우리는 자금에 대 한 최근 설정으로이 연구를 학과 고고학, 막스 플랑크 연구소에서 안정 동위 원소 실험실의 인류 역사의 과학에 대 한 최대 플랑크 사회를 감사 하 고 싶습니다.

다음 프로토콜 인류 역사의 과학에 대 한 최대 플랑크 연구소에서 빛 동위 원소 질량 분석 실험실의 지침을 따릅니다. 멸종 위기에 놓인된 현대 또는 역사 faunal 견본를 포함 분석 그리고 현대 이해 관계자 관심의 고고학과 faunal 물자의 사용에 대 한 국내 및 국제 위원회에서 적절 한 윤리 권한은 찾았던 되어야 합니다. . 이 문서에서 사용 하는 샘플 고고학과 화석 표본 이었다. 아니 살아있는 인간이이 연구에 사용 되었다 하 고 파괴적인 분석에 대 한 전체 윤리, 기관, 및 정부 권한을 갖게 되었습니다.
1. 대량 샘플링
참고: 인간과 동물, 대량의 기본적인 방법은 치아에 나 멜 샘플링은 치아의 볼 가장자리에 드릴의 응용 이다.
<ol><li>드릴 설정을 사용 하 여 부드러운 마모 또는 알루미늄 샷 블래스터를 사용 하 여 치아 (~0.1 m m)의 외부 표면을 청소. 깨끗 한 다이아몬드 밀고 드릴 비트 (아래 참조), 심지어 모양, 드릴 설정에 한 척을 통해 연결 된 휴대용 드릴을 사용 합니다. 온화 하 고 심지어 마모 홈 전체 성장 축에 평행으로 수행 확인 (그림 1 및 그림 2).</li>
	<li>시도, 가능한 경우, 각 인간 같은 치아 부분 또는 동물 샘플링에 메서드를 적용 합니다. 참고: 인간 paleodietary 연구에서 셋째 어 금 니는 일반적으로 선호 하는 대표 늦게 청소년/성인 다이어트로 동안 첫 번째 어 금 니 효과23이유 때문에 피할 수 있습니다. 각 taxon, 표현, 생활의 기간에 대 한 선호 치아는 사용할 수 있는 샘플 및 연구 질문으로 달라 집니다.</li>
	<li>치아에 나 멜 분말의 흡입을 피하기 위해 마스크를 착용 하는 동안 통풍이 잘되는 방에 드릴. 눈을 보호 하기 위해 고글을 착용. 교 련된 샘플 파우더의 양을 분석, 전처리 프로토콜 및 치아의 크기에 사용 되는 장비에 따라 달라 집니다 것을 유의 하십시오. 샘플이 열을 방지 하기 위해 낮은 속도로 드릴. 참고: 약, 4-8 mg 샘플 파우더의 동위 원소 비율 질량 분석 및 diagenetic 테스트 온라인 가스 준비 및 도입 시스템을 사용 하 여 여러 분석에 대 한 적절 한 목표 이다. 선택한 드릴 속도 샘플의 취약성에 따라 달라 집니다와 시행 착오의 몇 가지 수준을 요구할 것 이다 다는 것을 유의 하십시오. 일반적으로, 소형 드릴에 힘의 2/5 바는 충분. 깨끗 한 알루미늄 호 일의 조각을 통해 치아 분말을 드릴 또는 종이 무게.</li>
	<li>결과 나 멜 파우더를 수집 하 고 드릴링 전에 적절 하 게 정확한 균형에 tared 되었습니다 1.5 mL 마이크로 원심 튜브로 전송. 라벨 샘플 지정 (그림 3)과 각 관. 샘플 번호 및에 나 멜 무게 실험실 노트북 전자 데이터베이스에 기록 합니다.</li>
	<li>각 새로운 치아를 시추 하기 전에 먼저 0.5 M HCl을 사용 하 여 강력한 조직에 사용된 드릴 비트를 청소. 다음 씻어 드릴 비트는 유기 용 제 (아세톤, 메탄올, 에탄올 등)와 함께 사용 하 여 강력한 조직.</li>
	<li>철저 하 게 전용 사용 하 여 작업 영역을 청소 드릴링, 다음 진공 청소기, 또는 쓰와 브러시. 메탄올과 샘플링 공간을 닦아 주십시오. 진공 또는 훈련 압축 공기 제거 샘플 사이의 먼지와 샘플 파우더를 가볍게 스프레이 합니다.</li>
</ol>2. 순차 샘플링
참고: 순차 샘플링 및 다양 한 형태에에서 접근 될 수 있다 taxon 샘플링 되는 치아 뿐만 아니라 원하는 시간적 해상도의 크기에 따라 달라 집니다.
<ol><li>매우 얇은 제거 하 여 샘플링 되는 치아의 표면을 청소 외부 치아에 나 멜 층 (~0.1 m m).</li>
	<li>크라운의 정상에에 나 멜 루트 분기점에서 실행 되는 치아의 성장 축에 수직인 볼 표면 샘플을 드릴. 수평 밴드 성장 축에 수직인 각 샘플에 나 멜 층에 걸쳐 1-2 밀리미터 넓은 홈에 결과 드릴 (그림 1 및 그림 4). 그것은 샘플 및 결과 측정을 오염 시킬 것으로 dentine에에 나 멜을 드릴 하지 않도록 주의 하십시오. 참고: 샘플 수 원하는 해상도 따라 달라 집니다 하지만 c. 10 δ13C에 길 들 여 진된 소의 크기는 hypsodont에 대 한 δ18O 값 계절 변화를 공부 하는 적절 한 목표를 나타냅니다.</li>
	<li>샘플링 라인의 폭은 드릴 비트의 직경에 의해 결정으로 각 샘플에 대 한 적절 한 드릴 비트를 선택 합니다.</li>
	<li>장비 설정을 사용 하 여 증분 샘플 (그림 2)의 더 많은 수를 요구 하는 더 섬세 한 치아 (예., 인간의 치아), 뿐만 아니라 더 안정적인 드릴링에 대. 아래쪽을 가리키는 드릴 비트와 함께 안전 하 게, 드릴을 보유 하 고 있는 장비 스탠드를 설정 합니다. 참고: 4 개의 샘플은 쉽게 휴대용 접근24를 사용 하 여 영구 인간의 모 랄에서 얻어질 수 있다, 하는 동안 더 세련 된 샘플링 rig 또는 CO2 레이저 절제 접근 되지 것입니다 그 논의 여기14. 또 다른 일반적인 방법은 사용 하는 반자동된 microsampling25입니다.</li>
	<li>치아를 보유 하거나 클램프를 연결 합니다. 치아에 나 멜 드릴 비트에 대 한 누르고 압력을 적용 합니다. 샘플은 뚫고 증분 볼 표면 꼭대기 (occlusal 표면)에서 나 멜-루트 분기점 (ERJ)의 위치에서 크라운의 기지에. 동일한 샘플 전략 여러 번 이전 샘플 줄에 각 연속 선 병렬 드릴링 드릴링을 복제 합니다. 작은 원통형 다이아몬드 드릴 비트를 사용 하 여 양 어 금 니, 직경 1 mm (그림 1C)와 같은 섬세 한 치아에 대 한.</li>
	<li>ERJ 캘리퍼스를 사용 하 여에서 각 샘플링 라인의 거리를 측정 하 고 비교에 대 한이 거리를 기록 합니다.</li>
	<li>단계 1.3-1.6 위의 따릅니다. 참고: 작은, 섬세 한이 분석 되 고 전처리 및 diagenetic 검사 방법을 적용 되지 않습니다, 만약 샘플 1-4 밀리 그램 작은 탄산 분석의 온라인 가스 준비 및 설정에 신뢰할 수 있는 결과 생산할 예정 이다. 수정 된 자동화 주변 기기 시스템의 더 낮은 샘플 무게, 사용을 촉진할 수 있다 하지만 공부에 나 멜 (4 ~ 5 wt %)26,27에 탄산의 비율에 의해 필연적으로 제한 됩니다. 연구팀은 샘플은 필요한 샘플의 크기를 결정 측정 하려고 하는 연구소와 상담 해야 한다.</li>
</ol>3. 푸리에 변환 적외선 분 광 분석/Attenuated 총 반사율 메서드
<ol><li>약하게 한 총 반사율 메서드에 대 한 샘플 챔버 배경, 진공에서 또는 정상적인 대기의 상태를 설정 합니다.</li>
	<li>치아에 나 멜의 약 1 밀리 그램 다이아몬드 크리스탈 주걱을 사용 하 여 샘플 챔버에 배치. 낮은 및 샘플, 게시물과 다이아몬드 격판덮개 사이 회사 연결 될 때까지 샘플 게시물 보안. 시료 챔버와 함께 또는 없이 설립 되 고 진공, 설정 또는 가용성에 따라서를 닫습니다.</li>
	<li>400과 4000 cm-1사이 배열 하는 wavenumber에 대 한 64 번 샘플의 FTIR 스펙트럼을 측정 합니다. 복제의 원하는 수 따라 달라 집니다, 연구의 목표에 불구 하 고 다음 주택 샘플, microcentrifuge 튜브에 반환 되 고 다른 aliquots와 이상적으로 3 복제의 분석 강력한 결과 보장 한다.</li>
	<li>각 약 수 사이 고 각 샘플 사이의 메탄올과 주걱을 청소.</li>
	<li>사용 가능한 소프트웨어를 사용 하 여 기본 보정을 수행 합니다. 소프트웨어는 자동으로 샘플 챔버 배경을 결과 연결 프로필에서 뺍니다. 더 나은 재현성을 보장 하기 위해, ~1035 c m-1 에서 가장 높은 인산 염 밴드에 0.06의 최소 흡 광도와 나 멜 스펙트럼만 계정에 취해야 한다.</li>
	<li>711 c m-1에서 피크를 확인 하 여 모든 샘플에서 일반적인 보조 오염 탄산 방해석의 존재를 모니터링 합니다.</li>
	<li>분석에 따라 신중 하 게 주걱 또는 흡입 장치를 사용 하 여 그들의 microcentrifuge 관에 샘플을 반환 하 고 전처리 또는 분석의 다음 단계에 걸릴.</li>
	<li>원시 파장 및 강도 데이터를.csv 파일로 (또는 유사한) 내보내고 관심의 인덱스를 계산에 사용 (일반적으로 사용 되는 인덱스는 A 사이트 인산 인덱스, B 사이트 인산 인덱스, 인산 염 결정 지, 인산 인덱스에 물 아 미드 및 공동3/PO4 17,,1819색인) (표 1).</li>
	<li>비교는 FTIR 화석 또는 고고학 견본에서 결과 지금 성장 하 고 현대 faunal 치아에 나 멜의 데이터 집합 문학19,20 에서 사용할 수 있는 자연과 diagenetic 변경의 범위를 결정 하는 에 나 멜 샘플링입니다.</li>
</ol>4. 간단한 초 산 (0.1 M) 전처리
<ol><li>각 샘플에 대 한에 나 멜 파우더 적절 한 균형을 사용 하 여 microcentrifuge 튜브에 무게. 튜브를 따라 레이블을 지정 합니다. 에 나 멜 파우더 비슷한 크기의 입자와 같은 정도로 접지 해야 합니다. 참고: 많은 연구자 활용 희석 표 백제 (NaClO) 같은 산화 대리인, 또는 30% 과산화 수소 (H2O2) 샘플 및 이것에서 생명체를 제거 하는 시점에서 추가 되어야 합니다. 그러나, 뿐만 아니라 이러한 시 약 변경 안정적인 탄소 및 산소 동위 원소 값은 샘플의 수 있지만 온라인 가스 준비 및 도입 시스템에서 뼈 콜라겐 샘플의 스펙트럼 보여 100% 인산 탄산에 활용 측정 유기 샘플 (그림 5),이 단계가 필요 하지 않습니다 제안 반작용 하지 않는다.</li>
	<li>피 펫을 사용 하 여 각 샘플을 0.1 m M 초 산 (에 나 멜의 1 밀리 그램) 당 0.1 mL를 추가 합니다. 피펫으로와 샘플을 만지지 마십시오. 샘플 및 피 펫 접촉으로와 서, 다음 샘플에 대 한 새로운 피 펫을 사용 하 여 교차 오염을 방지.</li>
	<li>선동, 떨고 또는 전자 교 반기 (그림 3)를 통해 고 다음 앉아 10 분에 나 멜 파우더 하지 맡겨야 한다 아세트산에 시간의 연장된 기간에 대 한 대 한 샘플 (> 4 h).</li>
	<li>13,700 x g에서 2 분 동안 microcentrifuge에서 샘플을 놓습니다. 참고: 값이 싼 대안 3500 x g는 적은 샘플을 보유 하 고 있지만 큰 샘플 세트를 다룰 때 시간이 덜 소모 되는에서 4 분에 대 한 미니 원심 분리기의 사용 이다.</li>
	<li>Microcentrifuge 프로그램 중지, 초 산 2 mL의 초순 13,700 x g 2 분에 대 한 예제는 깨끗 한 피 펫, 다음 microcentrifuge을 사용 하 여 바꿉니다.</li>
	<li>두 번 더 전에, 초순 수를 변경 하 고 중립성에 대 한 테스트. (방해는 상쾌한) 없이 피 펫을 사용 하 여 나머지 액체를 제거 합니다. 참고: 초순와 3 개의 세척 총 중립성을 표준 절차입니다. 중립성에이 때까지 샘플을 세척 한다.</li>
	<li>시트 Parafilm (1 cm × 1 cm)의 고 각 microcentrifuge 튜브 위에 놓습니다. 샘플을 적절 하 게 건조 되도록 날카로운 개체를 사용 하 여 중앙에 작은 구멍을 확인 합니다.</li>
	<li>어떤 남아 있는 액체를 제거 하는 건조 기 동결에 튜브를 놓습니다. 참고: 동결 건조 기, 부드러운 오븐 없으면 건조 (40 ° C) 또한 가능성 이며 안정적인 탄소 및 산소 동위 원소 데이터에 어떤 악영향을 하지 말았어야.</li>
	<li>일단 건조, 제거는 Parafilm 고 microcentrifuge 뚜껑을 닫습니다. 튜브 라벨 인지 정확한 확인 및 필요한 경우 다시 쓰기. 참고: 이것은 밖으로, 제한 된 자금으로 실험실에서 다른 분석에 대 한 샘플 배포 전에 마지막 무대 될 수 무게에 대 한 스토리지 이전 마지막 단계.</li>
</ol>5. 계량 및 측정 샘플 및 표준
<ol><li>0.001 mg (그림 6)에 민감한 균형에 주석 디스크에에 나 멜 가루 약 2 m g으로 무게는 주걱을 사용 하 여. 인산의 산 성-붕 규 산 유리 약 병에 샘플을 신중 하 게 전송 다음. 에 나 멜의이 금액은 치아에 나 멜에 탄산의 상대적으로 작은 비율 때문에 신뢰할 수 있는 결과 얻을 하는 데 필요한.</li>
	<li>메탄올을 사용 하 여 샘플 사이 주걱을 깨끗 한 신선한, 깨끗 한 디스크를 사용 하 여 또는 선박 각 샘플에 대 한 무게.</li>
	<li>IAEA NBS18, IAEA 603, IAEA CO8, 또는 머 CaCO3등 국제 표준의 0.2 밀리 그램을 무게. 사내 표준 큰 치아의 무 균된에 나 멜에서 만든 잘20으로 사용할 수 있습니다. 76 샘플 및, 사용 61 샘플 및 15 표준의 전체 실행에 대 한이 균등 하 게 배포 해야 전부에 실행. 여러 연구 결과 적절 한 수의 표준 및 고고학 연구20,28세부 사항을 보고 했다. 참고: 반복된 전처리 및 집 표준, 고고학 샘플의 실행의 수에에서에 나 멜의 분석은 정확도의 적절 한 측정을 제공 하는 공부 되 고 샘플에 대 한 것도20.</li>
	<li>심장은 아니지만 꽉 빨려는 유리병까지 바늘을 액세스할 수 있는 특수 설계 된 뚜껑을 조입니다. 할 하지 통해 조여 뚜껑 심장에 압력 너무 강한 얻을 것 이다 하 고 궁극적으로 부러진된 바늘 분석 하는 동안 발생할 수 있습니다. 70 ° c.에가 열 블록 내에 나열 된 순서로 튜브를 배치 컴퓨터 소프트웨어에 순서와 샘플의 무게를 안정적으로 기록 합니다.</li>
	<li>3 단계에 따라 샘플을 측정: 1) 플러시 순수한 헬륨으로 샘플을 작성, 2) 추가 인산 3) 샘플 측정.<ol>
<li>순수한 헬륨 (학년 5.0) 주변 공기를 밖으로 플러시를 5 분 동안 100 mL/min의 흐름으로 샘플을 플러시.</li>
		<li>인산의 4-5 방울을 추가 (99%, 밀도가 1.85 g/mL) 탄산이 포함 된 샘플을. 샘플 H3포4 사이의 반응을 시작합니다. 반응, 동안 CO2 는 동위 원소는 탄산염 이온 CO32- 샘플의 값을 운반 해제.</li>
		<li>CO2 의 평형에 도달할 때까지 샘플 당 1 시간을 기다립니다. 1 시간 후 신뢰할 수 있는 결과 얻으려면 샘플을 측정 한다. 동안에 수집, 샘플 가스와 장치에 그 패스의 혼합물. 건조 단계 샘플 가스 혼합물에서 물을 제거합니다.</li>
		<li>알려진된 동위 원소 성분과 CO2 참조 가스의 세 봉우리로 시작 하 여 샘플을 측정 합니다. 피크 강도 4000 mV (사이 4000 8000 mV) 샘플 봉우리의 강도 일치 하도록 해야 합니다. 3 참조 가스 봉우리 20 s 길고 30 s 떨어져 해야 합니다. 샘플의 측정 간격을 정의로 따라. 10 회 5 대 한 샘플 측정 각 s와 55 s 떨어져. 피크 높이 나타내는 샘플/헬륨 혼합물 (그림 5)의 적절 한 전송 시간이 지남에 감소를 확인 합니다. 참고: 측정, 동안 소프트웨어 계산 샘플의 동위 원소 구성 알려진된 동위 원소 값, 피크 높이 및 피크 높이 참조 가스의 피크의 면적 및 샘플의 봉우리의 면적을 비교 하 여 합니다. 원시 13C /12C와 18O /16O 구성 샘플의 계산 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>측정 후 샘플을 정상화. 참고: 이것은 중요 참조 가스 샘플 가스 질량 분석기에 도입 하는 경우와 동일한 화학 및 물리적 경로 받아야 하지 않는다 하기 때문에. 따라서, 샘플 또한 국제 표준 (단계 5.3)는 동일한 육체 및 화학 치료를 받을 실행 내에서 자체 샘플으로20에 보정은 필수적 이다. 이러한 국제 탄산 표준 국제 델타 측정 비율에 샘플 2-포인트 캘리브레이션 및 정밀도와 반복성을 실행에 걸쳐 평가 활성화합니다.</li>
</ol>

<ol>
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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+enamel+carbonate+environments+during+fossilization.">Alteration of enamel carbonate environments during fossilization.</a> Journal of Archaeological Science. 26 (2), 143-150 (1999).</li><li>Roche, D., S&#233;galen, L., Balan, E., Delattre, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+assessment+of+Miocene-Pliocene+tooth+enamel+from+Tugen+Hills+(Kenyan+Rift+Valley)+through+FTIR,+chemical+and+stable-isotope+analyses.">Preservation assessment of Miocene-Pliocene tooth enamel from Tugen Hills (Kenyan Rift Valley) through FTIR, chemical and stable-isotope analyses.</a> Journal of Archaeological Science. 37 (7), 1690-1699 (2010).</li><li>Roberts, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calling+all+archaeologists:+guidelines+for+terminology,+methodology,+data+handling,+and+reporting+when+undertaking+and+reviewing+stable+isotope+applications+in+archaeology.">Calling all archaeologists: guidelines for terminology, methodology, data handling, and reporting when undertaking and reviewing stable isotope applications in archaeology.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. , (2018).</li><li>Snoeck, C., Pellegrini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+bioapatite+carbonate+pre-treatments+for+isotopic+measurements:+Part+1-Impact+on+structure+and+chemical+composition.">Comparing bioapatite carbonate pre-treatments for isotopic measurements: Part 1-Impact on structure and chemical composition.</a> Chemical Geology. 417, 394-403 (2015).</li><li>Pellegrini, M., Snoeck, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+bioapatite+carbonate+pre-treatments+for+isotopic+measurements:+Part+2-Impact+on+carbon+and+oxygen+isotope+compositions.">Comparing bioapatite carbonate pre-treatments for isotopic measurements: Part 2-Impact on carbon and oxygen isotope compositions.</a> Chemical Geology. 420, 88-96 (2016).</li><li>Wright, L. E., Schwarcz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+carbon+and+oxygen+isotopes+in+human+tooth+enamel:+identifying+breastfeeding+and+weaning+in+prehistory.">Stable carbon and oxygen isotopes in human tooth enamel: identifying breastfeeding and weaning in prehistory.</a> American Journal of physical anthropology. 106 (1), 1-18 (1998).</li><li>Roberts, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fruits+of+the+forest:+Human+stable+isotope+ecology+and+rainforest+adaptations+in+Late+Pleistocene+and+Holocene+(&#8764;+36+to+3+ka)+Sri+Lanka.">Fruits of the forest: Human stable isotope ecology and rainforest adaptations in Late Pleistocene and Holocene (&#8764; 36 to 3 ka) Sri Lanka.</a> Journal of human evolution. 106, 102-118 (2017).</li><li>Zazzo, A., Balasse, M., Patterson, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+&#948;13C+intratooth+profiles+in+bovine+enamel:+Implications+for+mineralization+pattern+and+isotopic+attenuation.">High-resolution &#948;13C intratooth profiles in bovine enamel: Implications for mineralization pattern and isotopic attenuation.</a> Geochimica et Cosmochimica Acta. 69 (14), 3631-3642 (2005).</li><li>Sydney-Zax, M., Mayer, I., Deutsch, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbonate+content+in+developing+human+and+bovine+enamel.">Carbonate content in developing human and bovine enamel.</a> Journal of dental research. 70 (5), 913-916 (1991).</li><li>Rink, W. J., Schwarcz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tests+for+diagenesis+in+tooth+enamel:+ESR+dating+signals+and+carbonate+contents.">Tests for diagenesis in tooth enamel: ESR dating signals and carbonate contents.</a> Journal of Archaeological Science. 22 (2), 251-255 (1995).</li><li>Szpak, P., Metcalfe, J. Z., Macdonald, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Best+practices+for+calibrating+and+reporting+stable+isotope+measurements+in+archaeology.">Best practices for calibrating and reporting stable isotope measurements in archaeology.</a> Journal of Archaeological Science: Reports. 13, 609-616 (2017).</li><li>Wright, L. E., Schwarcz, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correspondence+between+stable+carbon,+oxygen+and+nitrogen+isotopes+in+human+tooth+enamel+and+dentine:+infant+diets+at+Kaminaljuyu.">Correspondence between stable carbon, oxygen and nitrogen isotopes in human tooth enamel and dentine: infant diets at Kaminaljuyu.</a> Journal of Archaeological Science. 26 (9), 1159-1170 (1999).</li><li>Schoeninger, M. J., Hallin, K., Reeser, H., Valley, J. W., Fournelle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isotopic+alteration+of+mammalian+tooth+enamel.">Isotopic alteration of mammalian tooth enamel.</a> International Journal of Osteoarchaeology. 13 (1-2), 11-19 (2003).</li></ol>

저자는 충돌의 관심을 선언합니다.

(대량과 증분) 성공의 전에 치열의 지식에 대 한 액세스에 의존 드릴링 기술 및 샘플 준비, 상대적으로 저렴 한 장비에 대 한 투자와 함께. 이러한 문제는 쉽게 넘을 때 명확한 지침에 관한 샘플링 및 전처리 방법 사용할 수 있습니다. 이 문서에서는 이러한 방법에 새로운 연구에 대 한 명확 하 고 간결한 방식에서를 전파 하겠습니다. 처음으로 이러한 방법을 적용 하는 학자 분석 및 귀중 한 고고학?...

치아에 나 멜 탄산의 안정적인 탄소 및 산소 동위 원소 분석은 인간의 식이 섭취, 이유, 이동성, 뿐 아니라 및 faunal 의존 식물, 동물 및 가축 foddering의 움직임 과거 공부에 사용 되었습니다. 이러한 응용 프로그램 포괄적으로 논의 되었고 다양 한 지역 건조, 온도, 물 소스, 그리고 식물 작곡1,2, 의 효과 나타내는 환경 조건에 대 한 검토 3,4,,56. 고고학과 고생물학, 잠재적인 응용 프로그램의 다양성 뿐만 아니라 치아에 나 멜 탄산의 좋은 보존 했다 그것은 안정 동위 원소 작업3에 대 한 매력적인 소재를. 샘플링, 전처리, 및 diagenesis 심사의 방법 이전 간행물1,7의 숫자에 간략하게 설명 합니다. 그러나, 철저 한 구두 및 시각적 데모 남아 크게 사용할 수 없게, 특히 사람들이 고고학 과학 실험실 및 연구소 그룹이 기술의 사용에 대 한 관심 증가 제한 된 자금 중 5.
치아에 나 멜은 주로 이루어진 hydroxyapatite (bioapatite) 정자8 그 뼈, 사후 diagenetic 이온 대체 및 오염3을 더 저항 하에 보다 큰. 현대 연구는 faunal 치아의 안정적인 탄소 동위 원소 (δ13C) 측정에 나 멜을 안정적으로 레코드 동물 다이어트 및 동작9,10설명 했다. 치아에 나 멜의 안정 되어 있는 산소 동위 원소 (δ18O) 값 섭취 물, 물에 다양 한 환경에 미치는 영향 뿐만 아니라 식물 및 동물성 식품, 식 수, 호흡, 물 포함의 산소 동위 원소 구성에 의해 결정 됩니다. 또한 동위 원소 분별 법으로 이어질 수 있는 (예., 건조, 온도, 고도, 강우량 금액, 대륙 위치)11. 이 식이 환경 재건에 대 한 인기 있는 방법을에서 했다 paleoecological, 고고학, 고생물학 연구.
치아에 나 멜 형성 기간 (년)을 상대적으로 짧은 이며 샘플링 되 고 치아에 따라 다릅니다. 인간을 위한 첫 번째 어 금 니에 나 멜 mineralizes 출생에서 3 세 사이, 구치 형성 1.5 ~ 7 세 사이, 두 번째 어 금 니 2.5와 8 세의 형성 및 세 번째 어 금 니12 7 16 세 사이 청소년 기 동안 형성 . 대형의 그것의 기간 동안 점진적으로 그 치아에 나 멜 형태를 감안할 때, 그것은 전체 성장 축 따라 대량에서 샘플링 하거나 수13 형성 기간 동안 발생 한 규정식 및 환경에서 변경 내용을 조사 하려면 순차적 샘플링 . 특정된 치아 내 식이 변화를 시간순으로 정렬 된 인간과 다른 동물1,14, 간 연례 계절과 규정식 변화에 관한 정보를 제공에 대 한 관찰 이다.
에 나 멜은 보통 diagenesis, 매장 환경에서 발생 하는 동위 원소 수정 가능 하 고15,16, 실험 검사 및 전처리 선택 유용한 만드는 관찰 되었습니다. 푸리에 변환 적외선 분광학 (FTIR), 특히 감쇠 전송 모드에서 빠르고, 저렴 한, 그리고 치아에 나 멜에 taphonomic 변경 평가 대 한 상대적으로 액세스할 수 있는 방법으로 등장 했습니다 동안 그것만 사용할 수 있는 방법, 고생물학 컨텍스트17,18,,1920에 특히. 그러나, 상세한 프로토콜 및 녹음 표준 남아 지구 화학 또는 재료 과학 분야 이외의 많은 사람들이 상대적으로 액세스할 수 없습니다.
반응 시간과 치아에 나 멜의 전처리에 연구원에 의해 고용 하는 화학 물질도 상당히 다이 다양성 안정적인 탄소 및 산소 동위 원소 값 샘플21의 무엇을 할 수 있습니다로 제한 고려 종종 문학에서 ,22. 여기, 우리는 나 멜 파우더 샘플의 전처리에 대 한 접근을 사용 하 여 희석 초 산 (0.1 m M)를 보고 합니다. 그러나, 그에 주어진 동위 원소 측정 전처리에서 결과에 차이 상대적으로 경미한 치아에 나 멜에 대 한, 연구자는 그들은11에 그들의 데이터를 비교 하고자 하는 데이터 집합에 대 한 프로토콜에 따라에 대 한 최상 이다. 또한, 홀로세 샘플에 특히 작은 순차적 샘플 촬영은 어디 아무 전처리 선택할 수 있습니다 (다음 파일럿 diagenetic 테스트) 샘플 낭비를 피하기 위해.
우리가 여기에 보고 하는 방법을 우리의 지식에 새로운 수단으로 있지만, 이것은 처음으로 대량 및 순차 샘플링, 전처리 선택, 그리고 치아에 대 한 diagenetic 확인 방법 (FTIR의 형태로)의 철저 한 서 면 및 비주얼 문서에 나 멜 되었습니다 널리 사용할 수 있는 다양 한 학술 관객 들에 게. 우리는 우리의 노력 하 게 될이 이렇게 더 쉽게 개인 및 실험실의 넓은 수를 희망 하는 동안 적용 하 고이 기술을 게시 하 고 싶은 연구자 최소 기준, diagenetic 고려 사항, 보고 알고 있어야 하 고 프레 젠 테이 션 요구 overviewed 다른 잠재적인 해석 복잡성을 그들의 연구 영역, 분석, taxa에 고유 기간5시간으로20일.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dremel Micro</td>
			<td>Dremel</td>
			<td></td>
			<td>https://www.dremel.com/en_US/products/-/show-product/tools/8050-micro</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond-tipped drill bit</td>
			<td>Dremel</td>
			<td></td>
			<td>https://www.dremel.com/en_US/products/-/show-product/accessories/7122-diamond-wheel-point</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL micro-centrifuge tube</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t2422?lang=de&#38;region=DE&#38;gclid=EAIaIQobChMI7pHRpauW2QIV77ftCh1p1wjhEAAYASAAEgKzkvD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Linear Formula:&#160;CH3OH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Linear Formula:&#160;CH3CO2H</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dremel rig set-up (workstation)</td>
			<td>Dremel</td>
			<td></td>
			<td>https://www.dremel.com/en_US/products/-/show-product/tools/220-01-workstation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/75002401</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-centrifuge</td>
			<td>Sprout</td>
			<td></td>
			<td>http://www.heathrowscientific.com/sprout-mini-centrifuge-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freeze drier</td>
			<td>Zirbus Technology</td>
			<td></td>
			<td>http://www.zirbus.com</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sampling and pretreatment of tooth enamel carbonate for stable carbon and oxygen isotope analysis

인간과 동물의 치아에 나 멜 탄산의 안정적인 탄소 및 산소 동위 원소 분석 적용 되었습니다 paleodietary, paleoecological, 및 paleoenvironmental 연구에서 최근 역사적인 기간에서 10 백만 년 전를 다시. 대량 접근 치아 내의 순차 견본이이 기간 동안 식이 환경 변화를 추적할 수 있습니다 하는 동안 사기 질 강화 작용의 기간에 대 한 대표 하는 샘플을 제공 합니다. 없음 명시적 지침 필요한 실험실 장비의 선택에 도움을 철저 하 게 상세한 실험실 샘플링을 설명 되었습니다 동안 이러한 방법론 널리 적용 되었고 고고학, 생태학, 고생물학에 설명, 그리고 프로토콜입니다. 이 문서에서는, 우리가 문서 함수와 및 시각, 전처리 및 diagenetic 심사 방법론 더 널리 사용할 수 있도록 다양 한 실험실 설정에서에서 응용 프로그램을 고려 하는 연구를 통해 샘플링에서 전체 과정.

위의 샘플 프로시저를 사용 하 여 증분에 나 멜 bioapatite 샘플 준비 되었다. 에 나 멜에서 bioapatite의 분석은 샘플링, 대량 또는 증분의 정확도에 따라 달라 집니다. 이 경우에, 다른 기후 지역에서 고 고 학적 샘플 (2 개 양)의 결과를 선택 했습니다. 증분 샘플 양 두 번째 어 금 니에서 분석 및 ERJ (그림 4)에서 시작을 표시 했다. 증분 샘플 위치 번호가 있?...

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Sampling and Pretreatment of Tooth Enamel Carbonate for Stable Carbon and Oxygen Isotope Analysis

안정적인 탄소 및 산소 동위 원소 분석을 위한 샘플링 및 치아에 나 멜의 전처리 탄산염

인간과 동물의 치아에 나 멜 탄산의 안정적인 탄소 및 산소 동위 원소 분석은 개별 단과 환경 재건에 대 한 프록시로 사용 되었습니다. 여기, 우리 대 한 자세한 설명을 제공 하 고 대량 순차적 시각적 설명서 치아에 나 멜 샘플링으로 고고학과 고생물학 샘플의 전처리.

Stable carbon and oxygen isotope analysis of human and animal tooth enamel carbonate has been applied in paleodietary, paleoecological, and ...

sampling-pretreatment-tooth-enamel-carbonate-for-stable-carbon-oxygen

Research

JoVE Journal

Biochemistry

13.8K 조회수.  Max Planck Institute for the Science of Human History. 인간과 동물의 치아에 나 멜 탄산의 안정적인 탄소 및 산소 동위 원소 분석은 개별 단과 환경 재건에 대 한 프록시로 사용 되었습니다. 여기, 우리 대 한 자세한 설명을 제공 하 고 대량 순차적 시각적 설명서 치아에 나 멜 샘플링으로 고고학과 고생물학 샘플의 전처리.

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A Method for Measuring Metabolism in Sorted Subpopulations of Complex Cell Communities Using Stable Isotope Tracing

Mammalian cell types exhibit specialized metabolism, and there is ample evidence that various co-existing cell types engage in metabolic cooperation. Moreover, even cultures of a single cell type may contain cells in distinct metabolic states, such as resting or cycling cells. Methods for measuring metabolic activities of such subpopulations are valuable tools for understanding cellular metabolism. Complex cell populations are most commonly separated using a cell sorter, and subpopulations isolated by this method can be analyzed by metabolomics methods. However, a problem with this approach is that the cell sorting procedure subjects cells to stresses that may distort their metabolism.
To overcome these issues, we reasoned that the mass isotopomer distributions (MIDs) of metabolites from cells cultured with stable isotope-labeled nutrients are likely to be more stable than absolute metabolite concentrations, because MIDs are formed over longer time scales and should be less affected by short-term exposure to cell sorting conditions. Here, we describe a method based on this principle, combining cell sorting with liquid chromatography-high resolution mass spectrometry (LC-HRMS). The procedure involves analyzing three types of samples: (1) metabolite extracts obtained directly from the complex population; (2) extracts of "mock sorted" cells passed through the cell sorter instrument without gating any specific population; and (3) extracts of the actual sorted populations. The mock sorted cells are compared against direct extraction to verify that MIDs are indeed not altered by the cell sorting procedure itself, prior to analyzing the actual sorted populations. We show example results from HeLa cells sorted according to cell cycle phase, revealing changes in nucleotide metabolism.

This article describes a method for studying cellular metabolism in complex communities of multiple cell types, using a combination of stable isotope tracing, cell sorting to isolate specific cell types, and mass spectrometry.

안정 동위 원소 추적을 사용하여 복잡한 세포 공동체의 정렬 된 부분 집단에서 대사를 측정하는 방법

Mammalian cell types exhibit specialized metabolism, and there is ample evidence that various co-existing cell types engage in metabolic cooperation. ...

연구

생화학

Reconstitution of Nucleosomes with Differentially Isotope-labeled Sister Histones

Asymmetrically modified nucleosomes contain the two copies of a histone (sister histones) decorated with distinct sets of Post-translational Modifications (PTMs). They are newly identified species with unknown means of establishment and functional implications. Current analytical methods are inadequate to detect the copy-specific occurrence of PTMs on the nucleosomal sister histones. This protocol presents a biochemical method for the in vitro reconstitution of nucleosomes containing differentially isotope-labeled sister histones. The generated complex can be also asymmetrically modified, after including a premodified histone pool during refolding of histone subcomplexes. These asymmetric nucleosome preparations can be readily reacted with histone-modifying enzymes to study modification cross-talk mechanisms imposed by the asymmetrically pre-incorporated PTM using nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy. Particularly, the modification reactions in real-time can be mapped independently on the two sister histones by performing different types of NMR correlation experiments, tailored for the respective isotope type. This methodology provides the means to study crosstalk mechanisms that contribute to the formation and propagation of asymmetric PTM patterns on nucleosomal complexes.

This protocol describes the reconstitution of nucleosomes containing differentially isotope-labeled sister histones. At the same time, asymmetrically post-translationally modified nucleosomes can be generated after using a premodified histone copy. These preparations can be readily used to study modification crosstalk mechanisms, simultaneously on both sister histones, by using high-resolution NMR spectroscopy.

된 유의 동위 원소 표지 자매 히스톤과 뉴 클레오의 재구성

Asymmetrically modified nucleosomes contain the two copies of a histone (sister histones) decorated with distinct sets of Post-translational Modifications ...

Dissection of Human Retina and RPE-Choroid for Proteomic Analysis

The human retina is composed of the sensory neuroretina and the underlying retinal pigmented epithelium (RPE), which is firmly complexed to the vascular choroid layer. Different regions of the retina are anatomically and molecularly distinct, facilitating unique functions and demonstrating differential susceptibility to disease. Proteomic analysis of each of these regions and layers can provide vital insights into the molecular process of many diseases, including Age-Related Macular Degeneration (AMD), diabetes mellitus, and glaucoma. However, separation of retinal regions and layers is essential before quantitative proteomic analysis can be accomplished. Here, we describe a method for dissection and collection of the foveal, macular, and peripheral retinal regions and underlying RPE-choroid complex, involving regional punch biopsies and manual removal of tissue layers from a human eye.One-dimensional SDS-PAGE as well as downstream proteomic analysis, such as liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), can be used to identify proteins in each dissected retinal layer, revealing molecular biomarkers for retinal disease.

The human retina is composed of functionally and molecularly distinct regions, including the fovea, macula, and peripheral retina. Here, we describe a method using punch biopsies and manual removal of tissue layers from a human eye to dissect and collect these distinct retinal regions for downstream proteomic analysis.

Proteomic 분석에 대 한 인간의 망막과 맥락 막의 RPE의 해 부

The human retina is composed of the sensory neuroretina and the underlying retinal pigmented epithelium (RPE), which is firmly complexed to the vascular ...

Quantitative and Qualitative Method for Sphingomyelin by LC-MS Using Two Stable Isotopically Labeled Sphingomyelin Species

We present a method of analyzing sphingomyelin (SM) qualitatively and quantitatively by liquid chromatography-electrospray Ionization-tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). SM is a common sphingolipid composed of a phosphorylcholine and a ceramide as the hydrophilic and hydrophobic component, respectively. A number of SM species are present in mammalian cells due to a variety in the sphingoid long chain base (LCB) and an N-acyl moiety in the ceramide. In this report, we show a method of estimating the number of carbon and double bonds in a LCB and an N-acyl moiety based on their corresponding product ions in MS/MS/MS (MS3) experiments. In addition, we present a quantitative analysis method for SM using two stable isotopically labeled SM species, which facilitates determining the range used in SM quantitation. The present method will be useful in characterizing a variety of SM species in biological samples and industrial products such as cosmetics.

Here, we present a protocol to quantify and qualify each sphingomyelin species using multiple reaction monitoring and MS/MS/MS mode, respectively.

LC-MS Isotopically 두 안정을 사용 하 여 Sphingomyelin에 대 한 양적 및 질적 방법 Sphingomyelin 종 분류

We present a method of analyzing sphingomyelin (SM) qualitatively and quantitatively by liquid chromatography-electrospray Ionization-tandem mass ...

Electrochemical Detection of Deuterium Kinetic Isotope Effect on Extracellular Electron Transport in Shewanella oneidensis MR-1

Direct electrochemical detection of c-type cytochrome complexes embedded in the bacterial outer membrane (outer membrane c-type cytochrome complexes; OM c-Cyts) has recently emerged as a novel whole-cell analytical method to characterize the bacterial electron transport from the respiratory chain to the cell exterior, referred to as the extracellular electron transport (EET). While the pathway and kinetics of the electron flow during the EET reaction have been investigated, a whole-cell electrochemical method to examine the impact of cation transport associated with EET has not yet been established. In the present study, an example of a biochemical technique to examine the deuterium kinetic isotope effect (KIE) on EET through OM c-Cyts using a model microbe, Shewanella oneidensis MR-1, is described. The KIE on the EET process can be obtained if the EET through OM c-Cyts acts as the rate-limiting step in the microbial current production. To that end, before the addition of D2O, the supernatant solution was replaced with fresh media containing a sufficient amount of the electron donor to support the rate of upstream metabolic reactions, and to remove the planktonic cells from a uniform monolayer biofilm on the working electrode. Alternative methods to confirm the rate-limiting step in microbial current production as EET through OM c-Cyts are also described. Our technique of a whole-cell electrochemical assay for investigating proton transport kinetics can be applied to other electroactive microbial strains.

Electrochemical Detection of Deuterium Kinetic Isotope Effect on Extracellular Electron Transport in Shewanella oneidensis MR-1

Here we present a protocol of whole-cell electrochemical experiments to study the contribution of proton transport to the rate of extracellular electron transport via the outer-membrane cytochromes complex in Shewanella oneidensis MR-1.

전기 화학 탐지의 중수소 활동적인 동위 원소 효과 Shewanella oneidensis 미스터-1에서 세포 외 전자 전송에

Direct electrochemical detection of c-type cytochrome complexes embedded in the bacterial outer membrane (outer membrane c-type cytochrome complexes; OM ...

Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis

Polymodal ion channels transduce multiple stimuli of different natures into allosteric changes; these dynamic conformations are challenging to determine and remain largely unknown. With recent advances in single-particle cryo-electron microscopy (cryo-EM) shedding light on the structural features of agonist binding sites and the activation mechanism of several ion channels, the stage is set for an in-depth dynamic analysis of their gating mechanisms using spectroscopic approaches. Spectroscopic techniques such as electron paramagnetic resonance (EPR) and double electron-electron resonance (DEER) have been mainly restricted to the study of prokaryotic ion channels that can be purified in large quantities. The requirement for large amounts of functional and stable membrane proteins has hampered the study of mammalian ion channels using these approaches. EPR and DEER offer many advantages, including determination of the structure and dynamic changes of mobile protein regions, albeit at low resolution, that might be difficult to obtain by X-ray crystallography or cryo-EM, and monitoring reversible gating transition (i.e., closed, open, sensitized, and desensitized). Here, we provide protocols for obtaining milligrams of functional detergent-solubilized transient receptor potential cation channel subfamily V member 1 (TRPV1) that can be labeled for EPR and DEER spectroscopy.

This article describes specific methods to obtain biochemical quantities of detergent-solubilized TRPV1 for spectroscopic analysis. The combined protocols provide biochemical and biophysical tools that can be adapted to facilitate structural and functional studies for mammalian ion channels in a membrane-controlled environment.

정화 및 분 광 분석에 대 한 TRPV1의 재구성

Polymodal ion channels transduce multiple stimuli of different natures into allosteric changes; these dynamic conformations are challenging to determine ...

Manipulating Living Cells to Construct Stable 3D Cellular Assembly Without Artificial Scaffold

Regenerative medicine and tissue engineering offer several advantages for the treatment of intractable diseases, and several studies have demonstrated the importance of 3-dimensional (3D) cellular assemblies in these fields. Artificial scaffolds have often been used to construct 3D cellular assemblies. However, the scaffolds used to construct cellular assemblies are sometimes toxic and may change the properties of the cells. Thus, it would be beneficial to establish a non-toxic method for facilitating cell-cell contact. In this paper, we introduce a novel method for constructing stable cellular assemblies by using optical tweezers with dextran. One of the advantages of this method is that it establishes stable cell-to-cell contact within a few minutes. This new method allows the construction of 3D cellular assemblies in a natural hydrophilic polymer and is expected to be useful for constructing next-generation 3D single-cell assemblies in the fields of regenerative medicine and tissue engineering.

We demonstrate a novel method for constructing a single-cell-based 3-dimensional (3D) assembly without an artificial scaffold.

인공 비 계 없이 안정적인 3D 셀룰러 어셈블리를 생성 하는 살아있는 세포를 조작

Regenerative medicine and tissue engineering offer several advantages for the treatment of intractable diseases, and several studies have demonstrated the ...

Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition

Oxygen-sensitive proteins, including those enzymes which utilize oxygen as a substrate, can have reduced stability when purified using traditional aerobic purification methods. This manuscript illustrates the technical details involved in the anaerobic purification process, including the preparation of buffers and reagents, the methods for column chromatography in a glove box, and the desalting of the protein prior to kinetics. Also described are the methods for preparing and using an oxygen electrode to perform kinetic characterization of an oxygen-utilizing enzyme. These methods are illustrated using the dioxygenase enzyme DesB, a gallate dioxygenase from the bacterium Sphingobium sp. strain SYK-6.

Here we present a protocol for anaerobic protein purification, anaerobic protein concentration, and subsequent kinetic characterization using an oxygen electrode system. The method is illustrated using the enzyme DesB, a dioxygenase enzyme which is more stable and active when purified and stored in an anaerobic environment.

혐 기성 단백질 정화 및 DesB Dioxygenase 활동을 연구 하 고 억제를 위한 산소 전극을 통해 운동 분석

Oxygen-sensitive proteins, including those enzymes which utilize oxygen as a substrate, can have reduced stability when purified using traditional aerobic ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the progression of cancer, diabetes, neurodegeneration, and aging to name a few. For instance, changes in mitochondrial activity, the cell&#39;s metabolic powerhouse, have been characterized in many such diseases. Generally, the oxygen consumption rates of mitochondria were considered a reliable readout of mitochondrial activity and measurements in some of these studies were based on isolated mitochondria or cells. However, such conditions may not represent the complexity of a whole tissue. Recently, we have developed a novel method that enables the dynamic measurement of oxygen consumption rates from whole isolated fly heads. By utilizing this method, we have recorded lower oxygen consumption rates of the whole head segment in young versus aged flies. Secondly, we have discovered that lysine deacetylase inhibitors rapidly alter the oxygen consumption in the whole head. Our novel technique may therefore aid in uncovering new properties of various drugs, which may impact metabolic rates. Furthermore, our method may give a better understanding of metabolic behavior in an experimental setup that more closely resembles physiological states.

Measuring alterations in metabolic rates is central to understanding the progression of various diseases and aging. Here, we present a novel technique to measure whole head oxygen consumption that more closely resembles the physiological state and may aid in revealing novel drugs that modify mitochondrial activity.

측정 및 해석의 전체 산소 소비 속도 비행 머리 세그먼트

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

Proteomic Analysis of Human Macrophage Polarization Under a Low Oxygen Environment

Macrophages are innate immune cells involved in a number of physiological functions ranging from responses to infectious pathogens to tissue homeostasis. The various functions of these cells are related to their activation states, which is also called polarization. The precise molecular description of these various polarizations is a priority in the field of macrophage biology. It is currently acknowledged that a multidimensional approach is necessary to describe how polarization is controlled by environmental signals. In this report, we describe a protocol designed to obtain the proteomic signature of various polarizations in human macrophages. This protocol is based on a label-free quantification of macrophage protein expression obtained from in-gel fractionated and Lys C/trypsin-digested cellular lysis content. We also provide a protocol based on in-solution digestion and isoelectric focusing fractionation to use as an alternative. Because oxygen concentration is a relevant environmental parameter in tissues, we use this protocol to explore how atmospheric composition or a low oxygen environment affects the classification of macrophage polarization.

We present a protocol to obtain proteomic signatures of human macrophages and apply this to determination of the impact of a low oxygen environment on macrophage polarization.

낮은 산소 환경에서 인간 대 식 세포 분극의 Proteomic 분석

Macrophages are innate immune cells involved in a number of physiological functions ranging from responses to infectious pathogens to tissue homeostasis. ...