이러한 연구는 대체 연구 개발 재단 (107588), 국립 보건 연구소 (1U54CA136465-04S1) 및 캘리포니아 유방암 연구 프로그램 (201B-0141)에서 보조금에 의해 부분적으로 자금을 지원했다. 우리는 박사 감사합니다. 의 관대 한 기부에 대한 앤드류 윌버와 R. 스콧 McIvor 자신의 <pkt2 lubig=""> transponson과의 pKa ​​/ hUbiC-SB11 트랜스 플라스미드. 우리는 감사 존 Tamaresis, 박사 학위를 인정 통계적 방법에 대한 조언, 티모시 브라운은 유동 세포 계측법을 수행하기위한, 마이그레이션 분석에 대한 조언을 조젯 HENRICH, 낸시 Bellagamba에 대한 THR 표본의 수집을 용이하게. </pkt2>

대퇴 머리는 스탠포드 의과 대학에서 정형 외과의학과 과목 THR 수술을받은 환자에서 수집되었다. 모든 조직은 스탠포드 대학 연​​구 준수 부서의 규정에 따라 드 확인 된 표본으로 수집 하였다. 1. 유방암 세포주 (들)을 선택 <ol><li> 구하는 루시 페라 제 또는 GFP 리포터 구성체 원하는 유방암 세포주 (들)를 형질. 이하의 실험은 슬리핑 뷰티 트랜스포존 플라스미드 pKT2 / LuBiG로 형질 MDA-MB-231, MCF-7 유방암 세포주 반딧불이 루시퍼 라제의 안정한 발현을 위해 설계 (fLuc) 및 향상된 녹색 형광 단백질 (EGFP)를 사용하여 수행 하였다 및 트랜스 플라스미드 약동학 / hUbiC-SB11 45,46. 주 : 형질 감염된 세포주 MDA-MB-231-fLuc-EGFP 및 MCF-7-EGFP fLuc라고 칭한다. </li></ol> 2. 격리를 조직 F대퇴 머리에서 ragments <ol><li> THR 수술 후 생리 식염수로 채워진 멸균 용기에 폐기 된 대퇴골 두를 수집합니다. 실험실로 시편을 전송하고 수술 1-3 시간 이내에 처리합니다. 주 : 처리 지연이있는 경우, 4 ℃에서 시험편을 배치. </li><li> 실험의 각 유형은 아래 규정 된 멸균 장갑, 수술 rongeur, 집게, 비커를 70 % 이소프로판올로 악기 및 조직 배양 용기를 씻어 : 층류 조직 문화 후드에 흡수 매트에 다음 항목을 배치하여 작업 영역을 준비 . </li><li> 멸균 수술 장갑을 착용 한 손으로 둥근 대퇴골의 머리를 잡아 대퇴골의 노출 된 상부 샤프트에서 원하는 크기 (~ 2-5mm)의 소주 뼈 조각을 추출하는 반면에 rongeur를 사용합니다. 배양 용기 내로 뼈 조각을 전송 (예를 들면, 6, 12, 또는 조직 배양 플레이트 또는 마이그레이션 챔버 24 웰), 증식의 종류에 따라, COL또는 마이그레이션 onization 실험, 단계 3, 4 또는 5에 기재된 바와 같이. 주 : 각 특정 증식, 군체 또는 마이그레이션 분석을위한 초기 단계를 완료 한 후 전술 한 바와 같이 뼈 조직 단편을 수확한다. 도 2에 도시 된 바와 같이, 단편의 크기의 범위 일 것이다. 파편 전 또는 표준화의 목적으로 다양한 실험을 칭량 할 수있다. </li></ol> 뼈 조각에 인접 3. 공동 배양 유방암 세포는 BLI를 사용하여 유방 세포의 증식을 측정하는 <ol><li> 실험 전에, 2 × 105 유방암 세포 / 50 μL를 함유하는 현탁액을 제조하고, 배양 뼈 조각을 고정 뼈 왁스 플러그를 준비한다. 3 조각으로 P200 마이크로 피펫 팁을 잘라 뼈 왁스의 작은 (~ 35 mg)을 조각을 잘라 &#39;쿠키 커터 (cookie cutter)&#39;방식으로 가장 큰 조각의 좁은 끝을 사용합니다. 페트리 접시에 뼈 왁스 플러그를 꺼내 작은 조각의 넓은 끝 부분을 사용하여저장. </li><li> 각 웰의 12시 방향에 뼈 왁스의 조각을 놓고 부드럽게 멸균 장갑을 낀 검지 손가락으로 누르십시오. </li><li> 피펫 6- 웰 플레이트의 각 웰의 중앙에 DMEM-10 % FBS + 펜 스트렙토 1 × 105 유방암 세포를 포함하는 세포 현탁액 50 μL. (또는 원하는 경우 분산 패턴에 씨앗 세포.) 세포 부착을 촉진하기 위해 45 분 동안 37 ° C 조직 문화 인큐베이터에서 접시를 놓습니다. </li><li> 각각의 실험은 물론 뼈 왁스의 1 개에 1 뼈 조각을 배치하고 고정 rongeur와 부드러운 압력을 적용합니다. 아래 세 개의 우물 만 컨트롤과 같은 뼈 왁스를 포함하면서, 주어진 THR 표본에서되도록 3 뼈 조각이 상위 세 우물에 배치됩니다 세중에서 실험을 수행합니다. </li><li> 5 ㎖ 피펫을 사용하여 조심스럽게 천천히 유방암 세포 또는 뼈 조각을 빠지 피하기 위해 각 웰의 측면에 DMEM-10 % FBS 5 mL를 전달한다. 37 접시를 놓고76; 20 ~ 24 시간 동안 C 조직 문화 인큐베이터. </li><li> 생물 발광 이미징을 수행하기 위해 (BLI)는 인큐베이터에서 플레이트를 제거하고, 각 웰 (300 ㎍ / ml의 농도를 달성하기 위해) 루시페린 기질을 추가한다. 이미지 다음 매개 변수를 사용하여 IVIS 이미징 플랫폼에서 즉시 플레이트 : 1의 f- 스톱, 작은 비닝 (binning), 1 초의 노출 시간, 레벨 D.는 신호 각각의 강도뿐만 아니라 평균 복사 휘도 (광자 / 초 / 제곱 센티미터를 / 측정 스테 라디안). </li><li> 모든 실험 및 제어 우물의 평균 복사 휘도를 정량하는 관심 영역 (ROI)을 정의하는 이미징 소프트웨어를 사용합니다. 엑셀 시트로 내보내기 평균 복사 휘도 값은 통계를 수행하고 그래프를 생성합니다. </li></ol> 뼈 조각에 직접 시드 4. 공동 배양 유방암 세포는 식민과 세포 수를 연구에 <ol><li> 24 웰 조직 배양 플레이트의 웰에 직접 빈 뼈 조각을 배치 (1 단편 / 웰) 집게를 사용한다. </li><li> 삐악 삐악 울다직접 각각의 뼈 조각 위에 한 X 10월 3일부터 6일까지 유방암 세포를 함유하는 DMEM-10 % FBS의 50 μl를 세포 현탁액 액적 ette. 세포 부착을 촉진하기 위해 45 분 동안 37 ° C 조직 문화 인큐베이터에서 접시를 놓습니다. 조심스럽게 조각이 완전히 매체에 빠져들 것을 각 웰 등의 측면에 1-2 ml의 DMEM-10 % FBS를 추가합니다. 20 ~ 24 시간 동안 37 ° C 조직 문화 인큐베이터에서 접시를 품어. </li><li> 배양 후, 각 웰에 1 ㎖의 DMEM-10 % FBS를 함유하는 새로운 24 웰 플레이트에 각 골 조직 단편을 전송하는 집게를 사용한다. BLI을 수행하려면, 단계 3.6-3.7 위를 따르십시오. 또한, 단편을 형광 현미경을 사용하여 볼, 또는 단계 6에 기재된 유방암 세포 수 및 특성에 대한 분석을위한 인구 골수를 얻기 위해 플러싱 될 수있다. </li><li> BLI, 피펫 형광 라벨링 비스포스포네이트 용액을 5 μL (프리 다음, 형광 현미경으로 질적 평가를 위해 그대로 단편을 제조하기 위하여뼈 조각의 광물의 spicules 레이블을 각 웰에) 제조업체의 지시에 따라 깎았 다. 또 다른 24 시간을위한 조직 문화 인큐베이터에서 접시를 품어. </li><li> 형광 비스포스포네이트 라벨링 용액 배양 24 시간 이후, 화상 GFP (485 ㎚) 및 비스포스포네이트 라벨 (680 ㎚)로 구성된 형광 현미경을 사용하는 페놀 레드없는 배지 뷰로 함유 조직 배양 플레이트에 프래그먼트를 전송하는 집게를 사용한다. </li></ol> 5. 뼈 조직 파편과 배양 된 뼈 조각 상층 액에 유방암 세포의 마이그레이션을 측정 <ol><li> 뼈 조직 배양 상층 액을 향해 마이그레이션. 주 : 중으로 지정된 THR 시료로부터되도록 세 조각을 실험을 수행 상등액 3을 생성하는데 사용된다. 각 실험의 경우, 마이그레이션 뼈 상층 액 대 제어 매체만을 포함하는 세 우물을 포함하는 세 우물에서 비교된다. <ol><li> 뼈 TIS를 생성웰 당 2.2 ㎖의 DMEM-10 % FBS를 함유하는 12 웰 플레이트에 뼈 조각을 배치하여 상청액 고소. 24 시간 동안 37 ° C 조직 문화 인큐베이터 문화. 24 시간에 매체를 철회하고 2.2 ml의 신선한 DMEM-10 % FBS로 교체. DMEM-10 % FBS를 함유하는 동일한 방식으로 치료 대조군 웰. 주 : 매체는 수술로 인한 조직 외상에 반응하여 분비되는 요인을 제거하기 위해 24 시간으로 변경됩니다. 뼈 조직이 상청액에 생성되기 때문에 단지 유방암 세포 이동에 FBS의 기여도를 제어하기 위해 포함 FBS 함유 배지를 함유하는 배지를 웰 FBS 함유. </li><li> 48 시간에서, 수용기 판의 각 웰에 뜨는 / 제어 매질과 0.9 ㎖를 피펫을 모은다. 삽입은 나중에이 우물에 배치됩니다. 인서트 심는 조직 배양 인큐베이터에서 수용기 판을 인큐베이션. 주 : 나머지 상청액 (~ 증발시킨 후 1 ml)을 secretome 사실상의 분석을 위해 수집 될 수있다RS는 경우 44 원했다. </li><li> 트랜스 웰 삽입을 시드, 표준, 빈 24 잘 조직 배양 플레이트에 배치합니다. 도 1a에 도시 된 바와 같이, 각 인서트의 상부, 내부 막 표면 상 DMEM-10 % FBS에서 1 × 105 유방암 세포를 함유하는 350 μL 피펫 세포 현탁액. 첨부 파일을 촉진하기 위해 45 분 동안 37 ° C 조직 문화 인큐베이터에 시드 삽입을 포함하는 24 웰 플레이트를 놓습니다. </li><li> 셀 인서트에 부착 한 후에, 제조자의 지시에 따른 수용기 판에 인서트를 전송하는 집게를 사용한다. 각도 삽입 막 잘 뜨는 수신기 사이의 거품 형성을 방지하기 위해 잘 수신기로 배치 각 삽입. 37 ° C 조직 문화 인큐베이터에서 20 시간 동안 삽입과 수신기 판을 품어. 참고 : 삽입 막 잘 supernatan 수신기 사이의 거품에 대한 수신기 판의 바닥면을 확인t. 기포가 보이면, 특정 삽입물을 제거하고 기포가 존재하지 않을 때까지 잘 수신기에 다시 배치합니다. </li><li> 20 시간 사용 집게 후 수신기 판에서 삽입을 제거합니다. 단계 절차를 사용하여 이미지를 3.6-3.7로 마이그레이션과 수용기 판 웰의 바닥에 부착 한 세포를 BLI을 수행한다. </li></ol></li><li> 뼈 조직편 향해 마이그레이션. 참고 : 중으로 주어진 THR 표본에서되도록 3 조각을 실험을 수행 3 별도의 삽입에 배치하고, 3 유리 구슬은 컨트롤과 같은 3 별도의 삽입에 배치됩니다. <ol><li> 물론 각각에 0.9 ml의 DMEM-10 % FBS를 피펫 팅하여 수신기 판을 준비합니다. 삽입을 준비하는 동안 조직 문화 인큐베이터로 배치합니다. </li><li> 인서트 시드, 뚜껑이있는 플라스틱 미세 원심 분리 관 상자의 표면에 그들을 반전. 1 × 105 유방암 세포 d에 함유 DMEM-10 % FBS의 50 μl를 세포 현탁액 방울을 피펫irectly (역 삽입에 위를 향) 각 삽입 막의 외부, 바닥 표면에. 뚜껑을 미세 원심 튜브 상자가 열려 금이 커버 및 세포 부착을 촉진하기 위해 45 분 동안 37 ° C 조직 배양기로 전송. </li><li> 조직 문화 후드에 미세 원심 튜브 상자로 이동하고, 오른쪽면이 위로 시드 삽입을 켜고 수신기 판의 우물에 전송할 집게를 사용합니다. 각 삽입 컵에 피펫 0.450 ml의 DMEM-10 % FBS. 집게를 사용하여 각 준비 삽입 컵에 하나의 뼈 조직 조각 (~ 3mm)를 전송합니다. 선택적으로, 추가 우물에 유리 구슬에게 부정적인 컨트롤을 사용합니다. 20 시간 동안 조직 문화 인큐베이터에서 접시를 놓습니다. </li><li> 이주를 측정하기 위해, 웰 당 1 ㎖의 DMEM-10 % FBS를 함유하는 표준 24- 웰 조직 배양 플레이트를 준비한다. 인큐베이터에서 수신기 판을 제거하고 표준 판의 별도의 우물에 각에서 삽입을 뼈 조각과 구슬을 전송하는 집게를 사용합니다. 루시페린 추가기질을 각 웰에 (300 ㎍ / ml의 최종 농도를 달성하기 위해) 및 단계 3.6-3.7의 절차를 사용하여 수행 BLI. </li></ol></li></ol> 6. 추가 사전 및 사후 실험 분석 <ol><li> 플러시 골수의 분석. <ol><li> 50 ㎖ 원뿔형 튜브의 상단에 배치 된 70 μm의 셀 스트레이너로 뼈 조각을 전송. 격렬 원뿔형 튜브 내에 골수 세포의 현탁액을 수득 PBS 10 mL로 단편을 플러시 25 G 바늘 10 ㎖ 주사기를 사용한다. 원심 분리기는 세포 현탁액 300 XG에 3 분 21 ° C에 대해, 뜨는을 기음과 PBS의 펠렛 세포 또는 유동 세포 계측법에 대한 다른 원하는 솔루션을 재현 탁. 주 : 볼륨 재현 탁하고, 원심 분리하고,인가 후의 세포 펠렛의 크기에 따라 달라진다. </li><li> 생존력 분석법의 PBS ~ 75-300 μL 용량 시판 fluorescenc를 사용 적합하고, 상기 현탁액은 분석 될 수있다E 기반 생존력 분석은 제조자의 지시에 따라, 종래의 혈구에 피펫 및 반전 형광 현미경을 이용하여 세었다. </li><li> 유세포 분석을 위해 또는 GFP 양성 유방암 세포의 검출에 기초하여, 정렬 2 % FBS, 2mM의 EDTA를 함유하는 1 ml의 PBS에서 세포 펠렛을 재현 탁하고, 10 농도가 1 × 106 세포 / ml이다 mM의 HEPES되도록. </li></ol></li><li> H &amp; E 염색과 면역. <ol><li> 헤 마톡 실린 및 에오신 (H &amp; E) 염색 및 / 또는 면역 조직 화학 염색의 조각을 처리하기 위해 2 연필로 표지 플라스틱 카세트의 조각을 배치하고 24 시간 동안 10 % 포르말린으로 채워진 용기에 잠수함. </li><li> 파라핀 삽입을위한 프로세스 조직 절편 각 조각 내에서 광물의 spicules를 고려하여 탈회 단계를 포함 루틴 프로토콜을 사용하여 염색. </li></ol></li></ol>

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메라 ​​등. 이전 고품질 조직을 드러내는 전이성 프로세스 (47)을 연구하는 자가골 샘플의 사용의 유효성을 검사, 부검시 수확 전이성 전립선 암 환자의 사후 수집 및 뼈 시료 분석을 설명 하였다. 여기에 우리가 수집, 처리 및 유방암 세포의 이동, 정착 및 확산을 연구하는 단기 공동 문화 시스템에서 THR 수술 후 폐기 대퇴골에서 얻은 인간의 뼈 조직 조각을 사용하는 프로토콜을 ?...

종양 미세 환경 널리 유방암 진행성 전이성 암세포 중에 거동의 중요한 결정 인자로 인식되고 1-3 확산. 여기에 제시된 방법의 목적은 인간의 뼈 조직, 유방암 전이 4-6의 가장 빈번한 위치의 미세 환경 내에서 유방암 세포의 연구를 촉진 할 것이다. 뼈는 전이성 진행 (10, 11)에 연루 세포와 분비 요인 항구 둘 광물 및 골수 구획 7-9으로 구성되어 있습니다. 널리 생체 마우스 모델에서 사용하지만 전이 과정 12 ~ 15의 체계적인 연구를 촉진, 골격 내에서 세포 상호 작용은 관찰과 직접 섭동에 대해 쉽게 액세스 할 수 없습니다. 연구 및 마우스 골조직과 마우스 골수 세포를 배양 모델 시스템은 더 액세스를 제공하고 유방암 세포의 기초 m 많은 크로스 토크에 관한 통찰력과 메커니즘을 수득 한쥐의 골격 16-22 etastasis. 그러나, 연구는 뼈 조직 (23, 24)에 대해 osteotropism 종의 특정 패턴이있을 수 있음을 제안 하였다. 이러한 패턴은 뼈의 가능성 결정 인자 모두는 고유의 종 특이 골조직 특성의 차이, 면역 결핍 마우스 (11)에 변경된 골수 개체군 인한 차이들, 및 / 또는 실험에 사용 된 마우스의 비교적 어린 나이를 반영 할 수 미세. 시험 관내에서 통상적으로 골수 유래 골아 세포 또는 단층 배양 한 간질 세포 나 설계된 3 차원 모델 시스템 25-35 내의 특정 뼈 세포 유형에 집중 한 자가골 공동 배양에서 유방암 세포를 연구를 위해 접근한다. 2 차원 세포 배양 모델에서 시험 관내의 대들보를 형성 암 연구에 접근 하였지만, 그것은 롱 셀의 동작은 기본적으로 m에서 변경되는 것을 인식되어왔다문화 시스템 18,36,37 onolayer. 이것은 매트릭스 - 및 콜라겐 등의 천연 소재로 이루어지는 지지체 기반 모델을 포함하여 3 차원 살아있는 조직의 복잡성을 모방 설계된 미세 환경의 개발을 주도하고있다, 또는 합성 중합체는 조직 형 미세 환경을 만들기 위해 특정 유형의 세포로 시딩 36-41. 엔지니어링 접근 방법도 제어하고 미세 18,19,41-43의 호르몬 환경을 연구하는 생물 반응기 플랫폼의 사용을 포함했다. 생체 모방 모델 생물 반응기가 제어 된 환경에서 복잡한 미세 조직의 많은 요소를 제공하고, 성공적으로 뼈 18,19,35,42,43 유방암 전이 학습을 사전에 적용되었지만, 모델 설계된 시스템은 일반적으로 포함하지 않는다 뼈 네이티브 환경 내 존재하는 세포 형태 및 세포 외 기질 성분의 전체 스펙트럼. 최근까지, 유방암세포는 인간 뼈 조직의 네이티브 그대로 3 차원 미세 환경 내 연구되지 ​​않았다. 최근 우리는 (THR) 수술 44 시편 고관절 여분로부터 단리 인간 뼈 조직 단편을 사용하여 공 배양 모델의 개발을보고 하였다. 이 표본은 모두에게 단기 문화 마이크로 전이 기전을 연구하는 데 필요한 광물과 골수 구획을 항구. 이전 연구에서 우리는 뼈 조각 (44) (MDA-MB-231-fLuc) 공 배양 루시페라아제 발현 유방암 세포의 증식을 모니터링하는 생물 발광 영상 (BLI)을 사용하기위한 원칙의 증명을 수립. 여기에서 우리는 인간의 뼈 조직 이식편을 사용하여 원시 미세 환경의 컨텍스트 내에서 유방암 세포 암의 증식, 식민지 및 마이그레이션 연구를위한 실험 프로토콜을 상세하게 제시한다. 먼저 우리는 유방을 측정하는 골편에 인접한 공동 배양 유방암 세포에 대한 프로토콜을 제시BLI를 사용하여 세포 증식. 이 섹션에서는, 유방암 세포 현탁액은 뼈 왁스의 조각에 의해 고정되어 뼈 조각에 인접 6 웰 플레이트의 세포 명소​​로 씨앗을 품고있다. 제어 우물은 뼈 왁스,하지만 뼈 조각이 포함되어 있습니다. 셀 반점 부착하면 배지를 첨가하고, 플레이트를 측정한다 BLI 생물 발광 신호 강도 (셀 번호와 관련된) 24 시간 후, 배양이다. 다음 단계에서는 집락 증식을 연구하는 골편에 직접 파종 공동 배양 유방암 세포에 대한 방법을 제시한다. 여기 유방 세포 현탁액은 세포 집락 수를 추적하기 위해 시간에 걸쳐 BLI 및 형광 현미경에 의해 모니터되는 배양 골조직 단편에 직접 피펫 팅한다. 이 방법에서는, 골수 구획 유세포 식민지 유방암 세포 분석을위한 임의의 시점에서 뼈 조각에서 플러시, 골수 또는 생존력 분석 될 수있다. 또, 디유방암 세포의 이동을 측정하기위한 두 가지 접근법 스크라이브. 첫 번째 방법의 단계는 뼈 조직 배양 상청액을 향해 이동을 측정하기위한 나와있다. 없이 Transwell의 내부, 상부면이 8 ㎛의 공경을 멤브레인에 삽입 (도 1a에 도시 된 바와 같이)이 프로토콜에서 유방암 세포를 시딩 하였다. 이어서 인서트 골조직 상등액 또는 제어 매질을 포함하는 웰을 가진 수용기 판에 배치된다. 20 시간의 잠복기의 과정 동안, 유방암 세포의 작은 숫자는 아래가 BLI에 의해 검출 첨부 낮은 조직 문화의 우물에 삽입 세포막을 통해 이동한다. 두 번째 방법에서는 이주 유방암 세포없이 Transwell 인서트 막의 하부, 외부 표면 상에 시딩 하였다. 골 조직 단편을 삽입 컵에 배치되고, 유방암 세포 (도 1b에 도시 된 바와 같이) 뼈 조각에 정착하는 멤브레인을 통해 이동하는다음 BLI를 사용하여 몇 군데 있습니다.

<table><tbody><tr><td>DMEM (1X) + GlutaMAX-l</td><td>Life Technologies</td><td>10569-010</td><td>Supplement all DMEM with 10% fetal bovine serum and 1% Pen/Strep</td></tr><tr><td>McCoy&#039;s 5A Medium (1X)</td><td>Life Technologies</td><td>16600-082</td><td>Supplement all McCoy&#039;s&amp;nbsp; with 10% fetal bovine serum and 1% Pen/Strep</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Life Technologies</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Penicillen Streptomycin</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Blastocidin (10 mgl/ml)</td><td>InvivoGen&amp;nbsp;</td><td>ant-bl</td><td>Supplement media used for transfected cell lines.</td></tr><tr><td>Falcon&amp;reg; Cell Culture Inserts for 24 Well Plate with Transparent PET Membrane (8.0 &amp;mu;m pore size)</td><td>Corning Incorporated</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>Falcon&amp;reg; 24 Well TC-Treated Polystyrene Cell Culture Insert Companion Plate</td><td>Corning Incorporated</td><td>353504</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit *for mammalian cells*</td><td>Invitrogen Detection Technologies</td><td>L-3224</td><td></td></tr><tr><td>FluoroBrite DMEM</td><td>Life Technologies</td><td>A18967-01</td><td></td></tr><tr><td>D-luciferin firefly, potassium salt 5 g (30 mg/ml)</td><td>Life Technologies</td><td>L-8220</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Cell Strainer 70 &amp;mu;m</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363548</td><td></td></tr><tr><td>6 Well TC-Treated Cell Culture Cluster</td><td>Corning Incorporated</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>12 Well TC-Treated Cell Culture Cluster</td><td>Corning Incorporated</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>24 Well TC-Treated Cell Culture Cluster</td><td>Corning Incorporated</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Friedman-Pearson Rongeur</td><td>Fine Science Tools</td><td>16021-14</td><td></td></tr><tr><td>Bone wax</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>903</td><td></td></tr><tr><td>IVIS 50 Imaging Platform</td><td>Caliper Life Sciences/PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Living Image Software Program&amp;nbsp;</td><td>Caliper Life Sciences/PerkinElmer</td><td>133026</td><td></td></tr><tr><td>EVOS FL Imaging System</td><td>Life Technologies</td><td>Version 4.2</td><td></td></tr><tr><td>OsteoSense 680 EX</td><td>PerkinElmer</td><td>NEV10020EX</td><td></td></tr><tr><td>MCF-7 breast cancer cells</td><td>ATCC</td><td>HTB-22</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231 breast cancer cells</td><td>ATCC</td><td>HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>Monoclonal mouse anti-human cytokeratin antibody</td><td>DAKO Cytomation</td><td>Clone (AE1/AE3)</td><td></td></tr></tbody></table>

methods for culturing human femur tissue explants to study breast cancer cell colonization of the metastatic niche

뼈 유방암 전이의 가장 흔한 위치이다. 이것은 널리 미세 영향 암세포 동작 것이 허용되어 있지만, 약간의 인간 뼈 조직의 기본 미세 환경 내에서 유방암 세포의 특성과 동작에 대해 잘 알려져있다. 우리는 추적 정량화의 미세 환경 내에서 인간 유방암 세포를 조절하는 방법을 개발했다 고관절 교체 수술을 다음 폐기 대퇴골에서 분리 배양 된 뼈 조직 조각. 유방암 세포 루시페라아제 위해 설계 및 녹색 형광 단백질 (EGFP) 식을 확장을 사용하여, 우리는 재현성 후 유방암 세포를 형광 현미경을 이용하여 뼈 조각 내에 생물 발광 영상을 이용하여 이동 및 증식 패턴 (BLI), 트랙 세포 상호 작용을 정량하고, 평가할 수있다 유동 세포 계측법과 식민지. 이 모델의 주요 장점은 다음과 같습니다 : 1) 기본, 구조적 손상 조직 microe중요한 인간 세포 유형을 포함하며, 신속한 정량적 모니터링 및 유방 및 뼈 세포 특성, 동작 및 상호 작용의 섭동을 용이하게 미세 환경, 2)에 직접 액세스 nvironment. 기본 제한은 현재의 단기 배양 연구에 윈도우를 한정 조직편, 유한의 생존이다. 모델 시스템의 애플리케이션 내 틈새 전이성 유방암 및 기타 뼈 추구 악성 종양 기초 생물학을 연구하고 효과적으로 골조직의 유방암 표적 세포 치료 전략의 개발이 포함된다.

대퇴 머리에서 조직 파편을 분리 대퇴 머리는 남성과 스탠포드 의과 대학에서 정형 외과의학과 과목 고관절 교체 수술을받은 여성 환자 (나이 44~90년) 같은 수의에서 수집 하였다. 각각의 폐기 대퇴골은 광물의 spicules 및 골수 구성 소주 뼈 조직을 품고 상부 대퇴골의 작은 부분이 포함되어 있습니다. 이 조직은 작은 조각들을 추출하는 수술을 사용 rongeur 샤프트 (도 2a)?...

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Methods for Culturing Human Femur Tissue Explants to Study Breast Cancer Cell Colonization of the Metastatic Niche

프로토콜 인간 뼈 조직 이식편 모델 시스템에서 유방암 세포의 이동, 증식 및 집락 공부 설명된다.

배양 인간의 대퇴골 조직 외식하는 방법은 전이성 틈새의 유방암 세포 집락을 연구하기 위해

Bone is the most common site of breast cancer metastasis. Although it is widely accepted that the microenvironment influences cancer cell behavior, little ...

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Medicine

12.4K 조회수.  Stanford University School of Medicine.  프로토콜 인간 뼈 조직 이식편 모델 시스템에서 유방암 세포의 이동, 증식 및 집락 공부 설명된다. 

비디오: Methods for Culturing Human Femur Tissue Explants to Study Breast Cancer Cell Colonization of the Metastatic Niche

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major contributors to breast cancer initiation, relapse, metastasis and therapy resistance. It is imperative to understand the biology of breast cancer stem cells in order to identify novel therapeutic targets to treat breast cancer. Breast cancer stem cells are isolated and characterized based on expression of unique cell surface markers such as CD44, CD24 and enzymatic activity of aldehyde dehydrogenase (ALDH). These ALDHhighCD44+CD24- cells constitute the BCSC population and can be isolated by fluorescence-activated cell sorting (FACS) for downstream functional studies. Depending on the scientific question, different in vitro and in vivo methods can be used to assess the functional characteristics of BCSCs. Here, we provide a detailed experimental protocol for isolation of human BCSCs from both heterogenous populations of breast cancer cells as well as primary tumor tissue obtained from breast cancer patients. In addition, we highlight downstream in vitro and in vivo functional assays including colony forming assays, mammosphere assays, 3D culture models and tumor xenograft assays that can be used to assess BCSC function.

This experimental protocol describes the isolation of BCSCs from breast cancer cell and tissue samples as well as the in vitro and in vivo assays that can be used to assess BCSC phenotype and function.

세포 및 조직 샘플에서 인간 유방암 줄기 세포의 분리 및 기능 평가

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

연구

암 연구학

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its progression. Although the mechanisms involved in promoting breast cancer growth have been intensively studied using monocultures of breast cancer cells such as MCF-7 cells, the contribution of other cell types, such as vascular and lymphatic endothelial cells that are intimately involved in tumor growth, has not been investigated in depth. Cell-cell interaction plays a key role in tumor growth and progression. Neoangiogenesis, or the development of vessels, is essential for tumor growth, whereas the lymphatic system serves as a portal for cancer cell migration and subsequent metastasis. Recent studies provide evidence that vascular and lymphatic endothelial cells can significantly influence cancer cell growth. These observations imply a need for developing in vitro models that would more realistically reflect breast cancer growth processes in vivo. Moreover, restrictions in animal research require the development of ex vivo models to elucidate better the mechanisms involved.
This article describes the development of breast cancer spheroids composed of both breast cancer cells (estrogen receptor-positive MCF-7 cells) and vascular and/or lymphatic endothelial cells. The protocol describes a detailed step-by-step approach in creating dual-cell spheroids using two different approaches, hanging drop (gold standard and cheap) and 96-well U-bottom plates (expensive). In-depth instructions are provided for how to delicately pick up the formed spheroids to monitor growth by microscopic sizing and assessing viability using dead and live cell staining. Moreover, procedures to fix the spheroids for sectioning and staining with growth-specific antibodies to differentiate growth patterns in spheroids are delineated. Additionally, details for preparing spheroids with transfected cells and methods to extract RNA for molecular analysis are provided. In conclusion, this article provides in-depth instructions for preparing multi-cell spheroids for breast cancer research.

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Crosstalk between mammary epithelial cells and endothelial cells importantly contributes to breast cancer progression, tumor growth, and metastasis. In this study, spheroids have been made from breast cancer cells together with vascular and/or lymphatic endothelial cells and demonstrate their applicability as an in vitro system for breast cancer research.

유방암 연구를 위한 잠재적인 기능적인 시험관 내 모형으로 유방 상피 및 내피 세포 스페로이드

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods rely on the ability of cells either to attach to a solid substratum of a tissue culture dish or to grow in suspension in liquid medium. Multiple immortal cell lines have been created and grown using such approaches, however, these methods frequently fail when primary cells need to be grown ex vivo. Such failure has been attributed to the absence of the appropriate extracellular matrix components of the tissue microenvironment from the standard systems where tissue culture plastic is used as a surface for cell growth. Extracellular matrix is an integral component of the tissue microenvironment and its presence is crucial for the maintenance of physiological functions such as cell polarization, survival, and proliferation. Here we present a 3-dimensional tissue culture method where primary bone marrow cells are grown in extracellular matrix formulated to recapitulate the microenvironment of the human bone (rBM system). Embedded in the extracellular matrix, cells are supplied with nutrients through the medium supplemented with human plasma, thus providing a comprehensive system where cell survival and proliferation can be sustained for up to 30 days while maintaining the cellular composition of the primary tissue. Using the rBM system we have successfully grown primary bone marrow cells from normal donors and patients with amyloidosis, and various hematological malignancies. The rBM system allows for direct, in-matrix real time visualization of the cell behavior and evaluation of preclinical efficacy of novel therapeutics. Moreover, cells can be isolated from the rBM and subsequently used for in vivo transplantation, cell sorting, flow cytometry, and nucleic acid and protein analysis. Taken together, the rBM method provides a reliable system for the growth of primary bone marrow cells under physiological conditions.

In standard culture methods cells are taken out of their physiological environment and grown on the plastic surface of a dish. To study the behavior of primary human bone marrow cells we created a 3-D culture system where cells are grown under conditions recapitulating the native microenvironment of the tissue.

차 사람 골수 및 악성 종양을 연구하는 세 가지 차원 조직 배양 모델

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

의학

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

Three dimensional (3D) culture is a more physiologically relevant method to model cell behavior in vitro than two dimensional culture. Carcinomas, including breast carcinomas, are complex 3D tissues composed of cancer epithelial cells and stromal components, including fibroblasts and extracellular matrix (ECM). Yet most in vitro models of breast carcinoma consist only of cancer epithelial cells, omitting the stroma and, therefore, the 3D architecture of a tumor in vivo. Appropriate 3D modeling of carcinoma is important for accurate understanding of tumor biology, behavior, and response to therapy. However, the duration of culture and volume of 3D models is limited by the availability of oxygen and nutrients within the culture. Herein, we demonstrate a method in which breast carcinoma epithelial cells and stromal fibroblasts are incorporated into ECM to generate a 3D breast cancer surrogate that includes stroma and can be cultured as a solid 3D structure or by using a perfusion bioreactor system to deliver oxygen and nutrients. Following setup and an initial growth period, surrogates can be used for preclinical drug testing. Alternatively, the cellular and matrix components of the surrogate can be modified to address a variety of biological questions. After culture, surrogates are fixed and processed to paraffin, in a manner similar to the handling of clinical breast carcinoma specimens, for evaluation of parameters of interest. The evaluation of one such parameter, the density of cells present, is explained, where ImageJ and CellProfiler image analysis software systems are applied to photomicrographs of histologic sections of surrogates to quantify the number of nucleated cells per area. This can be used as an indicator of the change in cell number over time or the change in cell number resulting from varying growth conditions and treatments.

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

We demonstrate a method to generate 3D breast cancer surrogates, which can be cultured using a perfusion bioreactor system to deliver oxygen and nutrients. Following growth, surrogates are fixed and processed to paraffin for evaluation of parameters of interest. The evaluation of one such parameter, cell density, is explained.

준비 및 분석<em&gt; 체외</em&gt; 3 차원 유방 암 서로 게이트

Three dimensional (3D) culture is a more physiologically relevant method to model cell behavior in vitro than two dimensional culture. Carcinomas, ...

생체공학

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal cells. The tumor microenvironment is comprised of a variety of cell types, such as fibroblasts, immune cells, vascular endothelial cells, pericytes and bone-marrow-derived cells, embedded in the extracellular matrix (ECM). Cancer-associated fibroblasts (CAFs) have a pro-tumorigenic role through the secretion of soluble factors, angiogenesis and ECM remodeling. The experimental models for cancer cell survival, proliferation, migration, and invasion have mostly relied on two-dimensional monocellular and monolayer tissue cultures or Boyden chamber assays. However, these experiments do not precisely reflect the physiological or pathological conditions in a diseased organ. To gain a better understanding of tumor stromal or tumor matrix interactions, multicellular and three-dimensional cultures provide more powerful tools for investigating intercellular communication and ECM-dependent modulation of cancer cell behavior. As a platform for this type of study, we present an experimental model in which cancer cells are cultured on collagen gels embedded with primary cultures of CAFs.

Here we present a protocol to co-culture in three-dimensions, which is useful for investigating multicellular interactions and extracellular matrix-dependent modulation of cancer cell behavior. In this experimental model, cancer cells are cultured on collagen gels embedded with human cancer-associated fibroblasts.

종양 기질 상호 작용에 대한 세 가지 차원의 공동 문화 모델

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion

Breast cancer is the second leading cause of cancer-related death among women in the U.S. Organoid models of solid tumors have been shown to faithfully recapitulate aspects of cancer progression such as proliferation and invasion. Although patient-derived organoids and patient-derived xenograft organoids are pathophysiologically relevant, they are costly to propagate, difficult to manipulate, and comprised primarily of the most proliferative cell types within the tumor microenvironment (TME). These limitations prevent their use for elucidating cellular mechanisms of disease progression that depend upon tumor-associated stromal cells which are found within the TME and known to contribute to metastasis and therapy resistance. 
Here, we report on methods for cultivating epithelial-stromal multicellular 3D cultures. The advantages of these methods include a cost-effective system for rapidly generating organoid-like 3D cultures within scaffold-free environments that can be used to track invasion at single-cell resolution within hydrogel scaffolds. Specifically, we demonstrate how to generate these heteromulticellular 3D cultures using BT-474 breast cancer cells in combination with fibroblasts (BJ-5ta), monocyte-like cells (THP-1), and/or endothelial cells (EA.hy926). Additionally, differential fluorescent labeling of cell populations enables time-lapse microscopy to define 3D culture assembly and invasion dynamics. 
Notably, the addition of any two stromal cell combinations to 3D cultures of BT-474 cells significantly reduces circularity of the 3D cultures, consistent with the presence of organoid-like or secondary spheroid structures. In tracker dye experiments, fibroblasts and endothelial cells co-localize in the peripheral organoid-like protrusions and are spatially segregated from the primary BT-474 spheroid. Finally, heteromulticellular 3D cultures of BT-474 cells have increased hydrogel invasion capacity. Since we observed these protrusive structures in heteromulticellular 3D cultures of both non-tumorigenic and tumorigenic breast epithelial cells, this work provides an efficient and reproducible method for generating organoid-like 3D cultures in a scaffold-free environment for subsequent analyses of phenotypes associated with solid tumor progression.

There is a critical need for 3D cancer models that capture heterocellular crosstalk to study cancer metastasis. Our study presents the generation of heteromulticellular stromal-epithelial in a scaffold and scaffold-free environment that can be used to study invasion and cellular spatial distributions.

상피암 세포의 스캐폴드가 없는 3D 배양에서 이종다세포 기질 세포(Heteromulticellular Stromal Cells in Scaffold-free 3D Cultures of Epithelial Cancer Cells to Drive Invasion)

Breast cancer is the second leading cause of cancer-related death among women in the U.S. Organoid models of solid tumors have been shown to faithfully ...

Long-term Culture of Human Breast Cancer Specimens and Their Analysis Using Optical Projection Tomography

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later distally, is a major factor in patient prognosis. Experimental systems of breast cancer rely on cell lines usually derived from primary tumours or pleural effusions. Two major obstacles hinder this research: (i) some known sub-types of breast cancers (notably poor prognosis luminal B tumours) are not represented within current line collections; (ii) the influence of the tumour microenvironment is not usually taken into account.
We demonstrate a technique to culture primary breast cancer specimens of all sub-types. This is achieved by using three-dimensional (3D) culture system in which small pieces of tumour are embedded in soft rat collagen I cushions. Within 2-3 weeks, the tumour cells spread into the collagen and form various structures similar to those observed in human tumours1. Viable adipocytes, epithelial cells and fibroblasts within the original core were evident on histology. Malignant epithelial cells with squamoid morphology were demonstrated invading into the surrounding collagen. Nuclear pleomorphism was evident within these cells, along with mitotic figures and apoptotic bodies.
We have employed Optical Projection Tomography (OPT), a 3D imaging technology, in order to quantify the extent of tumour spread in culture. We have used OPT to measure the bulk volume of the tumour culture, a parameter routinely measured during the neo-adjuvant treatment of breast cancer patients to assess response to drug therapy. 
Here, we present an opportunity to culture human breast tumours without sub-type bias and quantify the spread of those ex vivo. This method could be used in the future to quantify drug sensitivity in original tumour. This may provide a more predictive model than currently used cell lines.

We have developed a collagen-based in vitro assay which promotes proliferation and invasion from samples of all breast cancer subtypes. Optical Projection Tomography, a three dimensional microscopy technique was utilised to visualise and quantify tumour expansion. This assay may be used to quantify drug response of individual tumour samples.

광학 프로젝션 Tomography를 사용하여 인간 유방암 표본과 그 분석의 장기 문화

Breast cancer is a leading cause of mortality in the Western world. It is well established that the spread of breast cancer, first locally and later ...

생물학

Three-Dimensional Culture Assay to Explore Cancer Cell Invasiveness and Satellite Tumor Formation

Mammalian cell culture in monolayers is widely used to study various physiological and molecular processes. However, this approach to study growing cells often generates unwanted artifacts. Therefore, cell culture in a three-dimensional (3D) environment, often using extracellular matrix components, emerged as an interesting alternative due to its close similarity to the native in vivo tissue or organ. We developed a 3D cell culture system using two compartments, namely (i) a central compartment containing cancer cells embedded in a collagen gel acting as a pseudo-primary macrospherical tumor and (ii) a peripheral cell-free compartment made of a fibrin gel, i.e. an extracellular matrix component different from that used in the center, in which cancer cells can migrate (invasion front) and/or form microspherical tumors representing secondary or satellite tumors. The formation of satellite tumors in the peripheral compartment is remarkably correlated to the known aggressiveness or metastatic origin of the native tumor cells, which makes this 3D culture system unique. This cell culture approach might be considered to assess cancer cell invasiveness and motility, cell-extracellular matrix interactions and as a method to evaluate anti-cancer drug properties.

Cancer cells are embedded in a collagen gel and then sandwiched in an acellular fibrin gel to generate a 3D culture system in which the invasiveness and formation of satellite tumors may be monitored.

암 세포 침윤 및 위성 종양 형성을 탐색하는 문화 분석 세 가지 차원

Mammalian cell culture in monolayers is widely used to study various physiological and molecular processes. However, this approach to study growing cells ...

Isolation of Mammary Epithelial Cells from Three-dimensional Mixed-cell Spheroid Co-culture

While enormous efforts have gone into identifying signaling pathways and molecules involved in normal and malignant cell behaviors1-2, much of this work has been done using classical two-dimensional cell culture models, which allow for easy cell manipulation. It has become clear that intracellular signaling pathways are affected by extracellular forces, including dimensionality and cell surface tension3-4. Multiple approaches have been taken to develop three-dimensional models that more accurately represent biologic tissue architecture3. While these models incorporate multi-dimensionality and architectural stresses, study of the consequent effects on cells is less facile than in two-dimensional tissue culture due to the limitations of the models and the difficulty in extracting cells for subsequent analysis.
The important role of the microenvironment around tumors in tumorigenesis and tumor behavior is becoming increasingly recognized4. Tumor stroma is composed of multiple cell types and extracellular molecules. During tumor development there are bidirectional signals between tumor cells and stromal cells5. Although some factors participating in tumor-stroma co-evolution have been identified, there is still a need to develop simple techniques to systematically identify and study the full array of these signals6. Fibroblasts are the most abundant cell type in normal or tumor-associated stromal tissues, and contribute to deposition and maintenance of basement membrane and paracrine growth factors7.
Many groups have used three dimensional culture systems to study the role of fibroblasts on various cellular functions, including tumor response to therapies, recruitment of immune cells, signaling molecules, proliferation, apoptosis, angiogenesis, and invasion8-15. We have optimized a simple method for assessing the effects of mammary fibroblasts on mammary epithelial cells using a commercially available extracellular matrix model to create three-dimensional cultures of mixed cell populations (co-cultures)16-22. With continued co-culture the cells form spheroids with the fibroblasts clustering in the interior and the epithelial cells largely on the exterior of the spheroids and forming multi-cellular projections into the matrix. Manipulation of the fibroblasts that leads to altered epithelial cell invasiveness can be readily quantified by changes in numbers and length of epithelial projections23. Furthermore, we have devised a method for isolating epithelial cells out of three-dimensional co-culture that facilitates analysis of the effects of fibroblast exposure on epithelial behavior. We have found that the effects of co-culture persist for weeks after epithelial cell isolation, permitting ample time to perform multiple assays. This method is adaptable to cells of varying malignant potential and requires no specialized equipment. This technique allows for rapid evaluation of in vitro cell models under multiple conditions, and the corresponding results can be compared to in vivo animal tissue models as well as human tissue samples.

A simple method is described for analyzing effects of tissue fibroblasts on associated epithelial cells. The combination of this method and three-dimensional tissue culture can facilitate analysis of cells after isolation from 3D. The technique is applicable to cells of varying malignant potential, allowing systematic study of effects of tumor-associated stroma on tumor cells.

세 가지 차원 혼합 셀 회전 타원체 공동 문화에서 Mammary 상피 세포의 분리

While enormous efforts have gone into identifying signaling pathways and molecules involved in normal and malignant cell behaviors1-2, much of this work ...

Non-enzymatic, Serum-free Tissue Culture of Pre-invasive Breast Lesions for Spontaneous Generation of Mammospheres

Breast ductal carcinoma in situ (DCIS), by definition, is proliferation of neoplastic epithelial cells within the confines of the breast duct, without breaching the collagenous basement membrane. While DCIS is a non-obligate precursor to invasive breast cancers, the molecular mechanisms and cell populations that permit progression to invasive cancer are not fully known. To determine if progenitor cells capable of invasion existed within the DCIS cell population, we developed a methodology for collecting and culturing sterile human breast tissue at the time of surgery, without enzymatic disruption of tissue.
Sterile breast tissue containing ductal segments is harvested from surgically excised breast tissue following routine pathological examination. Tissue containing DCIS is placed in nutrient rich, antibiotic-containing, serum free medium, and transported to the tissue culture laboratory. The breast tissue is further dissected to isolate the calcified areas. Multiple breast tissue pieces (organoids) are placed in a minimal volume of serum free medium in a flask with a removable lid and cultured in a humidified CO2 incubator. Epithelial and fibroblast cell populations emerge from the organoid after 10 - 14 days. Mammospheres spontaneously form on and around the epithelial cell monolayer. Specific cell populations can be harvested directly from the flask without disrupting neighboring cells. Our non-enzymatic tissue culture system reliably reveals cytogenetically abnormal, invasive progenitor cells from fresh human DCIS lesions.

Primary cell culture using intact tissue organoids provides a model system that mimics the multi-cellular in vivo microenvironment. We developed a serum-free primary breast epithelium tissue culture model that perpetuates mixed cell culture lineages and exhibits differentiated morphology, without enzymatic tissue disruption. Breast organoids remain viable for &#62;6 months.

비 효소, Mammospheres의 자연 발생에 대한 사전 침습 유방 병변의 혈청이없는 조직 문화

Breast ductal carcinoma in situ (DCIS), by definition, is proliferation of neoplastic epithelial cells within the confines of the breast duct, without ...