Para começar, leve 50 mililitros cada, um meio de fibroblastos e um meio epitelial vaginal, em tubos cônicos separados de 50 mililitros. Desgaseifique o meio aquecido sob vácuo estéril por cinco minutos. Em seguida, desinfetar bandejas limpas com CaviCide e etanol para o módulo de fluxo dinâmico.
Remova as cápsulas da embalagem e coloque-as nas bandejas do módulo de fluxo dinâmico. Pipetar dois mililitros de meio epitelial vaginal desgaseificado para o reservatório de entrada apical. E adicione três mililitros de meio de fibroblastos desgaseificado ao reservatório de entrada basal.
Pipete 500 microlitros de meio epitelial vaginal desgaseificado para o reservatório de saída apical e 500 microlitros de meio fibroblasto desgaseificado para o reservatório de saída basal. Deslize as bandejas contendo cápsulas para o módulo de fluxo dinâmico. Agora, execute o ciclo principal duas vezes.
Se uma gota não se formar após quatro ciclos principais, faça contato direto com a porta dentro do reservatório de saída da cápsula. Pipete 200 microlitros do respectivo meio para permitir que o meio flua entre o reservatório no canal para preparar manualmente as vagens. Em seguida, remova as pontas da pipeta dos chips de órgãos com sementes de fibroblastos uterinos humanos.
Coloque uma gota do respectivo meio sobre todas as portas de cada chip. Deslize os chips nas vagens e coloque-os nas bandejas. Aspire qualquer mídia na superfície dos cavacos e, em seguida, deslize cada bandeja em um módulo de fluxo dinâmico.
Em seguida, no módulo, defina a parte superior e inferior como líquido, o fluxo apical para 15 microlitros por hora, o fluxo basal para 30 microlitros por hora, o trecho para 0% e a frequência para zero hertz. Execute o ciclo de regulação no módulo e permita o fluxo durante a noite. Uma folha contínua de células epiteliais vaginais que progressivamente formaram várias camadas de células após a diferenciação foi observada no dispositivo de chip de órgão.
