이 프로토콜은 비침습적 및 고해상도 표현 및 성인 제브라피시 심장 기능의 분석을 허용합니다. 이 방법은 성인 심장 질환 모델 및 잠재적인 약물 화면의 유효성 검사에 사용할 수 있습니다. 이 기술은 정확하고 재현 가능한 결과를 제공하는 올바른 이미징을 위해 물고기의 신속한 위치를 허용합니다.
그것은 비침습적이며 물고기의 빠른 회복을 허용하는 수중 수행입니다. 이미지 수집을 위한 플랫폼을 설정하려면 작은 가위 나 메스를 사용하여 12시 위치에서 스폰지에 절개를합니다. 스폰지를 유리 용기에 놓습니다.
양면 테이프를 사용하여 초음파 플랫폼에 스폰지가 들어있는 유리 용기를 부착합니다. 유리 용기가 플랫폼의 중앙에 단단히 부착되어 있는지 확인합니다. 플랫폼 홀더 왼쪽의 손잡이를 사용하여 플랫폼을 약 30도 앞으로 기울이게 합니다.
유리 용기에 밀리리터 트리카인 메탄술포네이트당 0.2밀리그램을 함유한 어류 시스템 물 약 200밀리리터로 채웁니다. 트랜스듀서의 노치를 작업자로 돌리는 작업 레일 스테이션의 마이크로 조작기 홀더 내에 트랜스듀서를 삽입합니다. 스테이지에 대해 작업 측세로 접점을 평행하게 유지합니다.
현재 연결된 트랜스듀서 레일 시스템이 x 와 y 축을 따라 이동할 수 있도록 양쪽에 약 10cm의 공간을 남겨 둡니다. 제어 소프트웨어에 로그인하고 마우스 작은 혈관을 선택합니다. 연구에서 유도된 각 동물에 대한 새로운 연구와 새로운 시리즈를 만듭니다.
브라우저 페이지의 화면 왼쪽 하단에 있는 새 스터디 버튼을 누릅니다. 뷰는 B 모드에서 시작됩니다. 생선 그물을 사용하여 트리카인밀리리터 당 0.2 밀리그램의 시스템 물을 포함하는 작은 탱크로 물고기를 옮킵니다.
물고기가 완전히 마취 될 때까지 기다립니다 아무 움직임이나 터치에 대한 응답없이. 물고기를 부드럽고 빠르게 유리 용기에 넣고 스폰지를 물고기의 복부 면이 위를 향하여 이전에 만든 절개로 옮겨 넣습니다. 레일 시스템의 핸들을 사용하여 트랜스듀서를 부드럽게 낮추고 작업자를 향한 트랜스듀서의 노치로 물고기의 복부 측면을 닫습니다.
물고기에서 2 ~3 밀리미터의 여유를 남겨 주세요. 물고기 심장이 시각화 될 때까지 세 축 모두에 미세 조작기를 사용하여 트랜스듀서에 대한 플랫폼을 조정합니다. 심장을 현지화한 직후 B 모드로 선택하거나 유지하며 확대하여 필드를 줄여 심장을 자세히 살펴봅니다.
필요한 경우 동적 범위를 45~50데시벨로 설정하여 이미지의 품질또는 대비를 향상시킵니다. 더 많은 컨트롤 옵션에서 B 모드 컨트롤로 이동한 다음 변경 한 번 모드 사전 설정으로 변경 저장합니다. 모드 사전 설정을 탭하여 새 시리즈를 이미지화하기 전에 매번 최적화된 이미지 수집 설정을 선택합니다.
긴 축 평면에서 원하는 만큼 이미지를 가져 가라. 다음으로, 혈류 검출 및 취득을 위해 도플러색으로 전환합니다. 터치스크린을 사용하여 사분면을 대실 밸브 위에 배치하고 적색 신호로 구별되는 유입을 현지화합니다.
프레임 속도를 높이기 위해 사분면 영역을 가능한 한 줄입니다. 심실 혈액 유입 속도를 샘플링하기 위해 펄스 웨이브 도플러 이동을 활성화합니다. 샘플 볼륨 게이트를 대용량 밸브 중앙에 배치하여 최대 유량 속도를 감지합니다.
빨간색 신호가 더 황색이됩니다. 손가락을 사용하여 화면의 펄스 웨이브 각도를 조정하여 혈액 유입 방향에 정렬합니다. 시작 또는 업데이트를 눌러 심실로 흐르는 혈액의 속도를 샘플링합니다.
심실과 구균 사이의 접합에 도플러 사분면색상을 배치하여 유출 속도를 결정하고 흐름을 국소화합니다. 이것은 파란색 신호로 구별됩니다. 심실 전구 접합 직전에 샘플 볼륨 게이트를 배치하고 혈류방향에 맞게 각도 보정 선을 조정합니다.
신호 피크를 완전히 감지하고 추적하기 위해 유량 속도 패널에서 위점을 올리는 기준선을 조정합니다. 이미지 수집이 완료되는 즉시, 티스푼을 사용하고 트리카인이없는 일반 시스템으로 물고기를 옮기고 물고기를 회복시키십시오. 회복을 돕기 위해, 물과 산소 전달의 폭기를 촉진하기 위해 전송 파이펫을 사용하여 아가미 위에 반복적으로 물을 분출.
일반적으로 아가미 운동과 수영을 재개하는 데 30 초에서 2 분 정도 걸립니다. 이미지 분석 소프트웨어를 엽니다. 이미지를 선택하고 이미지 처리 아이콘을 클릭합니다.
심실 벽 또는 혈류 패턴을 명확하게 시각화할 수 있도록 이미지의 밝기와 대비를 조정합니다. B 모드 이미지를 사용하여 심장 패키지 측정의 파라서널 긴 축 옵션에서 드롭다운 목록을 엽니다. LV 추적을 선택하고 systole 및 diastole에서 심실 내부 벽을 추적하여 수축기 및 디아스톨 및 확장기 부피 및 종단 수축기 부피의 심실 영역을 얻습니다.
이 연구에서B 모드 이미지는 슬래버와 디아스톨의 심실 내부 벽을 추적하고 챔버 및 벽 치수와 같은 치수 데이터를 얻을 수 있었습니다. 또한 발수 부위 변화 및 배출 분획을 포함한 심박수, 뇌졸중 부피 및 심장 출력뿐만 아니라 심실 수축기 기능의 파라미터와 같은 기능적 데이터를 얻을 수 있었습니다. 컬러 도플러 모드 이미지를 사용하여 대실 밸브의 수준에서 측정또한 심실 유입 및 유출 혈중 속도를 제공했다.
펄스 파 도플러 이미지에 기초하여, 심박수 값은 3개의 연속 대동맥 유동 피크를 추적해서 생성되었습니다. 가장 중요한 것은 정확한 이미징을 위해 초음파 플랫폼과 물고기를 올바르게 배치하고 트리카인에 대한 물고기 노출을 최소화하는 것입니다. 이 절차를 지원하는 추가 방법은 심장 조직 구조 또는 세포 죽음을 평가하기 위하여 부정맥 또는 조직학 방법 같이 심장 기능 장애의 급속한 검출을 위한 물고기 심전도를 포함합니다.
이 기술은 제브라피시 심장 기능의 평가를 허용하고 제브라피시 심장 병 모형에 있는 심장 표현형을 설치합니다. 그것은 또한 새로운 약물을 테스트 할 수 있습니다., 심장 부상 및 재생 능력 연구. 트리카인 MS-222는 피부, 눈 및 호흡기 자극제입니다.
트리카인 용액을 준비할 때 보호 장비에는 방진 마스크, 안구 방패 및 장갑이 포함되어야합니다.
