Technique for Isolation and Culture of Rat Jaw Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells(쥐 턱뼈 골수 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 기법)

본 연구는 단시간에 강력한 분화 능력을 가진 고품질의 고품질 턱골수, 중간엽 줄기세포를 충분히 얻을 수 있는 효과적이고 안정적인 방법을 제공한다. 틈새 기반 방법은 쥐 골수 중간엽 줄기 세포의 분리에 적용할 수 있습니다. 본 연구는 고순도 턱 골수 중간엽 줄기세포를 성공적으로 분리하여 특히 뼈 결함 복구의 맥락에서 턱뼈 조직 공학을 위한 실질적인 세포 공급원을 제공합니다.

이러한 발전은 이 분야에 중요한 가능성을 제시합니다. 먼저 안락사된 쥐에서 쥐 하악골을 추출합니다. 위치 rongeurs는 추출된 쥐 하악골의 앞니와 첫 번째 어금니의 접합부에 부리를 형성합니다.

아래 앞니와 아래턱 사이의 연결을 끊은 다음 아래 앞니를 완전히 추출합니다. 모든 어금니를 제거한 다음 하악골을 제거합니다. 이제 마지막 어금니의 원위 가장자리를 따라 하악골의 중앙 부분을 분리하고 골수를 노출시킵니다.

다음으로, 1ml 일회용 주사기에 알파 MEM 완전 배지를 채웁니다. 바늘을 골수강에 삽입합니다. 뼈가 하얗게 될 때까지 알파 MEM 완전 배지가 포함된 배양 접시에 골수를 반복적으로 플러시합니다.

씻어낸 용액을 15ml 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 용액을 800G에서 실온에서 3분 동안 원심분리합니다. 원심분리가 완료되면 상층액을 피펫으로 빼낸 다음 10ml의 알파 MEM 완전 배지를 튜브에 추가합니다.

펠릿을 배지에 다시 현탁시키고 현탁액을 10cm 너비의 새로운 배양 접시로 옮깁니다. 이제 뼈 룽거를 사용하여 홍조된 하악골을 뼈 조각으로 나눕니다. 뼈 조각을 3밀리리터의 0.1% II형 콜라겐분해효소 용액이 들어 있는 튜브로 옮깁니다.

뼈 슬라이스 혼합물을 셰이커에 넣고 섭씨 37도, 200RPM에서 90분 동안 굽습니다. 배양이 완료되면 소화된 하악골을 800G에서 실온에서 3분간 원심분리합니다. 상층액을 피펫으로 배출하여 폐기한 다음 수확된 세포와 분해된 뼈 조각을 10ml의 알파 MEM 완전 배지가 포함된 웰 플레이트로 옮깁니다.

섭씨 37도의 가습 인큐베이터에서 5% 이산화탄소를 보충하여 배양합니다. 72시간 후 배양 배지의 절반을 새 배지로 교체하십시오. 부착 세포가 80-90% 합류하면 1:2의 비율로 통과시킵니다.

두 번째 하위 배양 중에 뼈 조각을 제거합니다. 72시간의 배양 후, 대부분의 세포는 매달려 둥글게 되었고, 일부는 벽에 부착되었습니다. 방추체 또는 섬유아세포와 같은 부착 군체는 5일간의 배양 후에 나타났습니다.

부착 세포는 7일째까지 90%의 포화도에 도달하여 물고기 학교 모양을 형성했습니다. 통로 세포는 균질성을 보였고, 주로 방추 모양이었으며, 합류 후 소용돌이와 같은 패턴을 보였습니다.