<p class="jove_content"> Reconhecemos conselhos úteis de Mingzhai Sol em células de ligação às superfícies. Agradecemos a Ned Wingreen e Zemer Gitai pelas valiosas discussões. Esta pesquisa foi suportada pelo National Institutes of Health conceder P50GM07150, National Science Foundation concessão de CARREIRA PHY-0844466 e Alfred P. Sloan Foundation. </p>

<ol><li> Cultivar células de E. coli em meio de caldo Luria-Beltrani (LB) para a fase exponencial (OD = 0,2-0,4). </li><li> Fazer crescer a cultura em LB suplementado com 50 mg / ml de cefalexina por 15 min para induzir crescimento filamentoso, e depois concentrar a cultura por 5 vezes por centrifugação. </li><li> Faça PEI revestido lamela fluindo polyethylenimine 1% diluído em água em uma câmara de fluxo, e lavar com água depois de uma incubação de 5 minutos. </li><li> O fluxo de cultura de células concentradas na câmara, e lavados com uma mistura de LB e cefalexina (50μg/mL), após 3 min para remover as células solto. </li><li> Incubar na câmara a 37 ° C por 30 min-1 hora para permitir que as células anexado crescer antes de colocar no aparelho captura óptica. </li><li> Faça polilisina revestido contas incubando contas 0,5 mícrons de diâmetro poliestireno (Bangs Labs) em polilisina 0,1% diluído em água por 30 min. Em seguida, lave as contas 3 vezes e ressuspender em água. </li><li> Diluir a solução talão por um fator de dois em LB com cefalexina (50μg/mL), e adicioná-lo na câmara de fluxo. </li><li> Opticamente armadilha um grânulo flutuante e tocá-lo para a ponta livre de uma célula. (Nós usamos uma Cidade Mad Labs estágio piezo para o controle do movimento da amostra.) Quando uma combinação adequada grânulo / célula for encontrada, lavar a câmara com cefalexina no LB (50μg/mL) para remover contas solto. </li><li> Executar custom-written programa LabView para aplicar forças de flexão para celular e força-deslocamento registro de dados. Detalhes do programa <ol class="lalpha"><li> Calibrar resposta do detector por digitalização raster anexado o talão dentro do feixe de laser de detecção e gravação 3D sinais de tensão PSD. </li><li> Identificar eixo célula longa em imagem do microscópio. </li><li> Mover células em passos em uma direção perpendicular ao eixo de células de comprimento. </li><li> Registrar a distância percorrida eo deslocamento da armadilha óptica. </li><li> Deslocamento para converter a força aplicada usando a rigidez armadilha previamente medidos e salvar o deslocamento da ponta e força para arquivo. </li></ol></li></ol><p class="jove_content"> Segredos para o Sucesso: No Passo 8), é preciso encontrar uma célula com um fim bem definidos preso. Algumas células são apenas preso em uma ponta, ea força de dobra na outra ponta leva a um giro de célula inteira, em vez de dobrar. Um par adequado é encontrado dobrando cada célula rapidamente à mão usando o movimento estágio joystick controlado. </p><p class="jove_title"> Resultados representativos: </p><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/2012/2012fig1.jpg" alt="Figura 1" /><br /> <strong>Figura 1.</strong> Esta figura mostra força-deslocamento de dados para uma única célula. A inclinação desta linha é a rigidez de flexão da célula. </p>

<ol>
	<li>Janmey, P. A., McCulloch, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+mechanics:+integrating+cell+responses+to+mechanical+stimuli.">Cell mechanics: integrating cell responses to mechanical stimuli.</a> <em style='font-style: italic'>Annu Rev Biomed Eng</em>. <b>9</b>, 1-34 (2007).</li><li>Morris, D. M., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+biomechanical+understanding+of+whole+bacterial+cells.">Toward a biomechanical understanding of whole bacterial cells.</a> <em style='font-style: italic'>Annu Rev Biochem</em>. <b>77</b>, 583-613 (2008).</li></ol>

<p class="jove_content"> A produção de vídeo deste artigo foi patrocinado pela Mad Cidade Labs, que produz instrumentos utilizados nestes estudos. </p>

<p class="jove_content"> O protocolo aqui apresentado foi concebido para medir quantitativamente as propriedades de dobra de células bacterianas. A configuração da experiência pode ser aplicada a qualquer célula em forma de bastonete que podem ser feitas a crescer filamentously. Temos utilizado com sucesso esta configuração para investigar os efeitos de filamentos do citoesqueleto da rigidez de flexão da <em>E.</em> células <em>coli.</em> Essa mesma técnica pode ser usada para avaliar os papéis de pressão rigidez da parede, celulares e outros componentes intracelulares na determinação da rigidez de flexão total de células. </p>

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>cephalexin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C4895-5G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>polyethylenimine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>181978-5G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>polylysine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P8920</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.5-&mu;m-diameter polystyrene beads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bangs Laboratory</td>
<td>PS03N</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nano-LP Series nanopositioning system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mad City Labs</td>
<td>NanoLP series</td>
<td><a href="http://www.madcitylabs.com/nanolpseries.html">http://www.madcitylabs.com/nanolpseries.html</a></td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

measuring the bending stiffness of bacterial cells using an optical trap

<p class="jove_content">Nós desenvolvemos um protocolo para medir a rigidez de flexão de filamentosas em forma de bastonete. Forças são aplicadas com uma armadilha óptica, uma mola tridimensional microscópicas feitas de luz, que é formado quando uma alta intensidade do feixe de laser é focalizada em um ponto muito pequeno pela objectiva de um microscópio. Para dobrar uma célula, primeiro bind bactérias vivas para uma lamela quimicamente tratados. Como estas células crescem, o meio das células permanece ligada ao lamela, mas as extremidades de crescimento são livres desta restrição. Por induzir crescimento filamentoso com a cefalexina drogas, somos capazes de identificar as células em que uma extremidade da célula estava preso à superfície, enquanto a outra extremidade permaneceu solto e suscetível a forças de flexão. A força de flexão é aplicado com uma armadilha óptica ligando um talão polilisina revestidos para a ponta de uma célula em crescimento. Tanto a força eo deslocamento do cordão de são registrados ea rigidez de flexão da célula é a inclinação dessa relação.</p>

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Measuring the Bending Stiffness of Bacterial Cells Using an Optical Trap

<p class="jove_content">Nós apresentamos um protocolo para dobrar filamentosas células bacterianas associadas a uma superfície de tampa de deslizamento com uma armadilha óptica para medir a rigidez de flexão celular.</p>

Medir a rigidez à flexão de células bacterianas Usando uma armadilha óptica

We developed a protocol to measure the bending rigidity of filamentous rod-shaped bacteria. Forces are applied with an optical trap, a microscopic ...

measuring-bending-stiffness-bacterial-cells-using-an-optical

Research

JoVE Journal

Biology

12.0K visualizações.  Princeton University. Nós apresentamos um protocolo para dobrar filamentosas células bacterianas associadas a uma superfície de tampa de deslizamento com uma armadilha óptica para medir a rigidez de flexão celular.