우리의 프로토콜은 폐 고혈압의 반전으로 이어지는 왼쪽 심장 질환으로 인한 폐 고혈압의 쥐 모델에서 상승하는 대동맥 밴딩을 제거하는 외과 적 절차를 설명합니다. 이 기술은 폐 순환과 우심실에서 생리적 역 리모델링의 메커니즘을 연구하는 데 유용한 도구를 제공합니다. 폐 고혈압 치료 전략을 개발하는 데 도움이 될 수 있습니다.
수술 도구가 준비되면 마취 된 쥐를 멸균 된 수술 테이블의 수핀 위치에 놓습니다. 그런 다음 동물의 복부와 팔다리를 접착 테이프로 고정하고 포비돈 요오드 / 요오드 포어 용액으로 동물 피부를 소독하십시오. 일차 수술 대동맥 밴딩 또는 AoB, 수술에서 흉터와 봉합사를 기록하십시오.
발가락을 꼬집고 마취의 적절한 깊이를 확보 한 후, 일차 AoB 수술에서 봉합사를 제거하십시오. 그런 다음 미세한 가위로 7 ~ 10 밀리미터 길이의 자궁 경부 중간 선 절개를 만들어 기관 절제술을 수행하십시오. 한 쌍의 둔한 포셉의 도움으로 자궁 경부 연조직을 해부하여 적외선 근육을 노출시킵니다.
그런 다음 중간 선에서 근육을 분할하여 기관을 시각화합니다. 완료되면 각진 Noyes 스프링 가위를 사용하여 두 개의 연골 고리 사이에 두 밀리미터 기관 절개를 만들어 외경 두 밀리미터의 기관 캐뉼라를 기관으로 삽입하십시오. 그런 다음 캐뉼라를 4-0 실크 봉합사로 고정하십시오.
기관 캐뉼라의 다른 쪽 끝을 기계식 인공 호흡기에 연결하면서 죽은 공간을 최소한으로 유지하십시오. 수술 전 폐 환기를 체중 kg 당 8.5 밀리리터의 갯벌 부피로 분당 90 회 호흡으로 유지하십시오. 대동맥 해빙을 위해서는 미세한 가위를 사용하여 두 번째와 세 번째 갈비뼈 사이에 20 밀리미터 길이의 피부 절개를하십시오.
더 작은 외과 용 가위의 도움으로 근육을 층별로 펼치고 자르고 두 번째와 세 번째 늑골 사이의 늑간 공간을 따라 10 밀리미터 측면 절개를 만듭니다. 늑골 스프레더를 사용하여 두 번째와 세 번째 늑골 사이의 늑간 공간을 확장하여 수술 창을 만듭니다. 무딘 포셉의 도움으로 흉선을 심장과 도관 동맥에서 분리하여 클립으로 대동맥을 시각화하십시오.
포셉의 도움으로 클립을 잡은 다음 클립 주변의 결합 조직을 제거하여 대동맥을 노출시킵니다. 바늘 홀더로 클립을 열고 흉강에서 클립을 분리합니다. 가슴을 닫기 전에 폐 atelectasis를 열고 10 분 동안 체중 킬로그램 당 9.5 밀리리터의 갯벌 부피로 기계적 환기로 과도한 팽창없이 적절한 폐 모집을 보장하고 체중 킬로그램 당 8.5 밀리리터의 갯벌 부피로 돌아갑니다.
나중에 4-0 실크를 사용하여 간단한 중단 봉합사로 깊은 근육을 닫고 간단한 연속 봉합사로 상부 근육을 연결하십시오. 그런 다음 간단한 연속 봉합사로 피부를 닫으십시오. 자발적인 호흡을 위해 쥐를 관찰하면서 환기 기계에서 기관 캐뉼라를 분리하십시오.
연결이 끊어졌을 때 동물이 자발적으로 숨을 쉬지 못하면 인공 호흡기를 다시 연결하고 절차를 반복하기 전에 추가 다섯 분 동안 환기를 계속하십시오. 자발적인 호흡이 다시 확립 된 후, 기관지에서 캐뉼라를 제거하고 스폰지 포인트로 기관 주변의 액체를 청소하십시오. 6-0 Prolene을 사용하여 간단한 봉합사로 기관을 닫고 4-0 실크를 사용하여 간단한 중단 봉합사로 적외선 근육을 닫습니다.
간단한 연속 봉합사로 피부를 연결 한 다음 포비돈 - 요오드 / 요오드 포어 용액으로 근육과 피부를 청소하고 소독하십시오. 수술 절차를 완료 한 후 단일 동물을 보충 산소와 적외선 램프가있는 회복 케이지로 옮기고 산소 마스크를 쥐의 가까이에 놓습니다. 이 연구에서, AoB 동물에서 오름차순 대동맥 상의 클립의 위치와 해산 또는 뎁 수술 후 그것의 부재가 가시화되었다.
또한, 대동맥 혈류는 뎁 수술 후 해산 전과 상응하는 대동맥 세그먼트에서 AoB 동물에서의 클립 전후의 맥파 도플러 영상화에 의해 평가되었다. 결과는 기능적 해체와 일치하는 혈류 구배의 현저한 감쇠를 나타냈다. 다섯 번째 주에, 뎁 래트는 가짜 동물에 필적하는 수준으로 뇌 나트륨이뇨 펩티드 또는 BNP를 발현시켰는데, 이는 대동맥 해체에 의한 좌심실 또는 LV의 역전을 나타낸다.
흉부 흉부 심초음파에 의한 LV 기능의 평가는 AoB 래트에 비해 Deb 동물에서 증가된 LV 배출 분획 및 LV 부피를 밝혀냈다. AoB 이후 세 번째 주에 수행 된 해동 수술은 AoB 동물에 비해 좌심실 수축기 압력 및 LV 비대증의 현저한 감소를 가져 왔습니다. 세 번째 주와 다섯 번째 주에 AoB 쥐와 비교했을 때, Deb 동물은 또한 우심실 수축기 압력과 우심실 비대증의 현저한 감소를 보여 좌심 심장 질환으로 인한 폐 고혈압의 성공적인 반전을 보여주었습니다.
이 절차에서 가장 중요한 단계는 클립의 제거와 대동맥 해체 후 폐의 모집입니다. 이 단계를 올바르게 수행하면 동물의 생존이 증가합니다.
