<p> Os autores agradecem Salman Khetani, Jared Allen, Chris Flaim, e Austin Derfus para discussões úteis durante o processo de projetar esse dispositivo. Este trabalho foi financiado pela National Science Foundation Faculdade Early Career Development Program, National Institutes of Health / National Institute of Diabetes e Doenças Digestivas e Renais, e David e Lucile Packard Foundation. EEH foi apoiado por uma Kirschstein Ruth L. Prêmio Nacional de Serviço de Pesquisa. </p>

<p class="jove_title"> Preparação de culturas de células: </p><ol><li> Comece com peças de silício revestido com plasma tratado com poliestireno. </li><li> Revestimento com peças apropriadas proteínas da matriz extracelular para suporte de fixação do tipo de célula desejada. Para hepatócitos, incubar em 50 g / ml Colágeno-1 solução a 37 ° C por 45 min. Para fibroblastos 3T3, nenhuma matriz é necessário. </li><li> Bloqueio peças com partes complementares na configuração de contato. </li><li> Mergulhe em álcool 70% para um mínimo de 10 min para esterilizar. Lave 2x em DDH <sub>2</sub> O, e 1x em meios de cultura celular. </li><li> Células de semente em uma concentração de 500.000 células / ml no meio de cultura apropriado. Use 1 ml em cada poço de uma placa de cultura de 12 também. </li><li> Incubar por 1 hora, agitando a cada 15 minutos para voltar a suspender as células uniformemente. </li><li> Se uma monocamada confluente não foi alcançado após 1 hr, aspirar a suspensão celular e semeadura repetir com uma suspensão nova. Repita até que a densidade de célula desejada foi alcançada. </li><li> Remova as peças complementares. Transferência de peças a fresco poços e incubar durante a noite para permitir que as células aderem e se espalhou completamente. </li><li> Forma co-culturas, bloqueando partes apropriadas em qualquer lacuna ou configuração de contato. A configuração pode ser alterado em qualquer ponto desejado durante a cultura. </li><li> Ao mudar de mídia, ter o cuidado de deixar pilhas secas para o tempo mínimo possível, de preferência apenas um segundo ou dois. Extrair fluido com uma mão e substituir imediatamente mídia usando a outra mão. </li></ol><p class="jove_title"> Peças de silício de processamento para reutilização: </p><ol><li> Faixa de células por imersão em água sanitária e enxaguar com água. </li><li> Permitem que as peças secar completamente. Mergulhe em tolueno por 2 h para tira de poliestireno. </li><li> Limpa em solução piranha (1:02 H <sub>2</sub> O <sub>2:</sub> H <sub>2</sub> SO <sub>4)</sub> aquecido a 120 ° C. </li><li> Enxágüe por 15 minutos sob um fluxo contínuo de DDH <sub>2</sub> O. Se você não está indo para depósito de poliestireno imediatamente, guarde as peças em água. </li><li> Dissolver poliestireno em tolueno a 100 mg / ml. Vortex em polipropileno cônica por cerca de 1 hora, ou até completamente dissolvido. Um pouco mais de 1 ml de solução é necessária para cada 10 partes. </li><li> Spin-solução de poliestireno casaco peças de silício individuais em 2400 rpm por 30 seg. </li><li> Leve ao forno por pelo menos 5 horas a 120 ° C. </li><li> Tratar com plasma de oxigênio (200 mTorr, 200 W) durante 1 min. </li></ol>

<ol>
	<li>Hui, E. E., Bhatia, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromechanical+control+of+cell-cell+interactions.">Micromechanical control of cell-cell interactions.</a> <em style='font-style: italic'>Proceedings of the National Academy of Sciences</em>. <b>104</b>, 5722-5726 (2007).</li><li>Bhatia, S. N., Balis, U. J., Yarmush, M. L., Toner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cell-cell+interactions+in+preservation+of+cellular+phenotype:+cocultivation+of+hepatocytes+and+nonparenchymal+cells.">Effect of cell-cell interactions in preservation of cellular phenotype: cocultivation of hepatocytes and nonparenchymal cells.</a> <em style='font-style: italic'>The FASEB Journal</em>. <b>13</b>, 1883-1900 (1999).</li><li>El-Ali, J., Sorger, P. K., Jensen, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+on+Chips.">Cells on Chips.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>442</b>, 403-411 (2006).</li></ol>

<p class="jove_content">The authors have nothing to disclose.</p>

<p> Este sistema é o único que permite que a organização espacial do tecido a ser manipulada de forma dinâmica a nível celular. Conseqüentemente, este dispositivo permitiu uma série de novas experiências biológicas, abrangendo temas como a dinâmica de sinalização intercelular, entre em contato mediada contra sinalização solúveis, as decisões destino celular, toxicologia e crosstalk celular. Este dispositivo deve ser amplamente generalizável desde o substrato plástico a cultura é a cultura padrão do tecido, eo sistema é com...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Silicon Comb Substrates</td>
<td>Tool</td>
<td>N/A</td>
<td>N/A</td>
<td>Parts are available for collaborative research projects. Please contact Elliot Hui (eehui @ alum . mit . edu) or Sangeeta Bhatia (sbhatia @ mit . edu).</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

silicon microchips for manipulating cell-cell interaction

<p class="jove_content"> O papel do microambiente celular é reconhecida como crucial para determinar o destino da célula e função em praticamente todos os tecidos de mamíferos de desenvolvimento para transformação maligna. Em particular, a interação com estroma vizinho tem sido implicado em uma infinidade de fenômenos biológicos, no entanto, as técnicas convencionais limitar a capacidade de interrogar os elementos espaciais e dinâmica de tais interações. </p><p class="jove_content"> Em Cultura Reconfigurável micromecânico (RC), que empregam um substrato de silício microusinados com partes móveis para controlar dinamicamente interações célula-célula através de reposicionamento mecânica. Anteriormente, este método tem sido aplicado para investigar comunicação intercelular em co-culturas de hepatócitos e células não-parenquimatosas, demonstrando interações dependentes do tempo e uma gama limitada de sinalização solúvel <sup>1.</sup> </p><p class="jove_content"> Aqui, descrevemos em detalhes a preparação e utilização do sistema RC. Começamos por demonstrar a movimentação das partes do dispositivo usando uma pinça, inclusive atuando entre a abertura e configurações de contacto (populações de células separadas por um intervalo de 80 mM estreito, ou em contato íntimo direta). Em seguida, detalhamos o processo de preparação dos substratos para a cultura, eo multi-etapa do processo de semeadura de células necessárias para a obtenção de monocamadas de células confluentes. Usando a microscopia ao vivo, nós então ilustrar tempo real manipulação de células entre as diferentes possíveis configurações experimentais. Finalmente, demonstrar os passos necessários, a fim de regenerar a superfície do dispositivo para reutilização: tolueno e limpeza piranha, revestimento de isopor, e tratamento de plasma de oxigênio. </p>

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Silicon Microchips for Manipulating Cell-cell Interaction

<p class="jove_content">Este artigo descreve uma abordagem experimental para a regulação dinâmica de interações célula-célula entre células aderentes em escala micrométrica. Manipulação da comunicação intercelular entre hepatócitos e células do estroma é demonstrada. A plataforma desenvolvida permite a investigação de interações célula-célula em uma variedade de processos biológicos, incluindo o desenvolvimento e patogênese.</p>

Microchips de silício para Manipulação de célula-Interação

The role of the cellular microenvironment is recognized as crucial in determining cell fate and function in virtually all mammalian tissues from ...

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Research

JoVE Journal

Biology

10.7K visualizações.  MIT - Massachusetts Institute of Technology. Este artigo descreve uma abordagem experimental para a regulação dinâmica de interações célula-célula entre células aderentes em escala micrométrica. Manipulação da comunicação intercelular entre hepatócitos e células do estroma é demonstrada. A plataforma desenvolvida permite a investigação de interações célula-célula em uma variedade de processos biológicos, incluindo o desenvolvimento e patogênese.