Mouse Wound Models and Preparation of Single-Cell Suspensions

본 연구는 주로 MSC 유래 세포외 매개체의 탯줄이 단세포 수준에서 상처 치유에 미치는 영향에 초점을 맞췄습니다. 그리고 이 연구 부분의 주요 목표는 실험의 중요한 토대인 안정적이고 급성이며 전체 두께 부상 질량 모델을 확립하는 것입니다. 상처 치유 과정은 매우 복잡하며, 시간과 공간 속에서 다양한 세포의 동기화된 상호 작용을 포함합니다.

단세포 및 염기서열분석(single cell and sequencing)은 세포의 독창성을 연구하고 뼈 치유 중 세포 분화 및 발달 궤적을 예측하는 최신 방법이 되었습니다. 그리고 왜곡된 조직에서 고품질 단일 세포 현탁액을 얻는 것이 이 연구의 핵심입니다. 당사의 프로토콜은 부상 마우스 모델에서 보다 안정적이고 완전한 두께를 만들어 모발 주기 및 측면 장력 문제를 피하고 마우스 긁힘 및 자연스러운 활동이 결과에 영향을 미치는 것을 방지합니다.

또한 효율적인 조직 해리를 위해 혼합 효소를 사용하여 고품질 단세포 현탁액을 산출합니다. 시작하려면 쥐를 대조군 및 실험 그룹에 무작위로 할당하고 특정 병원체가 없는 동물 시설에 수용합니다. 생쥐가 표준 식품과 오토클레이브 수돗물을 제한 없이 이용할 수 있도록 합니다.

마우스를 엎드린 자세로 부드럽게 고정하고 알코올 면봉으로 복부를 청소합니다. 마우스를 마취 한 후 제모 크림을 뒤쪽에 바르고 2 분 동안 기다립니다. 피부가 손상되지 않도록 촉촉한 거즈로 크림을 부드럽게 닦아냅니다.

그런 다음 마른 멸균 거즈로 피부를 닦으십시오. 오토클레이브 피부 생검 펀치, 가위, 집게 및 새 수술용 천을 멸균 플랫폼에 배열합니다. 마취된 마우스를 엎드린 자세로 놓고 베타딘과 70% 알코올을 번갈아 가며 면봉 3개로 등 피부를 소독합니다.

스탬프를 잉크에 담그고 마우스 뒷면의 상단 중간 부분에 표시를 합니다. 수술용 가위를 사용하여 원형 표시를 따라 등의 피부층 전체를 조심스럽게 절제하여 근육층을 완전히 노출시킵니다. 드레싱을 하지 않고 상처를 열어 두면 자연스럽게 딱지가 형성될 수 있습니다.

10%부프레노르핀 염산염 0.1ml를 상처 근처에 피하로 투여합니다. 마우스를 엎드린 자세로 개별 케이지에 다시 놓습니다. 마취 후 이틀에 한 번씩 쥐의 상처를 관찰하고 사진을 찍어 상처 크기를 측정합니다.

피하주사로 치료군에서 마취된 마우스의 절개 부위 주위에 엑소좀 유래의 인간 탯줄 중간엽 줄기세포 100마이크로그램을 주입합니다. 대조군 마우스의 절개 부위 주위에 200마이크로리터의 PBS를 주입합니다. 마우스의 양쪽에 상처를 놓으면 마우스 피부 탄력성으로 인해 상처 부위에 눈에 띄는 차이가 발생했습니다.

인간 탯줄 중간엽 줄기세포 유래 엑소좀 치료군은 대조군에 비해 빠른 치유를 보였다. 완전한 치유는 봉합된 금속 링 그룹보다 스탬프 모델에서 더 빠르게 일어났습니다.