이 패러다임의 전반적인 목표는 설치류의 복잡한 방어 행동을 평가하는 것입니다. 이 프로토콜은 방어 적 행동 사이의 전환에 대한 조사를 용이하게하기 때문에 중요하며 위협에 대한 복잡한 적응 반응을 연구하는 데 관심이있는 연구자에게 이상적입니다. 이 프로토콜은 일시적으로 정확한 조건 자극을 사용하여 방어 응답 간의 전환을 유도하여 개별 피사체 내에서 조건된 동결 및 비행 동작을 모두 연구할 수 있습니다.
방어 행동의 메커니즘을 밝히기 위해이 모델을 사용하면 PTSD 관련 기능 장애 및 공황 장애에 대한 통찰력을 제공 할 수 있으며 새로운 치료법의 개발에 도움이 될 수 있습니다. 행동 프로토콜을 설정하려면 프로그램에서 SCS를 정의하고, 10초 순수 톤 또는 10초 화이트 노이즈로 전달될 자극을 설정하고, 각 시험 시험을 무작위로 수행하도록 시험 간 간격을 정의한다. 소프트웨어 추적을 설정하려면 각 관련 컨텍스트에 테스트 마우스를 배치하고, 무게 중심을 정의하고, 등고선 크기를 조정합니다.
챔버의 크기와 카메라의 픽셀 치수를 사용하여 교정 계수를 결정합니다. 그런 다음 중앙 컴퓨터의 이벤트 마커를 실시간 발생과 동기화하기 위한 TTL 펄스 코드를 생성합니다. 실험을 시작하기 전에 공포 조절 상자 컨트롤러, 충격기 및 비디오 녹화 소프트웨어를 켭니다.
75데시벨에서 청각 자극을 전달하기 위해 컨텍스트 위에 오버헤드 스피커를 설치하고 미리 정의된 일정에 청각 자극을 생성하기 위해 프로그래밍 가능한 오디오 생성기를 설정합니다. 톤과 백색 잡음이 기능적임을 확인한 후, 3~5개월 된 남성 또는 암컷 마우스를 컨디셔닝 룸으로 데이터 수집 및 수송 시스템을 설정합니다. 사전 조정 시험을 시작하기 전에, 30 센티미터 직경, 30 센티미터 높은 맑은 원통형 플렉시 글라스 챔버를 클린 1% 아세트산 컨텍스트 A 챔버로 사용할 수 있습니다.
사전 컨디셔닝의 경우 컨텍스트 A에 마우스를 배치하고 90초 평균 의사 무작위 시험 간 간격으로 4개의 20초 SCS 트레일에 마우스를 노출하기 전에 3분 동안 적응할 수 있도록 합니다. 10분 동안 의 적응 후, 컨텍스트 A 챔버에 마우스 한 개를 전송하고 즉시 공포 컨디셔닝 시스템 및 데이터 수집 프로그램을 활성화합니다. 공포 조절 실험을 시작하기 전에, 적어도 35센티미터 높이, 25~ 30센티미터 직사각형 인클로저를 70%에탄올이 있는 전기 그리드 바닥으로 청소하여 컨텍스트 B 챔버로 사용한다.
그런 다음 쇼커를 Context B 챔버의 전기 그리드 바닥과 연결하고 적절한 컴퓨터 프로그램에서 충격의 주파수, 발병 및 지속 시간을 정의합니다. 모든 매개 변수가 설정된 경우 충격 강도가 충격기와 그리드 바닥에서 올바르게 전달되었는지 확인합니다. 2일과 3일에는 마우스를 컨텍스트 B 챔버에 3분 동안 배치한 후 1초, 0.9 밀리암페어 AC 풋 쇼크 및 120초 평균 인터-트라이얼 간격으로 공동 종료되는 SCS의 5쌍에 동물을 노출시한다.
세션이 끝나면 마우스를 홈 케이지에 다시 넣습니다. 실험의 목표에 따라 동물을 리콜 세션으로 4일째에 3분 동안 문맥 A 챔버에 놓고 90초 이상의 평균 의사 무작위 시험 간격으로 발 충격 없이 4개의 SCS 시험으로 동물을 제시하여 동물의 공포 회수 반응을 테스트합니다. 또는, 공포 멸종을 위해 시험하기 위하여는, 4일째에, 1, 910초의 기간 동안 90초 평균 의사 무작위 시험 간격으로 발 충격 없이 SCS의 16의 시험에 동물을 복종하기 전에 3 분 동안 문맥 B 챔버에 마우스를 놓습니다.
실험이 끝날 때 마우스의 동작을 정량화하기 위해, 자동 동결 검출기 임계값을 사용하여 동결 동작에 대한 기록된 비디오를 분석 점수에 관측자 블라인드가 있고 픽셀 변경에 대한 프레임별 분석이 뒤따릅니다. 최소 1초 동안 호흡에 필요한 것을 제외하고 동결을 신체 운동의 완전한 중단으로 정의합니다. 네 발이 모두 바닥을 떠날 때 점프점수가 상승하여 수직 및/또는 수평 이동이 발생합니다.
전체 세그먼트를 분석한 후 표시된 파일을 동결, 점프 및 이벤트 마커로 내보내고 정의된 관심 기간의 관련 이벤트를 스프레드시트로 추출합니다. 동결 기간을 계산하려면 각 평가판 기간의 종료 시간에서 시작 시간을 뺍니다. 특정 평가판 기간의 총 점프 수를 합산합니다.
마우스의 속도를 계산하려면 마우스 의 무게 중심의 프레임 XY 축 이동에서 좌표를 추적합니다. 비행 점수를 계산하려면 각 SCS의 평균 속도를 10초 전 SCS 의 평균 속도로 나누고 각 이스케이프 점프에 대해 1점을 추가합니다. 하나의 비행 점수는 이전 SCS 기간의 비행 동작에 변화가 없음을 나타냅니다.
그런 다음 적절한 통계 분석 소프트웨어 프로그램을 사용하여 통계적 유의를 위해 데이터를 분석합니다. 사전 노출 세션에서 SCS 프리젠 테이션은 마우스에서 비행 또는 동결 응답을 유도하지 않습니다. 컨디셔닝 중 행동 분석은 SCS의 톤 구성 요소가 SCS 이전 동안 동결에 비해 동결을 크게 향상시키는 것으로 나타났습니다.
비행 점수는 세션 전반에 걸쳐 크게 변경되었으며, 마우스는 톤 큐에 비해 더 빠른 속도와 화이트 노이즈 큐로 더 많은 점프를 나타낸다. 마우스는 명확한 방어 행동 전환을 보여 주며, 백색 잡음 중 톤 동안 낮은 비행 점수와 높은 비행 점수를 나타내며, 반대로 동결 응답이 관찰됩니다. 멸종 훈련의 16 시험을 실시 마우스는 톤 큐에 비해 화이트 노이즈 동안 높은 측정 네 시험의 첫 번째 블록 동안 싸움 점수와 함께, 조건부 비행의 급속한 멸종을 보여줍니다.
소멸 세션이 끝나면 비행 동작이 더 이상 어느 단서에 의해 유도되지 않습니다. 톤에 동결은 멸종 기간 동안 네 시험의 첫 번째 블록에 대한 화이트 노이즈에 동결보다 훨씬 높다. 16번의 멸종 시판에 걸쳐 톤으로 인한 동결이 감소하고, 백색 노이즈 매개 동결의 증가가 관찰됩니다.
리콜 세션에서는 비행 점수가 하나 미만이기 때문에 중립적인 맥락에서 백색 노이즈에 노출되면 항공편이 발생하지 않습니다. 오히려 중립적인 맥락에서 백색 잡음 프레젠테이션은 톤에 의해 유도된 응답보다 높은 동결 응답을 유도합니다. 전체적으로 컨텍스트를 청소하는 것이 중요하며 실험을 시작하기 전에 충격 진폭과 음압 수준을 테스트하는 것이 중요합니다.
이 패러다임은 현재 방어 행동의 복잡성을 이해하는 데 관심이있는 그룹에서 사용되며 방어 행동 선택에 대한 이해를 높이기 위해 사용할 수 있습니다.
