Para começar, estabeleça os esferóides multicelulares tridimensionais ou MCS de adenocarcinoma de pulmão humano ou células A549 iRFP. Semeie as células em uma microplaca esferóide de fundo redondo de fixação ultrabaixa de 96 poços usando 100 microlitros de meio de crescimento completo suplementado com 0,3% de colágeno. Centrifugue as microplacas a 300 G por sete minutos a quatro graus Celsius para facilitar a formação do MCS.
Após a centrifugação, examine a morfologia do esferóide ao microscópio para garantir a agregação celular. Substitua 100 microlitros de meio de crescimento em cada poço por meio de crescimento completo fresco a cada dois dias. Ao observar ao microscópio, escolha esferóides com formato redondo e bordas lisas em geral, mas com cinco a 10 brotamentos ásperos e diâmetro apropriado.
Meça a fluorescência iRFP para selecionar o MCS com sinais fluorescentes dentro de um desvio padrão da média.
