TKMcG는 캐나다 흉부 학회에서 재학 의해 지원됩니다. 저자의 공헌 모든 저자는 원고의 개념에 참여했다. 또한, TKMcG이 프로젝트를 시작한 실험 결과를 수집, 원고의 작성 및 그 중요한 검토에 공헌했다. AR를 수집하고 분석 실험 결과, 원고의 초안을 작성하고 중요한 평가에 기여했다. LF 실험 결과를 수집하고 원고의 중요한 평가에 기여했다. TFS와 JGM는 원고의 중요한 평가에 기여했다.

아래에서 설명하는 절차는 동물 케어 (CCAC)에 캐나다위원회의 지침에 따라 맥길 대학 기관 동물 관리위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 준비 단계 <ol><li> 솔루션 : <ol><li> 메타 콜린 : 50 밀리그램 / ML에서 재고 솔루션을 준비하고 5를 테스트 할 농도에 따라 직렬 희석 (1:1)를 확인합니다. 솔루션 5 nebulizing 전에 실내 온도에 도달 할 수 있습니다. </li><li> 마취제 : 다른 요법은 생쥐 (표 1)의 여러 변종 문헌에보고되었다. 주 : 레지 1은 현재 프로토콜에서 사용되었다. </li></ol></li><li> 장비 : 현재 프로토콜은 flexiWare 7 소프트웨어에서 지원하는 두 개의 flexiVent 세대 중 하나에 적용됩니다. 연구의 정의 및 계획, 실험 Sessio : 소프트웨어 기능은 3 개의 모듈 아래에 그룹화됩니다n과 검토 및보고. <ol><li> 시스템 (flexiVent FX 전용) 및 / 켜거나 소프트웨어를 시작합니다. </li><li> 첫 번째 실험 세션이나 그 이전 언제든지 학습 구조를 미리 정의 할 연구 정의 및 계획 모듈을 엽니 다. </li><li> 만들기 새로운 연구 버튼을 클릭하고, 연구 결과를 생성 프로토콜을 설명하고 연구하는 실험 집단과 과목을 정의하는 마법사를 따르십시오. </li><li> 실험 세션 모듈을 열고 연구와 템플릿 선택을위한 스타트 업 순서에 따라 실험 세션을 시작합니다. </li><li> 측정 사이트에 대한 주제를 할당하고 그 무게를 확인합니다. </li><li> 운영 소프트웨어에 설명 된 단계를 수행하여 시스템의 교정을 진행합니다. 당신은 교정 Y-튜브에 사용되는 정맥 (단계 1.3.3)를 첨부 한 지점하라는 메시지가 표시됩니다. </li><li> 중요한 단계. 반복 하오얻어진 보정 값이 허용 범위를 벗어난 경우 t는 1.2.6 단계. (보정 값의 모듈 특정 허용 범위에 대한 flexiVent FX 또는 flexiWare 7 사용자 설명서를 참조하십시오). </li><li> 취소 실험을 시작하기 위해 준비하지 않는 환기 및 데이터 기록을 시작하라는 메시지를 표시합니다. 이들은 나중에 지점에서 시작할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 주제 : <ol><li> 마취제의 적절한 용량 (표 1)를 사용하여 피사체를 마취. </li><li> 피사체가 마취의 수술 수준에 도달했는지 확인합니다. 주제는 발가락 핀치에 어떤 반응을 보여주지해야하며, 그 호흡은 정기적 수고하지해야합니다. </li><li> 기관 절개술을 수행하고 기관을 cannulate. <ol><li> 그 뒷면에 동물을 배치하고 열 소스 (마우스에서 약 45 센티미터 과열을 방지하기 위해에 위치한 60 와트 전구 예를 들어, 온도 조절 난방 담요 또는 램프) 제공합니다. </li><li> 청소 일전자 목 알코올 지역의 피부 절개를 만들고 부드럽게 submaxillary 선하고 취재 근육 층을 분리하여 기관을 노출합니다. </li><li> 부드럽게 마이크로 포셉 한 쌍을 사용하여기도를 들어 올려 아래에 봉합을 전달합니다. </li><li> 그것을 단면 않고기도에 작은 절개를 만들 수있는 후두 가까운 연골의 두 개의 링 사이에 잘​​라. </li><li> 절개로 이전 보정 캐 뉼러를 삽입하고 기관 내부 부드럽게 약 5 반지의 길이 주를 사전 :. 본 실험은 1.2 cm 긴 금속 18 게이지 정맥을 사용하여 수행되었다합니다. </li><li> 중요한 단계. 봉합사를 사용 장소에 정맥을 고정합니다. 첨부 정맥 주위에 완벽한 밀봉을 형성해야한다. </li></ol></li></ol></li></ol> 2. 기계 환기 <ol><li> 인공 호흡기에 가까운 동물을 가져옵니다. </li><li> 사전 정의를 선택하여 기계 환기를 시작합니다또는 환기 표시기의 정의 환기 프로필입니다. </li><li> Y-튜브를 통해 인공 호흡기에 동물을 연결합니다. </li><li> 중요한 단계. 인공 호흡기에 동물을 맞추고 기관 캐뉼라가 가능한 정맥 폐쇄 나 기관 트위스트를 방지하기 위해 인공 호흡기와 같은 수준에 있는지 확인합니다. </li><li> 중요한 단계. 정맥 삽입 및 첨부 파일을 확인 섭동 이름을 두 번 클릭하여 깊은 인플레이션 섭동을 실행합니다. 누설의 유무, 시스템은 과도한 볼륨 변위 (그림 1)하지 않고 3 초 동안 30 CMH 2 O의 압력을 유지 할 수 있어야한다. 이러한 정맥 폐쇄 또는 잘못된 위치를 나타낼 수로 기록 된 볼륨 및 압력 흔적도없이 오프셋의 증상이나 변형으로 부드럽게해야합니다. </li><li> 필요한 경우, 심장 박동과 체온 모니터링을위한 중요한 사인 트랜스 듀서를 연결합니다. 데이터 기록은 eithe 시작할 수 있습니다스크립트를 통해 수동 또는 자동으로 R. </li></ol> 3. 폐 기능 측정 측정 또는 명령 (예 : 천식 환자용 호흡 보조기를 두시 라고요 활성화, 이벤트 마커) 높은 통제하고 반복적 인 실험 과정을 (그림 2)에 대한 미리 정의 된 또는 사용자 정의 스크립트를 사용하여 자동화 할 수 있습니다. 매개 변수의 수에 상승을주는 교란 여섯 가족은 기준에 따라 호흡 시스템 역학을 설명하는 데 사용하고 주어진 과제 (표 2)에 따라 할 수있다. <ol><li> 중요한 단계. 측정을 시작할 준비가되면 폐쇄 폐 영역을 보충하고 폐 볼륨 히스토리를 표준화하는 깊은 인플레를 실행합니다. </li><li> 중요한 단계. 테스트 측정 (예를 들어, PV가-P 또는 PV가-V)를 실행하여 자연 흡기 노력의 부재를 확인합니다. 선택한 데이터 집합 뷰에서 압력 신호 트레이스를 관찰합니다. 단계적 PV 곡선으로,압력 고원은 잘, 아래쪽 변형으로 정의되어야한다. 압력 아래 스윙은 동물에서 흡기 노력 (그림 3)를 나타냅니다. </li><li> 제목을 두 번 클릭하여 선택한 스크립트를 시작합니다. 본 연구에 사용 된 스크립트는 일반적으로 측정을 포함 : <ul><li> 세중의에서 기준 측정의 시퀀스입니다. </li><li> . 흡입 메타 콜린 참고기도 응답의 평가를위한 분무기의 활성화 : 시스템에 연결되면, 분무기에 식염수 또는 메타 콜린의 용액 약 100 μl를로드합니다. 분무가 자동으로 시작되고 중지됩니다. </li><li> 분무기의 활성화에 따라 약 3 분의 기간 동안 밀접하게 간격 측정 (매 15 초)의 순서. </li><li> 프롬프트가 또 다른 도전을 수행하고 측정의 순서를 반복합니다. 주 : B의 면봉으로 분무기 마운트 내부 건조etween 문제는 흡기 라인에서 건물까지의 물방울 결로를 방지 할 수 있습니다. </li></ul></li><li> 실험의 끝에, 환기를 중지하고 피사체를 분리합니다. </li><li> 운영 소프트웨어의 다음 주제로 전환하고 그 무게를 확인합니다. </li><li> 중요한 단계. 헹구고 분무기, 어댑터, Y-튜브,과 과목 사이의 정맥을 건조. </li><li> 3.6 단계 1.2.6를 반복합니다. </li><li> 하루의 끝에서, 실험 세션을 닫습니다. 헹굼 및 건조 분무기, 어댑터, Y-튜브, 및 정맥을 제조 업체의 지침에 따라 실험실을 떠나기 전에 시스템 호기 밸브를 청소해야합니다. </li></ol> 4. 데이터 분석 소프트웨어가 자동으로 계산하고 교란과 관련된 매개 변수를 표시합니다. 또한 데이터에 대한 수학적 모델의 적합을 반영하는 결정 계수 (COD)를 제공합니다. 다핵 각 데이터 집합소프트웨어에 의해 제외로 fficient COD가 표시됩니다. 실험 세션의 검토는, 데이터를 재 분석 및 내보내기 시나리오의 생성은 소프트웨어의 검토 및보고 모듈에서 수행됩니다. <ol><li> 검토 및보고 모듈을 엽니 만 충분한 COD를 갖는 데이터 집합을 포함하도록주의하면서 수출 시나리오를 만들 수 있습니다. </li><li> 필요한 파라미터, 압력 또는 흐름 볼륨 커브, 원시 데이터 집합 신호 또는 스프레드 시트 응용 프로그램에 따라 정보 (표 3 참조)로 내보낼 수 있습니다. </li><li> 시간의 함수로 각 매개 변수와 플롯의 평균 기준선 측정은 모든 측정 (그림 4 참조). 그런 다음, 곡선 아래의 면적을 계산 곡선의 일반적인 프로파일을 분석하거나 통계 분석을 수행하도록 선택할 수 있습니다. </li><li> 메타 콜린의 농도의 함수로기도 응답의 결과를 표현하는 각각의 주제에 대해 매개 변수 및 실험 조건 별 하나를 결정점 (예를 들어, 피크) 또는 각 메타 콜린 공격 후 특정 시간. 각 실험 조건 (표 4, 그림 5)의 그룹 평균과 보고서 나 플롯 결과를 계산합니다. </li><li> 정규화를 적용 (예 : % 기준선) 또는 통계 분석을 수행, 당신은 또한 주어진 매개 변수 기준 값 (그림 5C PC 200)의 두배를 생산 농도를 계산 고려할 수 있습니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Bates, J. H. T., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+lung+function+in+mice:+the+phenotyping+uncertainty+principle.">Measuring lung function in mice: the phenotyping uncertainty principle.</a> J. Appl. Physiol. 94, 1297-1306 (2003).</li><li>Bates, J. H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lung mechanics. An inverse modeling approach. , (2009).</li><li>Hantos, Z., Daroczy, B., Suki, B., Nagy, S., Fredberg, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Input+impedance+and+peripheral+inhomogeneity+in+dog+lungs.">Input impedance and peripheral inhomogeneity in dog lungs.</a> J. Appl. Physiol. 72, 168-178 (1992).</li><li>McGovern, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethylthiourea+protects+against+chlorine+induced+changes+in+airway+function+in+a+murine+model+of+irritant+induced+asthma.">Dimethylthiourea protects against chlorine induced changes in airway function in a murine model of irritant induced asthma.</a> Respir. Res. 11, 138 (2010).</li><li>Hayes, R. D., Beach, J. R., Rutherford, D. M., Sim, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+methacholine+chloride+solutions+under+different+storage+conditions+over+a+9+month+period.">Stability of methacholine chloride solutions under different storage conditions over a 9 month period.</a> Eur. Respir. J. 11, 946-948 (1998).</li><li>North, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+arginase+1+expression+by+exposure+to+air+pollution+exacerbates+the+airways+hyperresponsiveness+in+murine+models+of+asthma.">Augmentation of arginase 1 expression by exposure to air pollution exacerbates the airways hyperresponsiveness in murine models of asthma.</a> Respir. Res. 12, (2011).</li><li>Siddiqui, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site+of+allergic+airway+narrowing+and+the+influence+of+exogenous+surfactant+in+the+brown+norway+rat.">Site of allergic airway narrowing and the influence of exogenous surfactant in the brown norway rat.</a> PloS ONE. 7, e29381 (2012).</li><li>Cohen, J. C., Lundblad, L. K. A., Bates, J. H. T., Levitzky, M., Larson, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+"Goldilocks+Effect"+in+cystic+fibrosis:+identification+of+a+lung+phenotype+in+the+cftr+knockout+and+heterozygous+mouse.">The "Goldilocks Effect" in cystic fibrosis: identification of a lung phenotype in the cftr knockout and heterozygous mouse.</a> BMC Genetics. 5, 21 (2004).</li><li>Shalaby, K. H., Gold, L. G., Schuessler, T. F., Martin, J. G., Robichaud, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+forced+oscillation+and+forced+expiration+measurements+in+mice+for+the+assessment+of+airway+hyperresponsiveness.">Combined forced oscillation and forced expiration measurements in mice for the assessment of airway hyperresponsiveness.</a> Respir Res. 11, 82 (2010).</li><li>Thiesse, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+structure+phenotype+variation+in+inbred+mouse+strains+revealed+through+in+vivo+micro-CT+imaging.">Lung structure phenotype variation in inbred mouse strains revealed through in vivo micro-CT imaging.</a> J. Appl. Physiol. 109, 1960-1968 (2010).</li><li>Amatullah, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+cardiopulmonary+effects+of+size-fractionated+airborne+particulate+matter.">Comparative cardiopulmonary effects of size-fractionated airborne particulate matter.</a> Inhalation Toxicology. 24, 161-171 (2012).</li><li>Salazar, E., Knowles, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+pressure-volume+characteristics+of+the+lungs.">An analysis of pressure-volume characteristics of the lungs.</a> J. Appl. Physiol. 19, 97-104 (1963).</li><li>Balakrishna, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmentally+persistent+free+radicals+induce+airway+hyperresponsiveness+in+neonatal+rat+lungs.">Environmentally persistent free radicals induce airway hyperresponsiveness in neonatal rat lungs.</a> Particle Fibre Tox. 8, 11 (2011).</li><li>Fahmy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+assessment+of+pulmonary+risk+associated+with+exposure+to+combustion+generated+fine+particles.">In vitro and in vivo assessment of pulmonary risk associated with exposure to combustion generated fine particles.</a> Environ. Toxicol. Pharmacol. 29, 173 (2010).</li><li>Duguet, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchial+responsiveness+among+inbred+mouse+strains.+Role+of+airway+smooth-muscle+shortening+velocity.">Bronchial responsiveness among inbred mouse strains. Role of airway smooth-muscle shortening velocity.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 161, 839-848 (2000).</li><li>Bozanich, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+in+airway+and+tissue+mechanics+in+mice.">Developmental changes in airway and tissue mechanics in mice.</a> J. Appl. Physiol. 99, 108-113 (2005).</li><li>Schwartz, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+central+airway+shunting+on+the+mechanical+impedance+of+the+mouse+lung.">Effects of central airway shunting on the mechanical impedance of the mouse lung.</a> Ann. Biomed. Eng. 39, 497-507 (2011).</li><li>De Vleeschauwer, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+invasive+lung+function+measurements+in+intubated+mice:+an+approach+for+longitudinal+lung+research.">Repeated invasive lung function measurements in intubated mice: an approach for longitudinal lung research.</a> Lab Anim. 45, 81-89 (2011).</li><li>Takubo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;1-Antitrypsin+determines+the+pattern+of+emphysema+and+function+in+tobacco+smoke-exposed+mice.">&#945;1-Antitrypsin determines the pattern of emphysema and function in tobacco smoke-exposed mice.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 166, 1596-1603 (2002).</li><li>Salerno, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+PEEP+on+induced+constriction+is+enhanced+in+decorin-deficient+mice.">Effect of PEEP on induced constriction is enhanced in decorin-deficient mice.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 293, L1111-L1117 (2007).</li><li>Therien, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus+IL-13-induced+airway+disease+in+mice.">Adenovirus IL-13-induced airway disease in mice.</a> Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 39, 26-35 (2008).</li><li>Bates, J. H. T., Cojocaru, A., Lundblad, L. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchodilatory+effect+of+deep+inspiration+on+the+dynamics+of+bronchoconstriction+in+mice.">Bronchodilatory effect of deep inspiration on the dynamics of bronchoconstriction in mice.</a> J. Appl. Physiol. 103, 1696-1705 (2007).</li><li>Wagers, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+and+antigen-induced+airway+hyperresponsiveness+are+the+result+of+diverse+physiological+mechanisms.">Intrinsic and antigen-induced airway hyperresponsiveness are the result of diverse physiological mechanisms.</a> J. Appl. Physiol. 102, 221-230 (2007).</li><li>Collins, R. A., Sly, P. D., Turner, D. J., Herbert, C., Kumar, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site+of+inflammation+influences+site+of+hyperresponsiveness+in+experimental+asthma.">Site of inflammation influences site of hyperresponsiveness in experimental asthma.</a> Respir. Physiol. Neurobiol. 139, 51-61 (2003).</li><li>Bishai, J. M., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+severe+calorie+restriction+on+the+lung+in+two+strains+of+mice.">Effect of severe calorie restriction on the lung in two strains of mice.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 295, L356-L362 (2008).</li><li>Song, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postexposure+administration+of+&#946;2-agonist+decreases+chlorine-induced+airway+hyperreactivity+in+mice.">Postexposure administration of &#946;2-agonist decreases chlorine-induced airway hyperreactivity in mice.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 45, 88-94 (2011).</li><li>Hirota, J. A., Ellis, R., Inman, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+differences+in+the+pattern+of+airway+remodeling+following+chronic+allergen+exposure+in+mice.">Regional differences in the pattern of airway remodeling following chronic allergen exposure in mice.</a> Respir. Res. 7, 120 (2006).</li><li>Llop-Guevara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo-to-in+silico+iterations+to+investigate+aeroallergen-host+interactions.">In vivo-to-in silico iterations to investigate aeroallergen-host interactions.</a> PloS ONE. 3, e2426 (2008).</li></ol>

LF, TFS가 SCIREQ 과학 호흡 장비 주식 회사 TFS에 의해 고용되는 AR은 또한 주식을 소유하고 있습니다. 이 문서에 무료로 액세스 SCIREQ 과학 호흡 장비, 주식 회사에 의해 후원

그것은 천식 및 다른 폐 질환과 관련기도 장애의 지속적인 연구는 질병 치료 옵션 개발의 기본 메커니즘의 이해에 중요 남아있다. 모델기도 질환 생쥐의 사용은 이러한 질병 메커니즘으로 이해하는 데 필수적이다. 폐 기능을 측정하는 것이 중요합니다되는 안정적이고 정확한 툴을 가지고, 마우스의 작은 주제에 평가를기도 장애를 고려합니다. 또한,기도 장애 또는 치료 효과의 위치에 통찰력을 제공 할 수있는 도구를 가지고하는 것은 매우 유용합니다. FOT 기술은 이러한 모든 특성을 결합하여 생리적 변화를 평가하는 강력한 통합 및 번역 방법을 제공합니다. 생쥐의 측정이 유형 성공하기 위해서는 특별한주의 즉, 몇 단계로 시스템의 교정, 기관 내 CA의 저항을 제공해야nnula, 분무기의 종류 (뿐만 아니라 그 동작 설정 등) 동물과 폐 볼륨 히스토리의 표준화의 위치. 또한, 피사체의 호흡 시스템은 측정시 수동적 남아 유효한 데이터 집합을 얻기 위해 필수적입니다. 이 가사 (표 1 참조) 유도 될 마취의 깊이면이나과 호흡에 의한 작업, 근육 마비 제의 투여에 의해 달성 될 수있다. 원하는 경우 마우스의 측정을 위해 필요한 기술을 습득하면서 조사자는 시험 부하와 함께, 마스터 시스템 및 운영 소프트웨어로 시작할 수 있습니다. 그런 다음 질병 모델 또는 처리 된 마우스로 이동하기 전에 순진한 동물의 재현 가능한 결과를 생성 할 논리적 인 것입니다. 호흡기 연구에 질병 모델의 중요한 비율은 알레르기 항원, 독소, 오염 물질, 담배 연기 또는 가스, measuremen으로 얻은 결과의 변화와 같은 에이전트에 동물을 노출 포함하기 때문에이 문서에서 설명하는 T 기술은 따라서 사용되는 노출 프로 시저에 의해 영향을받을 수 있습니다. 주요 실험 과정의 표준화 (컴퓨터 제어 노출 측정 시스템 6, 13, 14을 사용하는 등) 잠재적 변동성 감소에 상당한 영향을 미칠 수 있습니다. 장점뿐만 아니라 기술의 한계를 강조하면서이 문서에서 제시된 예제는 순진과 염소에 노출 된 쥐 실험에서 전형적인 결과의 선택을 나타냅니다. 그림 6의 예를 들어 볼 수 있듯이,이 기술은 재생 폐 기능 측정을 생성 할 수 있습니다. 유사한 기준 저항 값이 마우스 변종 사이에보고 된 반면, elastance의 차이는 있지만 15 관찰되었다. 실질적인 변화는 유아와 성인 마우스 16 사이에 예상 할 수도 있습니다. 같은 일 같은 생체 생리 학적 평가, 높은 정밀도 결과, 다른도FOT에 의해 생성 된 OSE는 주제의 자연 상태로 양보를 갖추고 있습니다. 표현형의 불확정성 원리 1이라고이 원칙은, 측정, 마취에서 만든 (또는 경구 삽관) tracheotomised 및 기계적 과목을 환기해야한다는 의미에서이 의정서에 적용됩니다. 이 기술의 또 다른 제한은 데이터를 일정한 단계 모델의 적합 기관지의 중간 수준보다 가난하기 때문에 데이터가 염소에 노출 된 그룹의 높은 농도에서 사용할 수없는 그림 5D-5F에서 관찰된다. 그러나 심각 bronchoconstricted 동물은 직접 15, 또는 예를 들어 계정으로 기계 기능 17 이질성을 가지고, 더 복잡한 수학적 모델에 맞게 타사 사후 분석 소프트웨어를 사용하여 ZRS를 분석하여 평가 될 수있다. 동물의기도가 충분히 피하지 않은 경우 제외 셋도 관찰 할 수있다assive 또는 정맥의 저항이 너무 높은 경우. 엄지 손가락의 규칙으로, 정맥의 저항은 기준에서 동물의 저항을 초과하지 않아야한다. 큰 내경 및 / 또는 짧은 길이의 정맥으로 작업 정맥의 저항을 줄이는 데 도움이됩니다. 마지막으로, 마우스에있는 FOT 측정의 현재 데모는 시간이 많이 소요되므로 비효율적 인 방법이나 침략 기술을 이하에 비해 종 연구에 덜 적용되는 것으로 인식 될 수 있습니다. 그러나 후자는 자신의 성과의 기초에 대한 불확실성의 큰 거래와 관련된 1 결함 것으로 많은 볼 수 있습니다. 반복 된 침략 측정은 기술적으로 도전 17 있지만, 경구 삽관 동물에서 가능합니다. 제공된 예제에서 결과는 호흡 역학의 측정을 생산에 flexiVent 시스템의 두 세대의 등가뿐만 아니라,기도 hyperreac을 보여흡입 메타 콜린에 tivity 및 과민 반응은 생쥐의 염소 노출에 따라. 생리적 변화 또는 질병 모델을 특성화하거나 이해하는 데 사용할 때 기술에 관한 상세한 측정 측면은 지식의 현재 상태를 확장에 기여할 수 있습니다.

작은 동물의 폐의 기계적 성질의 적절한 특성화 호흡기 과학 쥐 모델의 급성장 때문에 필수가되었다. 강제 진동 기법 (FOT), 또한 인간의 과목에서 사용되는 기술을 사용하여 수행하는 경우, 이러한 측정은 의미있는 생리적 변화를 연구 할 수있는 강력한 통합 및 번역 방법을 제공합니다. FOT 측정은 일반적으로 미리 정의 된 작은 진폭, 피사체의기도 오프닝 1에 적용 진동 공기 파형 (도 교란 또는 입력 신호라고도 함)에 반응 취득 압력과 부피 신호를 분석하여 얻을 수 있습니다. 가장 간단한 형태의 FOT 섭동은 잘 정의 된 주파수에서 단일 정현파 것입니다. 더 복잡한 교란은 일반적으로 넓은 스펙트럼을 커버하는 특정 (상호 프라임) 주파수 파형의 선택의 중첩으로 구성되어 있습니다. 다중 주파수 분해푸리에 변환을 사용하여 구성 요소에 입력 및 출력 신호는 호흡 시스템의 입력 임피던스 (ZRS)의 계산은 섭동 2에 포함 된 모든 주파수에서 입력과 출력 신호 사이의 전달 함수, 즉 수 있습니다. 따라서, FOT는 하나의 기동 2의 주파수 범위에서 호흡 역학의 동시 평가를 허용합니다. 임피던스 데이터에 맞는 고급 수학적 모델 (예를 들면 일정한 단계 모델 3) 다음기도 (중앙 및 주변 장치) 및 실질 폐 조직에 따라 매개 변수를 1, 3에 대한 응답의 분할을 허용합니다. 생리적 반응 (예를 들면 호흡 주파수, 호흡량, 폐 볼륨, 상부기도, 자연 호흡 노력, 측정 시간) 영향을 미치는 많은 요인이 측정 시스템 및 실험 절차에 의해 통제되고 표준화되어 있기 때문에, 1 기술 캡올바르게 수행되도록 제공 정확하고 재현성있는 측정을 생성 할 수. 이 문서의 목적은 생쥐에서 같은 측정을 실행하기 위해 필요한 절차에 대한 상세한 설명을 시간 순서로 제공하는 것입니다. 준비 단계 (시약, 장비 및 과목), 기계 환기, 폐 기능 측정 및 데이터 분석 : 프로토콜은 네 부분으로 구성되어 있습니다. 호흡 역학의 대표적인 결과의 예를 제공하는 컴퓨터 제어 피스톤 인공 호흡기 (flexiVent, SCIREQ Inc의 몬트리올, 품질 관리, 캐나다)를 사용하여 생성됩니다. 이들은 같은기도 염증, 상피 세포의 손상 및 흡입 분무 메타 콜린 4 증가기도 응답을 특징으로기도 손상의 산화 스트레스 구동 모델에서 순진 마우스뿐만 아니라에서 하였다. 이 프로토콜은 종종 흡입 메타 콜린에 대한기도 반응성을 평가하는 데 사용되는 동안, 다른 결과와 다목적으로 확장천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 폐기종, 폐 섬유증, 폐 손상뿐만 아니라 인간의 질병과 유사한 병리의 형질 전환 마우스 모델로. 등의 병리 이 도구를 사용하여 연구 결과는 생리적 변화 또는 질병 모델의 더 나은 특성과 이해뿐만 아니라 새로운 연구 영역으로 확대에 기여할 수있다.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>REAGENTS</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Acetyl-&beta;-methylcholine chloride </td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>A-2251</td>
 <td>Methacholine</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro-Adson forceps, serrated 12 cm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11018-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Moria MC31 forceps, serrated-curved</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>11370-31</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Iris scissors-tough cut, straight 11.5 cm</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>14058-11</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Spring scissors-2.5 mm blades, straight</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>15000-08</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Non-sterile blunt needle (18g x &frac12;")</td>
 <td>Brico Medical Supplies Inc.</td>
 <td>BN1805</td>
 <td>Endotracheal cannula</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Non-sterile 5-0 silk suture</td>
 <td>Seraflex</td>
 <td>IDI58000</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Phosphate buffered solution</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>14190-144</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>15 ml conical tubes</td>
 <td>Starstedt</td>
 <td>SS-4001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1 ml TB syringes</td>
 <td>Becton Dickinson</td>
 <td>309626</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>200 &mu;l filter tips</td>
 <td>Biosphere</td>
 <td>70.760.211</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>EQUIPMENT</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>flexiVent FX</td>
 <td>SCIREQ Inc. </td>
 <td>sales@scireq.com</td>
 <td><a href="http://www.scireq.com/" target="_blank">www.scireq.com</a></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Aerogen Aeroneb nebulizer</td>
 <td>SCIREQ Inc.</td>
 <td>sales@scireq.com</td>
 <td><a href="http://www.scireq.com/" target="_blank">www.scireq.com</a></td>
 </tr>
 </tbody>
 </table>

evaluation of respiratory system mechanics in mice using the forced oscillation technique

강제 진동 기법 (FOT)는 포괄적 인 상세한, 정확하고 재현성있는 방식으로 생쥐의 폐 기능의 실험 평가를 허용하는 강력한 통합 및 번역 도구입니다. 그것은 미리 정의 된 작은 진폭, 일반적으로 피사체의기도 오프닝에서 적용되는 진동 공기 흐름 파형에 반응 취득 압력과 부피 신호의 분석을 통해 호흡 역학의 측정​​을 제공합니다. 현재 프로토콜 세부 사항을 적절 컴퓨터 제어 피스톤 인공 호흡기 (flexiVent, SCIREQ Inc의 몬트리올, 품질 관리, 캐나다)를 사용하여 생쥐에서 강제 진동 측정을 실행하는 데 필요한 단계. 준비 단계, 기계 환기, 폐 기능 측정 및 데이터 분석 : 설명은 네 부분으로 나누어 져 있습니다. 또한 마취 쥐의 흡입 메타 콜린에 대한기도 반응성을 평가하는 방법에 대한 자세한 내용이 techniqu의 일반적인 응용 프로그램이 포함되어 있습니다또한 다른 결과와 각종 폐 병리로 확장 전자. 기도 손상의 산화 스트레스 구동 모델에서뿐만 아니라 순진 생쥐에서 얻은 측정뿐만 아니라 새로운 연구 영역에서 응용 프로그램으로이 도구를 잘 특성화 및 연구 생리적 변화 또는 질병 모델에 대한 이해에 기여할 수있는 방법을 설명하기 위해 제공됩니다.

호흡 기계 역학 측정. 표 4는 flexiWare 7 소프트웨어에서 지원하는 두 개의 flexiVent 세대 중 하나를 사용하여베이스 라인과 같은 메타 콜린에 의한 기관지에서 얻은 순진 A / J 마우스 (12.5 밀리그램 / ML)에서 전형적인 결과를 보여줍니다. 닫힌 가슴 조건, 즉 호흡의 메커니즘은, 근접한 방식 (스냅 샷-150, 빠른 프라임-3, 각각)에서 단일 및 광대역 주파수 강제 진동 가족의 섭동을 교류하여 평가 하였다. 환기 측정, 빠른 프라임-3, 국무-8로 유사한 주파수 범위를 커버하는 동안 일시 중지하지만, 짧은 기간 (3 대 8 초)가, 무호흡 기간을 단축하기 위해 선정되기 때문에,의 영향을 최소화 혈액 가스에 섭동과 응답의 더 나은 해상도를 제공합니다. 각 섭동과 관련된 매개 변수는 AUTOMATICA 계산 하였다베드로 운영 소프트웨어 있습니다. 결과는 flexiVent 시스템의 두 세대가 호흡 역학의 동등한 측정 값을 생성하는 보여줍니다. 폐 반응의 사이트. 폐 반응의 사이트를 구별하는 것은 조사가 더 약물 개입 6 잠재적 인 점을 확인하는뿐만 아니라 영향을받는 영역을 정확하게 할 수 있습니다. 측정이 이루어지는에 대해 기말 압력은 3 ~ 9 CMH 2 O (그림 6A, 스냅 샷-150)로 증가 할 때 예를 들어, 순진 A / J 마우스는 기준 저항의 증가를 보여줍니다. 본 실시 예에서, 광대역 FOT 측정 (빠른 프라임-3)의 사용은 저항의 변화에 대한 근거를 명확히하기 위해 세부 사항을 제공 : 기말 압력의 변화와 일치 (R N)기도 저항의 감소 결과 높은 폐 볼륨의 기관지 효과와 더 큰 인플레 압박URE (그림 6D) 및 조직 감쇠 (G, 그림 6E)의 증가 밀접하게 조직 점탄성 그리고 아마도 작은기도 7의 저항을 반영하는 조직의 저항에 관련된 매개 변수입니다. 후자는 증가하는 폐 볼륨 증가하는 것으로 알려져있다. 기도 과민성. 다음과 염소 가스 노출, 흡입 메타 콜린에 대한기도 응답은기도 손상 4 (그림 2)의 결과로 글루 Balb / C 마우스에서 공기 노출에 비해 증가합니다. 염소는 특히 상피 세포,기도의 구조적 세포의 파괴로 이어지는, 그리고 염증 세포의 모집을 유도 산화 스트레스를 유발하는 것으로 알려져 있습니다. 그림 5에 표시된대로, 호흡 역학을 설명하는 모든 매개 변수의 변화는 증가하는 메타 콜린 도전에 대한 응답으로 볼 수 있습니다. 공기에 노출 된 생쥐에 비해, 마우스 염화물에 노​​출NE 가스는 모든 FOT 매개 변수 (그림 5A, 5B, 5D-5F)뿐만 아니라 저항 배로을 일으킬 데 필요한 메타 콜린의 농도의 감소에 의해 예시 농도 - 반응 곡선의 통계적으로 유의 왼쪽으로 이동에 더 큰 최대 응답을 표시 그리고 elastance (PC 200, 그림 5C). 그 결과, 각각기도 과민성과 염소 가스 흡입 메타 콜린 다음 노출 과민 반응을 보여줍니다. 다른 측량. FOT뿐만 아니라, flexiVent 시스템은 또한 폐 기능 8-10 심혈 11 측정의 다른 유형을 수집하는 데 사용할 수 있습니다. 그림 7은 기준 조건에서 순진 A / J 생쥐의 대표 단계적 압력 구동 압력 - 부피 곡선을 표시 . 곡선의 수축 사지의 상단 부분은 자르-놀즈 방정식 (12)에 적합하다 </<html> &gt;를 한모금과 매개 변수는 소프트웨어에 의해 자동으로 계산됩니다. <img src="/files/ftp_upload/50172/50172table1.jpg" alt="표 1" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172table1highres.jpg" fo:content-width="6in" /> 표 1. 마우스에 사용되는 마취 요법의 예. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172table1large.jpg" target="_blank">큰 테이블을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img src="/files/ftp_upload/50172/50172table2.jpg" alt="표 2" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172table2highres.jpg" fo:content-width="5in" /> 표 2. 생쥐의 폐 기능 측정에 사용 섭동. 시스템에 필요한 * 연장. 주제는 또한 측정하는 동안 폐쇄 plethysmograph에 챔버에 있어야합니다.야윈는 &quot;&gt; 큰 테이블을 보려면 여기를 클릭하십시오. <img src="/files/ftp_upload/50172/50172table3.jpg" alt="표 3" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172table3highres.jpg" fo:content-width="6in" /> 표 3. 단일 및 광대역 주파수 강제 진동 교란 가정에서 내 보낸 매개 변수의 예. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172table3large.jpg" target="_blank">큰 테이블을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img src="/files/ftp_upload/50172/50172table4.jpg" alt="표 4" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172table4highres.jpg" fo:content-width="6in" /> 표 4. 시스템 비교. 폐 역학 매개 변수의 비교 flexiWare 7 소프트웨어에 의해 운영 flexiVent 시스템의 두 세대를 사용하여 수집. 결과는 순진 A / J 마우스 (에서 생성 된 N = 5 /<html> 베이스 라인과 같은 메타 콜린에 의한 기관지에서 그룹) MCH (12.5 밀리그램 / ML). . * 그룹은 반복 측정을위한 양방향 ANOVA와 로그 분산의 동질성 (; GraphPad 소프트웨어, 샌디에고, 미국 GraphPad 프리즘 버전 5.03)의 각 응답의 10을 사용 하였다 <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig1.jpg" alt="그림 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig1highres.jpg"/> 그림 1. 깊은 폐 인플레이션의 스크린 샷. 상단 패널은 인공 호흡기의 피스톤 (적색 트레이스)과 주제 (회색 추적)에 전달 부피 전치 볼륨을 보여줍니다. 하단 패널은 3 초에 걸쳐 30 CMH 2 O의 설정 압력을 증가 실린더 압력을 표시하고 같은 기간 동안 일정하게 유지. 172/50172fig2.jpg &quot;고도 =&quot;그림 2 &quot;/&gt; 그림 2. 기준선에서 호흡 역학을 평가하는 데 사용되는 일반적인 스크립트의 예. <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 단계적 압력 볼륨 곡선의 실행 중에 자연 흡기 노력. <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig4.jpg" alt="그림 4" fo:content-width="2.6in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig4highres.jpg"/> 그림 4. 시간 과정 응답 다음은 흡입 메타 콜린 문제를 증가. 결과는 5 순진 자발적으로 hyperresponsive A / J 생쥐의 그룹의 평균 (± 표준 편차)로 표현된다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172fig4large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . &lt;P 클래스 = &quot;jove_content&quot;FO : 유지 - together.within 페이지 = &quot;항상&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig5.jpg" alt="그림 5" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig5highres.jpg"/> 그림 5. 증가하는 메타 콜린에 도전 염소와 공기에 노출 글루 Balb / C 마우스에 따라 호흡 역학의 변화. 피크 값은 모든 과목과 실험 조건에서 각 매개 변수에 대해 확인되었다. 그룹 평균은 다음 (; N = 4-6 평균 ± 표준 편차)으로 계산 하였다. 그룹 간의 차이는 분산의 동질성에 대한 개별 반응의 로그 10를 사용하여 분산 분석에 의해 평가되었다. 기준의 두배 (PC 200)를 생산하는 메타 콜린의 농도는 각각의 용량 - 반응 곡선과 장착 곡선의 보간에 두 번째 주문 다항식 피팅을 얻었다. 데이터 점 D에서 누락 된 E 및 염소에 노출 된 생쥐에서 F데이터에 대한 수학적 모델의 빈약 한 적합을 반영하는 결정에 충분히 높은 계수로 인해 두 개의 높은 메타 콜린의 농도.에서 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172fig5large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig6.jpg" alt="그림 6" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig6highres.jpg"/> 그림 6. 기도와 폐 조직 역학에 호흡 반응의 분할. 실험 추적이 순진에서 (1-20.5Hz) 싱글 (2.5 Hz에서) 및 광대역 주파수를 설명하는 A / J 마우스는 두 가지 기말 압력에서 세중 호흡 기계의 진동 측정을 강제로 (3, 9 CMH 2 O). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50172/50172fig6large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> </&gt;. <img src="/files/ftp_upload/50172/50172fig7.jpg" alt="그림 7" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50172/50172fig7highres.jpg"/> 그림 7. 기준 조건에서 순진 A / J 마우스의 압력 볼륨 커브. 압력 볼륨 곡선은 각 마우스의 폐는 독립적으로 자신의 상태의 같은 압력으로 팽창 된 것을 확인하기 위해 단계적 압력 중심의 섭동 (PVs의-P)를 사용하여 생성 하였다. 자르-Knowles의 개별 압력 볼륨 곡선에서 추출 방정식 매개 변수는 평균과 표 형식으로보고되었다. 결과는 평균 ± 표준 편차 (n = 6)으로 표현됩니다.

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique at JoVE.com

Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique

SCIREQ Inc의 몬트리올, 품질 관리, 현재의 프로토콜은 호흡 역학의 측정​​뿐만 아니라 강제 진동 기술을 사용하여 마우스의 흡입 메타 콜린에 대한기도 응답의 평가 (flexiVent을 실행하는 데 필요한 절차에 대한 자세한 단계별 설명을 제공합니다 , 캐나다).

강제 진동 기술을 사용하여 마우스의 호흡기 시스템 역학의 평가

The  forced oscillation technique (FOT) is a powerful, integrative and translational  tool permitting the experimental assessment of lung function in mice ...

evaluation-respiratory-system-mechanics-mice-using-forced-oscillation

Research

JoVE Journal

Biology

56.0K 조회수.  McGill University. SCIREQ Inc의 몬트리올, 품질 관리, 현재의 프로토콜은 호흡 역학의 측정​​뿐만 아니라 강제 진동 기술을 사용하여 마우스의 흡입 메타 콜린에 대한기도 응답의 평가 (flexiVent을 실행하는 데 필요한 절차에 대한 자세한 단계별 설명을 제공합니다 , 캐나다).

비디오: Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique

Evaluation of the Spatial Distribution of &gamma;H2AX following Ionizing Radiation

An early molecular response to DNA double-strand breaks (DSBs) is phosphorylation of the Ser-139 residue within the terminal SQEY motif of the histone H2AX1,2. This phosphorylation of H2AX is mediated by the phosphatidyl-inosito 3-kinase (PI3K) family of proteins, ataxia telangiectasia mutated (ATM), DNA-protein kinase catalytic subunit and ATM and RAD3-related (ATR)3. The phosphorylated form of H2AX, referred to as &gamma;H2AX, spreads to adjacent regions of chromatin from the site of the DSB, forming discrete foci, which are easily visualized by immunofluorecence microscopy3. Analysis and quantitation of &gamma;H2AX foci has been widely used to evaluate DSB formation and repair, particularly in response to ionizing radiation and for evaluating the efficacy of various radiation modifying compounds and cytotoxic compounds4.
Given the exquisite specificity and sensitivity of this de novo marker of DSBs, it has provided new insights into the processes of DNA damage and repair in the context of chromatin. For example, in radiation biology the central paradigm is that the nuclear DNA is the critical target with respect to radiation sensitivity. Indeed, the general consensus in the field has largely been to view chromatin as a homogeneous template for DNA damage and repair. However, with the use of &gamma;H2AX as molecular marker of DSBs, a disparity in &gamma;-irradiation-induced &gamma;H2AX foci formation in euchromatin and heterochromatin has been observed5-7. Recently, we used a panel of antibodies to either mono-, di- or tri- methylated histone H3 at lysine 9 (H3K9me1, H3K9me2, H3K9me3) which are epigenetic imprints of constitutive heterochromatin and transcriptional silencing and lysine 4 (H3K4me1, H3K4me2, H3K4me3), which are tightly correlated actively transcribing euchromatic regions, to investigate the spatial distribution of &gamma;H2AX following ionizing radiation8. In accordance with the prevailing ideas regarding chromatin biology, our findings indicated a close correlation between &gamma;H2AX formation and active transcription9. Here we demonstrate our immunofluorescence method for detection and quantitation of &gamma;H2AX foci in non-adherent cells, with a particular focus on co-localization with other epigenetic markers, image analysis and 3D-modeling.

Evaluation of the Spatial Distribution of &amp;#947;H2AX following Ionizing Radiation

Microscopic analysis of &gamma;H2AX foci, which form following the phosphorylation of H2AX at Ser-139 in response to DNA double-strand breaks, has become an invaluable tool in radiation biology. Here we used an antibody to mono-methylated histone H3 at lysine 4 as an epigenetic marker of actively transcribing euchromatin, to evaluate the spatial distribution of radiation-induced &gamma;H2AX formation within the nucleus.

이온화 방사선 다음 γH2AX의 공간적 분포 평가

An early molecular response to DNA double-strand breaks (DSBs) is phosphorylation of the Ser-139 residue within the terminal SQEY motif of the histone ...

연구

생물학

Visualization of DNA Replication in the Vertebrate Model System DT40 using the DNA Fiber Technique

Maintenance of replication fork stability is of utmost importance for dividing cells to preserve viability and prevent disease. The processes involved not only ensure faithful genome duplication in the face of endogenous and exogenous DNA damage but also prevent genomic instability, a recognized causative factor in tumor development.
Here, we describe a simple and cost-effective fluorescence microscopy-based method to visualize DNA replication in the avian B-cell line DT40. This cell line provides a powerful tool to investigate protein function in vivo by reverse genetics in vertebrate cells1. DNA fiber fluorography in DT40 cells lacking a specific gene allows one to elucidate the function of this gene product in DNA replication and genome stability. Traditional methods to analyze replication fork dynamics in vertebrate cells rely on measuring the overall rate of DNA synthesis in a population of pulse-labeled cells. This is a quantitative approach and does not allow for qualitative analysis of parameters that influence DNA synthesis. In contrast, the rate of movement of active forks can be followed directly when using the DNA fiber technique2-4. In this approach, nascent DNA is labeled in vivo by incorporation of halogenated nucleotides (Fig 1A). Subsequently, individual fibers are stretched onto a microscope slide, and the labeled DNA replication tracts are stained with specific antibodies and visualized by fluorescence microscopy (Fig 1B). Initiation of replication as well as fork directionality is determined by the consecutive use of two differently modified analogues. Furthermore, the dual-labeling approach allows for quantitative analysis of parameters that influence DNA synthesis during the S-phase, i.e. replication structures such as ongoing and stalled forks, replication origin density as well as fork terminations. Finally, the experimental procedure can be accomplished within a day, and requires only general laboratory equipment and a fluorescence microscope.

DT40, a model vertebrate genetic system, provides a powerful tool to analyze protein function. Here we describe a simple method that allows qualitative analysis of parameters that influence DNA synthesis during the S-phase in DT40 cells at the single molecule level.

DNA 복제의 시각화는 척추 모델 시스템 DT40의 DNA 섬유 기술을 사용하여

Maintenance of replication fork stability is of utmost importance for dividing cells to preserve viability and prevent disease. The processes involved not ...

Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI

The cuticle of C. elegans is a highly resistant structure that surrounds the exterior of the animal1-4. The cuticle not only protects the animal from the environment, but also determines body shape and plays a role in motility4-6. Several layers secreted by epidermal cells comprise the cuticle, including an outermost lipid layer7.
Circumferential ridges in the cuticle called annuli pattern the length of the animal and are present during all stages of development8. Alae are longitudinal ridges that are present during specific stages of development, including L1, dauer, and adult stages2,9. Mutations in genes that affect cuticular collagen organization can alter cuticular structure and animal body morphology5,6,10,11. While cuticular imaging using compound microscopy with DIC optics is possible, current methods that highlight cuticular structures include fluorescent transgene expression12, antibody staining13, and electron microscopy1. Labeled wheat germ agglutinin (WGA) has also been used to visualize cuticular glycoproteins, but is limited in resolving finer cuticular structures14. Staining of cuticular surface using fluorescent dye has been observed, but never characterized in detail15. We present a method to visualize cuticle in live C. elegans using the red fluorescent lipophilic dye DiI (1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate), which is commonly used in C. elegans to visualize environmentally exposed neurons. This optimized protocol for DiI staining is a simple, robust method for high resolution fluorescent visualization of annuli, alae, vulva, male tail, and hermaphrodite tail spike in C. elegans.

Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI

We present a method to visualize cuticle in live C. elegans using the red fluorescent lipophilic dye DiI (1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate), which is commonly used in C. elegans to visualize environmentally exposed neurons. With this optimized protocol, alae and annular cuticular structures are stained by DiI and observed using compound microscopy.

의 시각화 Caenorhabditis Elegans</emLipophilic 바이탈 염료, DiI를 사용하기> 표피 구조

The cuticle of C. elegans is a highly resistant structure that surrounds the exterior of the animal1-4. The cuticle not only protects the animal from the ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term storage of biological materials such as blood, cells and tissues 1,2. The cryogenic nature of liquid nitrogen, while ideal for sample preservation, can cause rapid freezing of live tissues on contact - known as 'cryogenic burn'2, which may lead to severe frostbite in persons closely involved in storage and retrieval of samples from Dewars. Additionally, as liquid nitrogen evaporates it reduces the oxygen concentration in the air and might cause asphyxia, especially in confined spaces2.
In laboratories, biological samples are often stored in cryovials or cryoboxes stacked in stainless steel racks within the Dewar tanks1. These storage racks are provided with a long shaft to prevent boxes from slipping out from the racks and into the bottom of Dewars during routine handling. All too often, however, boxes or vials with precious samples slip out and sink to the bottom of liquid nitrogen filled tank. In such cases, samples could be tediously retrieved after transferring the liquid nitrogen into a spare container or discarding it. The boxes and vials can then be relatively safely recovered from emptied Dewar. However, the cryogenic nature of liquid nitrogen and its expansion rate makes sunken sample retrieval hazardous. It is commonly recommended by Safety Offices that sample retrieval be never carried out by a single person. Another alternative is to use commercially available cool grabbers or tongs to pull out the vials3. However, limited visibility within the dark liquid filled Dewars poses a major limitation in their use.
In this article, we describe the construction of a Cryotolerant DIY retrieval device, which makes sample retrieval from Dewar containing cryogenic fluids both safe and easy.

Here we present a low cost, durable cryotolerant device for sample retrieval from Dewar tanks filled with liquid nitrogen. The ease of construction and modular design of the device makes the process of sample retrieval from cryogenic tanks safe and easy.

Cryopreserved 샘플 복구를 위해 손수 함 장치 실수로 극저온 저장 탱크 떨어졌고

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

A High-throughput Method for Measurement of Glomerular Filtration Rate in Conscious Mice

The measurement of glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard in kidney function assessment. Currently, investigators determine GFR by measuring the level of the endogenous biomarker creatinine or exogenously applied radioactive labeled inulin (3H or 14C). Creatinine has the substantial drawback that proximal tubular secretion accounts for ~50% of total renal creatinine excretion and therefore creatinine is not a reliable GFR marker. Depending on the experiment performed, inulin clearance can be determined by an intravenous single bolus injection or continuous infusion (intravenous or osmotic minipump). Both approaches require the collection of plasma or plasma and urine, respectively. Other drawbacks of radioactive labeled inulin include usage of isotopes, time consuming surgical preparation of the animals, and the requirement of a terminal experiment. Here we describe a method which uses a single bolus injection of fluorescein isothiocyanate-(FITC) labeled inulin and the measurement of its fluorescence in 1-2 &mu;l of diluted plasma. By applying a two-compartment model, with 8 blood collections per mouse, it is possible to measure GFR in up to 24 mice per day using a special work-flow protocol. This method only requires brief isoflurane anesthesia with all the blood samples being collected in a non-restrained and awake mouse. Another advantage is that it is possible to follow mice over a period of several months and treatments (i.e. doing paired experiments with dietary changes or drug applications). We hope that this technique of measuring GFR is useful to other investigators studying mouse kidney function and will replace less accurate methods of estimating kidney function, such as plasma creatinine and blood urea nitrogen.

Measurement of glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard for kidney function assessment. Here we describe a high-throughput method which allows the determination of GFR in conscious mice by using a single bolus injection, determination of fluorescein isothiocyanate (FITC)-inulin in plasma and calculation of GFR by a two-phase exponential decay model.

의식 쥐의 사구체 여과율의 측정을위한 높은 처리량 방법

The measurement of  glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard in kidney function  assessment. Currently, investigators determine GFR by ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

사용<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em&gt; 다세포 생물의 단백질 항상성을 연구하는 모델 시스템으로

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Measuring Respiratory Function in Mice Using Unrestrained Whole-body Plethysmography

Respiratory dysfunction is one of the leading causes of morbidity and mortality in the world and the rates of mortality continue to rise. Quantitative assessment of lung function in rodent models is an important tool in the development of future therapies. Commonly used techniques for assessing respiratory function including invasive plethysmography and forced oscillation. While these techniques provide valuable information, data collection can be fraught with artefacts and experimental variability due to the need for anesthesia and/or invasive instrumentation of the animal. In contrast, unrestrained whole-body plethysmography (UWBP) offers a precise, non-invasive, quantitative way by which to analyze respiratory parameters. This technique avoids the use of anesthesia and restraints, which is common to traditional plethysmography techniques. This video will demonstrate the UWBP procedure including the equipment set up, calibration and lung function recording. It will explain how to analyze the collected data, as well as identify experimental outliers and artefacts that results from animal movement. The respiratory parameters obtained using this technique include tidal volume, minute volume, inspiratory duty cycle, inspiratory flow rate and the ratio of inspiration time to expiration time. UWBP does not rely on specialized skills and is inexpensive to perform. A key feature of UWBP, and most appealing to potential users, is the ability to perform repeated measures of lung function on the same animal.

The assessment of respiratory physiology has traditionally relied upon techniques, which require restraint or sedation of the animal. Unrestrained whole-body plethysmography, however, provides precise, non-invasive, quantitative analysis of respiratory physiology in animal models. In addition, the technique allows repeated respiratory assessment of mice allowing for longitudinal studies.

무제한 전신 혈량 측정법을 사용하여 마우스의 호흡 기능을 측정

Respiratory dysfunction is one of the leading causes of morbidity and mortality in the world and the rates of mortality continue to rise. Quantitative ...

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and alopecia areata. Alopecia can also occur as a side effect of chemotherapy in cancer patients. In this study, our goal was to develop a consistent and reliable method to quantify hair loss in mice, which will allow investigators to accurately assess and compare new therapeutic approaches for these various forms of alopecia. The method utilizes a standard gel imager to obtain and process images of mice, measuring the light absorption, which occurs in rough proportion to the amount of black (or gray) hair on the mouse. Data that has been quantified in this fashion can then be analyzed using standard statistical techniques (i.e., ANOVA, T-test). This methodology was tested in mouse models of chemotherapy-induced alopecia, alopecia areata and alopecia from waxing. In this report, the detailed protocol is presented for performing these measurements, including validation data from C57BL/6 and C3H/HeJ strains of mice. This new technique offers a number of advantages, including relative simplicity of application, reliance on equipment which is readily available in most research laboratories, and applying an objective, quantitative assessment which is more robust than subjective evaluations. Improvements in quantification of hair growth in mice will improve study of alopecia models and facilitate evaluation of promising new therapies in preclinical studies.

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including as a side-effect of chemotherapy. We have developed a method to quantify hair loss in mice, utilizing a standard gel imager to perform a grayscale analysis, to facilitate study of promising new alopecia therapies.

그레이 스케일 분석을 사용하여 마우스의 탈모의 정량 분석​​을위한 새로운 기술

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a prerequisite for studying the physiology of the isolated organ and for many innovative applications that may be possible in the future, including perfusion decellularization for kidney bioengineering or the administration of anti-rejection or genome-editing drugs in high doses to prime the kidney for transplantation. During the time of the perfusion, the kidney can be manipulated, renal function can be assessed, and various pharmaceuticals administered. After the procedure, the kidney can be transplanted or processed for molecular biology, biochemical analysis, or microscopy.
This paper describes the perfusate and the surgical technique needed for the ex vivo perfusion of mouse kidneys. Details of the perfusion apparatus are given and data are presented showing the viability of the kidney&#39;s preparation: renal blood flow, vascular resistance, and urine data as functional, transmission electron micrographs of different nephron segments as morphological readouts, and western blots of transport proteins of different nephron segments as molecular readout.

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. The buffers and surgical technique are described in detail.

마우스입니다 관류 신장 기법

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Induction of Right Ventricular Failure by Pulmonary Artery Constriction and Evaluation of Right Ventricular Function in Mice

The mechanism of right ventricular failure (RVF) requires clarification due to the uniqueness, high morbidity, high mortality, and refractory nature of RVF. Previous rat models imitating RVF progression have been described. Compared with rats, mice are more accessible, economical, and widely used in animal experiments. We developed a pulmonary artery constriction (PAC) approach which is comprised of banding the pulmonary trunk in mice to induce right ventricular (RV) hypertrophy. A special surgical latch needle was designed that allows for easier separation of the aorta and the pulmonary trunk. In our experiments, the use of this fabricated latch needle reduced the risk of arteriorrhexis and improved the surgical success rate to 90%. We used different padding needle diameters to precisely create quantitative constriction, which can induce different degrees of RV hypertrophy. We quantified the degree of constriction by evaluating the blood flow velocity of the PA, which was measured by noninvasive transthoracic echocardiography. RV function was precisely evaluated by right heart catheterization at 8 weeks after surgery. The surgical instruments made inhouse were composed of common materials using a simple process that is easy to master. Therefore, the PAC approach described here is easy to imitate using instruments made in the lab and can be widely used in other labs. This study presents a modified PAC approach that has a higher success rate than other models and an 8-week postsurgery survival rate of 97.8%. This PAC approach provides a useful technique for studying the mechanism of RVF and will enable an increased understanding of RVF.

Here, we provide a useful approach for studying the mechanism of right ventricular failure. A more convenient and efficient approach to pulmonary artery constriction is established using surgical instruments made inhouse. In addition, methods to evaluate the quality of this approach by echocardiography and catheterization are provided.

폐 동맥 수축에 의한 우심실 장애 유도 및 마우스의 우심실 기능 평가

The mechanism of right ventricular failure (RVF) requires clarification due to the uniqueness, high morbidity, high mortality, and refractory nature of ...