저자 감사 호세 아우 구 스토 Maulin 현미경 다중 사용자 실험실 (의 리 베이 라 오프 레 토 의학의 학교)에서 EDS와 sem의 그의 관대 한 지원에 대 한 분석 및 비디오 판에서 그의 관대 한 기술 지원에 대 한 브라 더 텍사스 마차.

이 연구는 리 베이 라 오프 레 토의 치과 학교의 기관 검토 위원회에 의해 승인 되었다 그리고 자원 봉사 참가자 서명 동의서 (2011.1.371.583 프로세스).
1. Biofilm 형성에서 제자리에
<ol><li>
참가자의 선택
	<ol>
<li>다음 포함 기준에 따라 환자 선택: 완전 한 치열과 구강 질환의 임상 표시 없이 건강 한 개인.</li>
		<li>다음 제외 기준에 따라 환자 제외: 임신, 수 유, 치과 카 리에 스, 치 주 질환 또는 지난 3 개월 동안, 흡연 자, 또는 치 주 상태에 영향을 미칠 수 있는 조직의 질환에 항생제 치료.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Intraoral 장치 준비
	<ol>
<li>Alginate 인상을 통해 상 악 아치를 기록 합니다.</li>
		<li>유형 IV 돌 돌 가루 100 g을 물 19 mL을 추가 하 여 준비 합니다. 돌 상 악 아치의 모델을 만들 alginate 몰드에 붓으십시오.</li>
		<li>디자인과 테스트 표본 (티타늄과 세라믹 디스크)를 지원 하기 위해 아크릴 intraoral 장치 조작.<ol>
<li>NiCr 와이어 (0.7 m m에 직경) 교정 플라이어 # 139를 사용 하 여에서 못 벗어난 걸쇠를 조작 하 고 모델에 그들을 배치 합니다. 그들은 루프를 형성 하 위 구치 사이 클램프 위치, 각 와이어의 한쪽 끝을 구 부.<ol>
<li>치 간 시의 지역에서 루프를 적응. Occlusal에서 연락처의 포인트는 폐색과 방해를 하지 않도록 부드러운 곡률을 삽입 합니다. 아크릴에 보존에 대 한 클램프의 끝에 접어 90 °를 확인 합니다.</li>
				<li>위 두 번째 어 금 니에 클램프를 맞게 적응 자 궁 경부 3에서 와이어의 곡률 (vestibular) 90 ° 아크릴에 보존에 대 한 클램프의 끝에 배를 (원심) 치아 윤곽. 참고: intraoral 장치에 적절 한 보존/안정성 제공, 보유 clasps 위 구치 원심 부분의 치과 아치의 양쪽에 두 번째 어 금 니 사이 배치 했다.</li>
			</ol>
</li>
			<li>제조업체의 지침에 따라 자체 경화 아크릴 수 지를 조작 하 고 3 m m 두꺼운 시트를 만들기 위해 플라스틱 단계 2 유리 접시 (interposed 두께 3mm 스페이서) 사이 아크릴 수 지를 누릅니다.</li>
			<li>소자의 디자인에 따라 모델의 경구개 지역에 아크릴 시트를 카 버, 중 합 전에 잉여 아크릴 수 지를 떨어져 트림.</li>
			<li>공고히 하는 매트릭스에 녹은 왁 스를 놓고 왁 스에 대 한 대기 금속 매트릭스 [10 밀리미터 직경, 2mm 두께 (78.5 m m2의 면적)]를 사용 하 여 왁 스 디스크 조작. 수동으로 아크릴 수 지, 그들의 2는 구치와 두 번째 어 금 니 옆 다른 2 사이 4 왁 스 디스크를 포함 합니다.</li>
			<li>20 분에 대 한 압축 공기의 미만 20 psi 압력 냄비에 유해 아크릴 수 지를 보자.</li>
			<li>전기 치과 실험실 핸드 피스와 커터 intraoral 장치를 완료 하 고 연마 고무 폴란드어.</li>
			<li>위에서 설명한 장비를 사용 하 여 입에 적당 한 적합을 위한 장치를 조정 합니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
티타늄과 지 르 코니 아 표본의 준비 참고: 표본 (n = 14) 10 mm 직경에서 및 두께에서 2 m m 이며 78.5 m m2의 면적을가지고.<ol>
<li>감소 하는 abrasiveness의 수냉식된 sandpapers 표본 표면 폴란드어 (600, 1200, 2000 모래), 약 20 분. 참고:는 표본의 연마 0.2 µ m에서 표면 거칠기 표준화를 수행 했다.</li>
		<li>청소 하 고 소독 표본 및 액체 세제와 수돗물, intraoral 장치 다음 이소프로필 알코올 초음파 목욕을 사용 하는 15 분 흡수 성 종이 타 올 그들을 건조.</li>
		<li>비-독성 핫 멜 트 접착제 (그림 1)의 약 0.1 mL와는 표본 intraoral 구강 장치에 수정.</li>
		<li>구강에서 견본을 포함 하는 장치를 설치 합니다. 참고: 포함 하는 표본 intraoral 장치 48 h에 대 한 착용 한다. 장치 제거 하 고 환자는 먹고 구강 청소를 수행 하는 동안 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)에 저장 되었습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2입니다. 세균 생존 능력의 평가
참고: 샘플 크기 n = 10.
<ol><li>SYTO9의 3 µ L을 추가 하 여 염색 솔루션 준비 (녹색 형광 핵 산 염료)와 3 µ L propidium 요오드 화물 (빨간색 형광 핵 산 염색) 살 균의 1 mL의 증류수. 참고: 빛 으로부터 보호 하는 솔루션을 준비 합니다.</li>
	<li>24-잘 접시에는 견본을 전송 하 고 모든 비 부착 한 세포를 제거 하는 PBS와 함께 그들을 씻어.</li>
	<li>Biofilm 포함 된 견본을 충당 하기 위해 형광 염료 솔루션의 적절 한 볼륨 (1 mL)을 추가 합니다. Disorganize는 biofilm를 하지 않도록 매우 신중 하 게 염료를 추가 합니다.</li>
	<li>빛 으로부터 보호 하는 실 온에서 20-30 분에 대 한 견본 품 어.</li>
	<li>부드럽게 biofilm 샘플 어떤 과잉 염료를 제거 하는 멸 균 증류수로 씻는 다.</li>
	<li>유리 하단 접시에는 견본을 놓고 multiphoton 레이저 현미경 biofilm 분석에 대 한 검색을 수행 합니다. 참고: 세균성 세포 생존 능력 분석 multiphoton 현미경 시스템을 사용 하 여 실행 되었다. Propidium 요오드 화물의 형광 546/680의 여기/방출 파장 필터를 사용 하 여 검색 및 477/600 nm SYTO9에 대 한. 가져온 이미지의 크기는 5.16188 x 5.16188 m m, 각 표본 (78.5 m m2)의 전체 면적의 전체 면적의 33.94 %26.64 m m2 에 해당 했다. 이미지는 1024 x 1024 픽셀의 해상도 샘플의 가장 중앙 부분에서 만들어졌다. 빨강 채널 및 녹색 이미지는 별도로 피지 소프트웨어31를 사용 하 여 분석 되었다. 선택 도구를 사용 하 여 각 셀을 선택한 및 형광의 강도 빼서 이미지 배경 픽셀의 통합된 밀도 통해 측정 했다.</li>
</ol>3. 에너지 흩어지는 분광학 (EDS)에 의해 표본 화학 성분의 분석
참고: 샘플 크기 n = 3.
<ol><li>각 biofilm 무료 테스트 소재의 3 표본 선택 하 고 전자 빔 전압 10 kV32의 분산 에너지 분석기를 결합 하는 스캐닝 전자 현미경을 사용 하 여 각 시료의 2 가지 영역에서 화학 성분 평가.</li>
</ol>4. 전자 현미경 검사 법을 검사 하 여 세균성 Biofilm의 형태소 분석
참고: 샘플 크기 n = 1.
<ol><li>2.5%도 0.1 M 나트륨 cacodylate 버퍼, pH 7.0-7.3, 24 h에에서 희석에 표본 immersing 하 여는 biofilm를 해결.</li>
	<li>PBS 버퍼에 샘플을 세척 (pH 7.6 =).</li>
	<li>1 시간에 1% 오스뮴 tetroxide와 biofilm 접미사</li>
	<li>PBS 버퍼에 샘플을 세척 (pH 7.6 =).</li>
	<li>탈수 biofilm 샘플 신중 하 게, 에탄올 솔루션 (50%, 70%, 90%, 95%, 및 100%)의 농도 증가 그들을 유지. 참고: 100% 농도에서 에탄올의 3 교류를 수행 합니다. 총 탈수 단계 약 2 시간 걸립니다.</li>
	<li>임계점 건조 기에 견본을 전송 하 고 이산화탄소 (CO2)와 함께 여러 대체는 표본 건조 될 때까지.</li>
	<li>장치에서 말린된 견본을 제거 하 고 스캐닝 전자 현미경 소유자에 그들을 마운트.</li>
	<li>스퍼터-코트 120에 대 한 시료의 표면에 금 20 nm 층 s.</li>
	<li>스캐닝 전자 현미경 실에서 골드 코팅 된 디스크를 삽입 합니다. 각 표본, 가변 압력 하에서 20-30 kV와 650 X 배율12의 5 가지 다른 영역에서 이미지를 가져옵니다.</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

이 연구에서 설명 하는 프로토콜 세균성 세포 생존 능력 및 형태학 상 특성의 분석을 포함 하 여 보 철 abutments에 대 한 티타늄 및 지 르 코니 아 재료에 biofilm 형성을 평가 하기 위해 개발 되었다. 이 작업을 수행 하기 위해 biofilm 형성의 현장에 모델 intraoral 장치 시험 자료의 샘플 및 48 h에 대 한 동적 구강 환경에 노출 그들을 유지 하는 능력의 구성 설계 되었습니다. 장치는 편안 하 고 쉽게 ?...

박테리아 biofilms 복잡 한, 기능적 및 구조적으로 미생물 지역 사회 조직, 세포 외, 생물학적으로 활성 폴리머 매트릭스1,2합성 미생물 종의 다양성에 의해 특징. 생물 비 생물 적인 표면에 세균성 접착 침 glycoproteins1,,34주로 구성 된 인수 박막의 형성에 의해 앞에 있습니다. 미생물 및는 박막 사이의 약한 물리 화학 상호 작용 처음 설립 하 고 세균성 adhesins 인수 박막의 당단백질 수용 체 사이 강한 상호 작용에 의해 따라. 미생물 다양성 형성 multispecies 커뮤니티1,,34, , 이미 연결 된 박테리아의 수용 체에 보조 식민지 개척자의 coaggregation를 통해 점차 증가 5.
구두 microbiota 및 호스트와의 공생 관계의 항상성 구강 건강 유지에 중요 하다. 구두 biofilms 안에 dysbiosis 카 리에 스 그리고 치 주 질환2,5의 개발에 대 한 위험을 증가할 수 있습니다. 임상 연구는 치아 나 치아에 biofilm의 축적과 치은 염 또는 페리-임 플 란 트 mucositis6,7의 개발 원인-효과 관계를 보여 줍니다. 염증 과정의 진행 임 플 란 트8의 필연적인 손실과 peri implantitis 이끌어 낸다.
치과 임 플 란 트 및 보 철 그들의 구성 요소는 세균성 식민 및 biofilm 형성9경향이 있습니다. 화학 성분 및 표면 지형 낮은 미생물 접착을 제공 하는 자료의 사용 정도와 요정 이식 질병9,10의 진행을 줄일 수 있습니다. 티타늄 임 플 란 트;에 대 한 보 철 abutments의 제조에 대 한 자료를 가장 많이 사용 되는 그러나, 세라믹 재료 최근에 도입 되었다 그리고 그들의 미적 속성 및 생체 적합성11,12티타늄 대신 인기를 얻고 있다. 또한 중요 한 것은, 세라믹 재료 미생물, 주로 그들의 표면 거칠기, 습윤, 및 표면 자유 에너지10,13때문에 살 일 걸 요 감소 잠재력 관련 되어 있다.
생체 외에서 연구 보 철 인접 표면9,14,15,,1617미생물 접착의 이해에 중요 한 발전에 기여 했다. 그러나, 구강, 전단 세력의 존재에 의해 뿐만 아니라 다양 한 온도 산도 및 양분 가용성 특징의 동적 환경이 이다 생체 외에서 실험 프로토콜18, 재현할 수 19. 이 문제를 해결 하려면 대신 advantageously 비보 전 분석10,20, 의 3 차원 구조를 유지 하는 biofilm 형성의 현장에 모델의 사용은 21 , 22 , 23 , 24.
구두 기판에 형성 된 biofilm의 복잡 한 구조의 분석 현미경 검사 법 기술 광학 밀도 문제25표시할 수 있는 사용을 해야 합니다. Multiphoton 레이저 스캔 현미경 biofilm 구조 분석26현대 옵션입니다. 그것은 적외선 파장, 펄스 femtoseconds27에 가까운 조명 소스와 비선형 광학의 사용에 의해 특징입니다. 이 메서드는 autofluorescence 자료 또는 자료 fluorophores, 비선형 광학 신호 제 2 고조파 발생으로 알려진 현상에서 파생 된에 의해 생성 된 이미지 외에 의해 표시의 이미지 수집에 대 한 표시 됩니다. Multiphoton 현미경의 장점 중27여기 빛 강도 의해 발생 하는 최소 세포 손상으로 얻은 좋은 이미지 깊이입니다.
Multiphoton 현미경에 의해 abiotic 표면에 biofilm의 생존 능력 분석, 형광 핵 산의 사용 다른 스펙트럼 특성을 가진 염료 그리고 세균성 세포에 침투 수 용량 필요28. 라이브 하 고 죽은 박테리아28,,2930사이의 시각적 차별화 Fluorophores SYTO9 (그린 형광) 및 propidium 요오드 화물 (레드 형광)를 사용할 수 있습니다. Propidium 요오드 화물 SYTO9는 손상과 손상 된 막으로 세균 세포를 입력 하는 동안 손상 된 멤브레인과만 박테리아 침투. 두 염료 셀 안에 있는 경우, propidium 요오드 화물 핵 산에 대 한 큰 선호도 있으며 배 수량 SYTO9, 그것에 게 빨간28,30을 표시 합니다.
보기는 구강 환경 복잡성과 구강 biofilm이, 치아와 치과 재료의 표면 biofilm 분석 수 있는 현미경 기술 필요. 이 문서에서는 일련의 프로토콜 비교 형태학 및 세포 수준에서 구두 biofilms 분석에 관련 된 방법으로 구두 biofilm 형성 티타늄 및 보 철 abutments에 대 한 세라믹 재료에 대 한 구현.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:937px;" width="937">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Hydrogum 5</td>
			<td style="width:135px;">Zhermack Dental</td>
			<td style="width:123px;">C302070</td>
			<td style="width:341px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Durone IV</td>
			<td style="width:135px;">Dentsply</td>
			<td style="width:123px;">17130500002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NiCr wire&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Morelli</td>
			<td style="width:123px;">55.01.070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">JET auto polymerizing acrylic</td>
			<td style="width:135px;">Cl&#225;ssico</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dental wax&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Cl&#225;ssico</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Pressure pot&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Essencedental</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Sandpapers 600 grit</td>
			<td style="width:135px;">NORTON</td>
			<td style="width:123px;">T216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Sandpapers 1200 grit</td>
			<td style="width:135px;">NORTON</td>
			<td style="width:123px;">T401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Sandpapers 2000 grit</td>
			<td style="width:135px;">NORTON</td>
			<td style="width:123px;">T402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Metallographic Polishing Machine</td>
			<td style="width:135px;">Arotec</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:135px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:123px;">W292907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Hot melt adhesive</td>
			<td style="width:135px;">TECSIL</td>
			<td style="width:123px;">PAH M20017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Filmtracer LIVE/DEAD Biofilm Viability Kit</td>
			<td style="width:135px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">L10316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Pipette Tips, 10 &#181;L</td>
			<td style="width:135px;">KASVI</td>
			<td style="width:123px;">K8-10&#160;&#160;</td>
			<td style="width:341px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Pipette Tips, 1,000 &#181;L</td>
			<td style="width:135px;">KASVI</td>
			<td style="width:123px;">K8-1000B&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24-well plate&#160;</td>
			<td style="width:135px;">KASVI</td>
			<td>K12-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Glass Bottom Dish</td>
			<td style="width:135px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:123px;">150680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AxioObserver inverted microscope&#160;</td>
			<td style="width:135px;">ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Chameleon vision ii laser</td>
			<td style="width:135px;">Coherent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Objective EC Plan-Neofluar 40x/1.30 Oil DIC</td>
			<td style="width:135px;">ZEISS</td>
			<td>440452-9903-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">SDD sensors - X-Max 20mm&#178;</td>
			<td style="width:135px;">Oxford Instruments</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Glutaraldehyde solution</td>
			<td style="width:135px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:123px;">G5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Sodium cacodylate Buffer&#160;</td>
			<td style="width:135px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:123px;">97068&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Osmium tetroxide</td>
			<td style="width:135px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:123px;">201030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:339px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:135px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:123px;">S9638</td>
			<td rowspan="4">Used for preparation of phosphate buffered saline</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:339px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:135px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:123px;">P9791&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">NaCl</td>
			<td style="width:135px;">MERK</td>
			<td style="width:123px;">1.06404</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Kcl</td>
			<td style="width:135px;">SIGMA-ALDRICH</td>
			<td style="width:123px;">P9333&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Ethanol absolute for analysis EMSURE</td>
			<td style="width:135px;">MERK</td>
			<td style="width:123px;">1.00983</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">CPD 030 Critical Point Dryer</td>
			<td style="width:135px;">BAL-TEC</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">JSM-6610 Series Scanning Electron Microscope</td>
			<td style="width:135px;">JEOL</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">SCD 050 Sputter Coater</td>
			<td style="width:135px;">BAL-TEC</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

oral biofilm formation on different materials for dental implants

치과 임 플 란 트 및 보 철 그들의 구성 요소 세균성 식민 및 biofilm 형성 하는 경향이 있다. 제공 하는 낮은 미생물 접착 재료의 사용 정도와 요정 이식 질병의 진행을 줄일 수 있습니다. 보기는 구강 환경 복잡성과 구강 biofilm이, 치아와 치과 재료의 표면에의 한 biofilm 분석 수 있는 현미경 기술 필요. 이 문서에서는 일련의 프로토콜 비교 형태학 및 세포 수준에서 구두 biofilms 분석에 관련 된 방법으로 구두 biofilm 형성 티타늄 및 보 철 abutments에 대 한 세라믹 재료에 대 한 구현. 이 연구에 설명 된 대로 치과 족 abutments에 대 한 티타늄 및 지 르 코니 아 재료에 구두 biofilm 형성 평가를 제자리에 모델 방법론 타당성을 시연 함으로써 48 h biofilm의 만족 스러운 보존을 제공 합니다. Multiphoton 현미경 시험 자료에 형성 된 biofilm의 지역 담당자의 분석을 수 있습니다. 또한, fluorophores의 사용 및 multiphoton 현미경을 사용 하 여 이미지의 처리에는 세균 생존 능력의 분석을 미생물의 아주 이질적인 인구에 있습니다. 전자 현미경 검사 법 생물학 견본의 준비 biofilm, 좋은 해상도, 이미지 및 아무 유물의 구조 보존을 촉진합니다.

후 48 h 제자리에 성장의 biofilm의 식민 밀도 multiphoton 현미경 (시료의 총 스캔된 영역에 관하여 티타늄 및 지 르 코니 아 디스크에 식민지 지역의 비율에 의해이 연구에서 대표 되었다 26.64 mm2)입니다. 그림 2 3 시험된 재료의 표면에 세균성 식민 밀도를 나타냅니다. 캐스팅의 표면에 biofilm의 높은 밀도 관찰 되었다 가공된 티타늄 디스크 (0...

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Oral Biofilm Formation on Different Materials for Dental Implants

치과 임 플 란 트에 대 한 다른 자료에 구두 Biofilm 형성

여기, 선물이 세균성 세포 생존 및 형태학 상 특성의 분석을 포함 하 여 치과 보 철물 abutments에 대 한 티타늄 및 지 르 코니 아 재료에 구두 biofilm 형성 평가 하는 프로토콜. 현장에서 모델 관련 강력한 현미경 검사 법 기술 된 구두 biofilm 분석에 사용 됩니다.

Dental implants and their prosthetic components are prone to bacterial colonization and biofilm formation. The use of materials that provides low ...

oral-biofilm-formation-on-different-materials-for-dental-implants

Research

JoVE Journal

Medicine

11.3K 조회수.  University of São Paulo. 여기, 선물이 세균성 세포 생존 및 형태학 상 특성의 분석을 포함 하 여 치과 보 철물 abutments에 대 한 티타늄 및 지 르 코니 아 재료에 구두 biofilm 형성 평가 하는 프로토콜. 현장에서 모델 관련 강력한 현미경 검사 법 기술 된 구두 biofilm 분석에 사용 됩니다.

비디오: Oral Biofilm Formation on Different Materials for Dental Implants

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human pulp-derived stem cells (hDPSCs) possess high proliferation potential with multi-lineage differentiation capacity compare to the ordinary source of adult stem cells1-8; therefore, hDPSCs could be the good candidates for autologous transplantation in tissue engineering and regenerative medicine. Along with these benefits, possessing the mesenchymal stem cells (MSC) features, such as immunolodulatory effect, make hDPSCs more valuable, even in the case of allograft transplantation6,9,10. Therefore, the primary step for using this source of stem cells is to select the best protocol for isolating hDPSCs from pulp tissue. In order to achieve this goal, it is crucial to investigate the effect of various isolation conditions on different cellular behaviors, such as their common surface markers &amp; also their differentiation capacity.
Thus, here we separate human pulp tissue from impacted third molar teeth, and then used both existing protocols based on literature, for isolating hDPSCs,11-13 i.e. enzymatic dissociation of pulp tissue (DPSC-ED) or outgrowth from tissue explants (DPSC-OG). In this regards, we tried to facilitate the isolation methods by using dental diamond disk. Then, these cells characterized in terms of stromal-associated Markers (CD73, CD90, CD105 &amp; CD44), hematopoietic/endothelial Markers (CD34, CD45 &amp; CD11b), perivascular marker, like CD146 and also STRO-1. Afterwards, these two protocols were compared based on the differentiation potency into odontoblasts by both quantitative polymerase chain reaction (QPCR) &amp; Alizarin Red Staining. QPCR were used for the assessment of the expression of the mineralization-related genes (alkaline phosphatase; ALP, matrix extracellular phosphoglycoprotein; MEPE &amp; dentin sialophosphoprotein; DSPP).14

The method described isolation and characterization of human Dental Pulp Stem Cells (hDPSCs) by using either enzymatic dissociation of pulp (DPSC-ED) or direct outgrowth of stem cells from pulp tissue explants (DPSC-OG). Then followed by in vitro comparative differentiation of both types of hDPSCs into odontoblasts.

인간 치과 펄프의 줄기 세포의 분리, 특성화 및 비교 차별화 두 가지 방법을 사용하여 영구 치아에서 파생

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

연구

의학

Two Techniques to Create Hypoparathyroid Mice: Parathyroidectomy Using GFP Glands and Diphtheria-Toxin-Mediated Parathyroid Ablation

Hypoparathyroidism (HP) is a disorder characterized by low levels of PTH which lead to hypocalcemia, hyperphosphatemia, and low bone turnover. The most common cause of the disease is accidental removal of the parathyroid glands during thyroid surgery. Novel therapies for HP are needed, but testing them requires reliable animal models of acquired HP. 
Here, we demonstrate the generation of two mouse models of acquired HP. In the GFP-PTX model, mice with green fluorescent protein (GFP) expressed specifically in the parathyroids (PTHcre-mTmG) were created by crossing PTHcre+ mice with Rosa-mTmGfl/fl mice. Green fluorescing parathyroid glands are easily identified under a fluorescence dissecting microscope and parathyroidectomy is performed in less than 20 min. After fluorescence-guided surgery, mice are profoundly hypocalcemic. Contrary to the traditional thyro-parathyroidectomy, this precise surgical approach leaves thyroid glands and thyroid function intact. The second model, which does not require surgery, is based on a diphtheria-toxin approach. PTHcre-iDTR mice, which express the diphtheria toxin (DT) receptor specifically in the parathyroids, were generated by crossing the inducible DTR mouse with the PTHcre mouse. Parathyroid cells are thus rendered sensitive to diphtheria toxin (DT) and can be selectively destroyed by systemically injecting mice with DT. The resulting hypocalcemic phenotype is stable.

Mice with acquired hypoparathyroidism would be useful for studying novel drug therapies for hypoparathyroidism. Two procedures to create such mice are demonstrated. The GFP-PTX mouse is generated by surgical parathyroidectomy guided by green fluorescing parathyroid glands. A second, non-surgical approach is based on parathyroid-specific expression of the diphtheria toxin receptor.

Hypoparathyroid 마우스를 만드는 두 기술 : 부갑상선 GFP 땀샘과 디프테리아 독소 매개 부갑상선 절제술을 사용하여

Hypoparathyroidism (HP) is a disorder characterized by low levels of PTH which lead to hypocalcemia, hyperphosphatemia, and low bone turnover. The most ...

Oral Biofilm Sampling for Microbiome Analysis in Healthy Children

Oral biofilm and its molecular analysis provide a basis for investigating various dental research and clinical questions. Knowledge of biofilm composition leads to a better understanding of cariogenic and periopathogenic mechanisms. Microbial changes taking place in the oral cavity during childhood are of interest for several reasons. The evolution of the child oral microbiota and shifts in its composition need to be analyzed further to understand and possibly prevent the onset of disease. At the same time, advanced knowledge of the natural composition of oral biofilm is needed. Early stages of caries-free permanent dentition with healthy gums provide a widely unaffected subgingival habitat that can serve as an in situ baseline for studying features of oral health and disease. Analysis of children's oral biofilm during different stages in life is thus an important theme in the field. Modern molecular analysis methods can provide comprehensive information about the bacterial diversity of such biofilms. To enable microbiota data comparison, it is important to standardize each step in the procedure for molecular data generation. This procedure spans from clinical sampling, Next Generation Sequencing (NGS), bioinformatic data processing, to taxonomic interpretation. One of the most critical factors here is biofilm sampling. Sampling in children is even more challenging in particular due to limited space in subgingival areas. We thus focus on the use of paper points for subgingival sampling. This article provides a detailed protocol for oral biofilm sampling of the subgingival sulcus, the mucosa, and saliva in children.

Changes in the oral microbiome throughout childhood are of growing interest. Comparison of different microbiome studies reveals a lack of standardized sampling protocols. Limited space makes sampling the sound subgingival sulcus of children challenging. Paper point sampling is presented here in detail as the method of choice for this area.

건강 한 아이에서 미생물 분석을 위한 구두 Biofilm 샘플링

Oral biofilm and its molecular analysis provide a basis for investigating various dental research and clinical questions. Knowledge of biofilm composition ...

Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result from altered activity of cells responsible for enamel synthesis named ameloblasts, which present in enamel organ. During amelogenesis, ameloblasts follow a specific and precise sequence of events of proliferation, differentiation, and death. A rat continually growing incisors is a suitable experimental model to study ameloblast activity and differentiation stages in physiological and pathological conditions. Here, we describe a reliable and consistent method to micro-dissect enamel organ of rats exposed to environmental toxicants. The micro-dissected dental epithelia contain secretion- and maturation-stage ameloblasts that may be used for qualitative experiments, such as immunohistochemistry assays and in situ hybridization, as well as for quantitative analyses such as RT-qPCR, RNA-seq, and Western blotting.

Understanding enamel formation and possible alterations requires the study of ameloblast activity. Here, we describe a reliable and consistent method to micro-dissect enamel organs containing secretion- and maturation-stage ameloblasts that may be used for further quantitative and qualitative experimental procedures.

사기 질 기관 이용과 환경에 노출 된 쥐의 악의 니에서의 마이크로 해 부

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result ...

Oral Health Assessment by Lay Personnel for Older Adults

Oral health is an often-undervalued contributor to overall health. The literature, however, underscores the myriad of systemic diseases influenced by oral health, including type II diabetes, heart disease, and atherosclerosis. Thus, assessments of oral health, called oral screenings, have a significant role in assessing risk of disease, managing disease, and even improving disease by oral care. Here we present a method to assess oral health quickly and consistently across time. The protocol is simple enough for non-oral health professionals such as students, family, and caregivers. Useful for any age of patient, the method is particularly key for older individuals who are often at risk of inflammation and chronic disease. Components of the method include existing oral health assessment scales and inventories, which are combined to produce a comprehensive assessment of oral health. Thus, oral characteristics assessed include intraoral and extraoral structures, soft and hard tissues, natural and artificial teeth, plaque, oral functions such as swallowing, and the impact this oral health status has on the patient&#39;s quality of life. Advantages of this method include its inclusion of measures and perceptions of both the observer and patient, and its ability to track changes in oral health over time. Results acquired are quantitative totals of questionnaire and oral screening items, which can be summed for an oral health status score. The scores of successive oral screenings can be used to track the progression of oral health across time and guide recommendations for both oral and overall health care.

The goal of this protocol is to enable non-dental professionals to assess oral health status for research or health-screening purposes. Aspects assessed include lips, tongue, soft and hard tissues, natural and artificial teeth, oral cleanliness, plaque, swallowing, and impact of oral health on quality of life.

노인을위한 평신도 직원에 의한 구강 건강 평가

Oral health is an often-undervalued contributor to overall health. The literature, however, underscores the myriad of systemic diseases influenced by oral ...

3D Planning and Printing of Patient Specific Implants for Reconstruction of Bony Defects

We are in the midst of the 3D era in most aspects of life, and especially in medicine. The surgical discipline is one of the major players in the medical field using the constantly developing 3D planning and printing capabilities. Computer-assisted design (CAD) and computer assisted manufacturing (CAM) are used to describe the 3D planning and manufacturing of the product. The planning and manufacturing of 3D surgical guides and reconstruction implants is performed almost exclusively by engineers. As technology advances and software interfaces become more user-friendly, it raises a question regarding the possibility of transferring the planning and manufacturing to the clinician. The reasons for such a shift are clear: the surgeon has the idea of what he wants to design, and he also knows what is feasible and could be used in the operating room. It allows him to be prepared for any scenario/unexpected results during the operation and allows the surgeon to be creative and express his new ideas using the CAD software. The purpose of this method is to provide clinicians with the ability to create their own surgical guides and reconstruction implants. In this manuscript, a detailed protocol will provide a simple method for segmentation using segmentation software and implant planning using a 3D design software. Following the segmentation and stl file production using segmentation software, the clinician could create a simple patient specific reconstruction plate or a more complex plate with a cradle for bone graft positioning. Surgical guides can be created for accurate resection, hole preparation for proper reconstruction plate positioning or for bone graft harvesting and re-contouring. A case of lower jaw reconstruction following plate fracture and nonunion healing of a trauma sustained injury is detailed.

This protocol describes the use of 3D planning and printing for reconstruction of bony defects. We use segmentation tools to create 3D models followed by 3D design software to create patient specific implants for reconstruction purposes concomitant to ablative surgery or as a second stage.

뼈 결함의 재건을위한 환자 특정 임플란트의 3D 계획 및 인쇄

We are in the midst of the 3D era in most aspects of life, and especially in medicine. The surgical discipline is one of the major players in the medical ...

Treatment of Facial Deformities using 3D Planning and Printing of Patient-Specific Implants

Technological advancements in surgical planning and patient-specific implants are constantly evolving. One can either adopt the technology to achieve better results, even in the less experienced hand, or continue without it. As technology develops and becomes more user-friendly, we believe it is time to allow the surgeon the option to plan his/her operations and create his/her own patient-specific surgical guides and fixation plates allowing him full control over the process. We present here a protocol for 3D planning of the operation followed by 3D planning and printing of surgical guides and patient-specific fixation implants. During this process we use two commercial computer-assisted design (CAD) software. We also use a fused deposition&#160;modeling printer for the surgical guides and a selective laser sintering printer for the titanium patient-specific fixation implants. The process includes computed tomography (CT) imaging acquisition, 3D segmentation of the skull and facial bones from the CT, 3D planning of the operations, 3D planning of patient-specific fixation implant according to the final position of the bones, 3D planning of surgical guides for performing an accurate osteotomy and preparing the bone for the fixation plates, and 3D printing of the surgical guides and the patient-specific fixation plates. The advantages of the method include full control over the surgery, planned osteotomies and fixation plates, significant reduction in price, reduction in operation duration, superior performance and highly accurate results. Limitations include the need to master the CAD programs.

As technology develops and becomes more user-friendly, planning of operations and patient-specific surgical guides and fixation plates should be performed by the surgeon. We present a protocol for 3D planning of orthognathic skeletal movements and 3D planning and printing of patient-specific fixation plates and surgical guides.

환자 별 임플란트의 3D 계획 및 인쇄를 이용한 안면 기형 치료

Technological advancements in surgical planning and patient-specific implants are constantly evolving. One can either adopt the technology to achieve ...

Development and Evaluation of 3D-Printed Cardiovascular Phantoms for Interventional Planning and Training

Catheter-based interventions are standard treatment options for cardiovascular pathologies. Therefore, patient-specific models could help training physicians&#39; wire-skills as well as improving planning of interventional procedures. The aim of this study was to develop a manufacturing process of patient-specific 3D-printed models for cardiovascular interventions.
To create a 3D-printed elastic phantom, different 3D-printing materials were compared to porcine biological tissues (i.e., aortic tissue) in terms of mechanical characteristics. A fitting material was selected based on comparative tensile tests and specific material thicknesses were defined. Anonymized contrast-enhanced CT-datasets were collected retrospectively. Patient-specific volumetric models were extracted from these datasets and subsequently 3D-printed. A pulsatile flow loop was constructed to simulate the intraluminal blood flow during interventions. Models&#39; suitability for clinical imaging was assessed by x-ray imaging, CT, 4D-MRI and (Doppler) ultrasonography. Contrast medium was used to enhance visibility in x-ray-based imaging. Different catheterization techniques were applied to evaluate the 3D-printed phantoms in physicians&#39; training as well as for pre-interventional therapy planning.
Printed models showed a high printing resolution (~30 &#181;m) and mechanical properties of the chosen material were comparable to physiological biomechanics. Physical and digital models showed high anatomical accuracy when compared to the underlying radiological dataset. Printed models were suitable for ultrasonic imaging as well as standard x-rays. Doppler ultrasonography and 4D-MRI displayed flow patterns and landmark characteristics (i.e., turbulence, wall shear stress) matching native data. In a catheter-based laboratory setting, patient-specific phantoms were easy to catheterize. Therapy planning and training of interventional procedures on challenging anatomies (e.g., congenital heart disease (CHD)) was possible.
Flexible patient-specific cardiovascular phantoms were 3D-printed, and the application of common clinical imaging techniques was possible. This new process is ideal as a training tool for catheter-based (electrophysiological) interventions and can be used in patient-specific therapy planning.

Here we present development of a mock circulation setup for multimodal therapy evaluation, pre-interventional planning, and physician-training on cardiovascular anatomies. With the application of patient-specific tomographic scans, this setup is ideal for therapeutic approaches, training, and education in individualized medicine.

중재 계획 및 교육을 위한 3D 인쇄 심장 혈관 팬텀의 개발 및 평가

Catheter-based interventions are standard treatment options for cardiovascular pathologies. Therefore, patient-specific models could help training ...

3D Imaging of PDL Collagen Fibers during Orthodontic Tooth Movement in Mandibular Murine Model

Orthodontic tooth movement is a complex biological process of altered soft and hard tissue remodeling as a result of external forces. In order to understand these complex remodeling processes, it is critical to study the tooth and periodontal tissues within their 3D context and therefore minimize any sectioning and tissue artefacts. Mouse models are often utilized in developmental and structural biology, as well as in biomechanics due to their small size, high metabolic rate, genetics and ease of handling. In principle this also makes them excellent models for dental related studies. However, a major impediment is their small tooth size, the molars in particular. This paper is aimed at providing a step by step protocol for generating orthodontic tooth movement and two methods for 3D imaging of the periodontal ligament fibrous component of a mouse mandibular molar. The first method presented is based on a micro-CT setup enabling phase enhancement&#160;imaging of fresh collagen tissues. The second method is a bone clearing method using ethyl cinnamate that enables imaging through the bone without sectioning and preserves endogenous fluorescence. Combining this clearing method with reporter mice like Flk1-Cre;TdTomato provided a first of its kind opportunity to image the 3D vasculature in the PDL and alveolar bone.

We present a protocol for generating orthodontic tooth movement in mice and methods for 3D visualization of the collagen fibers and blood vessels of periodontal ligament without sectioning.

만디큘러 뮤린 모델의 치열 교정 치아 운동 중 PDL 콜라겐 섬유의 3D 이미징

Orthodontic tooth movement is a complex biological process of altered soft and hard tissue remodeling as a result of external forces. In order to ...

Real-Time Dynamic Navigation System for the Precise Quad-Zygomatic Implant Placement in a Patient with a Severely Atrophic Maxilla

Zygomatic implants (ZIs) are an ideal way to address cases of a severely atrophic edentulous maxilla and maxilla defects because they replace extensive bone augmentation and shorten the treatment cycle. However, there are risks associated with the placement of ZIs, such as penetration of the orbital cavity or infra-temporal fossa. Furthermore, the placement of multiple ZIs makes this surgery risky and more difficult to perform. Potential intraoperative complications are extremely dangerous and may cause irreparable losses. Here, we describe a practical, feasible, and reproducible protocol for a real-time surgical navigation system for precisely placing quad-zygomatic implants in the severely atrophic maxilla of patients with residual bone that does not meet the requirements of conventional implants. Hundreds of patients have received ZIs at our department based on this protocol. The clinical outcomes have been satisfactory, the intraoperative and postoperative complications have been low, and the accuracy indicated by infusion of the designed image and postoperative three-dimensional image has been high. This method should be utilized during the entire surgical procedure to ensure ZI placement safety.

Here, we present a protocol to achieve precise quad-zygomatic implant placement in patients with severely atrophic maxilla using a real-time dynamic navigation system.

중증 위축성 상악 환자의 정확한 사중 접합체 임플란트 배치를 위한 실시간 동적 탐색 시스템

Zygomatic implants (ZIs) are an ideal way to address cases of a severely atrophic edentulous maxilla and maxilla defects because they replace extensive ...