Estabelecimento de um Modelo de Rato Simples e Eficaz para Imagem Intraoperatória da Glândula Paratireoide

Resumo

Até o momento, o desenvolvimento de métodos de identificação da glândula paratireoide (PG) é limitado pela falta de modelos animais na pesquisa pré-clínica. Aqui, estabelecemos um modelo de rato simples e eficaz para imagens de PG intraoperatórias e avaliamos sua eficácia usando nanopartículas de óxido de ferro como um novo agente de contraste PG.

Resumo

A identificação da glândula paratireoide (PG) é uma necessidade crítica não atendida na tireoidectomia. A identificação do PG é um desafio na cirurgia da tireoide, pois é semelhante em cor à glândula tireoide. A falta de modelos animais eficazes na pesquisa pré-clínica é uma grave limitação para o desenvolvimento de técnicas de identificação de PG. Este protocolo permite o estabelecimento de um modelo de rato simples e eficaz para a identificação de PG. Neste modelo, as nanopartículas de óxido de ferro preto (IONPs) são injetadas localmente na glândula tireoide e rapidamente difundidas dentro da glândula tireoide, mas não no PG. Um PG corado negativamente e uma glândula tireoide positivamente corada podem ser facilmente identificados a olho nu sem a necessidade de microscópios externos. A posição do PG pode ser identificada pelo aumento do contraste de cores entre a glândula tireoide e o PG, com base na cor dos IONPs pretos. Este modelo de rato é de baixo custo e conveniente para a identificação de PG, e os IONPs são um novo agente de contraste PG.

Introdução

A glândula paratireoide (PG) é uma pequena glândula endócrina de forma oval localizada no pescoço de humanos e outros vertebrados, que produzem e secretam hormônios paratireoidianos para regular e equilibrar os níveis de cálcio e fósforo no sangue e nos ossos¹. Os seres humanos geralmente têm dois pares de PG localizados atrás dos lobos da glândula tireoide em locais variáveis; o tamanho do PG humano normalmente mede 6 mm x 4 mm x 2 mm, com um peso de aproximadamente 35-40 mg². A remoção ou dano do PG causa hipoparatireoidismo (HP), um distúrbio endócrino caracterizado por hipocalcemia e níveis baixos ou indetectáveis de....

Protocolo

Todos os estudos em animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) do Instituto de Medicina Básica e Câncer da Academia Chinesa de Ciências. Esta é uma cirurgia de não-sobrevivência.

1. Animal

1. Use uma rata SD fêmea de 6-8 semanas de idade, pesando 250 g, para imagens de PG intraoperatórias.

2. Anestesia

1. Ligue a máquina de anestesia.
2. Antes de começar, certifique-se de que o nível de isoflurano esteja cheio no vaporizador de anestesia. Em seguida, ligue o oxigênio e defina a taxa de fluxo p....

Resultados

Neste modelo animal, incisamos cirurgicamente o pescoço de um rato SD para expor a traqueia, a laringe e os tecidos circundantes. Em seguida, a glândula tireoide estava visualmente localizada em ambos os lados da traqueia; é em forma de borboleta e aproximadamente 3 mm x 5 mm de tamanho. Um par de PG geralmente está localizado na parte superior da glândula tireoide, e sua cor é muito semelhante à dos lobos da glândula tireoide, tornando extremamente difícil distingui-los a olho nu (Figura 1<.......

Discussão

Demonstramos uma técnica de imagem negativa guiada por IONPs de PG de ratos usando IONPs pretos, que foram injetados localmente no centro da glândula tireoide e difundidos dentro da glândula tireoide, mas não no PG. Permite a identificação clara do PG a olho nu sem o auxílio de qualquer microscópio. Embora camundongos transgênicos com proteína verde fluorescente seletivamente expressa no PG tenham sido relatados¹³, o modelo descrito neste artigo é mais simples de executar. Leva apenas ~.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
alcohol	Li feng	9400820067
anesthesia machine	RWD Company	R520IE	Machine number
blade	Daopian	TB-JZ-10#
cylindrical pillow			made by ourselves
depilatory cream	Nair	TMG-001
electronic scale	Hong xingda	CN-HXD2
eosin	Thermo Fisher (Waltham, USA).	C0105S-2
erythromycin	Shuang ji (Beijing, China)	200409
gauze	Fulanns	YY0331-2006
heating pad	Johon (ShenZhen,China)	JH-36-2006
hematoxylin	Thermo Fisher (Waltham, USA).	C0105S-1
insulin injection needle	Jiangyin NanquanMacromolecule	20170702
iodophor cotton ball	HOYON	19-6007
iron oxide nanoparticle solution	Zhongke Leiming Technology (Beijing, China)	Mag9110-05
isoflurane	Sigma Aldrich (St Louis USA).	21112801
needle holder	Meijun	MH0587
operation table	BioJane	BJ-P-M
paraformaldehyde solution	Biosharp	21269333
rubber	G-CLONE	XT41050
scanning machine	Olympus	Slideview VS200
surgical forceps	Suping	SPHC-0676
surgical knife handle	Aladdin	S3052-06-1EA
surgical retractor	TOCYTO	18-4010
surgical scissors	Suping	SPHC-0795
surgical towel	Along technology	YCKJ-RJ-036205
suture	Ethicon	SA84G
suture with needle	Jinhuan (Shanghai,China)	F301
vascular forceps	Along technology	YCKJ-RJ-016218
Water Bath-Slide Drier	Hua su (Jinhua, China)	HS-1145