurane) 받는 사람 마우스 이미징 하기 전에 10 분.</li>
		<li>5 s 노출 자동 형광 무료 열띤된 무대와 쥐에 대 한 마 취 유지 하면서 발광 영상에서의 최소 배출 필터 없이 발광 설정을 사용 하 여 luciferase 활동에 대 한 이미지.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5입니다. SQ 종양의 분노
<ol><li>필요한 재료 준비: 정사각형 웨이브 electroporator, 안전 발 스위치, 전극 (족집게 trode 대 바늘 배열), 및 어댑터. 무 균 봉합 (비 흡수 4-0), 알코올 면봉, 헤어 클리퍼 스, depilatory 크림, 눈 윤 활 유, 면화 거 즈, buprenorphine, 및 마 취약 또한 근처.</li>
	<li>족집게를 소독 하거나 살 균 가스를 사용 하 여 배열 전극 바늘. 압력가 마로 소독을 권장 하지 않습니다. 유리 구슬 소독 기를 사용 하 여 동물 사이의 전극 소독.</li>
	<li>관리 buprenorphine 0.05-0.1 mg/Kg는 종양 방위 쥐 절차 전에 30 분.</li>
	<li>단계 4.4-4.5 평방 종양 이식 5 m m 직경에 도달 하면 성공적으로 마우스 마 취를 유도 합니다.</li>
	<li>측면에 평방 종양에 액세스 하는 측면에 마 취 마우스를 놓습니다. 머리 깍 고 알코올 면봉을 사용 하 여 깨끗 한 피부를 사용 하 여 제거 합니다.</li>
	<li>평방 종양 2 바늘 배열 전극 사용 하 여. 집게를 사용 하 여 종양 사이트 바로 아래 피부를 상승 하 고 복 막 구멍을 침투 하지 않는 다는 것을 확인 하는 신체에 평행 하 게 피부를 통해 전극을 삽입. 일단 피부를 통해 그들은 종양 대괄호 같은 방법으로 전극 위치.</li>
	<li>100 µs 펄스 150 펄스의 총 1500 V/cm에서 1 Hz의 주파수에 전달 하기 위해 electroporator 프로그램. 발 페달을 사용 하 여 펄스를 제공 합니다. 10 10 펄스의 각 집합을 별도 s, 방열에 대 한 허용 하 고 전극의 올바른 위치를 확인. 참고: 마비 에이전트를 사용 하지 않고 마우스는 수동으로 확보 하지 않는 한 전극의 변위를 일으킬 수 있는 분노와 근육 수축 발생 합니다.</li>
	<li>electroporator에 표시 되는 실제 전압 전달, 200 미 레코드를 초과 하지 않아야 완전 한 주입 후 전극을 제거 합니다. 수 단계 4.14-4.16 당 분노를 다음 복구 하 쥐.</li>
</ol>6입니다. Orthotopic 종양의 분노
참고: orthotopic 종양의 분노는 따라서 시작 하기 전에 현지 IACUC에서 특별 한 승인 요구 같은 마우스에 두 번째 생존 수술을 포함 한다.
<ol><li>필요한 재료 준비: 압력솥 scalpels,가 위, 바늘 드라이버, 수술 도구 겸 자, 그리고 평면 집게를 밀고. 뿐만 아니라 인근 다음 유지: 무 균 봉합 (흡수 6-0 및 비 흡수 4-0), 알코올 면봉, 헤어 클리퍼 스, depilatory 크림, 눈 윤 활 유, 면화 거 즈, 10 %povidone 요오드 솔루션, 수술 커튼, 난방 패드, 구형 파 electroporator 안전 발 스위치, 전극 및 그들의 어댑터, buprenorphine, 및 마 취약.</li>
	<li>Vivo에서 화상 진 찰에 의해 orthotopic 종양 성장 위한 쥐를 평가 (단계 4.17 참조) intraperitoneally D 소의 30 mg/kg을 주입 하 여. 참고: orthotopic 종양 종양 췌 장에 Luciferase 발광 이미지 ( 대표 결과참조)에서 볼 수 명확 하 게 표시 하 고 여전히 제한 된 때 분노 치료 8 ~ 10 일 포스트 주입에 이상적입니다.</li>
	<li>단계 4.4-4.9, 이식된 종양을 찾으려고 합니다. 종양 쉽게 찾을 하지 않으면 무딘 코 집게를 사용 하 여 위장과 비장 종양 식별을 부드럽게 이동.</li>
	<li>무딘 코 집게와 종양을 외부화 하 고 족집게 trode의 백 금 전극으로 단단히 종양. 단계 10 펄스 발 스위치에 의해 제어의 세트에서 구형 파 electroporator를 사용 하 여 5.7에서에서 프로그래밍 electroporation 펄스를 제공 합니다.</li>
	<li>적어도 60 s 게시물 출혈의 어떤 표시 든 지에 대 한 모니터링을 분노 externalized 종양을 유지. 기술된 이전 (단계 4.13-4.16)로 절 개 종양 복 부 구멍에 다시 삽입 닫고 복구 될 때까지 마우스를 모니터링 합니다.</li>
	<li>단계 4.17에 의하여 luciferase 이미징 vivo에서 를 사용 하 여 종양의 성장에 분노의 효과 모니터링 합니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Rahib, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projecting+cancer+incidence+and+deaths+to+2030:+the+unexpected+burden+of+thyroid,+liver,+and+pancreas+cancers+in+the+United+States.">Projecting cancer incidence and deaths to 2030: the unexpected burden of thyroid, liver, and pancreas cancers in the United States.</a> Cancer Res. 74 (11), 2913-2921 (2014).</li><li>Howlader, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> SEER Cancer Statistic Review, 1975-2013. , (1975).</li><li>Clark, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+the+immune+reaction+to+pancreatic+cancer+from+inception+to+invasion.">Dynamics of the immune reaction to pancreatic cancer from inception to invasion.</a> Cancer Res. 67 (19), 9518-9527 (2007).</li><li>Lee, E. W., Loh, C. T., Kee, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+guided+percutaneous+irreversible+electroporation:+ultrasound+and+immunohistological+correlation.">Imaging guided percutaneous irreversible electroporation: ultrasound and immunohistological correlation.</a> Technol Cancer Res Treat. 6 (4), 287-294 (2007).</li><li>Charpentier, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+for+the+ablation+of+liver+tumors:+are+we+there+yet?.">Irreversible electroporation for the ablation of liver tumors: are we there yet?.</a> Arch Surg. 147 (11), 1053-1061 (2012).</li><li>Narayanan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+Electroporation.">Irreversible Electroporation.</a> Seminars in Interventional Radiology. 32 (4), 349-355 (2015).</li><li>Martin, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+200+locally+advanced+(stage+III)+pancreatic+adenocarcinoma+patients+with+irreversible+electroporation:+safety+and+efficacy.">Treatment of 200 locally advanced (stage III) pancreatic adenocarcinoma patients with irreversible electroporation: safety and efficacy.</a> Ann Surg. 262 (3), 486-494 (2015).</li><li>Belfiore, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+CT-guided+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+as+a+novel+neoadjuvant+protocol+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+Our+preliminary+experience.">Percutaneous CT-guided irreversible electroporation followed by chemotherapy as a novel neoadjuvant protocol in locally advanced pancreatic cancer: Our preliminary experience.</a> Int J Surg. 21 Suppl 1, S34-S39 (2015).</li><li>Belfiore, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concurrent+chemotherapy+alone+versus+irreversible+electroporation+followed+by+chemotherapy+on+survival+in+patients+with+locally+advanced+pancreatic+cancer.">Concurrent chemotherapy alone versus irreversible electroporation followed by chemotherapy on survival in patients with locally advanced pancreatic cancer.</a> Med Oncol. 34 (3), 38 (2017).</li><li>Chu, K. F., Dupuy, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+ablation+of+tumours:+biological+mechanisms+and+advances+in+therapy.">Thermal ablation of tumours: biological mechanisms and advances in therapy.</a> Nat Rev Cancer. 14 (3), 199-208 (2014).</li><li>Wissniowski, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+tumor-specific+T+lymphocytes+by+radio-frequency+ablation+of+the+VX2+hepatoma+in+rabbits.">Activation of tumor-specific T lymphocytes by radio-frequency ablation of the VX2 hepatoma in rabbits.</a> Cancer Res. 63 (19), 6496-6500 (2003).</li><li>Eros de Bethlenfalva-Hora, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+ablation+suppresses+distant+tumour+growth+in+a+novel+rat+model+of+multifocal+hepatocellular+carcinoma.">Radiofrequency ablation suppresses distant tumour growth in a novel rat model of multifocal hepatocellular carcinoma.</a> Clin Sci (Lond). 126 (3), 243-252 (2014).</li><li>Zerbini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+thermal+ablation+for+hepatocellular+carcinoma+stimulates+autologous+NK-cell+response.">Radiofrequency thermal ablation for hepatocellular carcinoma stimulates autologous NK-cell response.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1931-1942 (2010).</li><li>Ali, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+dendritic+cells+by+local+ablation+of+hepatocellular+carcinoma.">Activation of dendritic cells by local ablation of hepatocellular carcinoma.</a> J Hepatol. 43 (5), 817-822 (2005).</li><li>Fietta, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammatory+response+and+downmodulation+of+peripheral+CD25+Foxp3++T-regulatory+cells+in+patients+undergoing+radiofrequency+thermal+ablation+for+lung+cancer.">Systemic inflammatory response and downmodulation of peripheral CD25+Foxp3+ T-regulatory cells in patients undergoing radiofrequency thermal ablation for lung cancer.</a> Hum Immunol. 70 (7), 477-486 (2009).</li><li>Jiang, C., Davalos, R. V., Bischof, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+basic+to+clinical+studies+of+irreversible+electroporation+therapy.">A review of basic to clinical studies of irreversible electroporation therapy.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 62 (1), 4-20 (2015).</li><li>Neal, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+local+and+systemic+anti-tumor+efficacy+for+irreversible+electroporation+in+immunocompetent+versus+immunodeficient+mice.">Improved local and systemic anti-tumor efficacy for irreversible electroporation in immunocompetent versus immunodeficient mice.</a> PLoS One. 8 (5), e64559 (2013).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer Cell. 7 (5), 469-483 (2005).</li><li>Safran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+reporter+strain+for+noninvasive+bioluminescent+imaging+of+cells+that+have+undergone+Cre-mediated+recombination.">Mouse reporter strain for noninvasive bioluminescent imaging of cells that have undergone Cre-mediated recombination.</a> Mol Imaging. 2 (4), 297-302 (2003).</li><li>Martin, R. C., McFarland, K., Ellis, S., Velanovich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Irreversible+electroporation+in+locally+advanced+pancreatic+cancer:+potential+improved+overall+survival.">Irreversible electroporation in locally advanced pancreatic cancer: potential improved overall survival.</a> Ann Surg Oncol. 20 Suppl 3, S443-S449 (2013).</li><li>Neal, R. E., Garcia, P. A., Robertson, J. L., Davalos, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Characterization+and+Numerical+Modeling+of+Tissue+Electrical+Conductivity+during+Pulsed+Electric+Fields+for+Irreversible+Electroporation+Treatment+Planning.">Experimental Characterization and Numerical Modeling of Tissue Electrical Conductivity during Pulsed Electric Fields for Irreversible Electroporation Treatment Planning.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 59 (4), 1076-1085 (2012).</li></ol>

저자는 아무 관련 재정 공개를 있다.

이 연구에서 우리가 종양 성장에 분노의 효과 연구 하는 데 사용할 수 있는 PC에 대 한 immunocompetent 마우스 모델을 증명 하고있다. 현재, 분노 먼 질병의 수술 치료의 달 후에 진행 하지 않은 매우 선택한 로컬 고급 PC 환자에만 비 열 제거 기법으로 사용 됩니다. 그것의 사용 그러므로 제한 되었습니다 로컬 고급 PC 가진 대부분의 환자는 먼 전이성 질환20를 개발 하기 때문에. 이 모?...

췌 장 ductal 선 암 (PC) 20201주위 미국에서 암 사망의 두 번째 주요 원인이 될 전망 이다. PC 진단 환자의 대부분은 먼 전이성 질환2에서 결국 죽을 것 이다. PC microenvironment는 악명 높게 면역 및 chemoresistant. 그것의 desmoplastic 기질 포함 이펙터 (안티 종양) T 세포의 부족 및 종양 관련 된 대 식 세포 (Tam)을 포함 한 면역 백혈구의 굴지, 골수성 파생된 억제기 세포 (MDSCs), 및 규제 T 세포 (Tregs)3 . 이 microenvironment의 이러한 효과 중화 하는 복합 전략을 개발할 필요가 기반이 됩니다.
분노는 종양 절제의 비 열 방법으로 개발 되었습니다. 열 제거 기술, 달리 분노 빠른 coagulative 괴 사를 발생 하지 않습니다 있지만 대신 점진적 apoptotic 세포 죽음4에 결과. 중요 한 것은 췌 장 종양에 대 한 분노는 "열 싱크" 효과에 취약 하 고 혈관5옆 바로 수행할 수 있습니다. 이 기술은6 FDA 510(k) 허가 있으며 현재 사용 되 고 임상, 선택한 로컬 고급 또는 경계선 불과하다 췌장암 환자. 가장 큰 출판된 시리즈에서 분노의 PC7대, 분노를 받은 환자의 평균 생존 약 두 번 절제8,9없이 혼자 현대 화학 요법으로 치료 하는 환자의 생존이 했다.
몇몇 학문은 그 열 제거 (검토 추 외 에 다른 종양 유형에서 조직의 면역 반응 유도 설명 했다 10). 고주파 제거 (RFA) 동물 종양 모델 리드 증가 T 세포에에서 침투11,12, 간세포 암 환자13, 활성화 된 자연 킬러 (NK) 세포에 있는 증가 포함 하 여 14, 그리고 면역 Tregs 폐 암 환자15감소. 연구의 많은 더 작은 수는 면역, microenvironmental, 그리고 부상 응답 분노16을 시험 했다. 분노는 보조 (contralateral) 신장 세포 이식의 성장 또는 감소 했다 2 주 기본 종양의 분노를 예방할 immunocompetent 마우스 모델에서 조직의 면역 반응을 자극 하 표시 되었습니다 이전17. 그들은 또한 immunocompetent 쥐 immunocompromised 쥐 보다 완벽 한 회귀에 대 한 더 적은 전압 필요한 관찰. 그것은 분노의 열 제거, coagulative 괴에 비해 향상 된 항 원 프레 젠 테이 션 될 수 있습니다 하지만이 특별히 공부 하지는 가설 되어 있다.
KPC-뤽 4580 셀 선 (제이 예치 노스캐롤라이나 대학에서에서 선물), 남성 LSL Kra 개발한 종양에서 파생 되었다에서 PC의 syngeneic 마우스 모델 개발 했습니다G12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX1Cre / +; LSL ROSA26 루크 / + 마우스, 분노18,19의 지역 및 조직의 효과 공부 하. 이 luciferase 표현 셀 라인 면역성 이며 또한 immunocompetent C57BL/6 쥐에 tumorigenic SQ orthotopically를 주입 하 고 안정적으로 생산 하는 간 전이 비장에 주입 했을 때. 우리 두 바늘 배열 조사 (5 m m 구분) 또는 광장 또는 orthotopic 종양, 플래티넘 트위터-trodes를 사용 하 여 1500 V/cm의 비 전압/거리에 전기의 100 µs 펄스를 제공 하는 프로그래밍 가능 구형 파 펄스 발생기 활용에서 각각, 작은 동물에 분노의 효과 모델링 하 쥐.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="873">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">ECM 830 square wave electroporator</td>
			<td style="width:147px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:344px;">BTX # 45-0002 ( 58018-004 )</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">2 needle array electrode</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Safety foot switch</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>45-0211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Platinum Tweezer-trode</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>&#160;45-0486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DMEM-F12 media</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10437028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Trypsin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Matrigel</td>
			<td>Corning&#160;</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Isoflurane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>792632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lacrilube</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>19090646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Buprenorphine</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>NC1292810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">D-luciferrin</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>122799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">IVIS&#160; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Mouse strain C57BL/6J</td>
			<td>The Jackson Laboratory&#160;</td>
			<td>000664/Black 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cell line (KPC-Luc 4580)</td>
			<td colspan="2">J.J. Yeh Lab at University of North Carolina</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">BD Precisionglide syringe needles</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Inc.</td>
			<td>Z192406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Alcohol Swab(70% isopropyl alcohol )</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Digital calipers</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14-648-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Disposable Scalpels, Sterile</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Cotton Tipped Applicators</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89198</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Suture Needle, 45 cm, Size 6-0</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-3308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Suture Needle, 45 cm, Size 4-0</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>72-3314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Povidone-iodine 10%</td>
			<td>BD</td>
			<td>29900-404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable Warming Pad&#160;</td>
			<td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td>
			<td>TP-3E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mouse Hair Clipper</td>
			<td>KENT SCIENTIFIC CORP.</td>
			<td>CL8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Drape</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>59-7421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered Saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic pancreatic cancer mouse model to study the effects of irreversible electroporation

췌장암 (PC), 미국에서 약 40000 환자 년 죽이 질병은 성공적으로 유망한 immunotherapeutic 전략을 포함 한 여러 치료 접근을 피할 수 있습니다. 돌이킬 수 없는 electroporation (분노) 따라서 종양 혈관 가까이 매우에 수행 하는 절차를 사용 하면 인접 한 collagenous 구조의 파괴 없이 종양 세포 죽음을 유도 하는 비 열 제거 기술 이다. 열 제거 기술, 달리 분노 유발 즉시 제거 괴 사, 함께 점진적 apoptotic 세포 죽음에 결과 이며 현재 로컬 고급 PC 선택 된 환자에 대 한 임상 사용. 융 제, 분노 같은 비 대상 특정 절차 종양 microenvironment에 반응의 무수 한을 유도할 수 있다. 몇 가지 연구는 다른 종양 유형, 종양 성장에 분노의 영향을 해결 하지만 아무도 PC에 집중 했다. 우리는 다양 한 경도 연구 포스트 절차를 용이 하 게 높은 통제 속에서 분노와 피하 (SQ)와 orthotopic 종양 대우 될 수 있다 성공적으로 PC의 syngeneic 마우스 모델을 개발 했습니다. 이 동물 모델 분노와 분노의 임상 효능을 개선 하는 방법의 효과 연구 하는 강력한 시스템 역할을 합니다.

우리는 절차를 따라 위에서 설명한 고 5-6 주 오래 된 야생 타입 C57BL/6 쥐 50 %1 x 106 세포 주사에 평방 종양 생성 BMM. 종양 크기 직경에서 5-6 m m에 도달 하면 쥐의 몇 가지 했다 안락사, 그들의 종양 excised 했다 orthotopically 받는 사람 C57BL/6 쥐에 이식. 그림 1에 타임 라인에 같이 분노 수행된 10 일 게시물을 이식 했다. 분노는 베어링 평방 종양 나머?...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation at JoVE.com

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

돌이킬 수 없는 Electroporation의 효과 공부 하는 Syngeneic 췌 장 암 마우스 모델

돌이킬 수 없는 electroporation (분노) 로컬 고급 췌장암의 치료에 사용 하는 비 열 제거 기술입니다. 비교적 새로운 기술 이기 때문에, 종양 성장에 분노의 효과 제대로 이해 된다. 췌장암에 대 한 분노의 효과 공부 하 고 용이 하 게 syngeneic 마우스 모델을 개발 했습니다.

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

a-syngeneic-pancreatic-cancer-mouse-model-to-study-effects

Research

JoVE Journal

Cancer Research

11.4K 조회수.  University California San Diego. 돌이킬 수 없는 electroporation (분노) 로컬 고급 췌장암의 치료에 사용 하는 비 열 제거 기술입니다. 비교적 새로운 기술 이기 때문에, 종양 성장에 분노의 효과 제대로 이해 된다. 췌장암에 대 한 분노의 효과 공부 하 고 용이 하 게 syngeneic 마우스 모델을 개발 했습니다.

비디오: A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will survive longer than five years. In order to understand and mimic the microenvironment of pancreatic tumors, we utilized a murine orthotopic model of pancreatic cancer that allows non-invasive imaging of tumor progression in real time. Pancreatic cancer cells expressing green fluorescent protein (PANC-1 GFP) were suspended in basement membrane matrix, high concentration, (e.g., Matrigel HC) with serum-free media and then injected into the tail of the pancreas via laparotomy. The cell suspension in the high concentration basement membrane matrix becomes a gel-like substance once it reaches room temperature; therefore, it gels when it comes in contact with the pancreas, creating a seal at the injection site and preventing any cell leakage. Tumor growth and metastasis to other organs are monitored in live animals by using fluorescence. It is critical to use the appropriate filters for excitation and emission of GFP. The steps for the orthotopic implantation are detailed in this article so researchers can easily replicate the procedure in nude mice. The main steps of this protocol are preparation of the cell suspension, surgical implantation, and whole body fluorescent in vivo imaging. This orthotopic model is designed to investigate the efficacy of novel therapeutics on primary and metastatic tumors.

A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.

췌장암의 형광 동소 이식 마우스 모델

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

연구

암 연구학

The Colon-26 Carcinoma Tumor-bearing Mouse as a Model for the Study of Cancer Cachexia

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and activation of lipolysis and proteolysis systems. Cancer patients with cachexia benefit less from anti-neoplastic therapies and show increased mortality1. Several animal models have been established in order to investigate the molecular causes responsible for body and muscle wasting as a result of tumor growth. Here, we describe methodologies pertaining to a well-characterized model of cancer cachexia: mice bearing the C26 carcinoma2-4. Although this model is heavily used in cachexia research, different approaches make reproducibility a potential issue. The growth of the C26 tumor causes a marked and progressive loss of body and skeletal muscle mass, accompanied by reduced muscle cross-sectional area and muscle strength3-5. Adipose tissue is also lost. Wasting is coincident with elevated circulating levels of pro-inflammatory cytokines, particularly Interleukin-6 (IL-6)3, which is directly, although not entirely, responsible for C26 cachexia. It is well-accepted that a primary mechanism by which the C26 tumor induces muscle tissue depletion is the activation of skeletal muscle proteolytic systems. Thus, expression of muscle-specific ubiquitin ligases, such as atrogin-1/MAFbx and MuRF-1, represent an accepted method for the evaluation of the ongoing muscle catabolism2. Here, we present how to execute this model in a reproducible manner and how to excise several tissues and organs (the liver, spleen, and heart), as well as fat and skeletal muscles (the gastrocnemius, tibialis anterior, and quadriceps). We also provide useful protocols that describe how to perform muscle freezing, sectioning, and fiber size quantification.

Mice bearing the Colon-26 (C26) carcinoma represent a classical model of cancer cachexia. Progressive muscle wasting occurs in association with tumor growth, over-expression of muscle-specific ubiquitin ligases, and reductions in muscle cross-sectional area. Fat loss is also observed. Cachexia is studied in a time-dependent manner with increasing severity of wasting.

콜론-26 암 종양 베어링 암 악액질의 연구를위한 모델로 마우스를

Cancer cachexia is the progressive loss of skeletal muscle mass and adipose tissue, negative nitrogen balance, anorexia, fatigue, inflammation, and ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of diagnosis. Metastatic RCC (mRCC) is incurable, with a median survival time of only 18 months. Immune-based interventions (e.g., interferon (IFN) and interleukin (IL)-2) induce durable responses in a fraction of mRCC patients, and multikinase inhibitors (e.g., sunitinib or sorafenib) or anti-VEGF receptor monoclonal antibodies (mAb) are largely palliative, as complete remissions are rare. Such shortcomings in current therapies for mRCC patients provide the rationale for the development of novel treatment protocols. A key component in the preclinical testing of new therapies for mRCC is a suitable animal model. Beneficial features that recapitulate the human condition include a primary renal tumor, renal tumor metastases, and an intact immune system to investigate any therapy-driven immune effector responses and the formation of tumor-induced immunosuppressive factors. This report describes an orthotopic mRCC mouse model that has all of these features. We describe an intrarenal implantation technique using the mouse renal adenocarcinoma cell line Renca, followed by the assessment of tumor growth in the kidney (primary site) and lungs (metastatic site).

Implementation of an orthotopic model of renal cell carcinoma in immunocompetent mice affords the investigator a clinically-relevant system defined by the presence of a primary renal tumor and lung metastases in the same animal. This system can be used to preclinically test a variety of treatments in vivo.

전임상 치료의 양적 및 종 방향 평가를위한 동계 마우스 모델 전이성의 신장 세포 암

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Method to Define the Effects of Environmental Enrichment on Colon Microbiome Biodiversity in a Mouse Colon Tumor Model

Several recent studies have illustrated the beneficial effects of living in an enriched environment on improving human disease. In mice, environmental enrichment (EE) reduces tumorigenesis by activating the mouse immune system, or affects tumor bearing animal survival by stimulating the wound repair response, including improved microbiome diversity, in the tumor microenvironment. Provided here is a detailed procedure to assess the effects of environmental enrichment on the biodiversity of the microbiome in a mouse colon tumor model. Precautions regarding animal breeding and considerations for animal genotype and mouse colony integration are described, all of which ultimately affect microbial biodiversity. Heeding these precautions may allow more uniform microbiome transmission, and consequently will alleviate non-treatment dependent effects that can confound study findings. Further, in this procedure, microbiota changes are characterized using 16S rDNA sequencing of DNA isolated from stool collected from the distal colon following long-term environmental enrichment. Gut microbiota imbalance is associated with the pathogenesis of inflammatory bowel disease and colon cancer, but also of obesity and diabetes among others. Importantly, this protocol for EE and microbiome analysis can be utilized to study the role of microbiome pathogenesis across a variety of diseases where robust mouse models exist that can recapitulate human disease.

Environmental Enrichment (EE) is an animal housing environment that is used to reveal mechanisms that underlie the connections between lifestyle, stress, and disease. This protocol describes a procedure that uses a mouse model of colon tumorigenesis and EE to specifically define alterations in microbiota biodiversity that may impact animal mortality.

마우스 결 장 종양 모델에서 콜론 미생물 생물 다양성에 환경 농축의 효과 정의 하는 방법

Several recent studies have illustrated the beneficial effects of living in an enriched environment on improving human disease. In mice, environmental ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models. Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents. Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of mice. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration. Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

The goal of this protocol is to demonstrate the intra-prostatic injection of prostate cancer cells, with subsequent castration. Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease in the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

발광 및 형광 Orthotopic Syngeneic Murine 모델 Androgen 종속 및 거세 내성 전립선 암

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly its immune-components, is vital to the prognosis and prediction of treatment outcomes, especially those of immunotherapy. TME immune-components are composed of different subsets of tumor-infiltrating immune cells assessable by multi-color FACS. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is among the deadliest malignances lacking good treatment options, thus an urgent and unmet medical need. One important reason for its non-responsiveness to various therapies (chemo-, targeted, I/O) has been its abundant TME, consisting of fibroblasts and leukocytes that protect tumor cells from these therapies. Orthotopically implanted PDAC is believed to more accurately recapture the TME of human pancreatic cancers than conventional subcutaneous (SC) models.
Homograft tumors (KPC) are transplants of mouse spontaneous PDAC originating from genetically engineered KPC-mice (KrasG12D/+/P53-/-/Pdx1-Cre) (KPC-GEMM). The primary tumor tissue is cut into small fragments (~2 mm3) and transplanted subcutaneously (SC) to the syngeneic recipients (C57BL/6, 7&#8211;9 weeks old). The homografts were then surgically orthotopically transplanted onto the pancreas of new C57BL/6 mice, along with SC-implantation, which reached tumor volumes of 300&#8211;1,000 mm3 by 17 days. Only tumors of 400&#8211;600 mm3 were harvested per approved autopsy procedure and cleaned to remove the adjacent non-tumor tissues. They were dissociated per protocol using a tissue dissociator into single-cell suspensions, followed by staining with designated panels of fluorescently-labeled antibodies for various markers of different immune cells (lymphoid, myeloid and NK, DCs). The stained samples were analyzed using multi-color FACS to determine numbers of immune cells of different lineages, as well as their relative percentage within tumors. The immune profiles of orthotopic tumors were then compared to those of SC tumors. The preliminary data demonstrated significantly elevated infiltrating TILs/TAMs in tumors over the pancreas, and higher B-cell infiltration into orthotopic rather than SC tumors.

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

The experimental procedure on the immunophenotyping of murine orthotopic PDAC homografts aims at profiling the tumor immuno-microenvironment. Tumors are orthotopically implanted via surgery. Tumors of 200&#8211;600 mm3 in size were harvested and dissociated to prepare single-cell suspensions, followed by multi-immune marker FACS analysis using different fluorescently-labeled antibodies.

Immunophenotyping Orthotopic Homograft (Syngeneic) Murine 기본 KPC 췌 장 Ductal 선 암의 Cytometry로의

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, including genetically engineered models as well as transplantation models. However, genetically engineered mouse models are time-consuming and expensive, whereas some orthotopic transplantation models are difficult to reproduce. Here, a non-invasive intratracheal delivery method of lung tumor cells as an alternative orthotopic transplantation model is described. The use of mouse lung adenocarcinoma cells and syngeneic graft recipients allows studying tumorigenesis under the presence of a fully active immune system. Furthermore, genetic manipulations of tumor cells before transplantation makes this model an attractive time-saving approach to study the impact of genetic factors on tumor growth and tumor cell gene expression profiles under physiological conditions. Using this model, we show that lung adenocarcinoma cells express increased levels of the T-cell suppressor programmed death-ligand 1 (PD-L1) when grown in their natural environment as compared to cultivation in vitro.

Here we describe a minimally invasive syngeneic orthotopic transplantation model of mouse lung adenocarcinoma cells as a time- and cost-reducing model to study non-small cell lung cancer.

Orthotopic PD L1 식 공부 Syngeneic 폐 선 암 세포의 이식

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen receptors (CARs) for acute lymphoblastic leukemia (ALL) andnon-Hodgkin lymphoma (NHL). The focus of the field is now on emulating these successes in other hematological malignancies where less impressive complete response rates are observed. Further engineering of CAR T cells or co-administration of other treatment modalities may successfully overcome obstacles to successful therapy in other cancer settings.
We therefore present a model in which others can conduct pre-clinical testing of CD19 CAR T cells. Results in this well tested B-cell lymphoma model are likely to be informative CAR T-cell therapy in general.
This protocol allows the reproducible production of mouse CAR T cells through calcium phosphate transfection of Plat-E producer cells with MP71 retroviral constructs and pCL-Eco packaging plasmid followed by collection of secreted retroviral particles and transduction using recombinant human fibronectin fragment and centrifugation. Validation of retroviral transduction, and confirmation of the ability of CAR T cells to kill target lymphoma cells ex vivo, through the use of flow cytometry, luminometry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), is also described.
Protocols for testing CAR T cells in vivo in lymphoreplete and lymphodepleted syngeneic mice, bearing established, systemic lymphoma are described. Anti-cancer activity is monitored by in vivo bioluminescence and disease progression. We show typical results of eradication of established B-cell lymphoma when utilizing 1st or 2nd generation CARs in combination with lymphodepleting pre-conditioning and a minority of mice achieving long term remissions when utilizing CAR T cells expressing IL-12 in lymphoreplete mice.
These protocols can be used to evaluate CD19 CAR T cells with different additional modification, combinations of CAR T cells and other therapeutic agents or adapted for the use of CAR T cells against different target antigens.

Here, we present a protocol for the production and pre-clinical testing of murine CD19 CAR T cells by retroviral transduction and utilization as a therapy against established syngeneic A20 B-cell lymphoma in BALB/c mice with or without lymphodepleting pre-conditioning.

CD19 자동차 T 세포의 전 임상 평가 위한 Syngeneic 마우스 B-세포 림프 종 모델

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the limitations of current treatments, as the majority of patients do not respond to immunotherapy. Development of accurate preclinical models to quickly identify novel and effective therapeutic combinations are critical to address this unmet clinical need. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDA) is a canonical example of an immune checkpoint blockade resistant tumor with only 2% of patients responding to immunotherapy. The genetically engineered KrasG12D+/-;Trp53R172H+/-;Pdx-1 Cre (KPC) mouse model of PDA recapitulates human disease and is a valuable tool for assessing therapies for immunotherapy resistant in the preclinical setting, but time to tumor onset is highly variable. Surgical orthotopic tumor implantation models of PDA maintain the immunobiological hallmarks of the KPC tissue-specific tumor microenvironment (TME) but require a time-intensive procedure and introduce aberrant inflammation. Here, we use an ultrasound-guided orthotopic tumor implantation model (UG-OTIM) to non-invasively inject KPC-derived PDA cell lines directly into the mouse pancreas. UG-OTIM tumors grow in the endogenous tissue site, faithfully recapitulate histological features of the PDA TME, and reach enrollment-sized tumors for preclinical studies by four weeks after injection with minimal seeding on the peritoneal wall. The UG-OTIM system described here is a rapid and reproducible tumor model that may allow for high throughput analysis of novel therapeutic combinations in the murine PDA TME.

We describe a protocol for the ultrasound guided implantation of murine-derived pancreatic ductal adenocarcinoma cell lines directly into the native tumor site. This approach resulted in pancreatic tumors detectable by ultrasound scanning within 2-4 weeks of injection, and significantly reduced the proportion tumor cell seeding on the peritoneal wall as compared to surgical orthotopic implantation.

뮤린 췌장 연성 선암의 초음파 유도 정형 외 이식

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

An Orthotopic Resectional Mouse Model of Pancreatic Cancer

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer (PC). To address this deficiency, we describe a mouse model involving orthotopic implantation of PC followed by distal pancreatectomy and splenectomy. The model has been demonstrated to be safe and suitably flexible for the study of various therapeutic approaches in adjuvant and neo adjuvant settings.
In this model, a pancreatic tumor is first generated by implanting a mixture of human pancreatic cancer cells (luciferase-tagged AsPC-1) and human cancer associated pancreatic stellate cells into the distal pancreas of Balb/c athymic nude mice. After three weeks, the cancer is resected by re-laparotomy, distal pancreatectomy and splenectomy. In this model, bioluminescence imaging can be used to follow the progress of cancer development and effects of resection/treatments. Following resection, adjuvant therapy can be given. Alternatively, neoadjuvant treatment can be given prior to resection.
Representative data from 45 mice are presented. All mice underwent successful distal pancreatectomy/splenectomy with no issues of hemostasis. A macroscopic proximal pancreatic margin greater than 5 mm was achieved in 43 (96%) mice. The technical success rate of pancreatic resection was 100%, with 0% early mortality and morbidity. None of the animals died during the week after resection.
In summary, we describe a robust and reproducible technique for a surgical resection model of pancreatic cancer in mice which mimics the clinical scenario. The model may be useful for the testing of both adjuvant and neoadjuvant treatments.

In the clinical context, patients with localized pancreatic cancer will undergo pancreatectomy followed by adjuvant treatment. This protocol reported here aims to establish a safe and effective method of modelling this clinical scenario in nude mice, through orthotopic implantation of pancreatic cancer followed by distal pancreatectomy and splenectomy.

췌장암의 정형소 절제술 마우스 모델

There is a lack of satisfactory animal models to study adjuvant and/or neoadjuvant therapy in patients being considered for surgery of pancreatic cancer ...