이 작품은 미국 지질 조사국의 생태계 (체 서 피크 베이 환경 및 수 산) 및 환경 건강 (생물학 오염 물질) 프로그램 및 자연 자원의 웨스트버지니아 부에 의해 투자 되었다. 상호의 사용 용도로 이며 미국 정부에 의해 승인을 의미 하지 않습니다.

여기에 설명 된 방법 Leetown 과학 센터의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었습니다가지고.
1. 물고기 컬렉션
<ol><li>스트레스의 최소 살아있는 물고기를 수집 합니다. 보트 또는 배낭 금광, 후크 및 라인 또는 그물 사용 합니다.</li>
	<li>샘플링까지 라이브 웰 또는 화난된 컨테이너에서 물고기를 잡아. 참고: 미국 수 산업 사회 다양 한 물고기 수집, 처리 및 마 취/안락사26,,2728에 대 한 가이드를 출판 했다. 물고기를 처리 하는 경우 장갑을 착용 한다.</li>
</ol>2. 물고기 검 시
<ol><li>
물고기 안락사
	<ol>
<li>Opercular 운동 중단 되 고 물고기 평형까지 마 취에서 물고기를 놓습니다. 또 다른 2-10 분 후 물고기 안락사 될 것입니다; 그러나,이 또한 종에 의해 달라질 수 있습니다. 참고: 물고기 마 취약 (가장 일반적으로 사용 재료의 표 참조)의 번호와 안락사 될 수 있습니다. 안락사의 방법 조직 수집된29에 지휘 될 것 이다 실험실 측정에 따라 달라 집니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
생체 특성을 측정 합니다.
	<ol>
<li>물고기를 가장 가까운 그램 무게.</li>
		<li>가장 가까운 밀리미터에 물고기 길이 측정 합니다.<ol>
<li>때 함께 슬쩍 꼬리의 끝을 입으로는 주 둥이의 끝에서 총 길이 측정 합니다.</li>
			<li>주 둥이의 끝에는 꼬리에 포크에서 포크 길이 몸 (꼬리의 시작 부분)의 끝에 주 둥이의 끝에서 표준 길이 측정 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>다음 수식을 사용 하 여 상태 인자를 계산. 조건 요소 = (총 몸 무게-생식 체중) / 총 길이3. 참고: 생식 무게에서에서 뺍니다 총 몸 무게 때문에 생식 선 prespawn 여성 생선에 특히 총 몸 무게에 크게 기여할 수 있다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
혈액 샘플을 가져옵니다. 참고: 혈액 꼬리 정 맥에서 가장 일반적으로 가져온 것입니다 하지만 수 있습니다 또한 등 쪽 대동맥에서 철회 될 또는 심장에 의해 찔린30.<ol>
<li>물고기의 크기에 따라 1 ~ 5 mL 주사기에 22 또는 23 G 바늘 꼬리 정 맥에서 주변 혈액 샘플을 추출 합니다. 옆 선 (그림 1A 및 1B) 아래 꼬리 영역 앞쪽 바늘을 삽입 합니다. 척추를 타격까지 그것을 위쪽으로 각도 약간 철수 다음. 정 맥은 overlying 척추 복 부. 참고: 혈액 얼룩을 만들 것입니다 또는 혈 청이 필요한, 아니 응고 제 사용 됩니다. 대부분의 경우, 플라즈마를 수집 합니다 그리고, 따라서, 항 응고 제 헤 파 린 나트륨, EDTA 등 리튬 코트 바늘과 주사기를 사용 하 고 또한 혈액 컬렉션 튜브 (예를 들어, vacutainer).</li>
		<li>바늘을 제거 하 고 혈액 컬렉션 튜브에 퍼 팅 전에 sharps 처리 컨테이너에 배치. 참고: 혈액 얼음에 개최 될 수 있습니다 있지만 후속 분석에 따라 가능한30곧 centrifuged 한다.</li>
		<li>핵 이상 또는 차동 혈액 조사, 평가 하는 경우 즉시 중복 깨끗 한 유리 현미경 슬라이드에 혈액 한 방울을 놓습니다. 다음 모 세관 작용에 의해 표면에 걸쳐 그려 놓기에 45 ° 각도로 두 번째 슬라이드를 다시. 31건조를 허용 합니다.</li>
		<li>원심 침전 물에 15 분 동안 1500-2500 x g 에서 혈액 세포. 살 균 전송 피펫으로, 극저온 튜브에 aliquot와 함께 혈장/혈 청을 제거 하 고-80 ° c.에 저장</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig1.jpg"> 그림 1 : 물고기에서 혈액 샘플을 얻기. (A) 최근 안락사 한 물고기의 측면에 있는 옆 라인 꾸며져 있다. (B) 바늘 삽입 된 복 부 선 (화살표), 바늘 등뼈 접촉 될 때까지 위쪽으로 각도 옆에 이다. 그것은 다음 약간, 철회 하 고 흡입 혈액을 철회 하기 시작. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol start="4"><li>
각 물고기에 검 시 기반 상태 평가 실시 합니다. 참고: 설명 및 병 변 및 이상 게시 수가 있습니다 사용할 수32,33,,3435.<ol>
<li>문서 외부 이상 몸 표면 및 지 느 러 미 (그림 2), 눈과 아가미 (그림 3), 거머리 (그림 2D), grubs 또는 trematode metacercarial cysts (그림 2D, 같은 외부 기생충에 병 변 등 3B) 및 아가미 기생충 (그림 3D). 문서 유형, 위치 및 크기의 데이터 시트에서 관찰 된 이상으로 사진 뿐만 아니라, 가능한 경우.</li>
		<li>한가 위를 사용 하는 내부 장기를 노출 하는 operculum에 항문 지역에서 절단 하 고 근육의 플랩 제거 여 복 부 구멍 (그림 4A)를 엽니다. 참고: 이전 신장 수집 될 경우 면역에 대 한 함수 (아래의 5 단계 참조) 또는 샘플 또는 바이러스학 세균 학에 대 한 수집, 외부 몸 표면 70% 알코올로 소독 한다는 검 시를 수행 하기 전에 그 샘플을 얻을 수 있어야. 조직만 시각적 관찰, 플라즈마 분석과 histopathology 살 균에 사용 되는 경우에 기술을 필요 하지 않습니다.</li>
		<li>문서 내부 이상 (그림 4) 등 다양 한 장기 (그림 4B-4D)의 존재의 일반 또는 초점 변색 (그림 4E), cysts, 기생충, 고 이상 (크기 확대, 위축 시키는).</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig2.jpg"> 그림 2 : 보이는 병 변의 예 몸 표면에 물고기의 지 느 러 미 관찰. (A) A 작은, 약간 침식 병 변 (화살표) 측면 몸 표면에. (B) 대형 reddened 영역 (화살표) 꼬리 몸 표면에 관련 된. (C) 올린, 몸 표면과 지 느 러 미에 검은 병 변 (화살표) (D) 거머리 (흰색 화살표) 고은 지 느 러 미에 작은 검은색 반점 (검은 화살표). 눈금 막대 = 3 mm. (E), A multilobed, 창백한 병 변 (화살표) 몸 표면에. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig3.jpg"> 그림 3 : 아가미의 보이는 병 변 및 물고기의 눈의 예. (A) A 영역 (화살표) 눈의 렌즈를 창백. 눈금 막대 = 5 mm. (B) 백색 cysts (흰색 화살표) 및 취재 (a) 아가미 operculum에 trematode 기생충으로 인 한 작은 검은색 반점 (검은 화살표). 눈금 막대 = 1 cm. (C) A 창백, 침식 영역 (화살표)에 길 (a). 눈금 막대 = 5 mm. (D)은 기생충 (화살표)를 보여주는 제거 된 길 길 필 라 멘 트에 연결 된. 눈금 막대 = 2 m m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig4.jpg"> 그림 4: 는 검 시 및 물고기의 내부 이상 예. (A)는 검 시 동안 물고기는 자르면 (흰색 화살표)을 따라와 근육 (검은색 화살표)의 플랩 생식 선 (a)와 집게와가 위 개최 되 고, 비장을 제거. (B) 룩 간 (a), testes (b), 내장 둘러싸인 지방 지방 (c)와 복 부 (d). 눈금 막대 = 5 mm. (C) (a)와 어두운 빨간색 영역 (화살표), 난소 (b) 내장 (c) 간. 눈금 막대 = 5 mm. (D) 간 녹색 변색 영역 (화살표). 눈금 막대 = 1 cm. (E) (a) 정상의 예 고와 비정상적인 testes (b) 제기 혹. 눈금 막대 = 1 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol start="5"><li>
Hepatosomatic 지 수 (HSI)를 가져옵니다.
	<ol>
<li>간 간 동맥과 앞쪽 끝의 결합 조직 절단 하 여 제거 합니다. 부드럽게 트리밍 유착 및 다른 연결 내장 및 많은 지방 질을 동안 밖으로 리프트. 쓸 개를 펑크 하지 주의 하십시오. 간 무게. 참고: 일부 물고기, cyprinids, 같은 필요가 없습니다 개별 간 하지만 오히려 간 조직 감싸 내장 및 다른 기관. 이 종 간 가중치를 얻을 수 하지 않을 수 있습니다.</li>
		<li>Hepatosomatic 인덱스 (HSI) 수식을 사용 하 여 계산 합니다. HSI 간 무게/총 몸 무게 =</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Gonadosomatic 인덱스를 계산 합니다.
	<ol>
<li>생식 기를 제거 하 고 그것의 무게.</li>
		<li>Gonadosomatic 인덱스 (GSI) 수식을 사용 하 여 계산 합니다. GSI 생식 무게/총 몸 무게 =</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 현미경 병 리에 대 한 조직 유지
참고: fixatives Z-수정, 아연, 포 르 말린 기반 정착 액 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린 등의 숫자 필드에는 조직의 보존을 위해 사용할 수 있습니다. 후자는 원하는 경우에 현장에서 교 잡 또는 형광 항 체 염색 같은 방법을 사용할 수 있습니다.
<ol><li>조심 스럽게 잘라 하지만 조직 샘플을 꺼내 하지 마십시오. 개별 조직 조각을 계속 < 크기가 2 cm와 < 적절 한 고정을 위한 두께 5 m m. 엄지손가락의 규칙으로 서 볼륨 조직 보다 약 10 배 더 많은 정착 액을 사용 하 여 적절 한 보존에 대 한. 샘플링 되는 물고기의 크기에 따라 적절 한 크기의 동일한 누출 방지 용기에 생선에서 모든 조직 샘플을 배치 합니다.</li>
	<li>통 컨테이너에 모든 외부 이상의 조각을 놓으십시오. 또한, 정상 조직의 인접 한 조각 포함. 참고: 부적 절 한 압축 또는 다른 기계적 손상, 공기 나 햇빛에 긴 노출 처리 및 동결 아티팩트가 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>다양 한 지역에서 간 최소 5 3-4 m m 두꺼운 조각을 잘라 고 통 컨테이너 합니다. 관찰 하는 경우에, 정상 및 비정상 영역을 포함 합니다.</li>
	<li>크기에 따라 전체 생식 또는 한 생식 선 따라 여러 통 용기에 놓습니다.</li>
	<li>통 컨테이너에서 전체 기관, 작은, 경우 또는 다른 모든 장기 (비장, 앞쪽 및 후부 신장, 아가미, 심장, 대 장 및 위)의 조각 장소. 비정상적인 조직 관찰 되는 경우 뿐만 아니라 정상 조직에의 한 인접 한 조각을 유지 합니다.</li>
</ol>4. 나이 분석은 Otoliths 제거
참고: 나이 물고기 질병/물고기 건강 연구에 중요 한 변수가 될 수 있습니다. 다양 한 구조, 비늘 등 쪽이, 나이 확인을 위해 사용 되었다, 구조를 비교 하는 대부분 학문을 주고 최상의 결과36,37otoliths를 발견 했다. Teleost 물고기 otoliths-lapillus, sagitta 및 asteriscus의 3 쌍 있다. 일반적으로, 화살 또는 lapillus otoliths는 종에 따라 다를 수 있지만 노화 수집 됩니다. 제거 및 노화 기술 이전 설명된38되었습니다.
<ol><li>길 지협을 통해 고 머리를 뒤로 구 부. 스트립 거리 연결 및 근육 조직 prootic bullae, 제기 뼈 다 귀 영역을 찾을 수 neurocranium의 열 등 한 부분 주위.</li>
	<li>점수 또는 뼈 절단기로 절단 하 고 폭은 otoliths로 균열. 그들은 맨 눈으로 볼 수 있습니다.</li>
	<li>Otoliths 이라는 유리병 또는 동전 봉투와 반지 또는 증가38세 나이 대 한 분석까지 실내 온도에 상점에 배치 합니다. 경우는 유리병에 모자 한 번 실험실에 반환 열고 철저 하 게 수 있도록 저장 하기 전에 건조 합니다.</li>
</ol><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig5.jpg"> 그림 5 : Otoliths의 제거. (A) 지협 잘라 고 결합 조직 및 근육 떨어져 척추와 neurospinal 지역의 폭로. (B)는 뼈는 otoliths를 폭로 부 쉈 다. (C) Lapillar otoliths 제거 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
5. 면역 기능 분석에 대 한 조직을 구하십시오
참고: 이전 신장 주요 조 혈 기관, 세포 및 대 식 세포 기능 분석에 대 한 소스 이며 aseptically 셀 mitogenesis, phagocytic 등 살인 능력의 기능 분석을 위한 교양 것입니다 경우 제거 해야 합니다. 대 식 세포39,40.
<ol><li>70% 에탄올과 물고기의 외부 표면 스프레이. 살 균가 위, 메스와 집게를 사용 하 여 복 부 구멍을 열고 수영 방광 앞쪽에 위치 하는 어두운 빨간색 기관 이다 앞쪽 신장 조직을 제거 하.</li>
	<li>미디어 (예를 들어, Leibovitz L-15) 세포를 살아 있는 유지 하에 앞쪽 신장 샘플을 놓습니다. 단일 셀 정지로 살 균 휴대용 조직 분쇄기 (예를 들어, Tenbroeck 조직 분쇄기) 신장 샘플을 균질. 젖은 얼음 실험실에 반환 될 때까지 만요.</li>
</ol>6. 핵 산 분석에 대 한 조직 유지
참고: 사본 풍부41 또는 정량 PCR42 (연쇄 반응)를 사용 하 여 유전자 발현 등 다운스트림 분자 분석 실시 하는 경우는 적절 한 부식 방지 제 ( 에서에서 평가 될 조직의 조각을 놓으십시오 예를 들어, RNAlater 안정화 솔루션) 가능 한 한 빨리.
<ol><li>RNA 보존 조직에 방부 제 볼륨의 10:1 비율로 적절 한 방부 제에 2 ~ 3 작은 (2-3 m m) 조각을 놓으십시오. 참고: 샘플 햇빛 또는 과도 한 열 차폐 및 젖은 얼음에 수송 되어야 한다.</li>
	<li>DNA 보존에 대 한 95% 에탄올 (볼륨에 의해 조직에 에탄올 10:1)으로 조직의 2 ~ 3 작은 조각을 놓으십시오. 다음 샘플 젖은 얼음에 누른 후-20 ° c.에 저장</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

물고기 건강의 검 시 기반 평가는 탐정 모두 외부 및 내부 구조의 정상적인 외관에 대 한 이해는 어떤 어 종에 활용할 수 있습니다. 표준화 된 접근을 사용 하 여 계절과 일시적인 변화는 인구에서 뿐만 아니라 사이트와 종 간 비교에 대 한 수 있습니다. 결과 점과 nonpoint 근원 오염 물질의 연관 효과 식별 하 고 관리 작업 정보를 사용할 수 있습니다. 그것은 또한 개선 관리 작업은 시작 되 면 추적을 사용할 수 있습니다. 방법론은 다양 한 방법으로 시각적 외부 이상의 문서를 증가 시키기 위해 수정할 수 있습니다. 평가, 시각적 관찰에만 기반으로 비-치명적인, 상대적으로 저렴 한 될 수 있으며 개인의 큰 숫자에 대 한 데이터를 신속 하 게 생성 될 수 있습니다. 따라서, 그들은 탐구 또는 초기 평가, 변화를 모니터링 하는 데 유용할 수 있습니다 또는 다른 지표와 함께에서 시간이 지남에. 길이 및 물고기의 무게는 시각적 관찰 하는 동안, 측정 조건 요소 계산 또한 수 있습니다. 평가 기반 시각적 관찰에만 있지만 원인에 관련 된 위험 요인, 특정 피부 이상45 의 긴 기간 동향 정보를 제공 하지 않습니다 및 생체 매개 변수46 일부 지역에서 개선 표명 수 질 개선 관련.
검 시 기반 평가 내부 장기 검사 또한 hepatosomatic 인덱스와 gonadosomatic 인덱스와 같은 다른 조건 요소 산출 될 수 있다 더 많은 정보를 제공 합니다. Goede 및 바튼22 혈액 매개 변수, 생체 인식 요인, 이상, 그리고 특정 이상에 대 한 인덱스 값의 비율을 포함 하는 필드 검 시 방법 개발. 메서드의 상세 포함 몇 가지 변수를 계산 될 수 있는 건강 평가 지 수의 비교 통계23대 한 허용에 대 한 심각도 등급. 이 건강 평가 인덱스 사용 되었습니다 지역 사이트 비교23,,4748 및 조합 미국 지질에 플라즈마 및 histopathological 분석을 포함 한 다른 생물 지표 조사의 Biomonitoring 환경 상태와 동향 프로그램 큰 강 전국49,,5051에서 오염 물질 노출의 잠재적 영향을 평가. 물고기 질병 색인 외부에서 볼 수 질병에 따라 커지고 기생충, 보이는 간 신생 및 기타 histopathologically 간 장애를 개발 하 고 북 해, 발트 해 그리고 아이슬란드에서 광범위 하 게 사용. 이 인덱스는 생태계 건강 지표52중요 한 도구가 될 것 발견 되었다.
물고기에 검 시 기반 평가 실시에 몇 가지 중요 한 요인이 있다. 첫째, 평가 물고기 죽음 후 즉시 실시 해야 합니다. 기관 색깔과 일관성 있는 변화는 죽음 이후 상당히 빠르게 발생할 수 있습니다. 또한, 일부 기생충 죽음 후 곧 호스트를 떠날 수 있습니다. 둘째, 무슨 관심의 종류에 대 한 정상 인지 중요 하다. 예를 들어, 일부 물고기 일반적으로 지방 있고 대부분의 종에 대 한 비정상적인 것 창백한 간 하는 동안 따라서, 간은, 창백. 그것은 또한 자연스럽 게 발생 하는 계절 변화를 인식 하는 것이 중요입니다. 일부 물고기 색상 변경 또는 산란 기 동안 사육 tubercles 개발 됩니다.
물고기 건강 평가 위한 방법으로 검 시 기반 평가의 한계 1) 일관 되 게 특정 장애의 "원인"를 확인 하 고 2) 식별 효과 육안으로 보이지 않을 수 있습니다를 포함 합니다. Histopathology, 병원 체와 기생충, 유전자 발현의 분자 또는 문화 식별의 추가 함께 이러한 단점을 극복할 수 있습니다. 예를 들어, "종양" 또는 제기 병 변 (붓기) 실제 neoplasia 있을 수 있습니다 또는 기생충, 염증, 부 종이 있을 수 있습니다 또는 증식 (정상 세포의 수 증가), 화학 노출, 전염 성 요원 또는 다른 irritants에 기인. 대표 결과 같이 확실 한 종양 또는 신 생물 진단 현미경 병 리를 병 변의 종류와 심각도 (즉, 양성 또는 악성) 식별 하 필요 합니다. 시각적인 관찰 하 여 종양"흰 빠 외부"의 평가 기준 사이트에서 특히 유행 과대평가. 올려진된 병 변의 많은 신생 하지만 오히려 형성 병 변 되지 않았다. 그것은 현재 알 수 없습니다이 형성 병 변 인지 미리 종양 약. 반대로, 제기 혹 간에서 관찰은 크게 간 신생의 보급을 과소 평가. 따라서, 미세한 병 리에 대 한 조직의 컬렉션 적절 하 게 폐지에 대 한 가능성을 해결 하는 데 필요한 했다.

인간의 활동은 수생 환경에 수많은 불리 한 영향을 미칠. 물고기 인간의 인구에서 재현 하 고 식 수 원본으로 자주 사용 하는 다양 한 물 시체를 살고 있으며 따라서 수생 환경의 건강의 중요 한 지표. 야생 물고기를 라이브 하 고 특정 서식 지에서 재현 병원 체, 기생충, 가난한 수 질 그리고 화학 오염 물질을 포함 한 다양 한 스트레스를 그들의 삶을 통해 노출 됩니다. 화학 물질의 수천 산업 및 인간의 폐수, 교외/도시 stormwater 및 농업 결선을 통해 우리의 수로 입력합니다. 화학 물질의 복잡 한 혼합물이 수 첨가제, 시너지 나 대립 효과에 노출 생물1,2,3. 또한, 다른 환경 스트레스와 같은 높은 영양분, 온도 상승된, 낮은 용 존된 산소 또는 변동 pH 화학 오염 물질4,5의 효과 악화 수 있습니다. 환경 스트레스 또한 영향을 미칠 수 전염병 결과 전염 성 요원6의 수를 증가,7 기회 주의 병원 체 독성을 증가 또는 억제 면역 반응과 질병에 의해 직접 호스트8,,910의 저항. 이러한 이유로11,12,,1314, 물고기 및 식별 하는 다른 수생 생물 모니터링 생물 학적 또는 불리 한 효과에 대 한 관심 증가 인구 그리고 생태계 위험에.
부작용 모니터링 biomarkers subcellular 또는 분자, 인구를 좌우 하 고 나타내는 다양 한 스트레스에 노출 될 수 있습니다 sublethal 효과 식별 하는 organismal에서 조직의 다양 한 수준에서 활용 합니다. 유기 체 수준 표시기 표시 이상 등 조건입니다. 길이 무게에 따라 조건 인덱스 복지 또는 물고기 인구의 적합성을 평가 하기 위해 계산 됩니다. 가장 일반적인 풀턴의 조건을 요인 (K)는 = (무게/길이3) 15. 또 다른 표시기 표시 이상의 존재입니다. 다양 한 방법 평가, 문서, 및 표시 이상 평가 개별 연구와 모니터링 프로그램에 사용 되었습니다. 평가 외부 이상, 즉, 개인 질병, 지 느 러 미 손상, 종양 및 골격 변칙의 비율을 기반으로 지역 사회 건강16평가 생물 무결성 (비)의 색인에 대 한 통계 중 하나입니다. 비슷한 평가 되 나 DELTs (기형, 아픕니다, 병 변, 종양) 또한 물고기 지역 사회17의 상태 평가를 사용 되었습니다. 그러나,이 방법만 외부 시각 이상 및 안 내부 병 변 또는 조기 sublethal 지표 평가.
검 시 기반 평가 외부 및 내부 관측을 포함 하 고 추가 상태 지표의 측정에 대 한 허용. Hepatosomatic 색인 (간 무게/총 몸 무게)는 체력의 지표로 서 사용 되었습니다 또는 에너지 보유15 높은 인덱스 값 건강 한 물고기를 나타냅니다. 그러나, 연구의 수 비 대 또는 간 크기 증가 간18,,1920에 의해 물질 대사로 변화 하는 다양 한 오염 물질에 노출으로 인해 발생 합니다 나타났습니다. 이 경우에 더 높은 색인 특정 화학 클래스에 노출의 나타내는 것입니다. Gonadosomatic 인덱스 (생식 선 무게/총 몸 무게)는 생식 건강21으로 지시 하는 다른 조건 인덱스가입니다. 검 시 기반 평가 동안 관측 개별 병 변 종류의 유행 또는 정상적인 개인의 비율 비교를 사용할 수 있습니다. 그러나, 그들은 또한 더 양적 건강 평가22,23에서 사용할 수 있습니다.
여기에 설명 된 표준화 검 시 기반 평가 질문 답변, 전문 및 기타 사용 가능한 리소스에 따라 여러 가지 방법으로 조잡 한 볼 수 평가 증가 시키기 위해 사용할 수 있습니다. 우리의 일상적인 방식은 (길이, 무게, 간 무게, 생식 선 무게) 생체 인식 데이터를 수집, 혈액 혈장/혈 청 분석, 문서 외부 및 내부 표시 이상, 현미경 분석에 대 한 장기의 보존 및 수집에 대 한 otoliths 나이 분석. 검 시 기반 평가 플러스 나이 분석 및 다양 한 기관의 histopathology 계산 및 다양 한 상태 지표의 비교, 볼 수 이상, 미세한 조직 변경의 보급에 대 한 섹스, 나이, 사이트 및 샘플링 기간입니다. 전자 현미경 검사 법, 세균 학, 바이러스학, 기생충학 및 화학 농도 포함 하 여 다른 많은 분석에 대 한 추가 조직 컬렉션을 만들 수 있습니다. 이 방법은 또한의 일부분일 수 있다 물고기 죽이기24 의 원인을 진단 하는 데 사용 하는 더 깊이 있는 분석 또는 포로의 mortalities 물고기25. 두 개의 추가 분석, 유전자 발현 및 기능 면역 분석에 대 한 조직의 컬렉션에 대 한 방법 설명 됩니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:855px;" width="856">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Folding tables</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Folding chairs</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Dissecting boards</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Measuring board (in mm increments)</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Battery powered scale (in gm) for fish weight</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Battery powered scale (in mg) for organ weights</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Dissecting forceps</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Bone cutters</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Scalpel and blades</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Disposable gloves</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Buckets</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Leak-proof Nalgene bottles (250 ml)</td>
			<td style="width:215px;">ThermoFischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">02-924-5C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Vacutainer tubes with sodium heparin</td>
			<td style="width:215px;">ThermoFischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">02-689-6</td>
			<td>For blood collection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Disposable&#160; 3 ml syringes with 23 gauge needle</td>
			<td style="width:215px;">ThermoFischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-826-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">1 &#8211; 2ml cryovials</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for plasma and RNAlater samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Invitrogen RNAlater Stabilization solution</td>
			<td style="width:215px;">ThermoFischer Scientific</td>
			<td style="width:119px;">AM7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Z-Fix Formaldehyde Zinc fixative</td>
			<td style="width:215px;">Anatech LTD</td>
			<td style="width:119px;">SKU-174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Tricaine-S (MS-222)</td>
			<td style="width:215px;">Syndel USA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>fish anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Coin Envelopes</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>for otoliths</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Pencils and pens</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">70% alcohol</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:355px;">Data sheets</td>
			<td style="width:215px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

necropsy-based wild fish health assessment

서식 변경 및 기후 변화, 증가 영양소와 화학 오염 물질, anthropogenic 영향 물고기 인구에 상당한 영향을 가질 수 있습니다. 부작용 모니터링, 물고기 및 다른 유기 체에 누적 효과 평가 하기 위해 사용할 수 있습니다 분자 수준에 있는 organismal에서 바이오 마커를 활용 하 여. 물고기 건강은 수생 생태계 건강의 지표로 서 세계적으로 사용 되었습니다. 검 시 기반 물고기 건강 평가 표시 이상 및 병 변, 기생충, 상태 및 organosomatic 인덱스에 데이터를 제공합니다. 이러한 사이트, 계절과 섹스, 뿐만 아니라 일시적으로, 시간이 지남에 문서 변화를 비교할 수 있습니다. 심각도 등급 더 양적 평가 대 한 물고기 건강 인덱스를 계산 하기 위해 다양 한 관측에 할당할 수 있습니다. 검 시 기반 평가의 단점은 시각적 관찰과 조직 및 sublethal 효과 대 한 subcellular 생체로 구분 되지 않은 상태 요인에 기반. 또한, 그것은 거의 원인 또는 관찰 된 이상와 관련 된 위험 요소를 식별 수 있습니다. 그래서, 예를 들어 올려진된 병 변 또는 "종양" 지 느 러 미, 입술 또는 신체 표면에 있을 수 있습니다는 신 생물. 그러나, 그것은 또한 기생충, 만성 염증 또는 자극에 대 한 응답에 정상 세포의 증식에 대 한 응답 수 있습니다. 반대로, 신생, 특정 기생충, 기타 전염 성 요원 및 많은 조직 변화 표시 되지 않습니다 고 너무 과소 평가 될 수 있습니다. 그러나, 검 시 기반 평가, 혈액 (플라즈마), histopathology (현미경 병 리)에 대 한 조직, 유전체학 및 다른 분자 분석 및 노화에 대 한 otoliths 수집할 수 있습니다. 지리 공간 분석, 서식 지 평가, 함께이 다운스트림 분석, 수 질 및 오염 물질 분석 모두 수 포괄적인 생태계 평가에 중요 한.

오대호 지역은 우려 (AOC)의 다양 한 도움이 사용의 장애 때문에 지정 된 지역 이다. 많은 AOC에서 유익한 사용 장애 (뷔이) 중 하나입니다 물고기 종양 또는 다른 기형. 수백만 달러의는 다양 한 뷔이 고 궁극적으로 AOC43이번이 하려면 이러한 각 분야의 복원 및 업데이트 관리에 대 한 지출 되었습니다. 부이 다른 주 (epa.ohio.gov/portals/35/lakeerie/ohio_AOC_delisting_guidance.pdf 및 dnr.wi.gov/topic/GreatLakes/documents/SheboyganRiverFinalReport2008.pdf 참조); 물고기 종양 폐지에 대 한 기준 그러나, delisting 문서에서 설명 했 듯이, 일부 경우 피부 종양 및 간 종양의 발병 률을 결정 하는 필요는. 많은 경우에, 유행 아닌 AOC 참조 사이트에 비교 됩니다.
물고기 종양 부이 호수 슈페리어와 미시간, 흰 빠 (Catostomus 야가 라의 검 시 기반 평가 활용 하 여 3 개의 AOCs (세인트 루이스 강, 밀워키 강 기선 강)와 비 AOC 참조 사이트 (Kewaunee 강)에 평가 되었다 ), 뒤에 피부와 간 조직의 미세한 병 리. 물고기 2012 및 201344 밀워키, 기선 및 Kewaunee 강에서 2015 (되지 않은 데이터)에서 세인트 루이스 강에서 수집 했다. 2 백 화이트 풋 내기, 밀워키, 세인트 루이스, Kewaunee와 기선에서 193 평가 됐다.
정의 함으로써, 종양 수 붓기 또는 제기 영역, 비록 그것은 일반적으로 조직의 비정상적인 세포의 비정상적인 성장으로 인 한 붓기 중 양성 또는 악성 신 생물은 간주 됩니다. 모든 사이트에서 수집 하는 흰색 빠 병 변의 외부 제기 작은, 이산 흰 반점, 더 큰 흰색 영역, 약간 제기 mucoid 변과 몸 표면 및 입술 (그림 6)에서 multilobed 제기 영역을 포함 하 여 다양 한 전시. 물고기 했다 무게 조건 요소를 측정, 외부 및 내부 이상 문서화 되었다, 그리고 피부와 간 조직 histopathology 수집 했다.
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig6.jpg"> 그림 6 : 제기 피부 병 변 관찰 오대호에서 흰색 빠에. (몸 표면에 A)는 개별 화이트 명소입니다. 눈금 막대 = 5 mm. (B) 약간 mucoid (화살표) 및 multilobed 병 변 (a) 후부 몸 표면에. 눈금 막대 = 1 cm. (C) A 큰, multilobed 병 변 신체 표면에. 눈금 막대 = 1 cm. (D) 입술에 수많은 멀티 lobed 병 변. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
외부 종양 물고기의 백분율 또는 제기 변색 영역 58.0% 밀워키 AOC에서 세인트 루이스 AOC에서 15.5%에서 ranged. 일반적으로, 개별 흰 반점 multilobed 입술과 몸 표면 병 변은 가장 일반적인 최소 공통 시각 병 변 이었다. 관찰 간 혹와 물고기의 수 낮은, 밀워키 (표 1)에서 2.5 %Kewaunee 세인트 루이스에서 1.5%에서 배열 했다.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="4">샘플링 해 강</td>
		</tr>
<tr>
<td>보이는 병 변</td>
			<td>Kewaunee 2013</td>
			<td>세인트 루이스 2015</td>
			<td>기선 2012</td>
			<td>밀워키 2013</td>
		</tr>
<tr>
<td>개별 흰 반점</td>
			<td>16</td>
			<td>3</td>
			<td>3.1</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>Mucoid</td>
			<td>20</td>
			<td>9.5</td>
			<td>9.8</td>
			<td>30.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>Multilobed</td>
			<td>22.5</td>
			<td>3</td>
			<td>29.5</td>
			<td>40</td>
		</tr>
<tr>
<td>총 발생 피부 이상이는
</td>
			<td>46</td>
			<td>15.5</td>
			<td>38.3</td>
			<td>58</td>
		</tr>
<tr>
<td>보이는 간 혹</td>
			<td>1.5</td>
			<td>1.5</td>
			<td>1.6</td>
			<td>2.5</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">
는 올려진된 병 변으로 물고기의 총 수입니다. 일부 물고기는 여러 유형의 이상 했다.</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 흰색 빠의 검 시 기반 관측 비율으로 관심사 및 참조 사이트 (Kewaunee 강), 오대호 지역에서 수집. 시각적인 검사는 다양 한 이상으로 물고기의 %를 사용할 수 있습니다. 그러나, 결정적으로 진단 하려면 존재 및 신 생물의 종류, 조직 시험 되어야 한다 현미경 (histopathology). 현미경 검사, 시 제기 변의 모든 종양 약 했다 발견 했다. 많은 개별 흰 반점과 Kewaunee에서 특히 mucoid 병 변 형성 병 변 보다는 신 생물 (표 2) 했다. 또한, Kewaunee와 세인트 루이스, 관찰 하는 피부 종양의 모든 양성 갑 했다. 기선와 밀워키 갑와 편평 세포 carcinomas, 악성 피부 종양, (표 2) 관찰 되었다.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="4">샘플 강의</td>
		</tr>
<tr>
<td>신 생물 유형</td>
			<td>Kewaunee 2013</td>
			<td>세인트 루이스 2015</td>
			<td>기선 2012</td>
			<td>밀워키 2013</td>
		</tr>
<tr>
<td>유 두 종</td>
			<td>21</td>
			<td>5.2</td>
			<td>30.5</td>
			<td>37.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>편평 세포 암 종</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>2.1</td>
			<td>10.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>총 스킨 신생</td>
			<td>21</td>
			<td>5.2</td>
			<td>32.6</td>
			<td>48</td>
		</tr>
<tr>
<td>담 즙 덕트 신생은한
</td>
			<td>2.5</td>
			<td>4</td>
			<td>6.2</td>
			<td>9.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>간 세포 신생b
</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>2.1</td>
			<td>8</td>
		</tr>
<tr>
<td>총 간 신생</td>
			<td>3.5</td>
			<td>4</td>
			<td>8.3</td>
			<td>15.0c
</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">
는 Cholangioma 및 cholangiocarcinoma 포함</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">
b 간 세포 adenoma 및 간 세포 암</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">
c 일부 물고기가 했다 담 관 그리고 간 신생</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>표 2: 현미경 비율으로 관심사 및 참조 사이트 (Kewaunee 강), 오대호 지역에서 수집 된 흰색 빠의 종양 약 병 변 확인. Histopathological 분석은 또한 시각적 관찰에 의해 식별 되지 했다 간 종양을 확인. 동안 Kewaunee와 세인트 루이스에서 수집한 물고기의 1.5%만 보이는 간 혹 (표 1), 3.5%와 4.0%, 각각, 현미경으로 발견 했다 신생 (표 2). 큰 차이 기선 (보이는 미세한 8.3% 대 1.6%), 밀워키 (15.0% 미세한 대 표시 2.5%)에서 보였다. 또한 간장 세포 기원 (표 2) 대 담 즙 덕트의 신생의 감 별 법을 제공 하는 현미경 검사와 악성 종양 대 양성.

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Necropsy-based Wild Fish Health Assessment

수생 생태계 건강의 지표로 서 야생 물고기의 건강을 사용할 수 있습니다. 검 시 기반 물고기 건강 평가 제공 보이는 병 변 또는 이상, 조직 현미경 평가, 유전자 발현 및 다른 더 깊이 수집 하는 기회 뿐만 아니라 상태 지표를 계산 하는 데 사용 하는 데이터 분석입니다.

검 시 기반 야생 물고기 건강 평가

Anthropogenic influences from increased nutrients and chemical contaminants, to habitat alterations and climate change, can have significant effects on ...

necropsy-based-wild-fish-health-assessment

Research

JoVE Journal

Environment

16.9K 조회수.  U.S. Geological Survey. 수생 생태계 건강의 지표로 서 야생 물고기의 건강을 사용할 수 있습니다. 검 시 기반 물고기 건강 평가 제공 보이는 병 변 또는 이상, 조직 현미경 평가, 유전자 발현 및 다른 더 깊이 수집 하는 기회 뿐만 아니라 상태 지표를 계산 하는 데 사용 하는 데이터 분석입니다.

비디오: Necropsy-based Wild Fish Health Assessment

Modifying the Bank Erosion Hazard Index (BEHI) Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

Understanding the source of pollution in a stream is vital to preserving, restoring, and maintaining the stream&#8217;s function and habitat it provides. Sediments from highly eroding streambanks are a major source of pollution in a stream system and have the potential to jeopardize habitat, infrastructure, and stream function. Watershed management practices throughout the Cleveland Metroparks attempt to locate and inventory the source and rate the risk of potential streambank erosion to assist in formulating effect stream, riparian, and habitat management recommendations. The Bank Erosion Hazard Index (BEHI), developed by David Rosgen of Wildland Hydrology is a fluvial geomorphic assessment procedure used to evaluate the susceptibility of potential streambank erosion based on a combination of several variables that are sensitive to various processes of erosion. This protocol can be time consuming, difficult for non-professionals, and confined to specific geomorphic regions. To address these constraints and assist in maintaining consistency and reducing user bias, modifications to this protocol include a &#8220;Pre-Screening Questionnaire&#8221;, elimination of the Study Bank-Height Ratio metric including the bankfull determination, and an adjusted scoring system. This modified protocol was used to assess several high priority streams within the Cleveland Metroparks. The original BEHI protocol was also used to confirm the results of the modified BEHI protocol. After using the modified assessment in the field, and comparing it to the original BEHI method, the two were found to produce comparable BEHI ratings of the streambanks, while significantly reducing the amount of time and resources needed to complete the modified protocol.

Modifying the Bank Erosion Hazard Index BEHI Protocol for Rapid Assessment of Streambank Erosion in Northeastern Ohio

Streambank erosion potential can be evaluated and ranked using David Rosgen&#8217;s Bank Erosion Hazard Index (BEHI), however this protocol has significant limitations. Here we present protocol modifications to address time constraints, allow nonprofessionals to complete accurate assessments, and account for non-alluvial stream conditions in Northeast Ohio.

북동부 오하이오 하천 제방 침식의 신속한 평가를위한 은행 침식 위험 지수 (베히) 프로토콜을 수정

Understanding the source of pollution in a stream is vital to preserving, restoring, and maintaining the stream&#8217;s function and habitat it provides. ...

연구

환경과학

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with the goal of examining the ecological functions of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. The result has been a progression of protocols that have increasingly refined the ecological relevance of the experimental approach. Here we present the most up-to-date version of a fish-feeding laboratory bioassay that enables investigators to assess the antipredatory activity of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. Organic metabolites of all polarities are exhaustively extracted from the tissue of the target organism and reconstituted at natural concentrations in a nutritionally appropriate food matrix. Experimental food pellets are presented to a generalist predator in laboratory feeding assays to assess the antipredatory activity of the extract. The procedure described herein uses the bluehead, Thalassoma bifasciatum, to test the palatability of Caribbean marine invertebrates; however, the design may be readily adapted to other systems. Results obtained using this laboratory assay are an important prelude to field experiments that rely on the feeding responses of a full complement of potential predators. Additionally, this bioassay can be used to direct the isolation of feeding-deterrent metabolites through bioassay-guided fractionation. This feeding bioassay has advanced our understanding of the factors that control the distribution and abundance of marine invertebrates on Caribbean coral reefs and may inform investigations in diverse fields of inquiry, including pharmacology, biotechnology, and evolutionary ecology.

This bioassay employs a model predatory fish to assess the presence of feeding-deterrent metabolites from organic extracts of the tissues of marine organisms at natural concentrations using a nutritionally comparable food matrix.

물고기 먹이 실험 생물 검정은 해양 생물의 조직에서 이차 대사 산물의 Antipredatory 활동을 평가하기 위해

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

Characterization and Application of Passive Samplers for Monitoring of Pesticides in Water

Five different water passive samplers were calibrated under laboratory conditions for measurement of 124 legacy and current used pesticides. This study provides a protocol for the passive sampler preparation, calibration, extraction method and instrumental analysis. Sampling rates (RS) and passive sampler-water partition coefficients (KPW) were calculated for silicone rubber, polar organic chemical integrative sampler POCIS-A, POCIS-B, SDB-RPS and C18 disk. The uptake of the selected compounds depended on their physicochemical properties, i.e., silicone rubber showed a better uptake for more hydrophobic compounds (log octanol-water partition coefficient (KOW) &#62; 5.3), whereas POCIS-A, POCIS-B and SDB-RPS disk were more suitable for hydrophilic compounds (log KOW &#60; 0.70).

A protocol about the characterization and application of five different passive sampling devices is presented.

물에 농약의 모니터링을위한 특성화 및 패시브 샘플러의 응용 프로그램

Five different water passive samplers were calibrated under laboratory conditions for measurement of 124 legacy and current used pesticides. This study ...

Use of a Battery of Chemical and Ecotoxicological Methods for the Assessment of the Efficacy of Wastewater Treatment Processes to Remove Estrogenic Potency

Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in a watch list of environmental pollutants under the European Water Framework Directive. Municipal wastewater treatment plants are major contributors to the estrogenic potency of surface waters. Much of the estrogenic potency of wastewater treatment plant (WWTP) effluents can be attributed to the discharge of steroid estrogens including estradiol (E2), EE2 and E1 due to incomplete removal of these substances at the treatment plant. An evaluation of the efficacy of wastewater treatment processes requires the quantitative determination of individual substances most often undertaken using chemical analysis methods. Most frequently used methods include Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GCMS/MS) or Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LCMS/MS) using multiple reaction monitoring (MRM). Although very useful for regulatory purposes, targeted chemical analysis can only provide data on the compounds (and specific metabolites) monitored. Ecotoxicology methods additionally ensure that any by-products produced or unknown estrogenic compounds present are also assessed via measurement of their biological activity. A number of in vitro bioassays including the Yeast Estrogen Screen (YES) are available to measure the estrogenic activity of wastewater samples. Chemical analysis in conjunction with in vivo and in vitro bioassays provides a useful toolbox for assessment of the efficacy and suitability of wastewater treatment processes with respect to estrogenic endocrine disrupting compounds. This paper utilizes a battery of chemical and ecotoxicology tests to assess conventional, advanced and emerging wastewater treatment processes in laboratory and field studies.

Endocrine Disrupting Compounds (EDC) pose a substantial risk to the aquatic environment. Municipal wastewater treatment plants are major contributors to the estrogenic potency of surface waters. The methodology provided in this paper allows for an assessment of the efficacy and suitability of wastewater treatment processes with respect to EDC removal.

폐수 처리 프로세스의 효능의 평가를위한 화학 및 생체 독성 방법의 배터리를 사용하면 에스트로겐 효능을 제거하는 방법

Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in ...

Assessment of Labile Organic Carbon in Soil Using Sequential Fumigation Incubation Procedures

Management practices and environmental changes can alter soil nutrient and carbon cycling. Soil labile organic carbon, a readily decomposable C pool, is highly sensitive to disturbance. It is also the primary substrate for soil microorganisms, which is fundamental to nutrient cycling. Due to these attributes, labile organic carbon (LOC) has been identified as an indicator parameter for soil health. Quantifying the turnover rate of LOC also aids in understanding changes in soil nutrient cycling processes. A sequential fumigation incubation method has been developed to estimate soil LOC and potential C turnover rate. The method requires fumigating soil samples and quantifying CO2-C respired during a 10 day incubation period over a series of fumigation-incubation cycles. Labile organic C and potential C turnover rate are then extrapolated from accumulated CO2 with a negative exponential model. Procedures for conducting this method are described.

Labile organic carbon (LOC) and the potential carbon turnover rate are sensitive indicators of changes in soil nutrient cycling processes. Details are provided for a method based on fumigating and incubating soil in a series of cycles and using the CO2 accumulated during the incubation periods to estimate these parameters.

순차 훈증 배양 절차를 사용하여 토양으로 불안정 유기 탄소의 평가

Management practices and environmental changes can alter soil nutrient and carbon cycling. Soil labile organic carbon, a readily decomposable C pool, is ...

Empirical, Metagenomic, and Computational Techniques Illuminate the Mechanisms by which Fungicides Compromise Bee Health

Growers often use fungicide sprays during bloom to protect crops against disease, which exposes bees to fungicide residues. Although considered &#34;bee-safe,&#34; there is mounting evidence that fungicide residues in pollen are associated with bee declines (for both honey and bumble bee species). While the mechanisms remain relatively unknown, researchers have speculated that bee-microbe symbioses are involved. Microbes play a pivotal role in the preservation and/or processing of pollen, which serves as nutrition for larval bees. By altering the microbial community, it is likely that fungicides disrupt these microbe-mediated services, and thereby compromise bee health. This manuscript describes the protocols used to investigate the indirect mechanism(s) by which fungicides may be causing colony decline. Cage experiments exposing bees to fungicide-treated flowers have already provided the first evidence that fungicides cause profound colony losses in a native bumble bee (Bombus impatiens). Using field-relevant doses of fungicides, a series of experiments have been developed to provide a finer description of microbial community dynamics of fungicide-exposed pollen. Shifts in the structural composition of fungal and bacterial assemblages within the pollen microbiome are investigated by next-generation sequencing and metagenomic analysis. Experiments developed herein have been designed to provide a mechanistic understanding of how fungicides affect the microbiome of pollen-provisions. Ultimately, these findings should shed light on the indirect pathway through which fungicides may be causing colony declines.

Microbial consortia within bumble bee hives enrich and preserve pollen for bee larvae. Using next generation sequencing, along with laboratory and field-based experiments, this manuscript describes protocols used to test the hypothesis that fungicide residues alter the pollen microbiome, and colony demographics, ultimately leading to colony loss.

실험, Metagenomic, 및 계산 기법 밝히는 어떤 균 타협 꿀벌 건강 메커니즘

Growers often use fungicide sprays during bloom to protect crops against disease, which exposes bees to fungicide residues. Although considered ...

Development of New Methods for Quantifying Fish Density Using Underwater Stereo-video Tools

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and estimating fish abundance. We developed and implemented a rotating stereo-video camera tool that covers a full 360 degrees of sampling, which maximizes sampling effort compared to stationary camera tools. A variety of studies have detailed the ability of static, stereo-camera systems to obtain highly accurate and precise measurements of fish; the focus here was on the development of methodological approaches to quantify fish density using rotating camera systems. The first approach was to develop a modification of the metric MaxN, which typically is a conservative count of the minimum number of fish observed on a given camera survey. We redefine MaxN to be the maximum number of fish observed in any given rotation of the camera system. When precautions are taken to avoid double counting, this method for MaxN may more accurately reflect true abundance than that obtained from a fixed camera. Secondly, because stereo-video allows fish to be mapped in three-dimensional space, precise estimates of the distance-from-camera can be obtained for each fish. By using the 95% percentile of the observed distance from camera to establish species-specific areas surveyed, we account for differences in detectability among species while avoiding diluting density estimates by using the maximum distance a species was observed. Accounting for this range of detectability is critical to accurately estimate fish abundances. This methodology will facilitate the integration of rotating stereo-video tools in both applied science and management contexts.

We describe a new method for counting fishes, and estimating relative abundance (MaxN) and fish density using rotating stereo-video camera systems. We also demonstrate how to use distance from camera (Z distance) to estimate species-specific detectability.

수 중 스테레오 비디오 도구를 사용 하 여 물고기 밀도 측정을 위한 새로운 방법의 개발

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and ...

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns (Sterna Hirundo)

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread breeding distribution, that has been recently listed as endangered in some habitats of its range. Waterbird monitoring programs exist to track populations through time; however, some of the more intensive approaches require entering colonies and can be disruptive to nesting populations. This paper describes a protocol that utilizes a minimally invasive surveillance system to continuously monitor common tern nesting behavior in typical ground-nesting colonies. The video monitoring system utilizes wireless cameras focused on individual nests as well as over the colony as a whole, and allows for observation without entering the colony. The video system is powered with several 12 V car batteries that are continuously recharged using solar panels. Footage is recorded using a digital video recorder (DVR) connected to a hard drive, which can be replaced when full. The DVR may be placed outside of the colony to reduce disturbance. In this study, 3,624 h of footage recorded over 63 days in weather conditions ranging from 12.8 &#176;C to 35.0 &#176;C produced 3,006 h (83%) of usable behavioral data. The types of data retrieved from the recorded video can vary; we used it to detect external disturbances and measure nesting behavior during incubation. Although the protocol detailed here was designed for ground-nesting waterbirds, the principal system could easily be modified to accommodate alternative scenarios, such as colonial arboreal nesting species, making it widely applicable to a variety of research needs.

A Video Surveillance System to Monitor Breeding Colonies of Common Terns Sterna Hirundo

This paper describes a protocol that uses a remote video monitoring surveillance system to continuously monitor breeding colonies of ground-nesting waterbirds. The system includes five cameras monitoring individual nests and one camera monitoring the colony as a whole, and is powered by car batteries that are recharged via solar panels.

일반적인 제비 갈매기 (Hirundo)의 식민지를 사육을 모니터링 하는 영상 감시 시스템

Many waterbird populations have faced declines over the last century, including the common tern (Sterna hirundo), a waterbird species with a widespread ...

Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and toxicological studies. Using automated digital tracking platforms, recent efforts in neuropharmacology are leveraging larval fish locomotor behaviors to identify potential therapeutic targets for novel small molecules. Similar to these efforts, research in the environmental sciences and comparative pharmacology and toxicology is examining various behaviors of fish models as diagnostic tools in tiered evaluation of contaminants and real-time monitoring of surface waters for contaminant threats. Whereas the zebrafish is a popular larval fish model in the biomedical sciences, the fathead minnow is a common larval fish model in ecotoxicology. Unfortunately, fathead minnow larvae have received considerably less attention in behavioral studies. Here, we develop and demonstrate a behavioral profile protocol using caffeine as a model neurostimulant. Though photomotor responses of fathead minnows were occasionally affected by caffeine, zebrafish&#160;were markedly more sensitive for photomotor and locomotor endpoints, which responded at environmentally relevant levels. Future studies are needed to understand comparative behavioral sensitivity differences among fish with age and time of day, and to determine whether similar behavioral effects would occur in nature and be indicative of adverse outcomes at the individual or population levels of biological organization.

Here, we present a protocol to examine larval zebrafish and fathead minnow locomotor activities and photomotor responses (PMR) using an automated tracking software. When incorporated in common toxicology bioassays, analyses of these behaviors provide a diagnostic tool to examine chemical bioactivity. This protocol is described using caffeine, a model neurostimulant.

애벌레에서 행동 응답 프로필을 조사 하기 위한 실험 프로토콜: 신경 흥분 제 카페인에 응용

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...

Measuring Phosphorus Release in Laboratory Microcosms for Water Quality Assessment

Phosphorus (P) is a critical limiting nutrient in agroecosystems requiring careful management to reduce transport risk to aquatic environments. Routine laboratory measures of P bioavailability are based on chemical extractions performed on dried samples under oxidizing conditions. While useful, these tests are limited with respect to characterizing P release under prolonged water saturation. Labile orthophosphate bound to oxidized iron and other metals can rapidly desorb to solution in reducing environments, increasing P mobilization risk to surface runoff and groundwater. To better quantify P desorption potential and mobility during extended saturation, a laboratory microcosm method was developed based on repeated sampling of porewater and overlying floodwater over time. The method is useful for quantifying P release potential from soils and sediments varying in physicochemical properties and can improve site-specific P mitigation efforts by better characterizing P release risk in hydrologically active areas. Advantages of the method include its ability to simulate in situ dynamics, simplicity, low cost, and flexibility.

Accurate quantification of phosphorus (P) desorption potential in saturated soils and sediments is important for P modeling and transport mitigation efforts. To better account for in situ soil-water redox dynamics and P mobilization under prolonged saturation, a simple approach was developed based on repeated sampling of laboratory microcosms.

수질 평가를 위한 실험실 소우주에서 인 방출 측정

Phosphorus (P) is a critical limiting nutrient in agroecosystems requiring careful management to reduce transport risk to aquatic environments. Routine ...