<p> Teitell 연구실에서 인간 배아 줄기 세포 연구는 재생 의료에 대한 캘리포니아 연구소 (CIRM) 씨앗 부여 RS1 - 00313에 의해 지원됩니다. 우리는 UCLA, 특히 박사 Amander 클라크 박사 제롬 잭, 우리의 연구들의 지원 UCLA 브로드 연구소 줄기 세포 핵심 시설의 멤버에 재생 의료 및 줄기 세포 연구의 브로드 센터의 회원을 감사드립니다. </p>

<p class="jove_title"> 분리 인간의 배아 줄기 세포 (hESCs)는 마우스 배아 섬유아 세포의 (MEFs)에 도금 </p><p class="jove_content"> 일반적으로 합류 hESC 접시는 특정 hESC 라인에 따라 1시 10분에서 1시 6분까지을 분할 수 있습니다. 분할 플레이트는 분리 후 다시 5-7일 합류하게 될 것입니다. </p><ol><li> 분할 이틀 전에는 0.1 % 젤라틴 용액을 사용하여 번호판을 아교 질로 만들다. 6 - 잘 접시, 야간 37 ° C 5 % CO <sub>2</sub> 조직 문화 인큐베이터의 각 잘하고 품어 플레이트에 2ml를 추가합니다. </li><li> 플레이트 MEFs는 gelatinized 6 잘 접시에 하루는 분할에 hESCs를 계획하기 전에. (참고 : MEFs 3 일 전에 필요한 경우 많은처럼 도금 수 있습니다 ~ 3 일 후, MEFs은 아첨 확산 아웃 더 MEFs 수 hESCs뿐만 아니라 최신을​​ 유지 수 없습니다된다..) G - 반구 또는 mitomycin의 약병을 가지고 C는 37 ° C의 물 목욕 2 분 액체 질소와 해동에서, 5-6 X 10 <sup>6</sup> 세포를 포함, CF1 MEFs 치료. 50ml 팰컨 튜브에 따뜻한 MEF 문화 미디어로 한 번 세포를 씻고 따뜻한 MEF 문화 미디어의 마지막 볼륨 resuspend. 5-6 X 10 <sup>6</sup> 세포에서이 정도면 충분 접시 두 개 또는 세 6 - 잘 접시입니다. </li><li> MEFs 세차되고 있지만, gelatinized 접시를 꺼내 우물에서 모든 솔루션을 제거하고 잘 따라 MEF 문화 미디어 2.5 ML를 추가합니다. </li><li> 각 우물에 최종 볼륨으로 3ml 달성하기 위해 잘 당 MEF 서스펜션의 0.5 ML를 추가합니다. MEFs가 고르게 정착 하룻밤 인큐베이터에 다시 분산과 장소 플레이트 있는지 확인합니다. </li><li> hESC 분리의 날, 1mg/ml의 &lt;이주 된 무균 collagenase IV 솔루션을 새로운 준비하거나 사용합니다. 당신은 분할하려는 hESC의 우물에서 모든 미디어를 제거 2ml 당 잘 따뜻한 1 × PBS, pH를 7.4로 한번 씻어 및 collagenase IV 솔루션 1ml 추가할 수 있습니다. 37 ° C 50-10 분 알을 품다. 인큐베이터 밖으로 6 잘 hESC 판을 가지고 각 잘하는 ES 미디어 (bFGF없이)의 1ml를 추가합니다. 1ml 피펫으로 각 우물에 솔루션을 사용하면 미디어를 빨아하고 접시의 줄기 세포를 날려. 각 물론이 약 5-10 반복하게됩니다. 그런 다음, 50ml 팔콘 튜브에 정지 hESCs를 전송합니다. 분할되는 모든 우물에 대해이 작업을 수행 하나 50ml 팔콘 튜브에 결합. 펠렛은 5 분 200g에 실온에서 hESCs와 bFGF를 부족한 ES 매체와 한 번 씻으십시오. </li><li> hESCs 세차되고 있지만, MEF의 접시를 꺼내 우물에서 모든 미디어를 제거하고 함께 한번 씻어 살균, 따뜻한 1 × PBS, 산도 7.4 다음 ES 미디어 2.5 ML (지금은 10 NG / ML bFGF와 보충) 당을 추가 음. </li><li> 10ng/ml bFGF와 함께 보충 ES 미디어의 적절한 볼륨에 pelleted hESCs을 Resuspend. (참고 :.. hESCs가 resuspended 때, 그들은 대략 균일한 콜로니 크기와 모양이어야합니다 resuspension 볼륨 분할 비율에 따라 달라집니다) 조심스럽게 피펫은 hESC 중지 위아래로 몇 번 식민지가 더 작고 균일하게하기 위해, 하지만 정말 하나의 셀 또는 아주 작은 식민지가 생성됩니다. 각 우물에 최종 볼륨으로 3 ML을 달성하기 위해 MEF 플레이트에 잘 당 hESC 서스펜션의 0.5 ML를 추가합니다. 시각 hESCs가 밤새 해결하기 위해 인큐베이터에 다시 접시를 삽입하기 전에 균일하게 분산되어 있는지 확인합니다. 도금 후, 일반적으로 그들의 특성 모양과 테두리 모양을 맡을 식민지에 대한 몇 일 소요됩니다. </li></ol>

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	<li>Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+Stem+Cell+Lines+Derived+from+Human+Blastocysts.">Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts.</a> <em style='font-style: italic'>Science </em>. <b>282</b>, 1145-1147 (1998).</li><li>Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells.">Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.</a> <em style='font-style: italic'>Nature Biotechnology </em>. <b>19</b>, 971-974 (2001).</li></ol>

<p> 이 동영상은 마우스 배아 fibroblast (MEF) 피더 세포에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)를 성장하는 방법을 보여줍니다. 도금 전에 마지막 단계에서 hESCs가 resuspended 때, 그들은 약 균일 콜로니 크기와 모양을해야합니다. 조심스럽게 hESC의 정지를 피펫 아래 몇 번 식민지가 더 작고 균일하게하기 위해,하지만 너무 많은 단일 셀 또는 아주 작은 식민지 같은 월 hESC pluripotency 마커에 대한 generated.Immunofluorescence 염색법과 현미경...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Knockout Serum Replacer (KSR)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>10828-028</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM/F12</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11330-057</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Non-essential Amino Acids</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11140-050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GlutaMax </td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>35050-061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11995-065</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Clontech</td>
<td>631107</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-glutamine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>25030-081</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BME</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>BP176-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>bFGF</td>
<td>Reagent</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>233-FB-025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase IV</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>17104-019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase</td>
<td>Reagent</td>
<td>Stem Cell Technologies</td>
<td>17105-041</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin / Streptomycin </td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gelatin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Chemicon</td>
<td>ES-006-B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Matrigel</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>354277</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oct-4 antibody</td>
<td>Reagent</td>
<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
<td>SC-9081</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3</td>
<td>Reagent</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>FAB1435P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITCI-conjugated antirabbit IgG</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc.</td>
<td>715-095-152</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

from mefs to matrigel i: passaging hescs in the presence of mefs

<p class="jove_content">이 동영상은 마우스 배아 fibroblast (MEF) 피더 세포에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)를 성장하는 방법을 보여줍니다.</p>

Watch this Scientific Journal Video about From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs at JoVE.com

From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs

<p class="jove_content">이 동영상은 마우스 배아 fibroblast (MEF) 피더 세포에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)를 성장하는 방법을 보여줍니다. 3 부 1.</p>

MEFs부터를 Matrigel하기 : MEFs의 면전에서 Passaging hESCs를

This video demonstrates how to grow human embryonic stem cells (hESCs) on mouse embryonic fibroblast (MEF) feeder cells.
...

from-mefs-to-matrigel-i-passaging-hescs-in-the-presence-of-mefs

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12.6K 조회수.  University of California, Los Angeles. 이 동영상은 마우스 배아 fibroblast (MEF) 피더 세포에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)를 성장하는 방법을 보여줍니다. 3 부 1.