이 방법은 ECoG와 전선의 깊이모두에서 기록된 전기 코피널의 직접적인 관계를 확립하여 레이저 를 불러 일으키는 잠재력의 뉴런 기여에 대한 주요 질문에 답하는 데 도움이 됩니다. 이 기술의 주요 장점은 전극 이식이 폴리락틱 쉘에 의해 보호 될 수 있으므로 녹음이 우리의 자유로운 움직이는 쥐에 적용 될 수 있다는 것입니다. 이 방법은 각각의 신경자성의 조사를 촉진하는 정신 질환의 다른 감각 또는 간단한 기능의 자극에 의해 연상 뇌 반응을 기록에 적용 할 수있다.
텍스트 프로토콜에 자세히 설명된 대로 쥐의 마취로 이 절차를 시작합니다. 그런 다음, 입체 장치를 사용하여 마취 마스크에 코가 놓인 쥐의 머리를 고정시하십시오. 외과 적 내성은 쥐가 발가락 꼬집기에 반응하지 않을 때 달성됩니다.
각막 건조를 피하기 위해 안과 연고를 눈에 바립니다. 표준 면도기로 쥐의 두피 상단을 면도합니다. 이어서, 요오드 살균제용용과 75%의 알코올을 이용하여 두피를 살균하여 요오드를 제거한다.
국소 진통제를 위해 두피에 2 %의 리도카인을 주입하십시오. 그런 다음, 근육과 뼈를 투여하여 호흡 과자 생성을 억제합니다. 메스를 사용하여 두피에 약 2 ~3 cm의 중간 절개를합니다.
중간선을 따라 두피의 일부를 자르고 제거하고 두개골을 노출시합니다. 미리 정의된 스테레오탁스 좌표를 기반으로 ECoG 전극의 위치를 표시합니다. 또한, 미드라인에 기준 및 접지 전극의 위치를 표시한다.
두라를 파괴하지 않고 표시된 광경의 두개골에 전기 두개골 드릴을 사용하여 ECoG 나사에 대한 구멍을 뚫습니다. 절연 코팅 구리 와이어에 연결하는 스테인레스 나사를 구멍에 연결하여 대략 1밀리미터 깊이를 유지합니다. 기본 듀라를 관통하지 마십시오.
두개골에 보호 쉘 베이스를 놓습니다. 치과 아크릴을 사용하여 두개골에 인접한 나사로 베이스를 고정하십시오. 미리 정의된 스테레오탁좌에 기초하여 깊이 와이어 전극의 위치를 표시합니다.
이제, 전신 이식을 위해 마크 광경 주위에 두개골에 작은 구멍을 뚫고 조심스럽게 두라를 노출하는 뼈 플랩을 제거합니다. 일반 식염수로 두개골 절제술을 자주 씻으시다. 바늘을 사용하여 피아 마터, 혈관 및 신피질의 표면을 손상시키지 않고 두라를 들어 올리고 자른다.
신피질의 표면에 깊이 와이어 전극을 낮춥다. 그런 다음 천천히 뇌를 목표 깊이로 침투합니다. 왁스와 파라핀 오일을 혼합하여 두개골 절제술을 밀봉하여 후속 실험 조작을 위해 깊이 와이어 전극을 이동할 수 있도록 하십시오.
두개골에 치과 아크릴을 사용하여 전극 장치를 수정합니다. ECoG 나사에 연결하는 각 구리 와이어를 커넥터 모듈의 해당 채널에 용접합니다. 보호 쉘 벽을 베이스로 조립하고 참조 및 접지 전극을 해당 채널에 용접합니다.
오염을 방지하기 위해 테이프를 사용하여 보호 쉘에 캡을 고정합니다. 페니실린으로 쥐를 주입 한 후, 단일 집 온도 및 습도 제어 케이지에 텍스트 프로토콜에 자세히 설명 된 대로 수술 후. 쥐가 기록 환경에 적응하도록 실험 전에 적어도 한 시간 동안 행동 챔버에 쥐를 놓습니다.
레코딩 헤드 스테이지를 전극 모듈과 부드럽게 연결하여 쥐를 무서워하고 전극 모듈을 손상시키지 않도록 합니다. 레이저 생성기를 설정합니다. 광학 광섬유를 연결하고 장비 작업자 매뉴얼에 따라 레이저의 스팟 크기를 조정합니다.
이제 트리거 생성기의 디지털 출력을 레코딩 보드의 디지털 입력 포트에 연결합니다. 실험 챔버의 모퉁이 아래에 비디오 카메라를 설정하여 발이 발이 향각 레이저 자극을 받을 때 쥐의 불각성 동작을 지속적으로 기록합니다. 챔버 상단의 시끄러운 스피커를 통해 지속적인 백색 잡음전달.
장비 작업자 매뉴얼에 따라 기록 시스템을 사용하여 ECoG 및 깊이 와이어 전극 모두에서 전기 생리학적 데이터를 수집합니다. 이제 레이저 펄스를 레이저 발생기를 먼저 배치하여 챔버 바닥의 틈새를 통해 쥐의 앞포의 발바닥에 레이저 펄스를 전달합니다. 그런 다음 스위치를 눌러 레이저 자극을 전달합니다.
여기에 표시된 양자 1 차 모터 코르티, 양자 기본 somatosensory 코르티및 ECoG에서 원시 전기 생리학적 데이터가 있습니다. 명확한 레이저 방출 전위, 또는 LEP 응답, 레이저 자극의 발병 후 감지. 여기에 도시된 그룹 레벨평균 LEP 파 형태는 5마리의 쥐의 6개의 전극에서 형성된다.
LEP 응답은 N1 Wave라는 지배적인 음언 편향으로 구성됩니다. 양자 1 차 체 감각 코르티의 N1 물결은 양자 기본 모터 코르티제보다 짧은 대기 시간과 더 높은 진폭을 보여줍니다. 이 그림은 ECoG에서 샘플링된 LEP와 양측 S1 및 M1의 깊이 와이어 간의 웨이블릿 변형 일관성을 보여주며 레이저는 쥐의 오른쪽 앞포의 발바닥에 전달됩니다.
왼쪽 S1 및 M1은 감마 주파수 대역에서 오른쪽 S1 및 M1보다 일관성이 높은 것으로 나타났습니다. 그것은 개발 후이 기술은 동시에 레이저 에서 불러 올 보이는 잠재력의 신경 기여를 노출하는 무료 이동 쥐에서 ECoG와 늑간 로컬 채우기 잠재력을 모두 기억하는 연구원을위한 길을 포장합니다.
