Visualizando procedimentos de coleta de dados de campo de avaliações de exposição e biomarcadores para o ensaio da Rede de Intervenção em Poluição do Ar Domiciliar na Índia

Resumo

Detalhamos os procedimentos consistentes e de alta qualidade usados ao longo dos processos de amostragem biológica e aérea em campos indianos durante um grande ensaio clínico randomizado e controlado. Os insights obtidos a partir da supervisão de aplicações de tecnologias inovadoras, adaptadas para avaliação de exposição em regiões rurais, permitem melhores práticas de coleta de dados de campo com resultados mais confiáveis.

Resumo

Aqui, apresentamos uma representação visual de procedimentos padrão para coletar dados em nível populacional sobre exposições pessoais à poluição do ar doméstica (PAH) de dois locais de estudo diferentes em um ambiente com recursos limitados de Tamil Nadu, Índia. Material particulado PM 2.5 (partículas menores que_2,5 mícrons em diâmetro aerodinâmico), monóxido de carbono (CO) e carbono negro (BC) foram medidos em mães grávidas (M), outras mulheres adultas (OAW) e crianças (C) em vários momentos durante um período de 4 anos. Além disso, foram realizados monitoramentos do uso do fogão (SUMs) com termômetros de registro de dados e medições ambientais de poluição do ar. Além disso, a viabilidade de coletar amostras biológicas (urina e amostras de sangue em papel-filtro [DBSs]) dos participantes do estudo nos locais de campo foi demonstrada com sucesso. Com base nos resultados deste e de estudos anteriores, os métodos usados aqui melhoraram a qualidade dos dados e evitaram problemas com a poluição do ar doméstico e a coleta de amostras biológicas em situações com recursos limitados. Os procedimentos estabelecidos podem ser uma ferramenta educacional valiosa e um recurso para pesquisadores que conduzem estudos semelhantes sobre poluição do ar e saúde na Índia e em outros países de baixa e média renda (PBMRs).

Introdução

Globalmente, a exposição à poluição atmosférica doméstica (PAS), principalmente por combustível sólido, é uma das principais causas de morbidade e mortalidade ^1,2,3. O cozimento e o aquecimento com combustíveis sólidos (biomassa - como madeira, esterco, resíduos de culturas e carvão) são amplamente difundidos em países de baixa e média renda (PBMRs), apresentando várias questões de saúde, ambientais e econômicas. A PM 2.5 é um "assassino silencioso", ocorrendo tanto em ambientes fechados quanto externos ^4,5_. A qualidade do ar interior na Índia é muitas vezes consideravelmente pior do que a qualidade do ar exterior, e tem merecido atenção suficiente para ser considerada um grande perigo para a saúde ambiental⁴. A escassez de dados quantitativos de exposição baseados em medidas tem impedido as avaliações da carga global de doença (GBD) relacionadas à HAP ^6,7.

A pesquisa atual muitas vezes ignora que a medição das exposições ao HAP é complicada e varia dependendo de muitos fatores, incluindo o tipo de combustível, o tipo de fogão e um uso misto de muitos fogões limpos e impuros, um fenômeno conhecido como "empilhamento de fogão". Outras influências sobre a exposição incluem a quantidade de combustível consumido, os níveis de ventilação da cozinha, o tempo gasto na proximidade do fogão, a idade e o sexo⁸. O mais amplamente medido e, sem dúvida, o melhor indicador de exposição ao PAH é o PM_2,5; no entanto, devido à falta de instrumentação acessível, fácil de usar e confiável, a medição do material particulado fino (PM_2.5) tem sido particularmente difícil.

Vários estudos têm relatado a mensuração do nível de poluentes atmosféricos únicos ou múltiplos utilizando diferentes métodos 8,9,10,11,12. Nos últimos anos, têm surgido sensores relativamente de baixo custo capazes de medir esses poluentes em ambientes internos e ambientais. No entanto, nem todos esses sensores são viáveis para o trabalho de campo por várias razões, incluindo custos de manutenção, desafios de implantação, questões de comparabilidade com métodos de medição convencionais, recursos humanos limitados para validar esses sensores em relação a métodos de referência, a dificuldade de verificações regulares de qualidade de dados (através da nuvem) e instalações de solução de problemas limitadas ou inexistentes. Muitos dos estudos com esses tipos de medidas as utilizaram como proxy da exposição ou combinando medidas ambientais com reconstrução da exposição utilizando avaliações de tempo de atividade 8,9,12,13,14.

O monitoramento pessoal - no qual um monitor é realizado ou por um indivíduo através do espaço e do tempo - pode capturar melhor sua exposição total "verdadeira". Estudos que medem a exposição pessoal muitas vezes comunicam apenas brevemente seus protocolos exatos, muitas vezes em materiais complementares a manuscritos científicos 9,12,13,14,15. Embora as técnicas detalhadas nesses estudos forneçam um sólido senso geral da metodologia de amostragem, muitas vezes há ausência das especificidades das etapas de coleta de dados de campo^12,16.

Inúmeras características adicionais, além das concentrações de poluentes, podem ser monitoradas nessas residências. O monitoramento do uso do fogão, método de avaliação do tempo e da intensidade de uso de eletrodomésticos domésticos, é parte importante de muitas avaliações recentes de impacto e exposição^16,17,18,19. Muitos desses monitores se concentram em medir a temperatura no ponto de combustão ou próximo a ele em fogões de cozinha. Enquanto termopares e termistores são empregados, há uma falta de protocolos de operação para os monitores, incluindo a melhor forma de colocá-los em fogões para capturar a variabilidade nos padrões de uso do fogão.

O biomonitoramento, da mesma forma, é uma ferramenta eficaz para avaliar exposições ambientais, embora vários fatores influenciem a escolha de uma matriz biológica ótima²⁰. Em circunstâncias ideais, a coleta de amostras deve ser não ou minimamente invasiva. Os métodos utilizados devem garantir facilidade de manuseio, transporte e armazenamento não restritivos, uma boa correspondência entre o biomarcador proposto e a matriz biológica, um custo relativamente baixo e nenhuma preocupação ética.

A coleta de amostras de urina tem algumas vantagens importantes para o biomonitoramento. Tal como acontece com outras técnicas de recolha de amostras, existe uma variedade de métodos potenciais. A coleta de urina miccional de 24 horas pode ser complicada para os participantes, levando à não adesão à coleta da amostra^20,21. Nesses casos, recomendam-se amostras pontuais, primeiros vazios matinais ou outras amostragens "convenientes". O volume de urina coletado pode ser uma grande desvantagem na coleta de amostras pontuais, levando à variabilidade nas concentrações de substâncias químicas endógenas e exógenas. Nesse caso, o ajuste utilizando concentrações de creatinina na urina é um método comumente utilizado para correções de diluição²².

Outro bioespécime comumente coletado é o sangue venoso. Amostras de sangue venoso são muitas vezes difíceis de obter para biomonitoramento; Eles são intrusivos, indutores de medo e exigem manuseio, armazenamento e transporte adequados de amostras. Uma abordagem alternativa utilizando amostras de sangue em papel-filtro (EEP) pode ser útil na coleta de amostras em adultos e crianças para biomonitoramento²³.

Existe uma lacuna substancial na literatura entre a simples descrição de métodos de campo e a publicação de instruções detalhadas e replicáveis sobre o uso e a implantação do monitor, o que reflete a verdadeira complexidade da coleta de dados de campo de amostras com qualidade assegurada^24,25. Alguns estudos delinearam procedimentos operacionais padrão (POP) para medição de poluentes atmosféricos (internos e ambientais) e monitoramento do uso de fogões.

No entanto, as etapas essenciais por trás da medição de campo, suporte laboratorial e transporte de instrumentos de monitoramento e amostras são muito raramente descritas ^8,11,25. Os desafios e limitações do monitoramento em campo em ambientes de alto e baixo recurso podem ser adequadamente capturados por meio de vídeo, o que poderia complementar os procedimentos operacionais escritos e fornecer um método mais direto de mostrar como os dispositivos e as técnicas de amostragem e análise são realizados.

No ensaio clínico randomizado controlado Household Air Pollution Intervention Network (HAPIN), utilizamos protocolos em vídeo e escritos para descrever os procedimentos de medição de três poluentes (PM_2,5, CO e BC), monitoramento do uso do fogão e coleta de bioamostras. O HAPIN envolve o uso de protocolos harmonizados que exigem estrita adesão aos POPs para maximizar a qualidade dos dados de amostras coletadas em vários pontos de tempo em quatro locais de estudo (no Peru, Ruanda, Guatemala e Índia).

Os critérios para desenho do estudo, seleção do local e recrutamento são descritos anteriormente^24,26. O estudo HAPIN foi conduzido em quatro países; descreveram detalhadamente os cenários do estudo²⁶. Cada local de estudo recrutou 800 domicílios (400 de intervenção e 400 de controle) com gestantes entre 18 e 35 anos, de 9 a 20 semanas de gestação, que usam biomassa para cozinhar em casa e não são fumantes. Em um subconjunto desses domicílios (~120 por país), outras mulheres adultas também foram incluídas neste estudo.

Após o recrutamento, foram realizadas oito visitas. A primeira, basal (LB), ocorreu antes da randomização. Os sete seguintes foram divididos por antes do nascimento (24-28 semanas de gestação [P1], 32-36 semanas de gestação [P2]), ao nascimento (B0) e após o nascimento (3 meses [B1], 6 meses [B2], 9 meses [B3] e 12 meses [B4]). Para M, foram realizadas três avaliações (LB, P1 e P2), para os SAEs, seis avaliações (LB, P1, P2, B1, B2 e B4) e para C, quatro avaliações (B0, B1, B2 e B4). No B0, foram realizadas avaliações de biomarcadores e de saúde, enquanto apenas avaliações de saúde foram realizadas na visita B3.

Os quatro países seguiram protocolos idênticos. Neste manuscrito, descrevemos os passos seguidos na Índia. O estudo foi realizado em dois locais em Tamil Nadu: Kallakurichi (KK) e Nagapattinam (NP). Esses locais estão localizados entre 250 e 500 quilômetros da instalação de pesquisa central do Departamento de Engenharia de Saúde Ambiental do Sri Ramachandra Institute of Higher Education and Research (SRIHER) em Chennai, Índia. A complexidade dos protocolos de coleta de dados de campo requer o emprego de muitas pessoas com diferentes níveis de habilidades e experiências.

Apresentamos uma descrição escrita e visual das etapas envolvidas na estimativa de amostras de exposição microambiental e pessoal em mães grávidas (M), outras/idosas (OAW) e crianças (C) a material particulado fino, monóxido de carbono (CO) e carbono negro (BC). Protocolos de campo para (1) monitoramento da qualidade do ar ambiente com monitores de grau de referência e sensores de baixo custo, (2) monitoramento do uso de estufas em estufas convencionais e liquefeitos de gás de petróleo e (3) coleta de amostras biológicas (urina e DBSs) para biomonitoramento também são apresentados. Isso inclui métodos para transportar, armazenar e arquivar amostras ambientais e biológicas.

Protocolo

O Comitê de Ética Institucional do Sri Ramachandra Institute of Higher Education and Research (IEC-N1/16/JUL/54/49), o Emory University Institutional Review Board (00089799) e o Indian Council of Medical Research-Health Ministry Screening Committee (5/8/4-30/(Env)/ Indo-US/2016-NCD-I) aprovaram o estudo HAPIN. O estudo HAPIN é identificado como NCT02944682 em clinicaltrials.gov. Consentimento informado por escrito foi coletado dos participantes do estudo antes de sua participação e o estudo foi conduzido de acordo com as diretrizes éticas.

NOTA: Os formulários de relato de caso (CRF) administrados durante a amostragem e coleta de dados estão disponíveis no banco de dados RedCap, armazenado na Emory University, e são mantidos com o acordo de compartilhamento de dados entre todos os colaboradores, que pode ser fornecido aos leitores mediante solicitação.

1. Instrumentos e materiais

1. Use os seguintes instrumentos para monitoramento da poluição do ar: uma microbalança para pesagem de filtros, para microambiente/amostragem pessoal - Enhanced Children's MicroPEM (ECM) para PM 2.5, um transmissômetro óptico para medição de carbono negro (BC), registradores de dados para balizamento baseado em CO e Bluetooth, registradores de balizas para medição indireta de PM 2.5 (durante cada visita - BL, P1, P2, B1, B2 e B4), um monitor gravimétrico e nefelométrico combinado para PM_{ambiente 2.5} medições e registradores de temperatura para monitoramento do uso do fogão.
2. Use os seguintes instrumentos para biomonitoramento: sacos de resfriador e vacina para envio de bioespécimes, cartões de proteção de proteínas, cartões indicadores de umidade, lanceta para adultos, lanceta de segurança infantil e tubos capilares (40 μL).

2. Condicionamento e pesagem do filtro

1. Use luvas limpas e sem pó para manusear os filtros. Verifique os filtros (tamanho de poro de 2 μm, diâmetro de 15 e 47 mm) para quaisquer danos usando uma caixa de luz e coloque os filtros verificados em um guardião de filtro limpo em uma sala com ar condicionado (19-23 °C e 35%-45% de umidade relativa [RH]) por 24 h.
2. Coloque um pedaço limpo de papel alumínio sobre a mesa e ligue a microbalança. Ajuste a unidade de escala para miligramas (0,001 mg) e siga a calibração interna.
3. Registre a data/hora, o nome do técnico, RH, temperatura, número do lote do filtro, tamanho do filtro e ID do filtro na folha de entrada de dados.
4. Pegue o filtro condicionado e desionize por 10s. Coloque o filtro cuidadosamente na bandeja de pesagem e registre o peso como "Peso 1" no CRF (Figura Suplementar 1).
5. Retire o filtro, coloque-o em uma placa de Petri/filtro e espere a balança zerar antes de pesar o próximo filtro.
6. Repita as etapas 2.4 e 2.5 e insira-o como "Peso 2" no CRF.

3. Microambiente/amostragem de ar pessoal

NOTA: Um esboço detalhado da instrumentação e das etapas envolvidas na amostragem de ar microambiente/pessoal é apresentado na Figura Suplementar 2.

1. Para acompanhamento pessoal, colocar os instrumentos em um colete (Figura 1 Ai) e orientar o participante a usá-lo por 24 h, exceto durante o banho e o sono.
2. Durante o banho e o sono, instruir os participantes a colocarem o colete a <1 m de distância em um suporte metálico personalizado (Figura 1Aii) fornecido pela equipe de campo.
3. Para o monitoramento microambiental, escolha um local apropriado e coloque os suportes metálicos com os instrumentos (Figuras 1C,D; Tabela Suplementar 1) a 1,5 m acima do nível do solo, a 1 m de portas e janelas, se possível, e a 1 m da zona de combustão do fogão primário (quando colocado em cozinhas).
4. Realizar um passo a passo de 5 min na área de monitoramento, registrar o tempo de INÍCIO e FIM de todos os instrumentos de monitoramento (PM_2.5, BC, CO e monitor de tempo e localização) nos respectivos CRFs.
5. No dia da retirada (Dia 2, após as 24 h), recolher e envolver os instrumentos em papel alumínio e colocá-lo em uma tampa resealable para transporte até o escritório de campo. Até a retirada do filtro, coloque o amostrador ECM na caixa térmica (para manter a cadeia de frio).
6. Medição PM_2.5
   NOTA: Use ECM, que é bem adequado para esta aplicação devido ao seu pequeno tamanho (altura: 12 cm; largura: 6,7 cm) e peso (~150 g). A MEC coleta amostras nefelométricas e gravimétricas a 0,3 L/min (por até 48 h) por meio da extração de ar através de um pêndulo acoplado a um contendo filtros de politetrafluoretileno de 15 mm 19,26,27.
   1. Limpe todas as partes do ECM (cabeça de entrada, peças do pêndulo, fechadura de em forma de U) usando um cotonete de álcool (álcool isopropílico 70%) e inicie o amostrador usando o software ECM (por exemplo, estação de ancoragem MicroPEM).
   2. Coloque a tampa de calibração sobre a entrada do ECM e conecte um medidor de vazão com um filtro HEPA à tampa de calibração.
   3. Depois de configurar o conjunto de calibração, pressione o botão Iniciar e aguarde 5 minutos para que ele se estabilize. Ajustar a vazão (dentro de 5% de 0,3 L/min) e registrar em CRF-H48.
   4. Conecte o filtro HEPA diretamente à entrada do ECM, ajuste o deslocamento do nefelômetro até que o valor seja 0,0 e registre a leitura em CRF-H48.
   5. Defina o programa para 24 h e pressione o botão Enviar Valores de Calibração ; o ECM está agora pronto para amostragem.
   6. Após a amostragem, deixar as MCEs amostradas à temperatura ambiente por um período mínimo de 20 min e registrar o fluxo pós-amostragem em CRF-H48. Baixe e salve os dados do ECM usando a convenção de nome de arquivo.
   7. Retire o filtro, coloque-o num guardador de filtros e, em seguida, guarde-o a -20 °C.
7. Medição de carbono negro (BC)
   1. Utilizar um transmissômetro para medir a atenuação da luz através do filtro no comprimento de onda de 880 nm 19,26,27.
   2. Ligue e estabilize por 15 min. Certifique-se de que os cartuchos de tamanho correto (ou seja, cartuchos de 15 e 47 mm) estejam disponíveis nos slots em branco e de amostra do instrumento BC.
   3. Execute a varredura em uma densidade neutra (ND) e um filtro em branco com o ID atribuído (Figura 3 Suplementar e Tabela Suplementar 2).
   4. Depois de digitalizar o filtro em branco, coloque o laboratório em branco no slot do cartucho de amostra acima do difusor de amostra e insira no slot do instrumento na posição 2.
   5. Remova o laboratório em branco e continue a varredura com filtros de teste e filtros de amostra.
   6. Depois de concluir a varredura do filtro, remova o filtro e devolva-o aos detentores da placa de Petri/filtro. Selecione os dados digitalizados, clique no botão Aceitar e salve os dados.
8. Medição de monóxido de carbono (CO)
   NOTA: O instrumento CO é pequeno (aproximadamente do tamanho de uma caneta grande), pode registrar continuamente por ~32.000 pontos, tem um intervalo de 0-1.000 ppm e tem sido usado para avaliar exposições e PAH em vários outros esforços de monitoramento 19,26,27.
   1. Inicie e configure o registrador de dados CO por 1 min usando o software. A tela mostra 'CO logger foi configurado com sucesso'. O instrumento está pronto para amostragem.
   2. Após a amostragem, abra o registrador de CO usando o software, pressione Parar para parar o registrador de dados USB e salve os dados após o download.
   3. Calibrar o registrador de CO
      1. Configure o registrador de CO na taxa de amostragem de 1 min e coloque-o na caixa de calibração, com a ventilação de entrada dos sensores voltada para a porta de entrada de ar da caixa de calibração.
      2. Por 5 min, defina uma taxa de fluxo de 2 L/min de ar de grau zero ou ar ambiente. Anote a hora de início e término. Reduzir o fluxo de ar para 1 L/min. Novamente, anote o horário de início e fim.
      3. Repita o procedimento com gás de calibração (padrão de 50-150 ppm de CO em ar de grau zero), seguido de ar de grau zero, conforme descrito na etapa anterior.
      4. Baixe os dados calibrados para uma pasta específica. Abra o arquivo de dados de calibração e insira os dados do monitor de registro de CO no CRF-H47.
9. Registrador de tempo e local (TLL)
   NOTA: Use dois tipos de instrumento Bluetooth para monitorar a hora e o local da criança. Peça à criança que use um colete contendo dois monitores de tempo e localização (TLM) do tamanho de moedas, ligados a um registrador localizado próximo aos ECMs e ao colete amostral da mãe, como mostra a Figura 1Aiii. Calcular as exposições da criança integrando as concentrações de área correspondentes ao longo do tempo gasto naquele local 19,26,27.
   1. Carregue o banco de energia e certifique-se de que o registrador esteja funcionando conectando-se a ele.
   2. Monitor de tempo e localização (TLM)
      1. Insira uma bateria CR2032 no monitor (as luzes devem piscar algumas vezes se a bateria tiver energia suficiente).
      2. Para o TLM modelo 'O', pressione a tampa macia para ouvir um clique, e uma luz verde deve piscar, indicando que o TLM agora está 'ON' e transmitindo seu sinal. Para o modelo 'EM' TLM, pressione a tampa macia para ligar o primeiro modo (a luz deve piscar verde). Pressione novamente para entrar no modo intermediário (a luz deve piscar verde novamente).
      3. Após a amostragem, baixe os dados da unidade de 'inicialização' que aparece no cartão SD do registrador. Copie e salve os arquivos da pasta 'TLL' especificada.

4. Monitoramento do uso do fogão

1. Colete detalhes sobre padrões de uso de fogões por meio de pesquisas e da implantação de medidas objetivas baseadas em sensores. Colocar registradores de temperatura em fogões de GLP e biomassa^18,19,28. Um esboço detalhado da instrumentação e das etapas envolvidas no monitoramento do uso do fogão da coleta de dados no laboratório central, laboratório de campo e atividades no local de campo são apresentados na Figura Suplementar 4.
2. Coloque a sonda do termopar perto da zona incômoda do fogão, como mostrado na Figura Suplementar 5, e instale os pontos.
3. Abra o aplicativo Geocene e insira o nome da missão, o intervalo de amostragem, a identificação do domicílio, os tipos de fogão, os detalhes de randomização, a campanha, as tags e as anotações. Pressione Iniciar nova missão. Registre os detalhes da instalação em CRF-H40.
4. A cada 2 semanas, baixe os dados usando o aplicativo e transfira por Bluetooth do Dot para o servidor em nuvem. Registre as informações no CRF-H40.

5. Monitoramento ambiental

NOTA: O instrumento PM 2.5 ambiente registra em tempo real o PM 2.5 aerotransportado e possui um filtro embutido de 47 mm que pode coletar PM_2.5 para avaliação gravimétrica^19,26,29_. Um esboço detalhado da instrumentação e das etapas envolvidas no monitoramento ambiental da coleta de dados no laboratório central, laboratório de campo e atividades no local de campo são apresentados na Figura Suplementar 6.

1. Siga as diretrizes³⁰ da EPA dos EUA sobre o instrumento e a colocação da entrada: a) >2 m das paredes; b) >10 m das árvores; c) 2-7 m acima do solo; e d) >2 m de rodovias.
2. Monte o instrumento PM_2.5 ambiente em uma plataforma de concreto com aterramento. Certifique-se de que não há poluição do ar de fundo ambiente e insira os detalhes da amostragem no CRF-H46.
   1. Na opção de menu, defina o intervalo de amostragem para 5 min. Observe a hora de início e execute a calibração do fluxo usando um filtro nulo. Colete dados em tempo real por 6 dias.
   2. No dia de início da amostragem gravimétrica, baixe e salve os dados em tempo real.
   3. Remova o filtro nulo instalado anteriormente e limpe o suporte do filtro usando tecidos de laboratório. Coloque um filtro pré-pesado e encha CRF-H46.
   4. Após 24 h, pare o amostrador e baixe os dados em tempo real. Registre as informações da amostragem em CRF-H46. Retire o filtro, envolva com papel alumínio e coloque-o em um saco reselável durante o transporte da cadeia fria.

6. Biomonitoramento

1. Coleta, processamento e armazenamento de amostras de urina
   NOTA: Siga os passos envolvidos na coleta de amostras de urina miccional matinal na casa do participante de acordo com as diretrizes do CDC dos EUA 19,31,32. Coletar amostras de urina de gestantes (visitas BL, P1 e P2) e outras mulheres adultas (visitas BL, P1, P2, B1, B2 e B4); em crianças (visitas B1, B2 e B4) com a aplicação da respectiva IRC-B10 no dia 2. Um esboço detalhado das etapas envolvidas no biomonitoramento no laboratório central, laboratório de campo e atividades no local de campo são fornecidos na Figura Suplementar 7.
   1. Para a coleta da amostra de urina, fornecer o copo de coleta de urina (M e OAW) no dia 1. Da mesma forma, instrua a mãe a coletar a amostra de urina da criança pela manhã no dia seguinte em uma bolsa de urina ou diretamente no copo e armazená-la em uma bolsa de vacina.
   2. No laboratório de campo, armazenar as amostras de urina coletadas entre 1-8 °C. Antes de aliquotar, descongele o copo de urina.
   3. Para alíquota, processe uma amostra de urina de cada vez. Aspirar 2 mL da amostra e adicionar em dois crióscos de 4 mL, 5 mL em dois crióscos de 10 mL, 15 mL em um tubo de arquivo e armazenar a -20 °C.
   4. O mesmo procedimento de alíquota é seguido para a amostra em branco de campo (água).
2. Coleta, secagem e armazenamento DBS
   OBS: Treinar os pesquisadores para coletar EEP por punção digital em gestantes (visitas LB, P1 e P2) e outras mulheres adultas (visitas BL, P1, P2, B1, B2 e B4), e punção do calcanhar ou punção digital em crianças (visitas B0, B1, B2 e B4), seguindo as recomendações da OMS^33,34. Um procedimento detalhado de coleta de DBS de M e OAW é fornecido no Anexo H do arquivo suplementar.
   1. Para a criança, colete as EEP de picada de calcanhar com base nas diretrizes da OMS, usando as lancetas apropriadas.
   2. Escolha o calcanhar esquerdo ou direito e limpe o local da punção com um cotonete com álcool.
   3. Mantenha a lanceta na posição horizontal no local da punção da pele e punha. Depois de picar, limpe a primeira gota de sangue com uma gaze de algodão estéril.
   4. Coloque o tubo capilar perto do local da punção na camada de sangue e permita que o sangue flua para o tubo através da ação capilar.
   5. Depois de preencher volume de sangue suficiente no tubo capilar, aplique imediatamente o sangue dentro do círculo do cartão de proteção de proteínas.
   6. Deixar o espécime secar ao ar (durante a noite) numa direcção horizontal à temperatura ambiente.
   7. Certifique-se de que as manchas de sangue são uma cor acastanhada escura e nenhuma área vermelha é visível.
   8. Após a secagem, colocar o cartão DBS num saco bio-specimen reselável contendo dessecante (pelo menos duas saquetas) com um cartão indicador de humidade e armazená-lo a -20 °C.

7. Cadeia de custódia (COC) dos filtros amostrados

1. Consulte o arquivo suplementar para obter etapas detalhadas. As etapas que explicam o condicionamento do filtro estão descritas no anexo A, a amostragem do microambiente/ar pessoal de PM_2.5 está presente no anexo B, a medição de BC está descrita no anexo C, a medição de CO no anexo D, a monitorização de tempo e local no anexo E, a monitorização do uso do fogão no anexo F, a monitorização ambiental no anexo G, a biomonitorização no anexo H e o transporte de amostras no anexo I . A lista dos FRC utilizados consta do Quadro Complementar 3.
   OBS: A Figura 2A mostra a MEC coletada após a amostragem e envolta em papel alumínio. Os filtros embalados foram acondicionados em sacos separados de bioespécimes e colocados em sacos de vacina contendo uma embalagem de gel pré-congelado. Os filtros amostrados foram transportados para o laboratório de campo (Figura 2B). Como mostrado na Figura 2C, os filtros transportados do local de campo foram armazenados em freezer profundo (- 20 °C) no laboratório de campo e mantidos inalterados até serem transportados para o laboratório central. A cada 15 a 30 dias, as amostras eram enviadas por via rodoviária para o laboratório central; os filtros amostrados foram acondicionados em gelo seco e embalagens de gel com COC. Ao receberem as amostras no escritório de campo, as amostras foram cruzadas com o COC e arquivadas em freezer (-20 °C).

Resultados

Microambiente/metodologias pessoais de amostragem de ar:
A Figura 1Ai mostra uma gestante usando o colete personalizado durante o período de amostragem de 24 horas. O colete inclui o ECM, o registrador de CO e o registrador de tempo e localização com o banco de energia. Garantiu-se que os participantes usassem o colete durante todo o período de amostragem, exceto durante o banho e o sono. O suporte que foi fornecido para pendurar o colete dentro da pe...

Discussão

Demonstramos e representamos visualmente procedimentos padrão para coletar dados em nível populacional sobre exposições pessoais à poluição do ar doméstica no estudo HAPIN multipaíses^19,24. Os métodos de amostragem ambiental e de biomarcadores baseados em campo descritos aqui são apropriados e viáveis, particularmente em populações vulneráveis em ambientes com recursos limitados, onde as exposições a PM_2.5 são várias ordens de magnit...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
BD adult lancet	BD Biosciences	366594	DBS collection from finger
BD Quikheek infant safety lancet	BD Biosciences	368100 & 368101	Heel prick DBS collection
Beacon	Roximity	O/EM	Time and location monitor [TLM] (Personal monitor)
Beacon Logger	Berkley Air Monitoring group	xxxx	Time and location logger [TLL] (Indirect measurement)
Crdo ProMed Pelican Bag	Peli Biothermal USA		Cooler bag
Enhanced Children MicroPEM (ECM)	RTI International, Durham, NC, US	xxxx	Personal monitor of PM2.5
E-sampler	Met One Instruments	9800	Indirect measurement of ambient PM2.5
Geocene	Geocene Inc., Vallejo,CA	xxxx	for stove use monitoring
Humidity indicating card	DESSICARE, INC.	04BV14C10	Sample integrity indicator
Lascar	Lascar Electronics	EL-USB-300	Carbon monoxide (CO) data logger
PTS collect capillary tubes- 40 µL	PTS collect	2866	To collect heel prick DBS from children
Sartorius	Sartorius Lab Instruments, GmbH & Co, Germany	MSA6-6S-000-DF	Microbalance (Weighing filters)
SootScanTM	Magee Scientific Co, Berkeley, USA	OT21	Black carbon measurement
Vaccine Bag	Apex International, India	AIVC-46	Vaccine Bag
Whatman 903 Protein Saver card	GE Healthcare Life Sciences	10534612	Collection of capillary blood samples (Dried Blood Spot)