<p class="jove_title"> NIH3T3 preparação células: </p><p class="jove_step"> Células de A. de ejeção </p><ol><li> Trypsinize células, então diluir 1:1 com media de células, e transferência de um frasco T75 para um tubo Falcon 15 mL </li><li> Spin down células em um pellet por centrifugação, aspirar o sobrenadante e lavar as células com DPBS </li><li> Spin down células em uma pelota de novo, e aspirar o sobrenadante </li><li> Ressuspender as células em meios de comunicação </li><li> Determinar a densidade de células com hemocitômetro (~ 200 X 10 <sup>4</sup> células / mL por frasco T75) </li><li> Solução da célula centrífuga, aspirar o sobrenadante e ressuspender em quantidade adequada dos meios de comunicação para diferentes concentrações de células </li></ol><p class="jove_step"> B. Célula de ejeção </p><ol><li> Vortex células antes de usar para a ejeção </li><li> Transferir 200 mL da solução de célula em seringa </li><li> Definir o modo apropriado no gerador de pulso <ol><li> Para ejetar gotículas de única e gotículas múltiplas (rajadas), grupo gerador de pulso para &quot;E. BUR&quot; modo </li><li> Para a ejeção de gotas contínuo, grupo gerador de pulso para &quot;NORM&quot; modo de </li></ol></li><li> Alterar as configurações de sinal <ol><li> Conjunto de alto nível e baixo nível de tensão de saída: LIS a 5 V e LOL para 0 V e certifique-se o &quot;LIM&quot; LED está ligado </li><li> Definir como um sinal de pulso quadrado </li><li> Alterar a quantidade de tempo que a válvula solenóide é aberta para a ejeção de gotas, alterando o valor para &quot;WID&quot; ou mudar ciclo (&quot;dever&quot;) </li><li> Mudar a freqüência de ejeção, alterando o valor para &quot;PER&quot; </li><li> Alterar o número de gotículas ejetado em uma explosão, alterando o valor para &quot;BUR&quot; </li></ol></li><li> Solução da célula ejetar em substrato preparado para imagens com microscópio </li></ol><p class="jove_step"> Coloração C. </p><ol><li> Compõem solução corante com 0,5 mL calceína-AM e 2 homodímero de etídio mL por mL de DPBS </li><li> Substrato preparado mergulhe em solução corante </li><li> Deixar a amostra para incubar por 10 minutos a 37 ° C antes de imagem </li></ol><p class="jove_title"> Validação de experiência </p><ol><li> Em um microscópio Nikon Eclipse TE U-2000 Fluorescent <ol><li> Software ponto avançado (Diagnostics, Inc.) </li><li> Live / Morto Assay </li></ol></li></ol>

<p class="jove_content">The authors have nothing to disclose.</p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Fluorescent Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>Eclipse TE-2000 U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Solenoid valve cell ejector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
</td>
</tr>
<tr>
<td>5-Gallon Portable air tank</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coleman</td>
<td>Powermate CT5</td>
<td>Pressurized air: 30 PSI </td>
</tr>
<tr>
<td>Pressure regulators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Marsh Bellofram</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pulse Generator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HP8112A</td>
<td>Actuation frequency generation: 50 MHz
</td>
</tr>
<tr>
<td>XYZ-stage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Newmark Systems</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution</td>
</tr>
<tr>
<td>NIH 3T3</td>
<td>Cell-line</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>fibroblasts</td>
</tr>
<tr>
<td>Trypsin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>0.05% solution</td>
</tr>
<tr>
<td>NIH 3T3 cell medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DPBS</td>
<td>Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T75</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tissue culture flasks</td>
</tr>
<tr>
<td>Plastic conical tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>15 ml, for tissue culture</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

title cell encapsulation by droplets

Watch this Scientific Journal Video about Title Cell Encapsulation by Droplets at JoVE.com

Encapsulation título celular por Droplets