Métodos de Criação do Parasitoide Ganaspis brasiliensis, um Agente promissor de controle biológico para a Drosophila suzukii invasiva

Resumo

Ganaspis brasiliensis-a larval parasitoide de Drosophila suzukii (uma praga global de cultura de frutas invasivas)-- foi aprovado ou é considerado para introdução na Europa e nos Estados Unidos para o controle biológico desta praga. Este artigo fornece protocolos para a criação em pequena escala e em larga escala deste parasitoide.

Resumo

Nativa do leste da Ásia, a drosophila de asa manchada, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), estabeleceu-se amplamente nas Américas, Europa e partes da África na última década, tornando-se uma praga devastadora de várias frutas de pele macia em suas regiões invadidas. O controle biológico, especialmente por meio de parasitoides autoperpetuantes e especializados, deverá ser uma opção viável para uma gestão sustentável em toda a área desta praga altamente móvel e polifagosa. Ganaspis brasiliensis Ihering (Hymenoptera: Figitidae) é um parasitoide larval que é amplamente distribuído no leste da Ásia, e foi encontrado como um dos parasitoides mais eficazes de D. suzukii.

Após rigorosas avaliações pré-introdução de sua eficácia e potenciais riscos não-alvo, um dos grupos genéticos mais específicos para hospedeiros desta espécie (G1 G. brasiliensis) foi aprovado recentemente para introdução e liberação de campo nos Estados Unidos e na Itália. Outro grupo genético (G3 G. brasiliensis), que também foi comumente encontrado para atacar D. suzukii no leste da Ásia, pode ser considerado para introdução em um futuro próximo. Atualmente, há um enorme interesse em criar g. brasiliensis para pesquisa ou em produção em massa para lançamento de campo contra D. suzukii. Este protocolo e artigo de vídeo associados descrevem métodos eficazes de criação para este parasitoide, tanto em pequena escala para pesquisa quanto em grande escala para produção em massa e lançamento de campo. Esses métodos podem beneficiar mais pesquisas de longo prazo e o uso deste parasitoide asiático-nativo como um agente de controle biológico promissor para esta praga invasiva global.

Introdução

Nativa do leste da Ásia, a drosophila de asa manchada, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), estabeleceu-se amplamente nas Américas, Europa e partes da África ^1,2. A mosca é extremamente polifago, sendo capaz de utilizar diversos frutos cultivados e selvagens com peles macias e finas em suas regiões nativas e invadidas ^1,2,3. As estratégias de manejo atuais para esta praga dependem fortemente do uso frequente de inseticidas que visam moscas adultas em campos de cultivo quando frutas suscetí....

Protocolo

1. Métodos para criação laboratorial em pequena escala do G3 Ganaspis brasiliensis

1. Prepare a dieta do anfitrião.
   1. Adicione 600 mL de água destilada a um recipiente de vidro de 1.500 mL e aqueça a água em uma placa quente.
   2. Adicione 88,6 g de dieta seca comercialmente disponível (feita de ágar, levedura de Cervejeiro, farinha de milho, parabeno de metila e sacarose) ou prepare a dieta usando a fórmula publicada por Dalton et ^al.28 (ver passo 2.1.2).
   3. Adicione 300 mL de água destilada na dieta seca e mexa bem a mistura dietética.
   4. Adicione a mistura à água fervente.
   <....

Resultados

A Figura 4 mostra resultados representativos da criação laboratorial em pequena escala do G3 Ganaspis brasiliensis usando duas densidades parasitoides diferentes (seis ou dez pares) e dois tempos de exposição diferentes (5 ou 10 dias) na instalação de quarentena da Unidade de Introdução de Insetos Benéficos do USDA-ARS (Newark, Delaware). Houve 14 réplicas para cada combinação de densidade parasitoide e tempo de exposição. No total, os 64 frascos produziram 4.018 vespa.......

Discussão

Pesquisas de longo prazo e liberações de campo subsequentes de um agente de controle biológico dependem da disponibilidade de técnicas eficazes e econômicas de criação. Os métodos descritos neste estudo provaram ser protocolos eficientes tanto para a criação em pequena escala quanto para a criação em larga escala do Ganaspis brasiliensis. O protocolo de criação em pequena escala foi desenvolvido ao longo de vários anos para otimizar a quantidade de mão-de-obra e reduzir os equipamentos especializ.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Active dry yeast	Fleischmanns Yeast, Cincinatti, OH, USA	None	Used to cover fruit to reduce mold growth and enhance the frui attraction to the flies
Bacteriological agar	Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy	A1296 - 5KG	Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Bleach solution	Clorox Company, Oakland, CA, USA	None	Used to disinfect flesh fruit
Blue stopper	Azer Scientific, Morgantown, PA, USA	ES3837	Used for sealing the tube while allowing ventilation for insects
Blueberries	Grocery Store, Newark, DE, USA	None	Provided as host fruit for the flies (various other fruit can also be used)
BugDorm insect rearing cage (W24.5 x D24.5 x H63.0 cm)	Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan	4E3030	Used for rearing parasitoids (parasitism cage)
BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)	Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan	4E4590	Used for rearing flies
BugDorm insect rearing cage (W32.5 x D32.5 x H32.5 cm)	Mega View Science Co. Ltd., Taichung, Taiwan	4E4545	Used for rearing parasitoids (eclosion cage)
Chicken wire (0.64 cm, 19 gauge)	Everbilt, OH, USA	308231EB	Used to lift up the fruit to allow maximum parasitoid oviposition
Cornmeal	Grocery Store, Trento, TN, Italy	None	Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Dental cotton roll (1 x 3.8 cm)	Gima S.p.A., Gessate, MI, Italy	35000	Used for providing water to the parasitoids within the storage container
Drosophila diet	Frontier Scientific, Newark, DE, USA	TF1003	Custom diet used to rear flies
Drosophila vial narrow, Polystirene (2.5 x 9.5 cm)	VWR International, LLC., Radnor, PA, US	75813-160	Used for providing water to the parasitoids within the cage
Drosophila vial plugs, Cellulose acetate (2.5 cm)	VWR International, LLC., Radnor, PA, US	89168-886	Used for providing water to the parasitoids within the cage
Erlenmeyer flask (250 mL)	Carolina Biological, Burlington, NC, USA	731029	Used for rearing flies and parasitoids
Falcon-style centrifuge tube (50 mL)	VWR International, LLC., Radnor, PA, US	VWRI525-0611	Modified to ship adult parasitoids
Foam stopper	Jaece Industries, North Tanawanda, NY, USA	L800-C	Used for sealing the flasks while allowing ventilation for insects
Honey	Grocery Store, Newark, DE, USA	None	Provided as food for parasitoids
Identi-Plug plastic foam stopper	Fisher Scientific Company, L.L.C., Pittsburg, PA, US	14-127-40E	Used as feeder for parasitoids and to seal the storage container
Industrial paper towel	Grocery Store, Newark, DE, USA	None	Provided as a pupation substrate for pupae and mitigated moisture
Micron mesh fabric (250 mL)	Industrial Netting, Maple Grove, MN, USA	WN0250-72	Used to make ventilation lid for insects
Nutritional yeast (flakes)	Grocery Store, Trento, TN, Italy	None	Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Paper coaster (10.2 cm)	Hoffmaster, WI, USA	35NG26	Porvided as pupation substrate for flies and parsitized pupae
Plastic cup (Ø 13.3 cm, 800 mL)	Berry Superfos, Taastrup, Denmark	Unipak 5134	Modified to store adult parasitoids
Plastic lid (Ø 13.3 cm)	Berry Superfos, Taastrup, Denmark	PP 2830	Modified to store adult parasitoids
Propionic acid	Merk Life Science S.r.l., Milan, Italy	P1386 - 1L	Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Saccharose	Grocery Store, Trento, TN, Italy	None	Used to prepare the Standard Drosophila Medium
Soup cup with lid (475 mL)	StackMan, Vietnam	DC1648	Used for parasitized larvae to pupate
Soybean flour	Grocery Store, Trento, TN, Italy	None	Used to prepare the Standard Drosophila Medium
White felt washer (0.64 cm thick, 5 mm ID x 20 mm OD)	Quiklok, Lincoln, NH, US	WFW/.25 x 5 x 20 mm	Used as feeding ring for parasitoids