이 프로토콜은 자연에서와 마찬가지로 플랑크톤에 부착되어있는 동안 부착 된 조류의 광합성 활성을 측정합니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 광생리학의 측정이 샘플 산만 함없이 실시간으로 수행 될 수 있다는 것입니다. 기준선 형광에 대한 동물 플랑크톤 개체의 효과를 조사하려면 부착 된 유기체없이 배양물에서 성인 견갑골 무크로 나타를 준비하십시오.
이제 장 내용물의 형광을 피하기 위해 적어도 90 분 동안 섭씨 20도에서 FLW에있는 개인을 굶어 죽입니다. 1.5 밀리리터의 FWL을 큐벳에 붓습니다. 원하는 수의 s를 선택하십시오.
mucronata 개인은 광학 현미경으로 피펫을 사용하여 100 배 배율로 큐벳으로 옮깁니다. FLW를 추가하여 샘플 부피를 최대 2 밀리리터까지 가져오고 빠른 반복률 형광계 측정 전에 섭씨 20도의 저조도 아래에서 15 분 동안 적응할 수 있도록하십시오. 그런 다음 실행할 작업을 클릭하여 측정을 시작하고 샘플 당 세 번 이상 측정을 반복하십시오.
결과 플롯에서 F0 값을 읽습니다. 100 배 배율로 광학 현미경으로 피펫을 사용하여 털갈이 된 캐러페이스가있는 콜라슘 종을 집어 들고 FLW로 씻으십시오. AF-6 배지에 콜라슘 종을 깨끗한 벤치의 10 밀리리터 유리 튜브에 무균적으로 접종하십시오.
배양물을 성장 챔버 내의 NC2 온도로 유지하고, 유리 튜브를 하루에 적어도 한 번 손으로 부드럽게 흔들어 세포 침전을 방지한다. 엽록소에 대한 동물 플랑크톤 개체의 영향을 조사하려면 콜라슘 종의 형광을 띠고 부착 된 유기체없이 성인 s. mucronata를 사용하십시오.
장 내용물에서 형광을 피하려면 FLW에있는 개인을 적어도 90 분 동안 굶어 죽입니다. 큐벳 타입의 빠른 반복률 형광계를 설정합니다. 이제 미리 배양 된 콜라슘 종의 서브 샘플 1.5 밀리리터를 큐벳에 붓습니다.
그런 다음 원하는 수의 s. mucronata 개체를이 큐벳으로 옮기고 여과 된 배지로 최대 2 밀리리터의 시료 부피를 가져옵니다. 빠른 반복률 형광계 측정을하기 전에 섭씨 20도에서 저조도 아래에서 15 분 동안 개인을 적응시킵니다.
실행할 작업을 클릭하십시오"를 클릭하여 측정을 시작하고 샘플 당 세 번 이상 측정을 반복하십시오. 결과 플롯에서 F0 및 FM 값을 읽습니다. 기준선 형광을 보정하기 위해, 배양액을 0.2-마이크로미터 부어 크기 필터를 사용하여 여과하고 형광을 측정하였다.
콜라슘 종의 F0 및 FM에서 기준 샘플의 F0을 빼거나 옵션 탭의 설정에서 빈 보정 값을 수정합니다. 광학 현미경으로 피펫을 사용하여 콜라슘 종을 가진 s. mucronata 개체를 분리하십시오.
그런 다음 FLW를 사용하여 s. mucronata를 씻으십시오. 전송 s.
mucronata를 FLW 100 밀리리터에 넣고 NC2 온도에서 90 분 동안 어두운 조건에서 기아를 유지하십시오. 1.5 밀리리터의 FLW를 큐벳에 붓습니다. 열 초 정도 이동하십시오.
콜라시움 종을 가진 mucronata 개체는 큐벳에 넣고 FLW를 추가하여 샘플을 최대 2 밀리리터까지 가져옵니다. N2C 온도에서 15 분 동안 낮은 조명 하에서 개인을 적응시키고 텍스트 원고에 언급 된 바와 같이 엽록소의 형광을 측정하십시오. 부착 된 세포의 수를 열거하려면 빠른 반복률 형광계 측정을 취한 후 샘플을 2 % 글루타르 알데히드로 고정하십시오.
그런 다음 광학 현미경으로 s. mucronata의 여러 초점 깊이와 위치에서 사진을 찍으십시오. 기준선 형광 또는 엽록소 s에 의한 형광에 유의한 효과는 없었다.
mucronata는 밀리리터 당 최대 5 명입니다. 그러나, 최대 광화학적 효율 및 비-광화학적 담금질은 s. mucronata 밀도가 밀리리터당 7.5명이었을 때 유의하게 영향을 받았다.
AF-6 배지에서 고정상에 대한 부착 단계 및 플랑크톤 단계 동안 콜라슘 종의 식물 생리학에서의 계절적 변화는 유사한 평균 최대 광화학적 효율 및 비광화학적 담금질로 나타났다. 어두운 조건하에서의 콜라슘 종의 부착 단계의 경우, 광생리학적 파라미터에 있어서 유의한 차이가 없었으나, 비광화학적 담금질은 세 시간 후에 칼슘보다 망간에 대해 더 높고, 21시간에서 낮은 광강도에서 더 높았다. 플랑크톤 단계의 경우, PS2 흡수 단면은 세 시간에서 칼슘 처리보다 망간에서 유의하게 낮았다.
효과적인 광화학적 효율은 상당히 높았지만, 비-광화학적 담금질은 21시간에서 대조군보다 망간 처리에서 더 낮았다. 광이 증가함에 따라 망간은 21 시간에 비 광화학 담금질에서 PS2 흡수 단면을 세 시간에 감소시키는 경향이 있었고 세 시간에 효과적인 광화학 효율을 높이는 경향이있었습니다. 칼슘은 증가하는 빛 하에서 비 광화학 담금질을 약간 개선했습니다.
그러나, 세 시간에서 효과적인 광화학적 효율을 감소시켰다. 가장 중요한 것은 기질 유기체의 효과입니다. 조류가 다른 종이나 물질에 부착되면 효과가 다를 수 있습니다.
이 프로토콜 외에도 탄소 고정 또는 산소 생산 속도의 측정은 실험 조작에 대한 칼슘 생산성의 반응을 명확히하는 데 유용합니다. 이 프로토콜을 통해 우리는 부착 된 조류의 광합성 활동이 환경 변화에 어떻게 반응하는지 명확히 할 수 있습니다.
