Apoiada por USDA-NIFA/AFRI 2010-65105-20582, NSF 0918177, e Incorporação de Pesquisa Bedoukian.

<html> 1. Insetos <ol><li> Umbigo orangeworm, Amyelois transitella (Walker) (Lepidoptera: Pyralidae) colônia em nosso laboratório originado de mariposas coletadas de amendoeiras em Fresno, CA. Nossa colônia de insetos são mantidos em câmaras climáticas (Percival Inc, IA) a 28 ± 2 ° C, 75 ± 10% de umidade relativa, e sob 16:08 h (luz: escuro) foto regime. </li><li> Mariposas emergentes são coletados diariamente, sexados e transferidos para caixas de plástico (669 mL lancheira, 13 x 13 cm, altura, 4,5 cm, Rubbermaid) fornecido com até 10 camadas de toalhas de papel embebido de água (Thirsty Ultra Absorvente, 27,9 x 27,9 cm ; Safeway). Tampas de caixas são perfuradas para permitir a circulação de ar. Esse arranjo fornece ~ 100% RH. </li><li> Para medições eletrofisiológicas usamos 2-4 dias após a emergência das mariposas de idade, que são mantidos sob alta umidade. </li></ol> 2. Preparação eletrofisiológicas <ol><li> Mariposas (machos ou fêmeas) são gentilmente empurrado para uma ponteira (200 mL, EUA Scientific Inc) que é cortado de cima para ter um diâmetro da ponta de grande porte (ca. 2 mm). A mariposa é delicadamente empurrado através da outra extremidade com uma ponta de lenço de papel umedecido, até as antenas e parte da cabeça se projetam a partir da ponta. </li><li> Cabeça exposta é imobilizado, cobrindo a cabeça com uma argila não-secagem (Claytoon, Van Aken International, CA), deixando uma pequena parte de um olho e duas antenas expostas. Esta preparação é colocado sobre uma plataforma do micromanipulador EAG MP-12 (Syntech, Alemanha) entre os dois titulares do eletrodo. </li><li> Usamos eletrodo de vidro feita a partir de 1,0 milímetros tubos capilares de borosilicato com filamento (WPI Inc, FL) e puxou em um modelo P-97 micropipeta extrator (Sutter Instruments, CA) para obter microeletrodos de menos de uma ponta micrômetro. Eletrodos estão de volta cheio de sensillum linfáticos campainha (Kaissling e Thorson 1980). Um eletrodo empala a área exposta do olho sob o microscópio (Leica MZ75) e serve como referência, enquanto o eletrodo de registro acomoda as duas antenas. Para facilitar o contato, distal 1-2 segmentos antenais são cortadas antes de ser inserido no eletrodo de registro. Para gravações de sinais de sensilla individuais, modificar um pouco essa configuração em que o eletrodo de registro é empalado sob o microscópio (Olympus BX51WI; 800x de ampliação). Potenciais de ação são registrados, inserindo o eletrodo de vidro na base de um sensillum. Sinais são amplificados por uma alta impedância pré-amplificador (Syntech, Alemanha) e alimentado em um UB-IDAC a serem analisados ​​off-line com AUTOSPIKE software (Syntech, Alemanha). AC sinais passa-banda são filtradas entre 100 Hz -10.000 e potenciais de ação são extraídos por computador usando um algoritmo AUTOSPIKE que distingue o seu pico-cocho para-amplitudes do ruído. Respostas dos neurônios individuais são calculadas como o aumento (ou diminuição) na freqüência de potencial de ação (picos por segundo) sobre a freqüência espontânea. </li></ol> 3. Os estímulos químicos e protocolo de estimulação <ol><li> Produtos químicos de alta pureza são usados. Um importante componente do feromônio da fêmea orangeworm umbigo, (Z, Z) -11,13-hexadecadienal foi obtida a partir Bedoukian Research Inc, CT. Produtos químicos são diluídos, w / v, com vidro-hexano destilada para fazer soluções estoque de 10 diluições mcg / mL e decádico são feitas. Uma alíquota (10 mL) de um estímulo químico dissolvido em hexano é carregado em um filtro de papel Whatman strip (8x40 mm), o solvente é evaporado agitando por 10 s sob uma coifa ea faixa é colocada em um polipropileno 5 mL seringa (seringas BD, NJ) a partir do qual vários volumes são ejetados. Hexano sozinho e uma seringa vazia servir como controle. </li><li> A preparação é realizada em uma corrente de ar umidificado entregues pelo controlador de estímulo Syntech (CS-55 modelo; Syntech, Alemanha) a 20 mL / sec para o qual um pulso de estímulo de 4 mL / s é adicionado para 500 ms. Sinais são captados por 10 s, 2 s de partida antes do início do pulso de estímulo. Preparação antenais é estimulado com 500 ms de pulso durante o qual ca. 2 mL do ar purificado a partir de uma seringa de 5 mL de polipropileno contendo o estímulo é adicionado para o fluxo de ar principal. Um intervalo de pelo menos 1 min ou mais, seguindo alta respostas, é permitido entre as estimulações. </li></ol> 4. Resultados representante Antenas das mariposas restringido (Figura 1) estimuladas com componente feromônio feminino, (Z, Z) -11,13-hexadecadienal gerar respostas a dose robusta dependente (Figura 2). Este componente principais feromônio também provoca dose-dependente respostas excitatórias de longo trichodea sensilla (Figura 3A), como exibido em vestígios de gravações única unidade (Figura 3B). <img src="/files/ftp_upload/2489/2489fig1.jpg" alt="Figura 1" /> A Figura 1. Viva umbigo orangeworm traça contido e antena exposta load/2489/2489fig2.jpg &quot;alt =&quot; Figura 2 &quot;/&gt; Figura 2. Dose respostas dependentes EAG atingida em resposta a (Z, Z) -11,13-hexadecadienal, um componente importante feromônio feminino. <img src="/files/ftp_upload/2489/2489fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Sensilla trichoid no sexo masculino umbigo orangeworm traça responder a (Z, Z) -11,13-hexadecadienal de uma forma dose-dependente. (A) da antena do macho umbigo orangeworm mariposa é multi-segmentada e cada segmento é adornado com um grande número de cabelo como estruturas, sensilla. A micrografia eletrônica de varredura, mostrando detalhes na inserção (barras de escala são 200 e 50 mM, respectivamente). (B) Extracelular única unidade de gravações de um sensillum trichoid.

<ol>
	<li>Kaissling, K. -. E., Thorson, J., Sattelle, D. B., Hall, L. M., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+olfactory+sensilla:+structural,+chemical+and+electrical+aspects+of+the+functional+organization.">Insect olfactory sensilla: structural, chemical and electrical aspects of the functional organization.</a> Receptors for Neurotransmitters. Hormones and Pheromones in Insects. , 261-282 (1980).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Esse novo método desenvolvido para dominar um live umbigo traça orangeworm para medir sinais olfativos provou ser robusto e muito confiável. Empregamos rotineiramente este método para isolar e identificar atrativos romance a partir de substratos como hospedeiro natural amêndoas e pistache.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do material </td><td> Catálogo # / Modelo </td><td> Companhia </td><td> Comentário </td></tr><tr><td> Microscópio </td><td> BX51WI modelo </td><td> Olympus, EUA </td><td></td></tr><tr><td> Microscópio estéreo </td><td> MZ75 </td><td> Leica Microsystems Inc. EUA </td><td></td></tr><tr><td> 1,0 milímetros tubos capilares de borosilicato com filamento </td><td> 1B100F-3 </td><td> WPI Inc, FL </td><td></td></tr><tr><td> Micropipeta extrator </td><td> P-97 </td><td> Sutter Instruments, CA </td><td></td></tr><tr><td> Estímulo controlador </td><td> CS-55 modelo </td><td> Syntech, Alemanha </td><td></td></tr><tr><td> Impedância alta pré-amplificadores (Sonda Único Universal terminou) </td><td></td><td> Syntech, Alemanha </td><td></td></tr><tr><td> Amplificador / sistema de aquisição de dados (USB-IDAC) </td><td></td><td> Syntech, Alemanha </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulador EAG MP-12 </td><td></td><td> Syntech, Alemanha </td><td></td></tr><tr><td> (Z, Z) -11,13-hexadecadienal </td><td></td><td> Bedoukian Research Inc, CT. </td><td></td></tr><tr><td> Papel de filtro Whatman </td><td> 1001070 </td><td> Whatman EUA </td><td></td></tr><tr><td> Seringa de 5 mL de polipropileno </td><td> 309633 </td><td> Seringas BD, NJ </td><td></td></tr><tr><td> pipeta ponta (200 mL) </td><td> 1111-0806 </td><td> EUA Scientific Inc </td><td></td></tr><tr><td> 669 mL lancheira, 13 x 13 cm, altura, 4,5 cm, </td><td></td><td> Rubbermaid </td><td></td></tr><tr><td> Sede Ultra Absorvente, 27,9 x 27,9 cm </td><td></td><td> Safeway </td><td></td></tr><tr><td> Não-secagem de argila </td><td> 18150 </td><td> Claytoon, Van Aken International, CA </td><td></td></tr><tr><td> Câmara ambiental </td><td> I-30BLL modelo </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

electrophysiological measurements from a moth olfactory system

Inseto sistemas olfativos fornecem oportunidades únicas para a gravação odorant induzida por respostas nas formas de electroantennograms (EAG) e gravações sensillum simples (SSR), que são somadas as respostas de todos os neurônios olfativos receptor (ORNS), localizado na antena e daqueles alojados em individuais sensilla, respectivamente. Essas abordagens têm sido exploradas para obter uma melhor compreensão da comunicação química de insetos. Os estímulos identificados podem ser usados ​​tanto como atrativos ou repelentes nas estratégias de gestão para pragas de insetos.

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Electrophysiological Measurements from a Moth Olfactory System

Inseto sistemas olfativos fornecem oportunidades únicas para a gravação odorant induzida por respostas nas formas de electroantennograms (EAG) e gravações sensillum simples (SSR), que são somadas as respostas de todos os neurônios olfativos receptor (ORNS), localizado na antena e daqueles alojados em individuais sensilla, respectivamente.

Medidas eletrofisiológicas partir de um sistema olfativo Traça

Insect olfactory systems provide unique opportunities for recording odorant-induced responses in the forms of electroantennograms (EAG) and single ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

13.6K visualizações.  University of California, Davis. Inseto sistemas olfativos fornecem oportunidades únicas para a gravação odorant induzida por respostas nas formas de electroantennograms (EAG) e gravações sensillum simples (SSR), que são somadas as respostas de todos os neurônios olfativos receptor (ORNS), localizado na antena e daqueles alojados em individuais sensilla, respectivamente.