The authors would like to acknowledge funding support from the University of South Florida, Department of Surgery (Mack Wu, MD, PhD).

참고 : 아래에 제시된 모든 동물 절차에 대한 승인은 사우스 플로리다의 동물 관리위원회 (IACUC)의 대학에서 얻은 동물 복지법 및 실험실 동물의 관리 및 사용을위한 설명서의 모든 요구 사항을 준수했다. 실리콘 시트 및 수술 도구 1. 준비 <ol><li> 규격에 맞게 자르는 스트립 (10.5 cm X 3.0 cm) 0.01 두께, 의료용 실리콘 시트를 비는 강화 및 오토 클레이브를 사용하여 소독. </li><li> 청소하고 (수술 중 멸균 필드를 만들 가위, 집게와 커튼이나 수건) 적절한 수술 도구를 소독. </li></ol> 2. 실험 동물 <ol><li> 성인 남성 또는 상업적 개종에서 얻은 250-350g 범위에 무게 암컷 쥐를 사용합니다. 세 래트가 이용되는 경우, 더 잘 수술 후 생존을 보장하기 위해 ≥350 g이어야한다. 모든 실험의 시작에 앞서 적어도 모든 동물을 순응먹이와 물은 마음대로 먹게하면서 12 시간 명암주기의 표준 조건 하에서 칠일. </li></ol> 3. 마취, 수술 전 진통과 수술 준비 <ol><li> 유도 챔버를 통해 3 % -4 %를 이소 플루 란을 사용하여 전신 마취를 유도하고 피부 준비 및 수술 중 O 2 1 %에서 (코 콘의 사용을 통해) -2 %를 유지한다. 속도와 호흡, 인터 ​​핀치 또는 눈꺼풀 깜빡임과 깊이의 관찰에 의해 마취의 깊이를 모니터링합니다. 주 :이 때, 수의사 연고 동물이 마취 상태에서 건조를 방지하기 위해 눈 상에 배치 될 수있다. </li><li> 무균 수술 영역에서 위치 원격에서 발생하기 쉬운 위치에 쥐를 배치하고 목 아래 약 11cm의 기지에서 가위로 배부 면도. 영구 마커 스텐실, 3.0 cm X 10.5 cm 플랩에 대한 개요는 (그림 1A 참조). </li><li> 깨끗하고 지정된 surgica에 쥐를 이동승인 된 가열 패드 및 무균 수술 커튼이나 수건을 갖추고 리터 영역입니다. 통증 관리를위한 제 절개 수술 5 ㎎ / kg 케토 프로 피하 주사 종래. 필요에 따라 추가의 유체 (생리 식염수)를 피하에 (최대 5를 CC)을들 수있다. </li><li> 멸균 필드를 만들 멸균 커튼을 적용 후, 70 % 이소 프로필 알코올 0.2 % 클로르헥시딘과 초 먼저 보라고하여 더 피부를 준비합니다. 10 % 포비돈 - 요오드 (베타 딘)도 사용할 수있다. 참고 : 항생제 (15 ㎎ / ㎏에서 암피실린)를 피하 투여 할 수 있지만, 좋은 무균 기술을 사용하는 경우, 그것은 필요하지 않습니다. </li></ol> 4. 절제 상처와 Bipedicled 플랩 만들기 <ol><li> 멸균 일회용 6mm 생검 펀치 도구를 사용하여, 지정된 영역 플랩 (도 1b)의 중심에 두 개의 원형 &quot;허혈&quot;상처를 만든다. 상처의 깊이는 아래 (안 통해)에 panniculus의 carno의 기본 근막해야SUS 근육 (그림 1B 인세 트). </li><li> 사용 집게 펀치 생검에 의해 생성 된 상처 윤곽의 중간에 피부를 들어 올린 다음 (panniculus의 카르노 서스 근육 포함) 조직의 원형 조각을 절제하는 (곡선 팁) 홍채 가위를 사용합니다. 결과는 상처의 기부로서 근막 권취 전층 것이다. 참고 : 적출 한 조직 (상처 플러그) 액체 질소에 냉동 또는 제어와 같은 후 처리, 정상 피부에 10 % 완충 포르말린 O / N에 고정 스냅 할 수 있습니다. </li><li> 떨어져 길이 10.5 cm 3.0 cm있는 사전으로 그린 선 (그림 1C)을 따라 허혈성 상처의 각 측면에 멸균 메스로 절개를함으로써 bipedicled 플랩을 만듭니다. 절개의 깊이는 아래 paraspinous 근육해야한다. 홍채 가위를 사용하여, (6mm 펀치의 &quot;기본&quot;으로 그대로의 밴드되지 않도록 조심스럽게 paraspinous 근육에서 F를 panniculus의 카르노 서스 근막을 분리igure 1D). </li><li> 1 멸균 프리 컷 실리콘 시트를 가지고 panniculus의 카르노 서스 근막 시트가 구부러 지거나 접하지 않는 것을 보장 paraspinous 근육 (그림 1E) 사이를에 배치합니다. 블랙, 비 흡수성 봉합사 (크기 4.0)를 사용하여 플랩 (도 1F 및 1G)의 길이를 따라, 각각의 측면상의 적어도 8 중단 바늘 피부에 실리콘 시트를 고정함으로써 두 절개를 닫는다. </li><li> 멸균 일회용 생검 펀치 도구를 사용하여, 1cm가 플랩 (그림 1G)의 양쪽에있는 허혈성 상처에 대해 측면 (panniculus의 카르노 서스 근육의 앞쪽 근막 아래로)이 내부 통제 &quot;비 허혈성&quot;상처를 만들 수 있습니다. </li><li> 상처 아래 통치자를 놓고 상처 측정을 목적으로 (그림 3A 참조) 디지털 사진을 찍어. 이때, 혈류 (재관류) 레이저 도플러 또는 다른 조작이 수행 (국소 약물 배치)를 이용하여 모니터링 할 수있다.</li><li> 뇌와 꼬리 상처와 촉촉하고 (멸균) 깨끗한 상처 환경을 유지하기 위해 드레싱 투명 필름을 모두 승인 된 액체 접착제를 적용합니다. 추가적인 드레싱 가장 꼬리 봉합사를 제거하는 동물을 방지 플랩의 꼬리 단부에 배치 될 수있다. </li></ol> 5. 수술 후 절차 <ol><li> 공급 문지르는 수술 부위를 방지하기 위해 얕은 공급기가 장착 케이지 (단독으로 보관)에있는 동물을 놓습니다. 동물 방치 또는 흉골 드러 누움을 유지하고 목적이있는 운동을 전시 할 수있는 충분한 의식을 되 찾을 때까지 다른 동물의 회사에 반환 할 수 없습니다. 난방 매트를 복구하는 동안 최대 2 일 동안 케이지의 절반 아래에 배치해야합니다. </li><li> 수술 후 통증을 관리하려면, 최대 48 시간의 수술 후는 다음 아침과 하루에 1 배 동물에 피하 케토 프로 펜 (5 ㎎ / ㎏)을 관리 할 수​​ 있습니다. 동물도 매일 모니터링해야통증, 체중 감소 또는 수술 부위 감염의 징후 연장. </li></ol> 6. 후속 상처 측정 및 드레싱 변경 <ol><li> 유도 챔버를 통해 3 %에서 이소 플루 란을 사용하여 전신 마취 자주 -4 %를 허혈성 및 비 허혈성 상처를 측정하고 단계 3.1에서와 같이 O 2와 1 % -2 %에서 (코 콘을 통해) 유지. </li><li> 피부 접착제를 잡아 당기지하기로 부드럽게 드레싱을 제거합니다. 추가 디지털 사진 감아 측정에 찍은이 때, 국소 치료 재인가, 레이저 도플러 영상 (LDI) 또는 연구자의 필요에 맞게 다른 조작을 수행. </li><li> 접착제 깨끗한 드레싱을 적용하고 동물이 단계 5.1에서와 같이 복구 할 수 있습니다. </li></ol> 7. 상처 수집 및 안락사 <ol><li> 동물 공업을 통해 3 % -4 %를 이소 플루 란을 사용하여 전신 마취 상태에서 수확 허혈성 및 비 허혈성 상처 (날이 조사는 적절하다고 판단)uction 챔버 및 단계 3.1에서와 같이 O 2와 1 % -2 %에서 (코 콘을 통해) 유지. </li><li> 메스를 사용하여, 상처 주위의 건강한 조직을 일부 포함하는 상처 주위에 사각형 모양의 절개를 만든다. 1.5 ml의에 절제를 놓고 캡 튜브 스냅와 미래의 분자 분석 (-80 ° C에서 저장) 액체 질소에 동결 스냅 또는 조직 학적 처리를 위해 RT에서 10 % 포르말린의 O에서 / N을 배양한다. 주 : 상처 절개도 분석을 위해 더 많은 샘플을 제공하기 위해 반으로 잘라 될 수있다. </li><li> 상처 조직을 제거한 후, CO 2 흡입의 승인 된 방법을 사용하여 동물을 안락사. </li></ol>

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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+wound+repair.">Animal models for wound repair.</a> Arch Dermatol Res. 290 (S1-11), (1998).</li><li>Finn, G., Magnus, S. A., Tonny, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+use+in+wound+healing+research:+A+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue).">Models for use in wound healing research: A survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue).</a> Wound Repair and Regeneration. 8, (2000).</li><li>Gould, L. J., Leong, M., Sonstein, J., Wilson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+and+validation+of+an+ischemic+wound+model.">Optimization and validation of an ischemic wound model.</a> Wound repair and regeneration : official publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 13 (6), 576-582 (2004).</li><li>Loots, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+cellular+infiltrate+and+extracellular+matrix+of+chronic+diabetic+and+venous+ulcers+versus+acute+wounds.">Differences in cellular infiltrate and extracellular matrix of chronic diabetic and venous ulcers versus acute wounds.</a> The Journal of investigative dermatology. 111 (5), 850-857 (1998).</li><li>Schwartz, D. A., Lindblad, W. J., Rees, R. 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N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consequences+of+age+on+ischemic+wound+healing+in+rats:+altered+antioxidant+activity+and+delayed+wound+closure.">Consequences of age on ischemic wound healing in rats: altered antioxidant activity and delayed wound closure.</a> Age (Dordrecht, Netherlands). 36 (2), 733-748 (2014).</li><li>Roy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+preclinical+model+of+chronic+ischemic+wound).">Characterization of a preclinical model of chronic ischemic wound).</a> Physiological genomics. 37 (3), 211-224 (2009).</li><li>Biswas, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+inducible+microRNA+210+attenuates+keratinocyte+proliferation+and+impairs+closure+in+a+murine+model+of+ischemic+wounds.">Hypoxia inducible microRNA 210 attenuates keratinocyte proliferation and impairs closure in a murine model of ischemic wounds.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (15), 6976-6981 (2010).</li><li>Winocour, S., Vorstenbosch, J., Trzeciak, A., Lessard, L., Philip, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD109,+a+novel+TGF-beta+antagonist,+decreases+fibrotic+responses+in+a+hypoxic+wound+model.">CD109, a novel TGF-beta antagonist, decreases fibrotic responses in a hypoxic wound model.</a> Exp Dermatol. 23 (7), 475-479 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

<html> 쥐의 상처 치유는 종종 인해 감염된 상처와 interanimal 변화 (5)의 높은 비율을 치유 할 수있는 능력에 논쟁의 대상이되어왔다. 개발 중 모델의 원래 목표 중 하나는이 편차를 감소하는 것이었다. 특정 위치와 상처의 수를 감소 플랩의 폭에 대한 수정이, 실리콘 시트 및 소개 (일관성 cranio-꼬리 위치와 플랩을 중심으로)이 목표를 달성했다. 수축에 의해 상처 치유는 또한 인간에서와 같이,...

효과적인 약물 개발 및 다른 상처 치유 치료제는 인간의 치료 1 동물 모델에서 연구 결과를 번역하는 알려진 문제점에도 불구하고, 생체 내 모델에서 적절한 필요합니다. 다음은 병리 기전 상처 치유의 추가적인 이해를 조사하는 허혈성 피부 상처 치유 쥐 모델의 사용을위한 프로토콜의 상세한 설명이다. 쥐의 종, 종종 넓은 가용성, 크기로 인해 고용하고 절개 및 절제 상처, 이미징 및 조직 2 컬렉션에 적합한 피부 영역을 제공하기에 충분히 큰 같이 유순 자연 상처 치유 연구에 사용됩니다. 그러나 쥐가 느슨한 피부 동물 언급되면서, 쥐와 인간의 피부 해부학 적 차이가 심하게 고려해야한다. 이 독특한 특성은 래트 피부의 폐쇄 w 크게 기여하기보다는 오히려 상피화, 상처 수축 허​​용ounds 2. 또한, 쥐의 피하 panniculus 카르노 서스 근육의 존재는, 수축 모두 콜라겐 형성에 의해 3,4- 치유에 기여한다. 이러한 매우 중요한 해부학 적 차이는 허혈 래트의 피부 상처 모델의 개발을 고려하고, 특정 변형 상처 수축을 감소시키고 panniculus 카르노 서스의 근육 (5)의 영향력을 감소시키기 위해 실행되었다. 당뇨병 성 족부 궤양, 다리 궤양, 및 욕창에서 치유가 지연되고 이러한 상처는 만성 간주됩니다. 상처는 상처 수리 (6)의 다음 단계로 진행되지 않도록 상처 과도한 염증을 특징으로한다. 만성 상처의 개발에 주요 요인 중 하나는 염증을 취소 무능력에 기여 지역화 된 조직의 허혈 (감소 혈액의 흐름) 5입니다. 이 모델은 2003-4 년에 (개발 및 유효성을 검사 한 동안시), 상처 침대, 정상적인 상처 치유 동안 키 단계와이 모델 5 개발을위한 동기 부여 혈관 신생 유도를 테스트하기에 충분한 조직을 제공 할 수있는 표준화 된 동물 모델은 없었다. 즉, 여기에 제시된 모델은 첸 등에 의해 변형 된 형태로 사용 원래 슈워츠 등. 7, 이후 설명하는 허혈성 상처 모델의 변형입니다 말했다. (8) 변성 허혈성 상처 모델에서 변경 오히려 상피화보다 수축에 의해 치유 이어질 래트 상술 한 해부학 적 특징을 우회 이루어져왔다 : (1) 두 전층 절제 상처는 bipedicled 등쪽 피부 플랩 내에 생성된다 panniculus 카르노 서스 근육은 단지 근육의 근막 위의 해부에 의해 침대 상처에서 제거됩니다. (2) 자체가 플랩 t의 중간에 위치하는 더 좁은 혈액 공급이 랜덤 인 것을 보장 차원 및 상처를 가지고그는 플랩 허혈성 있습니다. (3) 실리콘 시트는 하부 조직으로부터 플랩의 재관류 재 부착을 방지 플랩 아래에 삽입된다. 상처 수축 고정 또는 실리콘 시트 (5)에 의해 봉합 플랩 (제거되지 않은) 제한된다. 이 모델은 최근 세 쥐 11 대 젊은 허혈성 상처 치유에 9,10 치유 허혈성 상처에 고압 산소의 효과에 이르기까지 연구에 사용되었으며, 장기간 조직 허혈의 신뢰할 수있는 모델로 입증되었습니다. bipedicled 플랩의 크기는 돼지 (12)와 마우스를 포함하여 다른 종 (3.0-3.5 cm 폭 10.5 cm 길이)와 F344 쥐 (2cm 폭으로 11cm 길이) 스프 라그을 포함한 다른 쥐의 변종에 맞게 조정되었습니다 13, 14. 이 비디오는 허혈성 피부 상처 모델의 데모에서 F344 근친 쥐의 피로를 사용합니다. 아래에 제시된 모든 동물 절차에 대한 승인 획득했다사우스 플로리다의 동물 관리위원회 (IACUC)의 대학에서 에드와 동물 복지법 및 관리에 대한 가이드 및 실험 동물의 사용의 모든 요구 사항을 준수.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="605">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:103px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Sil-Tec medical grade sheeting</td>
			<td style="width:103px;">Technical Products Inc.</td>
			<td style="width:119px;">500-3</td>
			<td>nonreinforced, 0.01 inches in thickness</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">Mini Iris scissors, 8cm, curved, SS</td>
			<td style="width:103px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">#503671</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethilon Nylon Sutures</td>
			<td style="width:103px;">Ethicon</td>
			<td style="width:119px;">1964G</td>
			<td>black, size 4.0, PC-3 16mm needles (3/8 circle)</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Laser Doppler Imager</td>
			<td style="width:103px;">Moor Instruments</td>
			<td style="width:119px;">moorLDI2-IR</td>
			<td>Standard blood flow imager: http://us.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ImageJ</td>
			<td style="width:103px;">NIH</td>
			<td style="width:119px;">free download</td>
			<td>http://rsb.info.nih.gov/ij/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mastisol</td>
			<td style="width:103px;">Henry Schein</td>
			<td style="width:119px;">Cat # 7289210</td>
			<td>Fisher Scientific NC9774929</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Tegaderm</td>
			<td style="width:103px;">Medical Specialties&#160;</td>
			<td style="width:119px;">3M1624W</td>
			<td>Fisher Scientific NC9922128</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

demonstration of the rat ischemic skin wound model

인간의 만성 상처에 대한 성향 등으로 인해 부동에 당뇨병과 장애인 심혈관 기능 및 누그러 압력 노화, 질병 상태에 따라 증가한다. 동물 모델은 만성 상처의 복잡성의 이해를 발전하기위한 목적으로 이러한 조건을 모방하는 것을 시도 개발되었다. 본 명세서에 기재된 모델은 허혈성되고 만성 상처 표현형 (혈관 감소, 염증 및 지연 증가 상처 봉합)을 닮은 상처 발생 혈류 감소 연장을 허용 래트 피변 허혈 모델이다. 그것은 컨트롤 등의 플랩 측 방향의 중앙 배치의 2 허혈성 상처와이 비 허혈성 상처와 bipedicled 등의 플랩으로 구성되어 있습니다. 이 피변 허혈 모델 신규 추가 배리어 및 혈관 재 형성을 방지 및 상처 치유로 수축을 감소시키기 부목로서 기능 플랩 아래에 실리콘 시트의 배치이다. 에도 불구하고때문에 사람에 비해 자신의 매우 독특한 해부학 및 생리 학적 차이에 대한 연구를 상처 치유에 대한 쥐를 사용하는 논쟁 (즉, panniculus의 카르노 서스 근육, 짧은 수명의 존재, 모낭의 수가 증가하고, 감염된 상처를 치유 할 수있는 능력) 이 모델에 사용 된 수정은 이전에 개발 된 허혈성 피부 플랩 모델에 귀중한 대체합니다.

효율적으로 수행 한 경우 쥐의 허혈성 상처 치유 모델 프로토콜은 동물 당 약 20 분 소요됩니다. 이전 그림 1G에 나타낸 바와 같이 나타납니다 모델을 드레싱의 응용 프로그램. 그것은 bipedicled 플랩과 상처 안에 허혈성 있는지 확인하는 것이 중요 할 것입니다. 상처의 수준에서 피하 산소 장력 (PSCO 2) 두 허혈성 상처 사이의 피하 조직에 폴라 전극을 배치하여이 모델 5의...

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Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

쥐가 크기 때문에, 가용성, 오히려 유순 한 행동에, 몇 년 동안 연구 모델로 이용되고있다. 이 프로토콜의 목적은 만성 상처의 병태 생리에 대한 통찰력을 제공하는 허혈성 상처 치유 피부 모델로서 쥐를 이용하는 것이다.

쥐 허혈성 피부 상처 모델의 데모

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

demonstration-of-the-rat-ischemic-skin-wound-model

Research

JoVE Journal

Medicine

21.0K 조회수.  University of South Florida.  쥐가 크기 때문에, 가용성, 오히려 유순 한 행동에, 몇 년 동안 연구 모델로 이용되고있다. 이 프로토콜의 목적은 만성 상처의 병태 생리에 대한 통찰력을 제공하는 허혈성 상처 치유 피부 모델로서 쥐를 이용하는 것이다. 