이 프로토콜은 질량 분광계에서 분자의 활성화시 생성된 단편에 대한 이온 이동성 프로파일을 기록하고 이성질체 구조를 구별하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 글리칸이 그들의 주요 구조적 특징 중 일부와 관련하여 11 개의 그룹으로 분류 될 수있게하며, 따라서 그렇지 않으면 얻기 어려운 정보를 제공합니다. 그것은 매우 일반적이며 많은 연구 분야에서 관심있는 대사 산물이나 약물과 같은 많은 분자 패밀리에 적합한 분자 네트워크를 구축하는 데 도움이 될 수 있습니다.
이 접근법은 이온 이동성 분광법에서 새로운 개념을 최대한 활용하며, 질량 분광법만으로는 두 구조를 구별하지 못하는 경우에 유용 할 것입니다. 실험은 질량 분광법과 이온 이동성에 대한 훌륭한 명령을 필요로합니다. 그러나 실험자는 각 단계를주의 깊게 따르는 경우 방법을 성공적으로 구현해야합니다.
절차를 시연하는 것은 내 실험실의 박사 과정 학생 인 Simon Ollivier가 될 것입니다. 시작하려면 튜닝 페이지에서 단일 패스 IMS 시퀀스를 설정하고 계측기를 이동성 모드로 전환한 다음 순환 시퀀스 제어 창을 엽니다. 이 새 창의 순환 함수 탭에서 고급 모드를 선택하고 번들 추가를 선택한 다음 단일/멀티패스를 선택합니다.
일련의 이동성 이벤트가 동일한 창의 시퀀스 탭에 나타날 때까지 기다립니다. 모든 교정 이온이 순환 IMS 경마장 주위를 단일 통과하도록 시퀀스를 조정합니다. 그러나 주입 시간이나 꺼내기 및 획득 시간을 변경하지 말고 분리 시간을 한 밀리초로 낮춥니다.
보정 혼합물의 일부 이온이 표시된 도달 시간 창에 맞지 않으면 ADC 설정 탭에서 빈당 푸시 수를 늘려 IMS와 직교 가속도 TOF 분석기의 푸셔의 동기화를 변경하십시오. 순환 시퀀스 제어 창에서 두 분 동안의 수집을 기록하려면 획득을 클릭하여 획득 설정 팝업 창을 열고 파일 이름, 설명 및 획득 길이(분)를 입력한 다음 저장을 클릭합니다. MS Tune 페이지에서 계측기를 TOF 모드로 전환하여 신호의 안정성을 확인합니다.
샘플의 전체 MS 획득을 일분 동안 기록하고, 이는 동위원소 패턴 및 잠재적 오염물의 존재를 확인하는데 유용할 것이다. 기본 튜닝 페이지의 쿼드/MS 프로파일 탭에서 계측기를 MSMS 모드로 전환합니다. 사중극자에서 분리하기 위해 MSMS 질량 필드에서 표적 철의 질량을 선택하십시오.
데이터를 처리할 때 전구체 격리를 확인하기 위해 일분 수집을 기록합니다. 관심 있는 이성질체의 이동성 기반 선택을 수행하려면 순환 시퀀스 제어 창의 계측기를 이동성 모드로 전환하고, 순환 함수 탭에서 번들 추가를 선택한 다음 슬라이싱을 선택합니다. 복잡한 이동성 이벤트 시퀀스가 시퀀스 탭에 나타날 때까지 기다립니다.
꺼내기 및 획득 이벤트를 첫 번째 개별 이벤트 바로 뒤에 배치한 다음 실행을 클릭합니다. 실시간으로 표시될 초기 분리 결과를 찾습니다. IMS 피크의 분해능이 만족스러울 때까지 시퀀스에서 이 이벤트에 대한 시간 값을 변경하여 멀티패스 분리에 대한 첫 번째 분리 이벤트의 지속 시간을 늘립니다.
참조를 위해 일분 획득을 기록합니다. 일시 중지를 클릭하고 꺼내기 및 획득 이벤트를 꺼내기 아래에 배치하고, 꺼내기를 미리 저장하고, 이벤트를 보류 및 꺼내기를 클릭합니다. 대상 피크가 미리 저장으로 꺼내기 영역에 있고 다른 이온이 꺼내기 또는 보류 및 꺼내기 영역에 있도록 이벤트 지속 시간을 조정합니다.
꺼내기 및 획득 이벤트를 사전 저장소에서 재주입 및 두 번째 개별 이벤트 아래의 시퀀스 끝에 배치합니다. 실행을 클릭하여 선택한 모집단을 표시합니다. 절연의 품질을 확인합니다.
참조를 위해 일분 획득을 기록합니다. 시퀀스 탭의 사용자 정의 이벤트 시간 옆의 열에서 모든 이벤트의 합계 시간을 찾습니다. CCS 보정을 수행하기 위해 Pre-Store 이벤트의 Reinject 라인에서 발견 된 Time Abs를 기록하십시오.
꺼내기 및 획득을 직접 진행하는 개별 이벤트의 지속 시간을 한 밀리초로 설정합니다. 사전 저장소에서 재주입 줄에서 활성화 사용 상자를 선택하고 기본 제공 컨트롤을 사용하여 조각화를 최적화합니다. 조각화가 내장 컨트롤로 만족스럽지 않은 경우 활성화 활성화 상자의 선택을 취소하고 재주입 전압을 수동으로 최적화하고, 사전 어레이 그라디언트를 증가시키고, 결과가 만족스러울 때까지 어레이 오프셋 전압을 낮춥니다.
획득 팝업 창에서 두 분 동안의 획득을 기록하려면 드리프트 시간 유지 옵션을 선택하여 도착 시간만 포함하는 파일을 생성하고, M은 _dt.raw로 레이블이 지정된 Z를 생성합니다. 아라비녹실란 펜타사카라이드 혼합물의 MS 분석을 수행한 후, 스펙트럼은 Z 685.24 이상 M에서 단일 피크를 갖는 동위원소 패턴을 표시하였고, 이는 두 화합물이 본질적으로 이성체임을 시사한다. 오각류의 부가물을 순환 IMS 세포를 통해 분리하고, 세 개의 피크를 상이한 도착 시간으로 분리하였다.
순수한 XA3XX는 83 및 90 밀리 초의 피크를 나타내는 반면, XA2XX는 94 밀리 초에서 피크를 나타냅니다. IMS 분리의 첫 번째 단계 후, XA3XX에 속하는 이온을 분출하고, IMS-IMS 분석을 위해 94밀리초에서의 피크를 선택하였다. 활성화 없이 이온을 재주입한 후 삼중 통과 분리를 수행하였고, XA2XX에 대한 피크를 199밀리초에서 수득하였다.
생성된 IMS-IMS MS 데이터는 Z 차원에 대한 도달 시간 및 M을 사용하여 디컨볼루브되어 IMS-IMS 스펙트럼을 생성하였다. 0.2% 이상의 상대 강도를 초과하는 피크는 CCS 교정을 위해 내보내졌으며, 그 결과 중심 CCS 보정 IMS-IMS 스펙트럼이 생성되었습니다. 전구체 이온의 단리를 확인하는 것이 항상 중요하며, 그렇지 않으면, 스펙트럼은 관심있는 화합물과 오염 물질의 혼합물로부터 올 수 있다.
이전에는 IMS-IMS 스펙트럼을 사용하여 네트워크를 구축하고 화합물을 분류했지만 복합 식별을 위해 데이터베이스를 검색하는 데에도 사용할 수 있었습니다. 이 기술은 매우 최근이지만, 우리는 그것이 당학뿐만 아니라 분석가들이 이성질 분자에 직면하는 모든 맥락에서 매우 유용 할 것으로 기대합니다.
