이 프로토콜은 24시간의 장기 보존 시간 및 peri 수술 텔레메트릭 모니터링을 사용하여 돼지 직소 신장 자동 이식 모델을 성공적으로 확립하는 모든 주요 단계를 설명합니다. 작은 동물 모델에 대한 전 생체 연구보다 이 큰 동물 자동 이식 모델의 주요 장점은 임상 설정에 대한 외과 해부학 및 병리학적 유사성입니다. 대학 병원 RWTH Aachen에 있는 우리 팀은 절차를 시연할 것입니다.
하룻밤 동안 금식 성인 여성 돼지에서 적절한 수준의 퇴적물을 확인한 후 사타구니에 3~5센티미터 절개를 하고 대퇴동맥을 360도 방식으로 해부한다. 숫자 11 메스를 사용하여 동맥 절제술을 만들고 원격 분석 장치의 동맥 센서를 삽입하십시오. 왼쪽 측면에 피하 파우치를 만든 후, 측면으로 원격 측정 트랜스 폰더를 터널과 3-O 폴리 프로필렌 단일 매듭 봉합사근육 근막에 트랜스 폰더를 고정.
다음으로 흉부의 왼쪽과 오른쪽에 두 개의 작은 절개를 만들고 빨간색과 흰색 ECG 전극을 지정된 위치로 터널링합니다. 전극이 확보되면 원격 분석 데이터의 등록을 시작합니다. 안정적인 신호 획득시 봉합사및 스프레이 필름 드레싱으로 사타구니 절개를 닫고 적절한 크기의 돼지 재킷을 동물에 놓습니다.
첫 번째 수술 후 14 일, 마취 동물의 오른쪽에 있는 경정맥에 4~5센티미터 절개를 하고, 피하 및 근육 조직을 해부하여 저글러 정맥을 노출한다. 필링 어웨이 시트 소개자 또는 셀딩거 방법을 사용하여 경마 카테터를 삽입합니다. 5-0 폴리프로필렌 봉합사로 카테터를 고정하고 두 층으로 절개를 닫습니다.
외과 소독 및 멸균 드레이핑에 따라 중간 절개 절제술을 수행하여 복부를 열고 표준 복부 리트랙터를 사용하여 수술장을 노출시하십시오. 복막층을 열고 단극성 소작, 양극성 집게 및 미세 가위를 사용하여 모든 부착 된 조직에서 왼쪽 신장과 요료를 해부합니다. 그런 다음 3-0 폴리글락틴 봉합사를 사용하여 왼쪽 요관을 신장 힐룸으로 최소 10센티미터 이상 분할합니다.
이식 신장을 검색하려면 혈관 클램프를 사용하여 대동맥과 정맥을 대동맥과 정맥 근처의 정맥을 닫습니다. 그리고 조개 위에 혈관을 잘라. 그런 다음 추가 준비를 위해 백 테이블 팀에 신장을 주고 신장 동맥과 정맥의 그루터기를 닫기 위해 5-0 폴리 프로필렌 봉합사를 사용합니다.
검색 직후, 표준 14 게이지 주변 카테터를 사용하여 신장 동맥을 꾸미고 적어도 500 밀리리터의 얼음 차가운 장기 보존 용액으로 신장을 플러시하십시오. 플러시 후, 컴퓨터 제어 냉각 회로를 사용하여 섭씨 4도에서 24 시간의 목표 감기 허혈 시간으로 장기 보존 용액에 보관하기 위해 멸균 장기 가방에 접목을 감쌉니다. 혈관 클램핑 2~5분 전에, 정맥 내 100개의 국제 단위를 낫리움 헤파린킬로그램당 주입하고, 그 후에 입증된 바와 같이 금단성 오른쪽 신장을 제거하고 중앙분리대를 다시 엽니다.
혈관 클램핑 2~5분 전에, 정맥 내 100개의 국제 단위를 낫리움 헤파린킬로그램당 주입하고, 그 후에 입증된 바와 같이 반대측 오른쪽 신장을 제거합니다. 보존된 이식성 신장을 수술 분야에 배치하고 효율성을 모니터링하기 위해 평균 동맥 혈압과 심박수를 사용하여 지속적인 주입으로 노르의 분당 0.1~ 1 마이크로그램의 투여를 시작합니다. 신장 정맥의 종단 간 해부학의 경우 5-0 폴리 프로필렌을 사용하여 두 개의 코너 스티치를 배치하고 백 월을 연속 방식으로 봉합하십시오.
후면 벽을 완성한 후 두개골 모서리 스티치의 한쪽 끝을 사용하여 앞벽을 두개골 방향으로 봉합하고 Heparinized 식염수 용액의 밀리리터 당 100 개의 국제 단위로 정맥을 플러시하십시오. 신장 동맥의 종단 간 해부학의 경우 낙하산 기술을 사용하여 백 벽을 연속적인 방식으로 봉합하기 전에 6-0 폴리 프로필렌 두개골 코너 스티치를 사용하십시오. 이중 무장 6-0 폴리 프로필렌 봉합사의 다른 쪽 끝으로 전면 벽을 봉합하고 Heparinized 식염수 용액의 밀리리터 당 100 국제 단위로 동맥을 플러시합니다.
해부학이 완료된 후, 코달 모서리에 있는 두 개의 실을 묶고 정맥 혈관 및 동맥 클램프를 순차적으로 열어 신장의 재침투를 허용합니다. 레퍼퓨전에 따라, 상류성 동맥의 외부 벽에 파파베린의 5 밀리리터를 국소 투여하고 정맥 관리 250 20% 포도당 용액의 단일 80 밀리그램 복용량푸로즈미드. 다음으로, 복벽과 피부를 통해 12개의 프랑스 소아 소변 카테터를 전달하고 합자를 사용하여 카테터를 요관에게 고정시하십시오.
혈관 해부학의 이식 및 꼬임의 탈구를 방지하기 위해 신장 위에 회중 층을 닫습니다. 그리고 입증 된 대로 네 개의 층으로 복부를 닫습니다. 마지막으로, 색상 도플러 초음파를 사용하여 완전히 억류 된 동물을 주택 시설로 되돌리기 전에 신장 이식의 적절한 동맥 및 정맥 관류를 보장하십시오.
5개의 돼지 치열 교정 신장 자동 이식 실험의 이 대표적인 세트에서, 트랜스폰더 이식 및 자동 이식 절차는 관찰 기간 동안 등록된 충분한 원격 측정 신호를 가진 각 동물에서 성공적이었다. 복부 폐쇄 에 이어, 컬러 도플러 초음파는 모든 경우에 신장의 만족스러운 동맥 및 정맥 관류를 밝혀. 혈청 칼륨과 크레아틴 값은 수술 후 3~4일에 정점을 찍었으며 그 후 점진적인 회복을 보였습니다.
혈액 pH는 정상 범위 내에 남아 있고 소변 출력은 처음 4 수술 후 일 동안 정상 값으로 회복되었습니다. 이 프로토콜은 임상적으로 중요한 큰 동물 모형에 있는 장기 보존 기술 또는 전 생체 내 또는 생체 내 치료의 효력에 관하여 다양한 질문에 대답하기 위하여 이용될 수 있습니다.
