점막 폐쇄성 질환은 기도 점액의 비정상적인 점도를 특징으로합니다. 이 프로토콜은 유변학을 사용하여 점액 점도를 정량화하고 데이터를 분석하여 점액 표적 치료를 테스트하는 방법을 보여줍니다. 점액 유변학은 특정 정량적 바이오마커를 제공한다.
벤치탑 장치를 사용하면 인간 객담 샘플과 같은 임상 표본에서 이러한 바이오마커를 측정하는 물류가 크게 단순화됩니다. 점액 유변학을 폐쇄성 질환의 진단 도구로 사용하는 것은 여전히 어려운 일입니다. 점점 더 많은 증거는 유변학 특성, 염증 및 박테리아 감염 사이의 강한 상관 관계를 보여줍니다.
점액은 항상 윤활유를 바르고 보호 역할을하는 신체 계면에 존재합니다. 점액 유변학은 위장 및 생식기 트랙과 같은 다른 시스템에 적용될 수 있습니다. 정확한 측정을 위해서는 시료의 정확한 취급 및 배치가 중요합니다.
시각적 데모는 이 분석의 정밀도를 향상시킬 수 있습니다. 이 절차를 시연하는 것은 항공 실험실의 연구 기술자 인 Kendall Shaffer가 될 것입니다. 수집 된 기도 가래 또는 점액을 멸균 표본 컵에서 분류하여 시작하십시오.
가래의 경우, 수집 즉시 샘플에서 과도한 타액을 제거하십시오. 운반을 위해 샘플을 얼음 위에 놓습니다. 전송 시간을 네 시간 미만으로 제한하십시오.
수집 시 샘플을 분석합니다. 긍정적 인 변위 피펫으로 세 번에서 다섯 번 부드럽게 위아래로 피펫팅하여 점액을 균질화하십시오. 또는 피펫을 마이크로원심분리 튜브에 직접 넣는다.
처리될 때까지 샘플을 섭씨 80도에 보관하십시오. 실험을위한 충분한 부피를 보장하기 위해 500 마이크로 리터보다 크거나 같은 부피로 저장하기 위해 샘플을 분취하십시오. 분취하기 전에 피펫을 신선하고 냉동 된 가래 또는 점액으로 직접 피펫하거나 표본을 균질화하십시오.
반복 측정 및 치료에 필요한 분취량을 수리하십시오. 측정하기 전에 적어도 5분 동안 섭씨 37도에서 시험할 분취량을 인큐베이션한다. 약리학 적 제제를 테스트하려면 시료 희석을 방지하기 위해 고농도의 원액을 사용하십시오.
원하는 시약의 1 % ~ 10 % 부피를 샘플에 직접 첨가하십시오. 화합물의 방울이 튜브의 측면에 머물러 있지 않은지 확인하십시오. 샘플을 필요한 시간 동안 섭씨 37도에서 인큐베이션하여 화학 반응을 허용하십시오.
점액 샘플과 시약을 혼합하여 두 분마다 미세원심분리 튜브의 바닥을 플릭팅하여 뮤신 네트워크를 손상시키지 않으면서 점액 샘플 내로의 시약의 점진적 침투를 허용한다. 여러 약물 시약을 비교할 때 배양 시간이 유사한지 확인하십시오. 컴퓨터를 켜고 소프트웨어를 초기화합니다.
새 측정값을 선택합니다. 계속하려면 측정 ID 아래에 샘플 식별 번호를 입력하고 연산자 아래에 운영자 이름을 입력합니다. 설명 아래에 추가 정보 또는 설명을 입력합니다.
형상 세트를 선택하고 크고 작은 플레이트를 신중하게 검사하여 플레이트가 깨끗하고 완벽한 상태인지 확인하십시오. 큰 접시를 바닥 강단에 단단히 삽입하십시오. 작은 접시를 상부 강단에 부드럽게 삽입하고 딸깍 소리가 들릴 때까지 약간 회전하여 플레이트를 잠급니다.
상부 플레이트의 자유 진동은 정상입니다. 온도가 목표 값인 섭씨 37도에 도달할 때까지 기다리십시오. 그런 다음 소프트웨어의 지시에 따라 자동 보정을 시작합니다.
포지티브 변위 피펫을 사용하여 큰 바닥 플레이트의 중앙에 샘플을 250 ~ 500 마이크로 리터 사이에서 천천히 피펫하십시오. 일단 플레이트에 증착되면, 점성 샘플은 돔 모양을 채택하는 반면, 고탄성 샘플은 물리적 절단이 필요할 수 있습니다. 소프트웨어를 통해 작은 플레이트를 운반하는 측정 헤드를 내리고 샘플을 관찰하십시오.
바닥 플레이트에 적절하게로드되면 샘플이 접촉하고 두 플레이트 사이에 중심을 맞 춥니 다. 샘플이 틈새를 채우도록 하려면 샘플이 더 이상 이중점 모양이 아니거나 플레이트의 가장자리와 정렬되지 않을 때까지 감소된 간격 함수를 사용합니다. 감소된 갭 기능은 측정 에지를 0.1밀리미터 단위로 낮추고 7 증분으로 제한됩니다.
7 증분 후에도 간격이 남아 있으면 설치 다시 실행을 클릭하여 초기 위치로 돌아가고 샘플의 위치와 볼륨을 조정합니다. 간격이 크게 줄어들면 상부 플레이트의 가장자리를 따라 원형 운동으로 주걱으로 과도한 샘플을 제거하십시오. 전단 응력을 피하기 위해 초과 샘플을 부드럽게 다듬습니다.
진동 중에 오염된 유체가 우발적으로 투사되지 않도록 보호 커버를 내립니다. 측정을 시작하려면 분석 시작을 클릭합니다. 전체 사이클은 네 분에서 일곱 분 정도 걸립니다.
사이클의 전체 기간 동안 큰 소리로 말하고 장치 또는 벤치를 만지지 마십시오. 조용한 환경은 처음 두 분 동안 매우 중요합니다. 주기가 완료되면 다음을 클릭하여 측정 헤드를 올리고 샘플 분석 보고서를 생성합니다.
측정 헤드가 완전히 수축되면 보호 커버를 들어올립니다. 샘플을 버리고 조심스럽게 플레이트를 제거하십시오. 따뜻한 물과 비누로 접시를 청소하고 소독하십시오.
여덟 메가달톤 PEO의 점탄성 특성을 다섯 가지 농도에서 측정하고 평가된 벤치탑 레오미터와 전통적인 벌크 레오미터 사이에서 직접 비교하였다. PEO 용액과 대조적으로, 상태 천식 점액은 낮은 변형률에서 고체 유사 탄성 지배적 거동을 나타내며 높은 균주에서 교차를 특징으로합니다. 또한, 1.5%PEO 용액 및 임상 분석 점액 샘플에서 트리플리케이트 측정을 수행하여, 생물학적 샘플로부터 수득된 값에 대해 선형 점탄성 특성이 매우 반복적임을 확인하였다.
변화는 점액용해제로 처리한 후 점액의 점탄성 특성에서 측정하였다. 점액 점탄성 검정에 대한 TCEP 효과를 벤치탑 레오미터를 사용하여 임상 환경에서 시험하였다. 점막 용해 처리는 복합 모듈러스 4.6배, 탄성 모듈러스 5.1배, 점성 모듈러스 1.9배, 크로스오버 변형률 3.3배, 크로스오버 항복 응력 5.7배 감소, 감쇠율 2.8배 증가로 유체형 샘플이 더 많았습니다.
빠르게 진행되는 임상 환경에서 기도 점액 점탄성을 측정하면 사례별로 환자의 치료를 맞춤화할 수 있을 뿐만 아니라 새로운 약리학적 화합물 테스트를 위한 표준화된 프로토콜을 제공할 수 있습니다. 이 기술은 현재 낭포성 섬유증 객담에 대한 매우 효과적인 CFTR 조절제의 효과를 검사하고 점액 특성을 변경하기위한 다양한 약물의 효능을 테스트하는 데 사용됩니다.
