A importância deste protocolo reside na detectabilidade em tempo real dos tumores pulmonares que se desenvolveram espontaneamente neste modelo de camundongos, desde a iniciação do tumor até a progressão do tumor. A vantagem dessa técnica é que não é invasiva, é exigir apenas habilidade básica e nos permitir monitorar diretamente o efeito da droga e o tratamento de interesse. A progressão do tumor pulmonar também pode ser avaliada na presença ou ausência de um gene de interesse.
Por meio dessa análise, novas estratégias de tratamento podem ser potencialmente estendidas à clínica. Sete e 18 semanas após a intubação lentiviral, ligue a bomba de aquecimento para o gel de ultrassom e o monitor de temperatura e configure uma incubadora de 33 graus celsius. Coloque o motor 3D no sistema ferroviário integrado e confirme que o sistema de montagem do motor e do transdutor estão seguros no lugar.
Conecte um transdutor de frequência de 40 hertz ao motor 3D e abra um novo estudo no software de ultrassom. Na nova janela de estudo, digite o nome do estudo. Na janela de nomes da série, digite o nome da série e quaisquer outras informações relevantes.
Após o clique feito, selecione o tipo de transdutor. O programa mudará para o modo B. Coloque uma lâmpada de aquecimento em uma posição conveniente acima da plataforma animal e confirme a falta de resposta ao reflexo do pedal no rato experimental anestesiado.
Coloque o rato na plataforma animal no ventral cubitus e aplique pomada aos olhos do animal. Fixar os membros firmemente na plataforma com fita adesiva e aplicar uma fina camada do gel de ultrassom aquecido no peito do animal. Use o botão de controle de altura para baixar a sonda de aquisição até que toque a superfície do baú do mouse e posicione a sonda de tal forma que o coração do mouse esteja aproximadamente centrado.
Em seguida, use os micro botões para adquirir imagens de todo o peito de ambas as extremidades na orientação transversal. Idealmente reunindo 500 quadros por mouse. Quando todas as imagens tiverem sido capturadas, limpe o gel do peito do rato e coloque o animal na incubadora de aquecimento.
Para análise 2D das imagens de ultrassom, abra os quadros adquiridos no software de ultrassom e escaneie manualmente os quadros para tumores. Para pequenos tumores iniciantes, conte o número de linhas de abelhas periodicamente a cada 10 quadros para o comprimento total dos 500 quadros adquiridos. Para medições 2D de tumores grandes use a ferramenta linear para medir a largura e o comprimento do tumor presente, em seguida, calcule o volume dos tumores usando a fórmula.
Sete semanas após a infecção intra traqueal, a imagem de ultrassom é realizada para visualizar os vários tipos de lesões precursoras que ocorrem no modelo experimental do camundongo após a injeção. Essas lesões precursoras identificadas por beelina podem ser contadas pelo olho e representam pequenos tumores na superfície dos pulmões. A dispersão desses dados permite quantificação dos tumores dentro dos camundongos experimentais para permitir a estimativa do número relativo de tumor por animal.
Com 18 semanas após a infecção, grandes tumores aparecem como fissuras profundas interrompendo a superfície plural que pode ser medida dentro do software de ultrassom. O volume relativo do tumor pode então ser quantificado para análise estatística. A hematoxilina e a coloração de eosina em seções pulmonares colhidas a 20 semanas após a infecção confirmam a formação de tumores grandes, bem como a formação de adenoma e adenocarcinoma.
É importante não confundir os tumores pulmonares, que são dinâmicos, com falsos positivos, que são estáticos. Como a qualificação do número de tumores do volume é relativa neste método, sugerimos o uso de métodos adicionais, como a coloração de petri. Este modelo permite a avaliação direta dos efeitos de aberrações genéticas ou estratégias de tratamento no desenvolvimento do câncer de pulmão em camundongos.
