마우스에서 폐 질환을 모델링하기 위해 실험제는 종종 장내 주사를 통해 투여됩니다. 그러나 이러한 접근법은 1개의 폐를 선택적으로 표적으로 할 수 없으며, 분포는 폐 사이의 비대칭일 수 있다. 마취 된 마우스에 개별 폐를 투여함으로써 실험에이전트를 일방적으로 투여 할 수 있습니다.
수정으로, 이 접근은 두 폐에 걸쳐 증착의 대칭을 향상, 양측으로 사용될 수 있습니다. 연마, 약간의 협응성 및 라벨링을 포함한 카테터 제제는 성공의 핵심 요소입니다. 물론 이 기술을 연습하는 것도 필요합니다.
절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 전문 연구 조수 인 Sumei Liao가 될 것입니다. 발가락 핀치에 대한 응답의 부족을 확인 한 후, supine 방향으로 드레이프 봉합사 라인에 앞개에서 마취, 8 - 10 주 된, C57-블랙 / 6 마우스를 일시 중단합니다. 마우스를 2~3개 후크로 느슨하게 고정하고 테이프를 반복하여 환기 제한을 피하고 발광 다이오드 광섬유 조명기를 켭니다.
연산자가 플랫폼 뒤에 배치하고 마우스에 등갈을 배치합니다. 발루미네이터의 구스넥을 마우스로부터 2~3센티미터 떨어진 곳에 향하게 하여 후두 부위를 피부를 통해 점등합니다. 지배적 인 손에 멸균 집게를 사용하여 구강에서 혀를 그립니다.
비지배적인 손과 멸균 우울기를 사용하여 혀의 뿌리를 평평하게 하여 구로하린을 널리 노출시하십시오. 집게를 풀어낸 후, 지배적인 손을 사용하여 확장된 카테터를 구강을 통해 기관으로 삽관합니다. 주사기의 거품이 호흡마다 위아래로 움직이는지 관찰하여 배치를 확인합니다.
탈경 오른쪽 폐의 선택적 엽 칸포의 경우, 내외 삽관 후 플라스틱 보드 30도 회전하고 테이블에 표시된 대로 마우스 미드라인에 병렬로 카테터의 허브를 안내합니다. 젤 로딩 팁을 사용하여 카테터에 0.3%의 에반스 블루 염료 20마이크로리터를 전달하고 유리 드롭퍼로 1~2개의 100마이크로리터 알리쿼트를 배출합니다. 그런 다음, 카테터를 철회하고, 전체 복구까지 모니터링, 온난화 담요에 동물을 배치하기 전에 30 초 동안 위치에 마우스를 유지합니다.
탈경 좌측 폐의 선택적 엽 캔터의 경우, 자궁 내 삽 관식 후 플라스틱 보드를 영하 74도 회전시키고 카테터를 왼쪽 메인스템 기관지로 부드럽게 전진시키면서 적당한 압력을 90도 아래로 그리고 북엔드쪽으로 배치한다. 왼쪽 하부 폐 세그먼트를 캐너팅 한 후 플라스틱 보드를 영하 30도 회전시키고 겔 로딩 팁으로 0.3 %의 에반스 블루 염료 40 마이크로 리터를 제공합니다. 이어서, 유리 드롭퍼를 통해 1내지 2개의 100-300 마이크로리터 알리쿼트의 공기를 전달하고, 카테터를 철회하여 마우스가 회복할 수 있도록 한다.
오른쪽 전체 폐 투여의 경우, 내내 삽 관식 후 플라스틱 보드를 30도 회전시키고 마우스 미드라인에 병렬로 카테터를 안내하여 오른쪽 단반 캐누레이션에 필요한 깊이에 도달합니다. 빈치피네아 기호의 모양을 확인하고 마우스를 영하 74도 회전하여 에이전트 전달을 위한 중력 지원을 가능하게 합니다. 카테터를 오른쪽 주줄기 기관지의 이륙에 해당하는 위치로 철회하고 카테터의 벨이 아래쪽으로 향하도록 합니다.
오른쪽 폐에 0.3%의 에반스 블루 염료 30개를 전달하고, 그 다음으로 1-2개의 100-300 마이크로리터 알리쿼트의 공기를 전달합니다. 그런 다음 카테터를 철회하고 마우스가 복구할 수 있도록 합니다. 왼쪽 전체 폐 투여의 경우, 내막 캐누레이션 후 플라스틱 보드를 영하 74도 회전시키고 카테터를 왼쪽 주줄기 기관지로 부드럽게 전진시키면서 90도 아래로 그리고 북엔드쪽으로 적당한 압력을 가한다.
빈맥 기호를 확인하고 마우스 86도 회전하여 에이전트 투여에 대한 중력 지원을 허용합니다. 카테터를 왼쪽 주줄기 기관지로 인출하고 카테터의 벨을 회전하여 아래쪽으로 향합니다. 왼쪽 폐에 젤 로딩 팁이 있는 0.3%의 에반스 블루 염료 30개를 전달하고, 그 다음으로 1~2개의 100-300 마이크로리터 알리쿼트의 공기를 전달합니다.
그런 다음, 설명된 대로 마우스가 회복되도록 카테터를 철회한다. FITC-dextran의 양자 전달은 자궁 내 및 대칭 내 막부 투여로 인해 왼쪽 폐에 지적된 상대적 농도가 더 큰 비대칭 폐 빈약한 FITC 형광으로 이어집니다. 이는 장내 투여 후 실험제의 비대칭 폐 전달이 각 주줄기 기관지에 대한 비대칭 프리젠테이션의 결과가 아니라 폐 중량과 질량의 차이에 의해 동등한 주줄기 전달이 희석된다는 것을 시사한다.
투여량 조정 기관내 투여는 폐 빈장체 전달의 대칭성을 향상시킵니다. 그러나 이러한 교정에도 불구하고, 지속적인 이질성은 여전히 오른쪽 폐의 다른 로브 내에서 관찰된다. 장내 출혈로 유발된 섬유성 폐 손상 후 21일 후, 염증은 오른쪽 폐에서 눈에 띄는 부상이 적고 왼쪽 폐에서 주로 관찰됩니다.
반대로, 투여량 조정 된 장간 출혈 성 투여는 왼쪽 폐에 약간 감소 된 부상과 오른쪽 폐에 부상이 증가하며 중간 및 우수한 엽에서 가장 큰 부상이 나타납니다. 전체 폐 투여 하는 동안, 카테터를 철회 하 고 아래로 카테터의 bevel 경향이 잊지 마세요.
