이 프로토콜은 열 화상 진찰을 사용하여 식물 발생을 조절할 수 있는 새로운 화합물을 식별합니다. 이 기술은 시험할 수 있는 식물 종, 화합물의 본질 및 화상 진찰의 모형에 관하여 다재다능합니다. 재배용 식물을 설정하려면 먼저 4센티미터 두께의 미세 버미쿨라이트 층을 10x 20인치 식물 트레이에 넣고 구멍이 없는 20인치 식물 트레이를 넣고 트레이에 씨앗 홀더를 2센티미터 떨어져 놓습니다.
씨앗 홀더를 vermiculite로 채우고 씨앗의 절반이 노출되도록 한 해바라기 시드를 각 홀더에 아래로 가리킨다. 모든 씨앗이 도금되었을 때, 위의 물로 2 센티미터의 고급 버미첼라이트와 안개로 덮습니다. 1시간 후 트레이를 뚜껑으로 덮고 식물을 온실의 성장 챔버에 놓습니다.
수경 시스템을 설정하려면 증류수로 수경 재배에 적합한 크기의 컨테이너를 채우고 제조업체가 지시한 대로 일반 수경 비료를 추가하십시오. 그런 다음 공기 및 물 펌프를 사용하여 결과 수경 솔루션을 일정한 움직임으로 방출합니다. 수경 부동자를 준비하려면 2센티미터 두께의 확장 된 폴리스티렌 폼 시트를 용기의 치수로 자르고 나무 굽기 도구를 사용하여 거품에 1 ~ 2 센티미터 직경의 구멍을 만듭니다.
그런 다음 플로터를 수경 시스템에 넣습니다. 심은 지 5일 후, 모종을 버미쿨라이트에서 부드럽게 꺼냅니다. 즉시 모종을 물 용기에 넣고 30분 동안 여분의 버미쿨라이트를 제거하고 나머지 침구를 부드럽게 합니다.
떠오르는 기본 뿌리가 보이면 필요에 따라 대각선을 손으로 제거합니다. 종자 홀더 내의 묘목을 수경 계통의 제조된 폴리스티렌 폼 플로터로 옮는다. 수경 재배에서 이틀 동안 식물을 성장시다.
작은 화합물 라이브러리의 화학 물질이 실온에서 해동하게하십시오. 부정적인 대조군 처리를 위한 6개의 capless 2 밀리리터 마이크로튜브, ABA 처리를 위한 3개의 관 및 triplicate에 관심 있는 20의 화학제품의 효력의 분석을 위한 마지막 60 개의 관을 레이블. 각 시험관에 각 화학물질 10마이크로리터, 10밀리머 ABA의 마이크로리터, 디메틸 설프리산화물 10개를 3개의 ABA 튜브에 넣고, 6개의 대조관에 디메틸 설프리산화물 10마이크로리터를 첨가한다.
그런 다음 10 밀리머 MES 칼륨의 990 마이크로 리터를 각 튜브에 조심스럽게 섞습니다. 튜브를 튜브 랙에 배치하여 양수 및 음수 제어 및 실험 튜브를 랙 내에 균등하게 분포하여 위치 관련 편향을 고려합니다. 열 화상 카메라를 설정하려면 먼저 복사 스탠드에 카메라를 장착하고 모든 케이블을 랩톱에 연결합니다.
랩톱을 켜기 전에 카메라를 켜고 열 화상 이미징 분석 소프트웨어를 엽니다. 기록 매개 변수를 조정하려면 레코드 버튼을 통해 마우스를 롤하여 레코드 설정에서 렌치 아이콘을 선택하고 적절한 레코드 모드 및 옵션을 선택합니다. 묘목의 처리를 위해, 조심스럽게 씨앗 홀더를 들어 올려 물을 포함하는 얕은 접시에 뿌리를 찍어.
물 아래 각 모종의 기본 뿌리를 잘라 0.8 받는 사람 1 씨앗 홀더의 가장 기초 끝 아래 1 센티미터 캐피션을 방지 하 고 화학 물질의 한 튜브에 갓 잘라 식물을 삽입. 모든 묘목이 옮겨지면 열 화상 카메라 아래에 식물을 배치하고 모든 식물이 카메라의 시야 내에 있는지 확인합니다. 코틸레돈의 표면에 카메라를 집중하려면 컨트롤 Alt A를 누르고 동영상 녹화를 클릭합니다.
녹음을 확인하는 새 창이 열립니다. 1~2시간 후에 는 녹음을 중지합니다. 데이터 분석을 위해 올바른 seq 파일을 열고 동영상을 일시 중지합니다.
관심 있는 3x3의 측정 커서 영역을 클릭하고 마우스를 첫 번째 식물의 코틸레돈의 중앙 위로 이동합니다. 이미지를 왼쪽 단추로 클릭하여 코틸레던에 레이블을 지정합니다. 제1 식물의 제2 코틸레던에 동일한 방식으로 라벨을 부착합니다.
모든 식물이 두 개의 커서로 레이블이 지정되면 관심 아이콘의 편집 영역을 클릭하고 보류를 클릭하고 스크롤하여 관심 있는 모든 지역을 선택합니다. 다음으로 통계 뷰어 아이콘 위로 마우스를 롤하고 시간적 플롯을 선택합니다. 새 창이 열립니다.
영화를 실행하면 그래프가 데이터로 채워집니다. 그런 다음 그래프 창에서 이중 화살표를 클릭하여 새 메뉴를 열고 저장 아이콘을 클릭하여 데이터를 저장합니다. 적색 염료 에리스로신 B를 사용하면 10 분 이내에 해바라기 묘목의 코틸레톤으로 잘라 낸 뿌리를 통해 눈에 띄게 흡수되는 화학 물질의 능력을 보여줍니다.
식물이 ABA로 처리될 때, 스토마탈 조리개 감소 및 구내 전도도의 감소와 연관되는 30분 이내에 해바라기 코틸레던에서 잎 온도의 증가가 감지됩니다. 또한, 10마이크로몰러 ABA로 치료 후 15분, 5개의 마이크로몰라 ABA로 치료 후 20분 후에 엽기 온도가 관찰되어 열화상에 의한 잎 온도 측정이 장내 조리개 및 전도도를 측정하는 좋은 프록시임을 입증한다. 본 대표적인 실험에서, 표준 점수 기반 통계 치료는 장토마탈 폐쇄 또는 개방을 촉진하는 화학 물질의 식별을 허용한다.
발생에 화합물의 영향을 측정 하려면, 빛의 최적의 조건에서 식물을 성장 하는 것이 중요 하다, 습도, 그리고 온도. 이 프로토콜은 대부분의 디코트에 적용할 수 있습니다. 또한 엽록소 형광을 측정하여 광합성 성능에 새로운 화합물의 효과를 평가하는 데 사용할 수 있습니다.
