이 프로토콜은 테라헤르츠 이미징과 분광법을 사용하여 두 번째 수술의 필요성을 실질적으로 감소시키는 것을 목표로 유방 종양의 수술 마진을 평가합니다. Terahertz 화상 진찰은 비 이온화 및 생물학적으로 안전한 방법 프로세스에서 그들의 광학 속성에 근거를 둔 암과 비암 조직을 구별하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이 기술은 유방암 마진 평가를 위해 개발되었습니다, 그러나 외과 절개 및 마진 평가를 요구하는 그밖 고형 종양에 적용됩니다.
이 방법은 물리적 슬라이스에 대한 필요없이 FFPE 조직 블록의 내부의 이미징을 허용, 정확한 어떤 깊이에서 종양 마진의 식별을 용이하게. 이 프로토콜은 시각적 데모없이 이해하기 어려울 수있는 조직 처리 및 단계 균형과 같은 중요한 단계의 성능을 요구합니다. 바이오 해드 백으로 티슈 커버 스테인리스 스틸 금속 트레이를 처리하기 전에 모든 적절한 실험실 재료를 덮은 트레이의 손이 닿지 않는 곳에 배치하십시오.
다음으로, 신선한 종양 샘플을 트레이의 페트리 접시에 옮기고 총 검사를 사용하여 충분히 평평하고 혈액과 혈관이 거의 없는 종양의 측면을 선택합니다. 이어서, 1급 필터 용지상에 영상을 배치하여 과도한 수요 배지를 제거하고, 유체 또는 분비물의 조직을 지우고, 종이가 포화됨에 따라 종양을 건식 지점으로 재배치한다. 종양건조를 5분 동안 유지하면서 1.2mm 두께의 폴리스티렌 플레이트를 약 37mm 직경 내에 스캔 창에 놓고 스캔 창과 폴리스티렌 플레이트를 테라헤르츠 이미저의 샘플 단계에 놓습니다.
메인 창에서 고정 점 스캔 아이콘을 클릭하여 테라헤르츠 안테나를 활성화하고 폴리스티렌 플레이트의 한 지점에서 반사된 테라헤르츠 신호를 보내고 수신하기 시작합니다. 모터 스테이지 대화 아이콘을 클릭합니다. 모터 컨트롤 창이 열립니다.
주 창에서 폴리스티렌의 반사된 펄스를 중심으로 광학 지연 축 화살표를 클릭하여 광학 지연 축을 조정합니다. 데이터 수집 설정 버튼을 클릭하여 데이터 수집 설정 대화 창을 열고 광학 지연 값을 5볼트에서 4볼트로 변경합니다. 마이크로미터 스케일로 스캐닝 스테이지의 수직 위치를 조정하고, 이차 펄스의 최소가 가장 강할 때까지 모터 제어 창의 축을 광학 지연을 조정하여 측정되는 반사 된 신호의 범위 외부에 1 차 반사를 넣습니다.
샘플 스테이지를 평준화하고 참조 신호를 기록하려면 모터 제어 대화 버튼을 클릭하여 모터 제어 창을 열고 모터 위치를 조정하는 동안 시간 도메인 신호가 보이도록 모터 제어 창과 기본 소프트웨어 창을 재배치합니다. 모터 컨트롤 창에서 다음 단계를 사용하여 A 축을 평준화하려면 x 축값을 0에서 음수 10으로 변경하고 Enter를 적중시합니다. 스테이지는 A 축의 영하 10mm 위치로 이동하고 신호 위치의 변화가 메인 창에서 관찰됩니다.
조정 가능한 마이크로미터 스케일을 사용하여 신호의 최소 피크를 이전 수직 위치로 다시 이동하고 A 축 값을 10으로 변경합니다. 입력을 클릭합니다. 스테이지는 A 축의 10mm 이상의 위치로 이동하고 신호의 변화가 다시 관찰됩니다.
신호가 이전 위치에서 이동한 방향과 거리가 A 축 값을 다시 마이너스 10으로 변경합니다. 신호가 원래 수직 위치로 돌아갑니다. 스캐닝 스테이지의 A 축에서 레벨링 나사를 회전시키고 신호를 동일한 방향으로 두 배로 이동하여 스테이지가 원래 위치에서 이동합니다.
스캐닝 스테이지의 마이크로미터를 사용하여 신호를 원래 위치로 이동하고 10및 마이너스 10의 신호가 원래 위치에 초점을 맞출 때 신호가 최고점에 같을 때까지 조정을 반복한다. A 축의 평준화가 완료되면 A 축 값을 0으로 변경하고 B 축에 대해 동일한 절차를 반복합니다. 두 축이 모두 수평화되면 A축과 B 축을 모두 0밀리미터로 반환하고 모터 제어 창을 둘러본 다음 신호가 약간 이동한 경우 원래 위치에 있는지 확인합니다.
이 신호를 데이터 수집 속성 창의 참조로 기록하려면 평균 값을 5로 변경하고 다른 모든 매개 변수를 기본 설정에 둡니다. 그런 다음 새 참조를 클릭합니다. 평균 카운터는 0에서 20까지 계산됩니다.
카운터가 20에 도달하면 평균 값을 하나로 변경하고 확인을 클릭합니다. 폴리스티렌의 반사된 신호는 후속 검사에 대한 참조로 저장됩니다. 모든 파라미터가 설정된 경우, 이미징 창을 스캐닝 단계에서 조직 처리 영역으로 옮기고 종양을 폴리스티렌 플레이트에 장착한다. 핀셋으로 종양 내의 기포를 제거하거나 공기 간격이 최소화 될 때까지 샘플을 폴리스티렌에 부드럽게 굴립니다.
시험 샘플 주위에 일정한 간격으로 absorptive 스페이서를 놓고 종양 위에 또 다른 폴리스티렌 플레이트를 놓습니다. 종양 표면을 가능한 한 평평하게 부드럽게 누르고 시료 창에 종양과 폴리스티렌 플레이트 배열을 테이프로 놓습니다. 평평한 조직 표면과 폴리스티렌 플레이트와의 좋은 접촉은 기포, 과잉 유체 및 고르지 않은 표면이 종양 조직 이미징을 망칠 수 있기 때문에 중요합니다.
샘플 창을 뒤집고 종양 사진을 찍어 방향기록을 보관합니다. 샘플 창을 스캔 단계로 반환하고 이미지 매개 변수 대화 버튼을 클릭하여 이미지 수집 매개 변수 창을 엽니다. 축의 값을 1최소, 축 최대, 축 2 최소 축 및 축 2 최대값으로 설정하여 이미징 창에서 종양의 위치를 완전히 둘러싸습니다.
이미징 스캔을 위해 축 1단계와 축 2단계를 0.2밀리미터로 설정합니다. 그런 다음 측정 메뉴에서 Flyback 2D 스캔을 선택하고 팝업 창에 스캔 데이터를 저장하는 폴더 및 파일 이름을 만듭니다. 이 분석에서는, 왼쪽 유방 요추 절제술 수술 절차를 통해 49 세 여자에게서 얻은 1-2 개의 침투 하는 덕트 암 등급을 평가하였다.
테라헤르츠 이미지를 병리학 이미지와 상호 연관시킨 결과, 암 부위가 지방 지역보다 더 높은 반사를 보였다는 것이 분명했습니다. 토모그래피 이미징은 주파수가 증가함에 따라 두 주파수모두에서 지방보다 높은 값을 나타내는 암 픽셀로 지방 픽셀에서 암에 대한 계산된 흡수 계수 값이 증가했습니다. 대조적으로, 주파수가 증가함에 따라 두 조직의 굴절률은 감소했습니다.
동일한 종양의 분광법 분석은 종양으로부터 추출된 두 단면도에 대해 추출된 흡수 계수 및 굴절률 모두의 주파수 범위에 대한 양호한 합의를 나타낸다. 조직의 불충분 한 처리 오해의 소지가 이미징 결과 이어질 수 있습니다., 예를 들어 건조 되지 않은 종양 샘플 내에서 과잉 액체의 존재 로 인해 종양에서 암의 더 큰 존재를 제안 하는 결과. 테라헤르츠 이미지 데이터상에서 추가 특성화를 수행하여 조직의 주파수 종속 특성에 대한 정보를 얻고 통계 분석은 자동화된 이미지 세분화를 위해 수행될 수 있다.
이 기술은 치명적인 고등급 종양에서 낮은 등급의 종양을 구별하기 위하여, 그(것)에 있는 덕트 암종의 서명을 조사하기 위한 화상 진찰 및 분광법 알고리즘의 발달로 이끌어 냈습니다. 암 조직 및 포르말린 용액을 신중하게 처리하고 종양 조직에 접촉하는 모든 시스템 요소 또는 도구를 적절하게 청소하거나 폐기해야합니다.
