Comece posicionando o rato anestesiado no suporte do animal e prendendo-o com duas alças Velcro. Ligue o computador e abra o software para ativar o laser. Ajuste o suporte do animal para centralizar o laser no olho do rato.
Visualize a parte posterior através de uma visualização na face, o campo de visão do plexo vascular superficial, uma varredura B e o corte transversal da retina dentro do campo de visão. Adquira uma tomografia de coerência óptica de luz visível, ou vis-OCT volume depois de fazer pequenos ajustes no foco óptico. Alinhe a cabeça do nervo óptico em cada um dos quatro cantos do campo de visão para cobrir diferentes áreas da retina.
Use um método de limiar baseado em intensidade para detectar a superfície da retina e gerar gramas de fibra vis-OCT a partir do volume. Corte a camada de fibras nervosas da retina, ou RNFL, selecionando os primeiros 16 micrômetros de profundidade. Em seguida, calcule a projeção da intensidade média ao longo da direção axial para gerar a imagem de fibrograma composta por feixes axonais de células ganglionares da retina e vasculatura circundante.
Alinhe os vasos sanguíneos usando um editor gráfico para montar as quatro imagens pós-processamento. O grama de fibra compósito vis-OCT é comparado com a imagem confocal correspondente de retina plana imunomarcada com TUJ1 para axônios RGC. Os vasos sanguíneos exibem estruturas ramificadas distinguíveis que podem ser combinadas com os vasos sanguíneos marcados com ICAM II na imagem confocal.
A comparação lado a lado entre a microscopia confocal ex vivo e a OCT in vivo revelou redes idênticas de feixes de éxons RGC e vasculatura retiniana circundante.
