Name: necropsy-based wild fish health assessment
Uploaded: 2018-09-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Necropsy-based Wild Fish Health Assessment at JoVE.com

이 작품은 미국 지질 조사국의 생태계 (체 서 피크 베이 환경 및 수 산) 및 환경 건강 (생물학 오염 물질) 프로그램 및 자연 자원의 웨스트버지니아 부에 의해 투자 되었다. 상호의 사용 용도로 이며 미국 정부에 의해 승인을 의미 하지 않습니다.

여기에 설명 된 방법 Leetown 과학 센터의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었습니다가지고.
1. 물고기 컬렉션
<ol><li>스트레스의 최소 살아있는 물고기를 수집 합니다. 보트 또는 배낭 금광, 후크 및 라인 또는 그물 사용 합니다.</li>
	<li>샘플링까지 라이브 웰 또는 화난된 컨테이너에서 물고기를 잡아. 참고: 미국 수 산업 사회 다양 한 물고기 수집, 처리 및 마 취/안락사26,,2728에 대 한 가이드를 출판 했다. 물고기를 처리 하는 경우 장갑을 착용 한다.</li>
</ol>2. 물고기 검 시
<ol><li>
물고기 안락사
	<ol>
<li>Opercular 운동 중단 되 고 물고기 평형까지 마 취에서 물고기를 놓습니다. 또 다른 2-10 분 후 물고기 안락사 될 것입니다; 그러나,이 또한 종에 의해 달라질 수 있습니다. 참고: 물고기 마 취약 (가장 일반적으로 사용 재료의 표 참조)의 번호와 안락사 될 수 있습니다. 안락사의 방법 조직 수집된29에 지휘 될 것 이다 실험실 측정에 따라 달라 집니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
생체 특성을 측정 합니다.
	<ol>
<li>물고기를 가장 가까운 그램 무게.</li>
		<li>가장 가까운 밀리미터에 물고기 길이 측정 합니다.<ol>
<li>때 함께 슬쩍 꼬리의 끝을 입으로는 주 둥이의 끝에서 총 길이 측정 합니다.</li>
			<li>주 둥이의 끝에는 꼬리에 포크에서 포크 길이 몸 (꼬리의 시작 부분)의 끝에 주 둥이의 끝에서 표준 길이 측정 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>다음 수식을 사용 하 여 상태 인자를 계산. 조건 요소 = (총 몸 무게-생식 체중) / 총 길이3. 참고: 생식 무게에서에서 뺍니다 총 몸 무게 때문에 생식 선 prespawn 여성 생선에 특히 총 몸 무게에 크게 기여할 수 있다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
혈액 샘플을 가져옵니다. 참고: 혈액 꼬리 정 맥에서 가장 일반적으로 가져온 것입니다 하지만 수 있습니다 또한 등 쪽 대동맥에서 철회 될 또는 심장에 의해 찔린30.<ol>
<li>물고기의 크기에 따라 1 ~ 5 mL 주사기에 22 또는 23 G 바늘 꼬리 정 맥에서 주변 혈액 샘플을 추출 합니다. 옆 선 (그림 1A 및 1B) 아래 꼬리 영역 앞쪽 바늘을 삽입 합니다. 척추를 타격까지 그것을 위쪽으로 각도 약간 철수 다음. 정 맥은 overlying 척추 복 부. 참고: 혈액 얼룩을 만들 것입니다 또는 혈 청이 필요한, 아니 응고 제 사용 됩니다. 대부분의 경우, 플라즈마를 수집 합니다 그리고, 따라서, 항 응고 제 헤 파 린 나트륨, EDTA 등 리튬 코트 바늘과 주사기를 사용 하 고 또한 혈액 컬렉션 튜브 (예를 들어, vacutainer).</li>
		<li>바늘을 제거 하 고 혈액 컬렉션 튜브에 퍼 팅 전에 sharps 처리 컨테이너에 배치. 참고: 혈액 얼음에 개최 될 수 있습니다 있지만 후속 분석에 따라 가능한30곧 centrifuged 한다.</li>
		<li>핵 이상 또는 차동 혈액 조사, 평가 하는 경우 즉시 중복 깨끗 한 유리 현미경 슬라이드에 혈액 한 방울을 놓습니다. 다음 모 세관 작용에 의해 표면에 걸쳐 그려 놓기에 45 ° 각도로 두 번째 슬라이드를 다시. 31건조를 허용 합니다.</li>
		<li>원심 침전 물에 15 분 동안 1500-2500 x g 에서 혈액 세포. 살 균 전송 피펫으로, 극저온 튜브에 aliquot와 함께 혈장/혈 청을 제거 하 고-80 ° c.에 저장</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig1.jpg"> 그림 1 : 물고기에서 혈액 샘플을 얻기. (A) 최근 안락사 한 물고기의 측면에 있는 옆 라인 꾸며져 있다. (B) 바늘 삽입 된 복 부 선 (화살표), 바늘 등뼈 접촉 될 때까지 위쪽으로 각도 옆에 이다. 그것은 다음 약간, 철회 하 고 흡입 혈액을 철회 하기 시작. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol start="4"><li>
각 물고기에 검 시 기반 상태 평가 실시 합니다. 참고: 설명 및 병 변 및 이상 게시 수가 있습니다 사용할 수32,33,,3435.<ol>
<li>문서 외부 이상 몸 표면 및 지 느 러 미 (그림 2), 눈과 아가미 (그림 3), 거머리 (그림 2D), grubs 또는 trematode metacercarial cysts (그림 2D, 같은 외부 기생충에 병 변 등 3B) 및 아가미 기생충 (그림 3D). 문서 유형, 위치 및 크기의 데이터 시트에서 관찰 된 이상으로 사진 뿐만 아니라, 가능한 경우.</li>
		<li>한가 위를 사용 하는 내부 장기를 노출 하는 operculum에 항문 지역에서 절단 하 고 근육의 플랩 제거 여 복 부 구멍 (그림 4A)를 엽니다. 참고: 이전 신장 수집 될 경우 면역에 대 한 함수 (아래의 5 단계 참조) 또는 샘플 또는 바이러스학 세균 학에 대 한 수집, 외부 몸 표면 70% 알코올로 소독 한다는 검 시를 수행 하기 전에 그 샘플을 얻을 수 있어야. 조직만 시각적 관찰, 플라즈마 분석과 histopathology 살 균에 사용 되는 경우에 기술을 필요 하지 않습니다.</li>
		<li>문서 내부 이상 (그림 4) 등 다양 한 장기 (그림 4B-4D)의 존재의 일반 또는 초점 변색 (그림 4E), cysts, 기생충, 고 이상 (크기 확대, 위축 시키는).</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig2.jpg"> 그림 2 : 보이는 병 변의 예 몸 표면에 물고기의 지 느 러 미 관찰. (A) A 작은, 약간 침식 병 변 (화살표) 측면 몸 표면에. (B) 대형 reddened 영역 (화살표) 꼬리 몸 표면에 관련 된. (C) 올린, 몸 표면과 지 느 러 미에 검은 병 변 (화살표) (D) 거머리 (흰색 화살표) 고은 지 느 러 미에 작은 검은색 반점 (검은 화살표). 눈금 막대 = 3 mm. (E), A multilobed, 창백한 병 변 (화살표) 몸 표면에. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig3.jpg"> 그림 3 : 아가미의 보이는 병 변 및 물고기의 눈의 예. (A) A 영역 (화살표) 눈의 렌즈를 창백. 눈금 막대 = 5 mm. (B) 백색 cysts (흰색 화살표) 및 취재 (a) 아가미 operculum에 trematode 기생충으로 인 한 작은 검은색 반점 (검은 화살표). 눈금 막대 = 1 cm. (C) A 창백, 침식 영역 (화살표)에 길 (a). 눈금 막대 = 5 mm. (D)은 기생충 (화살표)를 보여주는 제거 된 길 길 필 라 멘 트에 연결 된. 눈금 막대 = 2 m m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig4.jpg"> 그림 4: 는 검 시 및 물고기의 내부 이상 예. (A)는 검 시 동안 물고기는 자르면 (흰색 화살표)을 따라와 근육 (검은색 화살표)의 플랩 생식 선 (a)와 집게와가 위 개최 되 고, 비장을 제거. (B) 룩 간 (a), testes (b), 내장 둘러싸인 지방 지방 (c)와 복 부 (d). 눈금 막대 = 5 mm. (C) (a)와 어두운 빨간색 영역 (화살표), 난소 (b) 내장 (c) 간. 눈금 막대 = 5 mm. (D) 간 녹색 변색 영역 (화살표). 눈금 막대 = 1 cm. (E) (a) 정상의 예 고와 비정상적인 testes (b) 제기 혹. 눈금 막대 = 1 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol start="5"><li>
Hepatosomatic 지 수 (HSI)를 가져옵니다.
	<ol>
<li>간 간 동맥과 앞쪽 끝의 결합 조직 절단 하 여 제거 합니다. 부드럽게 트리밍 유착 및 다른 연결 내장 및 많은 지방 질을 동안 밖으로 리프트. 쓸 개를 펑크 하지 주의 하십시오. 간 무게. 참고: 일부 물고기, cyprinids, 같은 필요가 없습니다 개별 간 하지만 오히려 간 조직 감싸 내장 및 다른 기관. 이 종 간 가중치를 얻을 수 하지 않을 수 있습니다.</li>
		<li>Hepatosomatic 인덱스 (HSI) 수식을 사용 하 여 계산 합니다. HSI 간 무게/총 몸 무게 =</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Gonadosomatic 인덱스를 계산 합니다.
	<ol>
<li>생식 기를 제거 하 고 그것의 무게.</li>
		<li>Gonadosomatic 인덱스 (GSI) 수식을 사용 하 여 계산 합니다. GSI 생식 무게/총 몸 무게 =</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 현미경 병 리에 대 한 조직 유지
참고: fixatives Z-수정, 아연, 포 르 말린 기반 정착 액 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린 등의 숫자 필드에는 조직의 보존을 위해 사용할 수 있습니다. 후자는 원하는 경우에 현장에서 교 잡 또는 형광 항 체 염색 같은 방법을 사용할 수 있습니다.
<ol><li>조심 스럽게 잘라 하지만 조직 샘플을 꺼내 하지 마십시오. 개별 조직 조각을 계속 < 크기가 2 cm와 < 적절 한 고정을 위한 두께 5 m m. 엄지손가락의 규칙으로 서 볼륨 조직 보다 약 10 배 더 많은 정착 액을 사용 하 여 적절 한 보존에 대 한. 샘플링 되는 물고기의 크기에 따라 적절 한 크기의 동일한 누출 방지 용기에 생선에서 모든 조직 샘플을 배치 합니다.</li>
	<li>통 컨테이너에 모든 외부 이상의 조각을 놓으십시오. 또한, 정상 조직의 인접 한 조각 포함. 참고: 부적 절 한 압축 또는 다른 기계적 손상, 공기 나 햇빛에 긴 노출 처리 및 동결 아티팩트가 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>다양 한 지역에서 간 최소 5 3-4 m m 두꺼운 조각을 잘라 고 통 컨테이너 합니다. 관찰 하는 경우에, 정상 및 비정상 영역을 포함 합니다.</li>
	<li>크기에 따라 전체 생식 또는 한 생식 선 따라 여러 통 용기에 놓습니다.</li>
	<li>통 컨테이너에서 전체 기관, 작은, 경우 또는 다른 모든 장기 (비장, 앞쪽 및 후부 신장, 아가미, 심장, 대 장 및 위)의 조각 장소. 비정상적인 조직 관찰 되는 경우 뿐만 아니라 정상 조직에의 한 인접 한 조각을 유지 합니다.</li>
</ol>4. 나이 분석은 Otoliths 제거
참고: 나이 물고기 질병/물고기 건강 연구에 중요 한 변수가 될 수 있습니다. 다양 한 구조, 비늘 등 쪽이, 나이 확인을 위해 사용 되었다, 구조를 비교 하는 대부분 학문을 주고 최상의 결과36,37otoliths를 발견 했다. Teleost 물고기 otoliths-lapillus, sagitta 및 asteriscus의 3 쌍 있다. 일반적으로, 화살 또는 lapillus otoliths는 종에 따라 다를 수 있지만 노화 수집 됩니다. 제거 및 노화 기술 이전 설명된38되었습니다.
<ol><li>길 지협을 통해 고 머리를 뒤로 구 부. 스트립 거리 연결 및 근육 조직 prootic bullae, 제기 뼈 다 귀 영역을 찾을 수 neurocranium의 열 등 한 부분 주위.</li>
	<li>점수 또는 뼈 절단기로 절단 하 고 폭은 otoliths로 균열. 그들은 맨 눈으로 볼 수 있습니다.</li>
	<li>Otoliths 이라는 유리병 또는 동전 봉투와 반지 또는 증가38세 나이 대 한 분석까지 실내 온도에 상점에 배치 합니다. 경우는 유리병에 모자 한 번 실험실에 반환 열고 철저 하 게 수 있도록 저장 하기 전에 건조 합니다.</li>
</ol><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig5.jpg"> 그림 5 : Otoliths의 제거. (A) 지협 잘라 고 결합 조직 및 근육 떨어져 척추와 neurospinal 지역의 폭로. (B)는 뼈는 otoliths를 폭로 부 쉈 다. (C) Lapillar otoliths 제거 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
5. 면역 기능 분석에 대 한 조직을 구하십시오
참고: 이전 신장 주요 조 혈 기관, 세포 및 대 식 세포 기능 분석에 대 한 소스 이며 aseptically 셀 mitogenesis, phagocytic 등 살인 능력의 기능 분석을 위한 교양 것입니다 경우 제거 해야 합니다. 대 식 세포39,40.
<ol><li>70% 에탄올과 물고기의 외부 표면 스프레이. 살 균가 위, 메스와 집게를 사용 하 여 복 부 구멍을 열고 수영 방광 앞쪽에 위치 하는 어두운 빨간색 기관 이다 앞쪽 신장 조직을 제거 하.</li>
	<li>미디어 (예를 들어, Leibovitz L-15) 세포를 살아 있는 유지 하에 앞쪽 신장 샘플을 놓습니다. 단일 셀 정지로 살 균 휴대용 조직 분쇄기 (예를 들어, Tenbroeck 조직 분쇄기) 신장 샘플을 균질. 젖은 얼음 실험실에 반환 될 때까지 만요.</li>
</ol>6. 핵 산 분석에 대 한 조직 유지
참고: 사본 풍부41 또는 정량 PCR42 (연쇄 반응)를 사용 하 여 유전자 발현 등 다운스트림 분자 분석 실시 하는 경우는 적절 한 부식 방지 제 ( 에서에서 평가 될 조직의 조각을 놓으십시오 예를 들어, RNAlater 안정화 솔루션) 가능 한 한 빨리.
<ol><li>RNA 보존 조직에 방부 제 볼륨의 10:1 비율로 적절 한 방부 제에 2 ~ 3 작은 (2-3 m m) 조각을 놓으십시오. 참고: 샘플 햇빛 또는 과도 한 열 차폐 및 젖은 얼음에 수송 되어야 한다.</li>
	<li>DNA 보존에 대 한 95% 에탄올 (볼륨에 의해 조직에 에탄올 10:1)으로 조직의 2 ~ 3 작은 조각을 놓으십시오. 다음 샘플 젖은 얼음에 누른 후-20 ° c.에 저장</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

물고기 건강의 검 시 기반 평가는 탐정 모두 외부 및 내부 구조의 정상적인 외관에 대 한 이해는 어떤 어 종에 활용할 수 있습니다. 표준화 된 접근을 사용 하 여 계절과 일시적인 변화는 인구에서 뿐만 아니라 사이트와 종 간 비교에 대 한 수 있습니다. 결과 점과 nonpoint 근원 오염 물질의 연관 효과 식별 하 고 관리 작업 정보를 사용할 수 있습니다. 그것은 또한 개선 관리 작업은 시작 되 면 추적을 사용할 수 있습니다. 방법론은 다양 한 방법으로 시각적 외부 이상의 문서를 증가 시키기 위해 수정할 수 있습니다. 평가, 시각적 관찰에만 기반으로 비-치명적인, 상대적으로 저렴 한 될 수 있으며 개인의 큰 숫자에 대 한 데이터를 신속 하 게 생성 될 수 있습니다. 따라서, 그들은 탐구 또는 초기 평가, 변화를 모니터링 하는 데 유용할 수 있습니다 또는 다른 지표와 함께에서 시간이 지남에. 길이 및 물고기의 무게는 시각적 관찰 하는 동안, 측정 조건 요소 계산 또한 수 있습니다. 평가 기반 시각적 관찰에만 있지만 원인에 관련 된 위험 요인, 특정 피부 이상45 의 긴 기간 동향 정보를 제공 하지 않습니다 및 생체 매개 변수46 일부 지역에서 개선 표명 수 질 개선 관련.
검 시 기반 평가 내부 장기 검사 또한 hepatosomatic 인덱스와 gonadosomatic 인덱스와 같은 다른 조건 요소 산출 될 수 있다 더 많은 정보를 제공 합니다. Goede 및 바튼22 혈액 매개 변수, 생체 인식 요인, 이상, 그리고 특정 이상에 대 한 인덱스 값의 비율을 포함 하는 필드 검 시 방법 개발. 메서드의 상세 포함 몇 가지 변수를 계산 될 수 있는 건강 평가 지 수의 비교 통계23대 한 허용에 대 한 심각도 등급. 이 건강 평가 인덱스 사용 되었습니다 지역 사이트 비교23,,4748 및 조합 미국 지질에 플라즈마 및 histopathological 분석을 포함 한 다른 생물 지표 조사의 Biomonitoring 환경 상태와 동향 프로그램 큰 강 전국49,,5051에서 오염 물질 노출의 잠재적 영향을 평가. 물고기 질병 색인 외부에서 볼 수 질병에 따라 커지고 기생충, 보이는 간 신생 및 기타 histopathologically 간 장애를 개발 하 고 북 해, 발트 해 그리고 아이슬란드에서 광범위 하 게 사용. 이 인덱스는 생태계 건강 지표52중요 한 도구가 될 것 발견 되었다.
물고기에 검 시 기반 평가 실시에 몇 가지 중요 한 요인이 있다. 첫째, 평가 물고기 죽음 후 즉시 실시 해야 합니다. 기관 색깔과 일관성 있는 변화는 죽음 이후 상당히 빠르게 발생할 수 있습니다. 또한, 일부 기생충 죽음 후 곧 호스트를 떠날 수 있습니다. 둘째, 무슨 관심의 종류에 대 한 정상 인지 중요 하다. 예를 들어, 일부 물고기 일반적으로 지방 있고 대부분의 종에 대 한 비정상적인 것 창백한 간 하는 동안 따라서, 간은, 창백. 그것은 또한 자연스럽 게 발생 하는 계절 변화를 인식 하는 것이 중요입니다. 일부 물고기 색상 변경 또는 산란 기 동안 사육 tubercles 개발 됩니다.
물고기 건강 평가 위한 방법으로 검 시 기반 평가의 한계 1) 일관 되 게 특정 장애의 "원인"를 확인 하 고 2) 식별 효과 육안으로 보이지 않을 수 있습니다를 포함 합니다. Histopathology, 병원 체와 기생충, 유전자 발현의 분자 또는 문화 식별의 추가 함께 이러한 단점을 극복할 수 있습니다. 예를 들어, "종양" 또는 제기 병 변 (붓기) 실제 neoplasia 있을 수 있습니다 또는 기생충, 염증, 부 종이 있을 수 있습니다 또는 증식 (정상 세포의 수 증가), 화학 노출, 전염 성 요원 또는 다른 irritants에 기인. 대표 결과 같이 확실 한 종양 또는 신 생물 진단 현미경 병 리를 병 변의 종류와 심각도 (즉, 양성 또는 악성) 식별 하 필요 합니다. 시각적인 관찰 하 여 종양"흰 빠 외부"의 평가 기준 사이트에서 특히 유행 과대평가. 올려진된 병 변의 많은 신생 하지만 오히려 형성 병 변 되지 않았다. 그것은 현재 알 수 없습니다이 형성 병 변 인지 미리 종양 약. 반대로, 제기 혹 간에서 관찰은 크게 간 신생의 보급을 과소 평가. 따라서, 미세한 병 리에 대 한 조직의 컬렉션 적절 하 게 폐지에 대 한 가능성을 해결 하는 데 필요한 했다.

인간의 활동은 수생 환경에 수많은 불리 한 영향을 미칠. 물고기 인간의 인구에서 재현 하 고 식 수 원본으로 자주 사용 하는 다양 한 물 시체를 살고 있으며 따라서 수생 환경의 건강의 중요 한 지표. 야생 물고기를 라이브 하 고 특정 서식 지에서 재현 병원 체, 기생충, 가난한 수 질 그리고 화학 오염 물질을 포함 한 다양 한 스트레스를 그들의 삶을 통해 노출 됩니다. 화학 물질의 수천 산업 및 인간의 폐수, 교외/도시 stormwater 및 농업 결선을 통해 우리의 수로 입력합니다. 화학 물질의 복잡 한 혼합물이 수 첨가제, 시너지 나 대립 효과에 노출 생물1,2,3. 또한, 다른 환경 스트레스와 같은 높은 영양분, 온도 상승된, 낮은 용 존된 산소 또는 변동 pH 화학 오염 물질4,5의 효과 악화 수 있습니다. 환경 스트레스 또한 영향을 미칠 수 전염병 결과 전염 성 요원6의 수를 증가,7 기회 주의 병원 체 독성을 증가 또는 억제 면역 반응과 질병에 의해 직접 호스트8,,910의 저항. 이러한 이유로11,12,,1314, 물고기 및 식별 하는 다른 수생 생물 모니터링 생물 학적 또는 불리 한 효과에 대 한 관심 증가 인구 그리고 생태계 위험에.
부작용 모니터링 biomarkers subcellular 또는 분자, 인구를 좌우 하 고 나타내는 다양 한 스트레스에 노출 될 수 있습니다 sublethal 효과 식별 하는 organismal에서 조직의 다양 한 수준에서 활용 합니다. 유기 체 수준 표시기 표시 이상 등 조건입니다. 길이 무게에 따라 조건 인덱스 복지 또는 물고기 인구의 적합성을 평가 하기 위해 계산 됩니다. 가장 일반적인 풀턴의 조건을 요인 (K)는 = (무게/길이3) 15. 또 다른 표시기 표시 이상의 존재입니다. 다양 한 방법 평가, 문서, 및 표시 이상 평가 개별 연구와 모니터링 프로그램에 사용 되었습니다. 평가 외부 이상, 즉, 개인 질병, 지 느 러 미 손상, 종양 및 골격 변칙의 비율을 기반으로 지역 사회 건강16평가 생물 무결성 (비)의 색인에 대 한 통계 중 하나입니다. 비슷한 평가 되 나 DELTs (기형, 아픕니다, 병 변, 종양) 또한 물고기 지역 사회17의 상태 평가를 사용 되었습니다. 그러나,이 방법만 외부 시각 이상 및 안 내부 병 변 또는 조기 sublethal 지표 평가.
검 시 기반 평가 외부 및 내부 관측을 포함 하 고 추가 상태 지표의 측정에 대 한 허용. Hepatosomatic 색인 (간 무게/총 몸 무게)는 체력의 지표로 서 사용 되었습니다 또는 에너지 보유15 높은 인덱스 값 건강 한 물고기를 나타냅니다. 그러나, 연구의 수 비 대 또는 간 크기 증가 간18,,1920에 의해 물질 대사로 변화 하는 다양 한 오염 물질에 노출으로 인해 발생 합니다 나타났습니다. 이 경우에 더 높은 색인 특정 화학 클래스에 노출의 나타내는 것입니다. Gonadosomatic 인덱스 (생식 선 무게/총 몸 무게)는 생식 건강21으로 지시 하는 다른 조건 인덱스가입니다. 검 시 기반 평가 동안 관측 개별 병 변 종류의 유행 또는 정상적인 개인의 비율 비교를 사용할 수 있습니다. 그러나, 그들은 또한 더 양적 건강 평가22,23에서 사용할 수 있습니다.
여기에 설명 된 표준화 검 시 기반 평가 질문 답변, 전문 및 기타 사용 가능한 리소스에 따라 여러 가지 방법으로 조잡 한 볼 수 평가 증가 시키기 위해 사용할 수 있습니다. 우리의 일상적인 방식은 (길이, 무게, 간 무게, 생식 선 무게) 생체 인식 데이터를 수집, 혈액 혈장/혈 청 분석, 문서 외부 및 내부 표시 이상, 현미경 분석에 대 한 장기의 보존 및 수집에 대 한 otoliths 나이 분석. 검 시 기반 평가 플러스 나이 분석 및 다양 한 기관의 histopathology 계산 및 다양 한 상태 지표의 비교, 볼 수 이상, 미세한 조직 변경의 보급에 대 한 섹스, 나이, 사이트 및 샘플링 기간입니다. 전자 현미경 검사 법, 세균 학, 바이러스학, 기생충학 및 화학 농도 포함 하 여 다른 많은 분석에 대 한 추가 조직 컬렉션을 만들 수 있습니다. 이 방법은 또한의 일부분일 수 있다 물고기 죽이기24 의 원인을 진단 하는 데 사용 하는 더 깊이 있는 분석 또는 포로의 mortalities 물고기25. 두 개의 추가 분석, 유전자 발현 및 기능 면역 분석에 대 한 조직의 컬렉션에 대 한 방법 설명 됩니다.

<table><tbody><tr><td>Folding tables</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Folding chairs</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissecting boards</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Measuring board (mm)</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Battery powered scale (g) for fish weight</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Battery powered scale (mg) for organ weights</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissecting forceps</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bone cutters</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scalpel and blades</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Disposable gloves</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buckets</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leak-proof Nalgene bottles (250 mL)</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>02-924-5C</td><td></td></tr><tr><td>Vacutainer tubes with sodium heparin</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>02-689-6</td><td>For blood collection</td></tr><tr><td>Disposable&amp;nbsp; 3 mL syringes with 23 G needle</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>14-826-11</td><td></td></tr><tr><td>1 &amp;ndash; 2 mL cryovials</td><td>Any</td><td></td><td>Used for plasma and RNAlater samples</td></tr><tr><td>Invitrogen RNAlater Stabilization solution</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>Z-Fix Formaldehyde Zinc fixative</td><td>Anatech LTD</td><td>SKU-174</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine-S (MS-222)</td><td>Syndel USA</td><td></td><td>fish anesthetic</td></tr><tr><td>Coin Envelopes</td><td>Any</td><td></td><td>for otoliths</td></tr><tr><td>Pencils and pens</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% alcohol</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Data sheets</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

necropsy-based wild fish health assessment

서식 변경 및 기후 변화, 증가 영양소와 화학 오염 물질, anthropogenic 영향 물고기 인구에 상당한 영향을 가질 수 있습니다. 부작용 모니터링, 물고기 및 다른 유기 체에 누적 효과 평가 하기 위해 사용할 수 있습니다 분자 수준에 있는 organismal에서 바이오 마커를 활용 하 여. 물고기 건강은 수생 생태계 건강의 지표로 서 세계적으로 사용 되었습니다. 검 시 기반 물고기 건강 평가 표시 이상 및 병 변, 기생충, 상태 및 organosomatic 인덱스에 데이터를 제공합니다. 이러한 사이트, 계절과 섹스, 뿐만 아니라 일시적으로, 시간이 지남에 문서 변화를 비교할 수 있습니다. 심각도 등급 더 양적 평가 대 한 물고기 건강 인덱스를 계산 하기 위해 다양 한 관측에 할당할 수 있습니다. 검 시 기반 평가의 단점은 시각적 관찰과 조직 및 sublethal 효과 대 한 subcellular 생체로 구분 되지 않은 상태 요인에 기반. 또한, 그것은 거의 원인 또는 관찰 된 이상와 관련 된 위험 요소를 식별 수 있습니다. 그래서, 예를 들어 올려진된 병 변 또는 "종양" 지 느 러 미, 입술 또는 신체 표면에 있을 수 있습니다는 신 생물. 그러나, 그것은 또한 기생충, 만성 염증 또는 자극에 대 한 응답에 정상 세포의 증식에 대 한 응답 수 있습니다. 반대로, 신생, 특정 기생충, 기타 전염 성 요원 및 많은 조직 변화 표시 되지 않습니다 고 너무 과소 평가 될 수 있습니다. 그러나, 검 시 기반 평가, 혈액 (플라즈마), histopathology (현미경 병 리)에 대 한 조직, 유전체학 및 다른 분자 분석 및 노화에 대 한 otoliths 수집할 수 있습니다. 지리 공간 분석, 서식 지 평가, 함께이 다운스트림 분석, 수 질 및 오염 물질 분석 모두 수 포괄적인 생태계 평가에 중요 한.

오대호 지역은 우려 (AOC)의 다양 한 도움이 사용의 장애 때문에 지정 된 지역 이다. 많은 AOC에서 유익한 사용 장애 (뷔이) 중 하나입니다 물고기 종양 또는 다른 기형. 수백만 달러의는 다양 한 뷔이 고 궁극적으로 AOC43이번이 하려면 이러한 각 분야의 복원 및 업데이트 관리에 대 한 지출 되었습니다. 부이 다른 주 (epa.ohio.gov/portals/35/lakeerie/ohio_AOC_delisting_guidance.pdf 및 dnr.wi.gov/topic/GreatLakes/documents/SheboyganRiverFinalReport2008.pdf 참조); 물고기 종양 폐지에 대 한 기준 그러나, delisting 문서에서 설명 했 듯이, 일부 경우 피부 종양 및 간 종양의 발병 률을 결정 하는 필요는. 많은 경우에, 유행 아닌 AOC 참조 사이트에 비교 됩니다.
물고기 종양 부이 호수 슈페리어와 미시간, 흰 빠 (Catostomus 야가 라의 검 시 기반 평가 활용 하 여 3 개의 AOCs (세인트 루이스 강, 밀워키 강 기선 강)와 비 AOC 참조 사이트 (Kewaunee 강)에 평가 되었다 ), 뒤에 피부와 간 조직의 미세한 병 리. 물고기 2012 및 201344 밀워키, 기선 및 Kewaunee 강에서 2015 (되지 않은 데이터)에서 세인트 루이스 강에서 수집 했다. 2 백 화이트 풋 내기, 밀워키, 세인트 루이스, Kewaunee와 기선에서 193 평가 됐다.
정의 함으로써, 종양 수 붓기 또는 제기 영역, 비록 그것은 일반적으로 조직의 비정상적인 세포의 비정상적인 성장으로 인 한 붓기 중 양성 또는 악성 신 생물은 간주 됩니다. 모든 사이트에서 수집 하는 흰색 빠 병 변의 외부 제기 작은, 이산 흰 반점, 더 큰 흰색 영역, 약간 제기 mucoid 변과 몸 표면 및 입술 (그림 6)에서 multilobed 제기 영역을 포함 하 여 다양 한 전시. 물고기 했다 무게 조건 요소를 측정, 외부 및 내부 이상 문서화 되었다, 그리고 피부와 간 조직 histopathology 수집 했다.
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig6.jpg"> 그림 6 : 제기 피부 병 변 관찰 오대호에서 흰색 빠에. (몸 표면에 A)는 개별 화이트 명소입니다. 눈금 막대 = 5 mm. (B) 약간 mucoid (화살표) 및 multilobed 병 변 (a) 후부 몸 표면에. 눈금 막대 = 1 cm. (C) A 큰, multilobed 병 변 신체 표면에. 눈금 막대 = 1 cm. (D) 입술에 수많은 멀티 lobed 병 변. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
외부 종양 물고기의 백분율 또는 제기 변색 영역 58.0% 밀워키 AOC에서 세인트 루이스 AOC에서 15.5%에서 ranged. 일반적으로, 개별 흰 반점 multilobed 입술과 몸 표면 병 변은 가장 일반적인 최소 공통 시각 병 변 이었다. 관찰 간 혹와 물고기의 수 낮은, 밀워키 (표 1)에서 2.5 %Kewaunee 세인트 루이스에서 1.5%에서 배열 했다.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="4">샘플링 해 강</td>
		</tr>
<tr>
<td>보이는 병 변</td>
			<td>Kewaunee 2013</td>
			<td>세인트 루이스 2015</td>
			<td>기선 2012</td>
			<td>밀워키 2013</td>
		</tr>
<tr>
<td>개별 흰 반점</td>
			<td>16</td>
			<td>3</td>
			<td>3.1</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>Mucoid</td>
			<td>20</td>
			<td>9.5</td>
			<td>9.8</td>
			<td>30.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>Multilobed</td>
			<td>22.5</td>
			<td>3</td>
			<td>29.5</td>
			<td>40</td>
		</tr>
<tr>
<td>총 발생 피부 이상이는
</td>
			<td>46</td>
			<td>15.5</td>
			<td>38.3</td>
			<td>58</td>
		</tr>
<tr>
<td>보이는 간 혹</td>
			<td>1.5</td>
			<td>1.5</td>
			<td>1.6</td>
			<td>2.5</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">
는 올려진된 병 변으로 물고기의 총 수입니다. 일부 물고기는 여러 유형의 이상 했다.</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: 흰색 빠의 검 시 기반 관측 비율으로 관심사 및 참조 사이트 (Kewaunee 강), 오대호 지역에서 수집. 시각적인 검사는 다양 한 이상으로 물고기의 %를 사용할 수 있습니다. 그러나, 결정적으로 진단 하려면 존재 및 신 생물의 종류, 조직 시험 되어야 한다 현미경 (histopathology). 현미경 검사, 시 제기 변의 모든 종양 약 했다 발견 했다. 많은 개별 흰 반점과 Kewaunee에서 특히 mucoid 병 변 형성 병 변 보다는 신 생물 (표 2) 했다. 또한, Kewaunee와 세인트 루이스, 관찰 하는 피부 종양의 모든 양성 갑 했다. 기선와 밀워키 갑와 편평 세포 carcinomas, 악성 피부 종양, (표 2) 관찰 되었다.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="4">샘플 강의</td>
		</tr>
<tr>
<td>신 생물 유형</td>
			<td>Kewaunee 2013</td>
			<td>세인트 루이스 2015</td>
			<td>기선 2012</td>
			<td>밀워키 2013</td>
		</tr>
<tr>
<td>유 두 종</td>
			<td>21</td>
			<td>5.2</td>
			<td>30.5</td>
			<td>37.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>편평 세포 암 종</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>2.1</td>
			<td>10.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>총 스킨 신생</td>
			<td>21</td>
			<td>5.2</td>
			<td>32.6</td>
			<td>48</td>
		</tr>
<tr>
<td>담 즙 덕트 신생은한
</td>
			<td>2.5</td>
			<td>4</td>
			<td>6.2</td>
			<td>9.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>간 세포 신생b
</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>2.1</td>
			<td>8</td>
		</tr>
<tr>
<td>총 간 신생</td>
			<td>3.5</td>
			<td>4</td>
			<td>8.3</td>
			<td>15.0c
</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">
는 Cholangioma 및 cholangiocarcinoma 포함</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">
b 간 세포 adenoma 및 간 세포 암</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">
c 일부 물고기가 했다 담 관 그리고 간 신생</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>표 2: 현미경 비율으로 관심사 및 참조 사이트 (Kewaunee 강), 오대호 지역에서 수집 된 흰색 빠의 종양 약 병 변 확인. Histopathological 분석은 또한 시각적 관찰에 의해 식별 되지 했다 간 종양을 확인. 동안 Kewaunee와 세인트 루이스에서 수집한 물고기의 1.5%만 보이는 간 혹 (표 1), 3.5%와 4.0%, 각각, 현미경으로 발견 했다 신생 (표 2). 큰 차이 기선 (보이는 미세한 8.3% 대 1.6%), 밀워키 (15.0% 미세한 대 표시 2.5%)에서 보였다. 또한 간장 세포 기원 (표 2) 대 담 즙 덕트의 신생의 감 별 법을 제공 하는 현미경 검사와 악성 종양 대 양성.

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Necropsy-based Wild Fish Health Assessment

수생 생태계 건강의 지표로 서 야생 물고기의 건강을 사용할 수 있습니다. 검 시 기반 물고기 건강 평가 제공 보이는 병 변 또는 이상, 조직 현미경 평가, 유전자 발현 및 다른 더 깊이 수집 하는 기회 뿐만 아니라 상태 지표를 계산 하는 데 사용 하는 데이터 분석입니다.

검 시 기반 야생 물고기 건강 평가

Anthropogenic influences from increased nutrients and chemical contaminants, to habitat alterations and climate change, can have significant effects on ...

necropsy-based-wild-fish-health-assessment

Research

JoVE Journal

Environment

17.0K 조회수.  U.S. Geological Survey. 수생 생태계 건강의 지표로 서 야생 물고기의 건강을 사용할 수 있습니다. 검 시 기반 물고기 건강 평가 제공 보이는 병 변 또는 이상, 조직 현미경 평가, 유전자 발현 및 다른 더 깊이 수집 하는 기회 뿐만 아니라 상태 지표를 계산 하는 데 사용 하는 데이터 분석입니다.

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Use of a Battery of Chemical and Ecotoxicological Methods for the Assessment of the Efficacy of Wastewater Treatment Processes to Remove Estrogenic Potency

Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in a watch list of environmental pollutants under the European Water Framework Directive. Municipal wastewater treatment plants are major contributors to the estrogenic potency of surface waters. Much of the estrogenic potency of wastewater treatment plant (WWTP) effluents can be attributed to the discharge of steroid estrogens including estradiol (E2), EE2 and E1 due to incomplete removal of these substances at the treatment plant. An evaluation of the efficacy of wastewater treatment processes requires the quantitative determination of individual substances most often undertaken using chemical analysis methods. Most frequently used methods include Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GCMS/MS) or Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LCMS/MS) using multiple reaction monitoring (MRM). Although very useful for regulatory purposes, targeted chemical analysis can only provide data on the compounds (and specific metabolites) monitored. Ecotoxicology methods additionally ensure that any by-products produced or unknown estrogenic compounds present are also assessed via measurement of their biological activity. A number of in vitro bioassays including the Yeast Estrogen Screen (YES) are available to measure the estrogenic activity of wastewater samples. Chemical analysis in conjunction with in vivo and in vitro bioassays provides a useful toolbox for assessment of the efficacy and suitability of wastewater treatment processes with respect to estrogenic endocrine disrupting compounds. This paper utilizes a battery of chemical and ecotoxicology tests to assess conventional, advanced and emerging wastewater treatment processes in laboratory and field studies.

Endocrine Disrupting Compounds (EDC) pose a substantial risk to the aquatic environment. Municipal wastewater treatment plants are major contributors to the estrogenic potency of surface waters. The methodology provided in this paper allows for an assessment of the efficacy and suitability of wastewater treatment processes with respect to EDC removal.

폐수 처리 프로세스의 효능의 평가를위한 화학 및 생체 독성 방법의 배터리를 사용하면 에스트로겐 효능을 제거하는 방법

Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in ...

연구

환경과학

Protocol for Acute and Chronic Ecotoxicity Testing of the Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

The killifish Nothobranchius furzeri is an emerging model organism in the field of ecotoxicology and its applicability in acute and chronic ecotoxicity testing has been demonstrated. Overall, the sensitivity of the species to toxic compounds is in the range with, or higher than, that of other model species.
This work describes protocols for acute, chronic, and multigenerational bioassays of single and combined stressor effects on N. furzeri. Due to its short maturation time and life-cycle, this vertebrate model allows the study of endpoints such as maturation time and fecundity within four months. Transgenerational full life-cycle exposure trials can be performed in as little as 8 months. Since this species produces eggs that are drought-resistant and remain viable for years, the on-site culture of the species is not needed but individuals can be recruited when required. The protocols are designed to measure life-history traits (mortality, growth, fecundity, weight) and critical thermal maximum.

Protocol for Acute and Chronic Ecotoxicity Testing of the Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

In this work, we describe an acute, chronic and multigenerational bioassay to study the effects of single and combined stressors on the Turquoise killifish Nothobranchius furzeri. This protocol is designed to study life-history traits (mortality, growth, fecundity, weight) and critical thermal maximum.

급성 및 만성 Ecotoxicity 청록색 송사리 Nothobranchius furzeri 의 테스트에 대 한 프로토콜

The killifish Nothobranchius furzeri is an emerging model organism in the field of ecotoxicology and its applicability in acute and chronic ecotoxicity ...

Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and toxicological studies. Using automated digital tracking platforms, recent efforts in neuropharmacology are leveraging larval fish locomotor behaviors to identify potential therapeutic targets for novel small molecules. Similar to these efforts, research in the environmental sciences and comparative pharmacology and toxicology is examining various behaviors of fish models as diagnostic tools in tiered evaluation of contaminants and real-time monitoring of surface waters for contaminant threats. Whereas the zebrafish is a popular larval fish model in the biomedical sciences, the fathead minnow is a common larval fish model in ecotoxicology. Unfortunately, fathead minnow larvae have received considerably less attention in behavioral studies. Here, we develop and demonstrate a behavioral profile protocol using caffeine as a model neurostimulant. Though photomotor responses of fathead minnows were occasionally affected by caffeine, zebrafish&#160;were markedly more sensitive for photomotor and locomotor endpoints, which responded at environmentally relevant levels. Future studies are needed to understand comparative behavioral sensitivity differences among fish with age and time of day, and to determine whether similar behavioral effects would occur in nature and be indicative of adverse outcomes at the individual or population levels of biological organization.

Here, we present a protocol to examine larval zebrafish and fathead minnow locomotor activities and photomotor responses (PMR) using an automated tracking software. When incorporated in common toxicology bioassays, analyses of these behaviors provide a diagnostic tool to examine chemical bioactivity. This protocol is described using caffeine, a model neurostimulant.

애벌레에서 행동 응답 프로필을 조사 하기 위한 실험 프로토콜: 신경 흥분 제 카페인에 응용

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...

Modeling the Size Spectrum for Macroinvertebrates and Fishes in Stream Ecosystems

The size spectrum is an inverse, allometric scaling relationship between average body mass (M) and the density (D) of individuals within an ecological community or food web. Importantly, the size spectrum assumes that individual size, rather than species&#8217; behavioral or life history characteristics, is the primary determinant of abundance within an ecosystem. Thus, unlike traditional allometric relationships that focus on species-level data (e.g., mean species&#8217; body size vs. population density), size spectra analyses are &#8216;ataxic&#8217; &#8211; individual specimens are identified only by their size, without consideration of taxonomic identity. Size spectra models are efficient representations of traditional, complex food webs and can be used in descriptive as well as predictive contexts (e.g., predicting responses of large consumers to changes in basal resources). Empirical studies from diverse aquatic ecosystems have also reported moderate to high levels of similarity in size spectra slopes, suggesting that common processes may regulate the abundances of small and large organisms in very different settings. This is a protocol to model the community-level size spectrum in wadable streams. The protocol consists of three main steps. First, collect quantitative benthic fish and invertebrate samples that can be used to estimate local densities. Second, standardize the fish and invertebrate data by converting all individuals to ataxic units (i.e., individuals identified by size, irrespective of taxonomic identity), and summing individuals within log2 size bins. Third, use linear regression to model the relationship between ataxic M and D estimates. Detailed instructions are provided herein to complete each of these steps, including custom software to facilitate D estimation and size spectra modeling.

This is a protocol to model the size spectrum (scaling relationship between individual mass and population density) for combined fish and invertebrate data from wadable streams and rivers. Methods include: field techniques to collect quantitative fish and invertebrate samples; lab methods to standardize the field data; and statistical data analysis.

스트림 생태계에서 거대 척추 동물 및 물고기의 크기 스펙트럼 모델링

The size spectrum is an inverse, allometric scaling relationship between average body mass (M) and the density (D) of individuals within an ecological ...

Behavioral Tracking and Neuromast Imaging of Mexican Cavefish

Cave-dwelling animals have evolved a series of morphological and behavioral traits to adapt to their perpetually dark and food-sparse environments. Among these traits, foraging behavior is one of the useful windows into functional advantages of behavioral trait evolution. Presented herein are updated methods for analyzing vibration attraction behavior (VAB: an adaptive foraging behavior) and imaging of associated mechanosensors of cave-adapted tetra, Astyanax mexicanus. In addition, methods are presented for high-throughput tracking of a series of additional cavefish behaviors including hyperactivity and sleep-loss. Cavefish also show asociality, repetitive behavior and higher anxiety. Therefore, cavefish serve as an animal model for evolved behaviors. These methods use free-software and custom-made scripts that can be applied to other types of behavior. These methods provide practical and cost-effective alternatives to commercially available tracking software.

Here, we present methods for high-throughput study of a series of the Mexican cavefish behaviors and vital staining of a mechanosensory system. These methods use free-software and custom-made scripts, providing a practical and cost-effective method for the studies of behaviors.

행동 추적 및 멕시코 Cavefish의 Neuromast 이미징

Cave-dwelling animals have evolved a series of morphological and behavioral traits to adapt to their perpetually dark and food-sparse environments. Among ...

행동분석학

Swimming Performance Assessment in Fishes

Swimming performance tests of fish have been integral to studies of muscle energetics, swimming mechanics, gas exchange, cardiac physiology, disease, pollution, hypoxia and temperature. This paper describes a flexible protocol to assess fish swimming performance using equipment in which water velocity can be controlled. The protocol involves one to several stepped increases in flow speed that are intended to cause fish to fatigue. Step speeds and their duration can be set to capture swimming abilities of different physiological and ecological relevance. Most frequently step size is set to determine critical swimming velocity (Ucrit), which is intended to capture maximum sustained swimming ability. Traditionally this test has consisted of approximately ten steps each of 20 min duration. However, steps of shorter duration (e.g. 1 min) are increasingly being utilized to capture acceleration ability or burst swimming performance. Regardless of step size, swimming tests can be repeated over time to gauge individual variation and recovery ability. Endpoints related to swimming such as measures of metabolic rate, fin use, ventilation rate, and of behavior, such as the distance between schooling fish, are often included before, during and after swimming tests. Given the diversity of fish species, the number of unexplored research questions, and the importance of many species to global ecology and economic health, studies of fish swimming performance will remain popular and invaluable for the foreseeable future.

The lives of the majority of fish are predicated on swimming. This protocol describes techniques for capturing a range of swimming modes available to individual and schooling fish, and includes metrics associated with swimming physiology and behaviour.

물고기의 수영 성능 평가

Swimming performance tests of fish have been integral to studies of muscle energetics, swimming mechanics, gas exchange, cardiac physiology, disease, ...

생물학

Assessment of Swim Endurance and Swim Behavior in Adult Zebrafish

Due to their renowned regenerative capacity, adult zebrafish are a premier vertebrate model to interrogate mechanisms of innate spinal cord regeneration. Following complete transection of their spinal cord, zebrafish extend glial and axonal bridges across severed tissue, regenerate neurons proximal to the lesion, and regain their swim capacities within 8 weeks of injury. Recovery of swim function is thus a central readout for functional spinal cord repair. Here, we describe a set of behavioral assays to quantify zebrafish motor capacity inside an enclosed swim tunnel. The goal of these methods is to provide quantifiable measurements of swim endurance and swim behavior in adult zebrafish. For swim endurance, zebrafish are subjected to a constantly increasing water current velocity until exhaustion, and time at exhaustion is reported. For swim behavior assessment, zebrafish are subjected to low current velocities and swim videos are captured with a dorsal view of the fish. Percent activity, burst frequency, and time spent against the water current provide quantifiable readouts of swim behavior. We quantified swim endurance and swim behavior in wild-type zebrafish before injury and after spinal cord transection. We found that zebrafish lose swim function after spinal cord transection and gradually regain that capacity between 2 and 6 weeks post-injury. The methods described in this study could be applied to neurobehavioral, musculoskeletal, skeletal muscle regeneration, and neural regeneration studies in adult zebrafish.

Capable of functional recovery after spinal cord injury, adult zebrafish is a premier model system to elucidate innate mechanisms of neural regeneration. Here, we describe swim endurance and swim behavior assays as functional readouts of spinal cord regeneration.

성인 제브라 피쉬의 수영 지구력 및 수영 행동 평가

Due to their renowned regenerative capacity, adult zebrafish are a premier vertebrate model to interrogate mechanisms of innate spinal cord regeneration. ...

신경과학

Isolation, Fixation and Characterization of Juvenile Gilthead Seabream Head Kidney Leukocytes by Flow Cytometry

Immunity is crucial for the physiological regulation of organisms, serving as the primary defense against pathogens and environmental stressors. The isolation and analysis of immune cells provide key insights into immune responses to external pressures. However, the lack of harmonized protocols for less studied species, such as marine fish, often leads to technical and analytical challenges that hamper data interpretation and a thorough understanding of species-specific immune responses. This study aimed to set up an optimized flow cytometry-based analytical procedure to characterize and determine the viability of leukocytes from the head kidney (the main hematopoietic organ in teleost fish) of juvenile gilthead seabream (Sparus aurata). The procedure began with the isolation of leukocytes through a homogenization process using Hanks&#39; balanced salt solution, followed by an optimized Percoll density gradient centrifugation method to ensure high recovery rates of leukocytes with minimal erythrocyte contamination required for efficient subsequent flow cytometry analysis. Additionally, a novel technique using a cell-reactive dye (LIVE/DEAD Fixable Dead Cell Stain Kit) was employed to distinguish viable from dead cells based on their fluorescent staining patterns. Fixation was achieved with 3.7% formaldehyde, preserving cell morphology, viability, and staining efficiency. Flow cytometry analysis successfully identified three predominant leukocyte populations: lymphocytes, monocytes, and granulocytes. This method not only allowed viability tests but also the accurate differentiation of cell types. The improvement in flow cytometry protocols represents a step forward in fish immunology by increasing the accuracy and efficiency of immune cell analysis. Furthermore, by allowing the fixation of cells for later analysis, this protocol significantly reduces the time and effort required for immune assessments, making it a valuable tool for both research and practical applications in various fields of research.

This manuscript describes the isolation and fixation of leukocytes extracted from gilthead seabream's head-kidney and the assessment of their viability by flow cytometry. This work contributes to the standardization of protocols and leverages the processing of a higher number of samples without compromising sample quality, promoting advancements in fish immunology knowledge.

유세포 분석에 의한 Juvenile Gilthead Seabream Head Kidney Leukocytes 의 분리, 고정 및 특성화

Immunity is crucial for the physiological regulation of organisms, serving as the primary defense against pathogens and environmental stressors. The ...

면역학 및 감염병학

성인 제브라피쉬의 신경 독성 효과를 평가하기 위한 행동 테스트 배터리

Neurotoxicity Assessment in Adult Danio rerio using a Battery of Behavioral Tests in a Single Tank

The presence of neuropathological effects proved to be, for many years, the main endpoint for assessing the neurotoxicity of a chemical substance. However, in the last 50 years, the effects of chemicals on the behavior of model species have been actively investigated. Progressively, behavioral endpoints were incorporated into neurotoxicological screening protocols, and these functional outcomes are now routinely used to identify and determine the potential neurotoxicity of chemicals. Behavioral assays in adult zebrafish provide a standardized and reliable means to study a wide range of behaviors, including anxiety, social interaction, learning, memory, and addiction. Behavioral assays in adult zebrafish typically involve placing the fish in an experimental arena and recording and analyzing their behavior using video tracking software. Fish can be exposed to various stimuli, and their behavior can be quantified using a variety of metrics. The novel tank test is one of the most accepted and widely used tests to study anxiety-like behavior in fish. The shoaling and social preference tests are useful in studying the social behavior of zebrafish. This assay is particularly interesting since the behavior of the entire shoal is studied. These assays have proven to be highly reproducible and sensitive to pharmacological and genetic manipulations, making them valuable tools for studying the neural circuits and molecular mechanisms underlying behavior. Additionally, these assays can be used in drug screening to identify compounds that may be potential modulators of behavior.
We will show in this work how to apply behavioral tools in fish neurotoxicology, analyzing the effect of methamphetamine, a recreational drug, and glyphosate, an environmental pollutant. The results demonstrate the significant contribution of behavioral assays in adult zebrafish to the understanding of the neurotoxicological effects of environmental pollutants and drugs, in addition to providing insights into the molecular mechanisms that may alter neuronal function.

저자 스포트라이트: 성체 제브라피시의 환경 및 약물 유발 행동 변화 평가 

Here, we present a comprehensive behavioral test battery, including the novel tank, Shoaling, and social preference tests, to effectively determine the potential neurotoxic effects of chemicals (e.g., methamphetamine and glyphosate) on adult zebrafish using a single tank. This method is relevant to neurotoxicity and environmental research.