Os autores agradecem Pascal Paschenda e Mareike Schulz para a sua assistência técnica.

<ol>
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Nós não temos nenhum conflito de interesses para divulgar. Os ratos estão alojados em específico patógeno-condições livre de acordo com as diretrizes da Federação de Associações de Laboratório de Ciência Animal (FELASA). Todos os experimentos foram realizados em conformidade com a lei federal alemão em matéria de protecção dos animais e &quot;Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório&quot; (National Institutes of Health publicação No. 86-23, revisado 1985).

O primeiro modelo de rato OLT foi relatado por Lee et al. Em 1973 9, em que todos os recipientes, incluindo a artéria hepática foram reconstruídos por um método costuradas a mão e o desvio portossistêmico extracorpórea foi utilizado. Este modelo foi tecnicamente complicado e difícil de realizar. O modelo seguinte foi um sem reconstrução da artéria hepática e da derivação extracorpórea, desenvolvido pelos mesmos autores 10 em 1975. Posteriormente, em 1979, Kamada et al. Introduziu a técnica de anastomose manguito para o modelo sem rearterialization hepática 11. Com estas modificações, OLT em ratos foi simplificada com um tempo anepática encurtado em operações ao receptor e tem sido amplamente utilizado como modelo experimental. No entanto, tem havido uma considerável controvérsia uma vez que, em seguida, sobre o significado de arterialização hepática em ratos OLT 8 porque a arterialização foi uma tarefa exigente, mas did não afeta a sobrevivência após o transplante. Numerosos estudos sobre arterialização hepática utilizando técnicas de reconstrução várias foram relatadas 8, tal como uma anastomose do segmento de aorta 3,9,17-aórtico, uma técnica de anastomose cuff 18,19,20, uma técnica telescópica 5, uma técnica de stent 13, 16, e uma técnica de anastomose manga 12,21-23. Embora a técnica de OLT rato ainda não está padronizado hoje, o modelo arterializado tem sido cada vez mais favorecida em termos de sua superioridade fisiológica 8,12,13,14. Entre as técnicas acima mencionadas, uma técnica de stent que é simples e rápido de executar foi relatada por Lehmann et al. 16 em 2005. O estudo mostrou excelentes resultados: não foi observado grau de oclusão na artéria hepática reconstruído menos 8 h, 24 h, e 6 meses após a reperfusão. Por isso, adotou essa técnica para arterialização hepática. Nós desempenhoma anastomose costurado à mão para a reconstrução do SHVC e IHVC. Este método fornece o local da anastomose, com uma óptima condição fisiológica, o que leva à redução da incidência de trombose 8, e é o melhor simulação microcirurgia e de formação para os cirurgiões. Além disso, a anastomose pode ser possível mesmo com cotos dos vasos pequenos. No que diz respeito a anastomose de IHVC, este método não requer um IHVC longo do lado de enxerto em comparação com a técnica de anastomose manguito. Portanto, quando a veia renal doador é dissecada para fazer o enxerto IHVC tempo, este método é aplicável para o transplante de um enxerto que precisa de uma pequena IHVC longo, tal como um enxerto de 30%, que é constituída por lóbulos laterais direito e caudado com um curto intrahepática veia cava sem SHVC 2. Em relação às técnicas de ressecção hepática em ratos, até hoje vários métodos têm sido relatados, as duas principais técnicas são a técnica de ligadura clássica massae a técnica de vaso-orientado 24. Realizamos a técnica clássica para a ligadura ressecção hepática de 50% de 15, mas com um microscópio cirúrgico, para tornar o procedimento mais finas, e para evitar danos nos lobos remanescentes e estruturas. Descrevemos os resultados representativos dos ratos receptores no nosso modelo, os ratos sobreviveram durante o período de observação de 7 dias sem complicações aparentes. O modelo pode ser modificado para fins diferentes de experiências, escolhendo as configurações diferentes, como o armazenamento frio prolongado, isquemia quente prolongado que inclui a doação após a morte cardíaca, ea utilização de enxertos menores de fígado ou enxertos de modelos experimentais de lesão hepática ou doenças. Em nossa experiência, há três fatores-chave em todo os procedimentos que podem afetar a sobrevivência após o transplante, o parâmetro mais confiável para os resultados de OLT rato: a quantidade de perda de sangue, o tempo de operação, os eespecialmente tempo de pinçamento da veia porta e IHVC; ea adequação da reconstrução de cada navio, o que poderia resultar em trombose, estenose, ou sangramento. Em um período de treinamento deste modelo, a maioria das falhas provavelmente poderia estar relacionada a esses fatores. Neste artigo de vídeo, apresentamos passo-a-passo para os procedimentos cirúrgicos para o nosso modelo do rato de OLT parcial com reconstrução arterial hepática. Enquanto um modelo do rato de OLT é complicado e requer habilidades avançadas de microcirurgia, este artigo fornece uma abundância de informações práticas, que deve servir como um bom guia para a formação e aprendizagem deste modelo. Aprender este modelo eficaz é particularmente importante para a redução do período de aprendizagem, a redução do número de animais e dos custos necessários para a prática, e mais tarde reproduzir resultados fiáveis ​​em experiências. Isto está em linha com o conceito 3R (substituição, redução e refinamento) dos experimentos com animais, o que foi postulado por Russell e Burch em1959 25.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Microscópio cirúrgico </td><td> Leica </td><td> M651 </td><td></td></tr><tr><td> Fonte de luz </td><td> Schott </td><td> KL1500LCD </td><td></td></tr><tr><td> Cotonetes </td><td> NOBA Verbandmittel </td><td> 974202 </td><td></td></tr><tr><td> Compressas de gaze (5x5 cm) </td><td> Fuhrmann </td><td> 10002 </td><td></td></tr><tr><td> solução de iodo-povidona </td><td> Mundipharma </td><td> 6108022.00.01 </td><td></td></tr><tr><td> À base de óleo de argila </td><td> Debika corporação </td><td> 090148 </td><td></td></tr><tr><td> TachoSil </td><td> Takeda Pharmaceuticals International GmbH </td><td> EU/1/04/277/001-004</td><td> Aplicado a superfície ressecada do fígado </td></tr><tr><td> Lâmina de bisturi n º 11 </td><td> Pfm médica </td><td> 200130011 </td><td> Preparação da braçadeira e stents </td></tr><tr><td> Calibre 14 cateter </td><td> B. Braun </td><td> 4268210S </td><td> Manguito para o PV </td></tr><tr><td> Calibre 18 cateter </td><td> B. Braun </td><td> 4268130S </td><td> Perfusão através PV </td></tr><tr><td> Calibre 24 cateter </td><td> B. Braun </td><td> 4269071S </td><td> Stent para BD e HA </td></tr><tr><td> Sutura de seda 4-0 </td><td> Resorba </td><td> H3F </td><td> Ressecção hepática </td></tr><tr><td> 6-0 seda </td><td> Resorba </td><td> H1F </td><td></td></tr><tr><td> 7-0 Prolene (polipropileno) sutura </td><td> Ethicon </td><td> 8701H </td><td> SHVC e IHVC </td></tr><tr><td> Sutura Vicryl 4-0 </td><td> Ethicon </td><td> V304H </td><td> Fechamento abdominal </td></tr><tr><td> Seringa de 5 ml </td><td> Terumo </td><td> SS + T05ES1 </td><td> Fazer travesseiro </td></tr><tr><td> Almofada de aquecimento </td><td> Thermo </td><td> 190 x 260 mm </td><td></td></tr><tr><td> Sistema de retração magnético fixador </td><td> Multa Ciência Tools Inc. </td><td> 18200-01 18200-02 18200-03 18200-12 </td><td></td></tr><tr><td> Banho de água fria </td><td> Huber </td><td> 740.000X </td><td> Preservação do enxerto </td></tr><tr><td> Fórceps bipolar </td><td> Soring </td><td> MBC-200 </td><td></td></tr><tr><td> Fórceps do mosquito </td><td> BONIMED </td><td> 451-476-03 </td><td> Dois pares utilizados </td></tr><tr><td> Adson micro fórceps </td><td> Dimeda </td><td> 10.176.12 </td><td></td></tr><tr><td> Milhas curvacro fórceps </td><td> AESCULAP </td><td> FD281R </td><td></td></tr><tr><td> Retas fórceps micro </td><td> Bonimed </td><td> 451-476-03 </td><td></td></tr><tr><td> Curvas microtesoura </td><td> Medicon </td><td> 05.15.83 </td><td></td></tr><tr><td> Retas microtesoura </td><td> AESCULAP </td><td> FD12 </td><td> Incisão fina </td></tr><tr><td> Tesoura </td><td> AESCULAP </td><td> BC211W </td><td></td></tr><tr><td> Suporte da agulha micro </td><td> AESCULAP </td><td> FD241R </td><td> Reconstrução </td></tr><tr><td> Prefeito Hegar-titular da agulha </td><td> Mizuho Ikakogyo </td><td> 06-798-00 </td><td> Fechamento abdominal </td></tr><tr><td> DeBakey Bulldog braçadeira (em linha reta) </td><td> ULRICH </td><td> CV3054 </td><td></td></tr><tr><td> DeBakey Bulldog braçadeira (curvo) </td><td> CODMAN </td> &lt;td&gt; 37-1062 </td><td></td></tr><tr><td> Satinsky braçadeira </td><td> Mizuhoika </td><td> 09-230-24 </td><td></td></tr><tr><td> Grampo vascular periférica </td><td> Teleflex Medical </td><td> 353494 </td><td> Destinatário SHVC </td></tr><tr><td> Braçadeira navio Micro (descartável) </td><td> AROSurgical Instruments Corporation </td><td> TKM-1-60 g </td><td> PV, IHVC enxerto, e receptor HA </td></tr><tr><td> Braçadeira navio Micro (metal) </td><td> Multa Ciência Tools Inc. </td><td> 18052-01 </td><td> Destinatário IHVC </td></tr><tr><td> Solução de Ringer com lactato </td><td> Fresenius Kabi </td><td> 6150917.00.00 </td><td></td></tr><tr><td> Solução salina normal </td><td> DeltaSelect </td><td> 1299.99.99 </td><td></td></tr><tr><td> Solução HTK </td><td> Dr. Franz Köhler Chemie GmbH </td><td> 31268.00.00 </td><td> Solução de preservação </td></tr><tr><td> Heparina Natrium- </td><td> Ratiopharm </td><td> 5394.02.00 </td><td> 500 UI antes de perfusão do enxerto </td></tr><tr><td> Bicarbonato de sódio a 8,4% </td><td> Fresenius Kabi </td><td> 4399.97.99 </td><td> 0,5 ml após a reperfusão </td></tr><tr><td> Solução de glicose a 5% </td><td> B. Braun </td><td> 6714567.06.00 </td><td> 1,0 ml após a reperfusão </td></tr><tr><td> Cefuroxima de sódio </td><td> Fresenius Kabi </td><td> 38985.01.00 </td><td> Antibiótico, 16 mg / kg </td></tr><tr><td> Buprenorfina </td><td> Essex Pharma </td><td> 997.00.00 </td><td> Analgésico, 0,1 mg / kg </td></tr><tr><td> Gaiola de Unidade de Terapia Intensiva </td><td> Brinsea Products Ltd. </td><td> Vetario S10 </td><td> Cuidados pós-operatórios </td></tr></tbody></table>

surgical procedures for a rat model of partial orthotopic liver transplantation with hepatic arterial reconstruction

O transplante hepático (OLT) em ratos usando um enxerto total ou parcial é um modelo indispensável para a pesquisa experimental de transplante, como estudos sobre a preservação do enxerto e isquemia-reperfusão 1,2 lesão, respostas imunológicas 3,4, 5,6 hemodinâmica e pequeno para a dimensão síndrome 7. A OLT rato está entre os modelos animais mais difíceis em cirurgia experimental e exige técnicas de microcirurgia avançados que levam muito tempo para aprender. Por conseguinte, a utilização deste modelo tem sido limitada. Desde a confiabilidade e reprodutibilidade dos resultados são os principais componentes dos experimentos em que esses modelos animais complexos são usados, é essencial para os cirurgiões que estão envolvidos em OLT rato a ser treinados nos procedimentos de bem-padronizados e sofisticado para esse modelo. Embora várias técnicas e modificações do OLT em ratos foram descritos 8 uma vez que o primeiro modelo descreviaed por Lee et al. 9 em 1973, a eliminação da reconstrução arterial hepática 10 e da introdução da técnica de anastomose cuff por Kamada et al. 11 foram um grande avanço neste modelo, uma vez que os procedimentos de reconstrução simplificada, em grande . No modelo de Kamada et al., O rearterialization hepática foi também eliminado. Desde ratos podem sobreviver sem fluxo arterial hepática após transplante de fígado, houve uma considerável controvérsia sobre o valor de arterialização hepática. Contudo, a superioridade fisiológica do modelo arterializado tem sido cada vez mais reconhecido, especialmente em termos de conservação do sistema biliar 8,12 e a integridade hepática 8,13,14. Neste artigo, apresentamos detalhados procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de OLT com a reconstrução da artéria hepática utilizando um enxerto parcial de 50% após a ressecção hepática ex vivoção. Os procedimentos de reconstrução para cada navio e do ducto biliar são realizados pelos métodos seguintes: uma sutura de polipropileno 7-0 contínuo para a supra-infra e veia cava inferior, uma técnica de manga para a veia porta, e uma técnica de stent na artéria hepática e ducto biliar.

Todos os ratos destinatário (n = 20) sobreviveram sem complicações aparentes até eutanásia planeada para amostragem de sangue, 1, 3, 24 e 168 horas (7 dias) após a reperfusão portal (n = 5 em cada ponto de tempo). As amostras de sangue foram coletadas da IHVC por uma punção direta com uma agulha de calibre 27. Seguindo a centrifugação a 5340 xg durante 10 min, as amostras de soro foram obtidas e analisadas para a alanina aminotransferase (ALT), que reflectem o grau de dano hepatocelular após transplante. O curso temporal das alterações nos níveis de ALT no soro é mostrado na Figura 16. Os níveis de ALT atingiu um pico às 24 horas (média ± desvio padrão: 212,6 ± 67,9 UI / L) e, em seguida, desceu para dentro dos limites normais em 168 hr (33,6 ± 6,8 UI / L). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig1.jpg" /> Figura 1. Uma braçadeira para a veia porta (VP) de um 14 de calibre do cateter, e stents para a artéria hepática (AH) e ducto biliar (BD) de calibre 24 cateteres. <img alt="Figura 2" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig2.jpg" /> Figura 2. Esquema da retirada do fígado do animal doador BD, ducto biliar; HA., Artéria hepática; IHVC, infrahepatic veia cava; PV, veia porta; SHVC, supra-hepática da veia cava. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig3.jpg" /> Figura 3. Operação doador. a. O rato é colocado sobre uma almofada de aquecimento com um sistema de retracção magnética fixador. O abdómen é aberto por uma incisão na linha média com extensões bilaterais. B. Inserção do stent dentro do canal biliar. C. Perfusão do fígado através da veia portal. As abreviaturas são explicared na Figura 2. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig4.jpg" /> Figura 4. Fixação de um punho para a veia porta. a, b. DeBakey A braçadeira Bulldog que agarra o tronco venoso portal é colocado sobre o copo de metal. O copo está montado na caixa de plástico cheio de gelo picado. C. A veia porta é colocada através da braçadeira. D. A parede da veia portal é evertido sobre a manga com o coto da veia esplénica fora do manguito na 7 horas posição e uma extensão do punho na posição das 12 horas e.. A veia porta é fixada com um fio de seda 6-0 circunferencial no punho. As setas pretas indicam o coto da veia esplênica. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig5.jpg" /> Figura 5. Ex vivoa inserção de um stent na artéria hepática. a. O fígado é fixado por aperto de ambas as bordas do diafragma, e a artéria hepática é puxada reta, segurando o fio ligado à artéria. b. A parede anterior da pequena incisão na artéria hepática é realizada com uma pinça rectas micro . c, d. O stent é inserido na artéria hepática e fixada com um fio de seda 6-0. <img alt="Figura 6" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig6.jpg" /> Figura 6. O esquema de ressecção hepática ex vivo de 50%. Lobos em cor cinza são removidos. ACL, anterior caudado do lobo; PCL, lobo caudado posterior; LLL, lobo lateral esquerda; LML, parte esquerda do lobo médio; parte, RML direito do lobo médio; SRL, lobo direito superior lateral; IRL, lobo inferior direito lateral. Figura 7. Ex vivo ressecção hepática de 50%. uma ligadura. ligadura do pedículo do lobo caudado posterior. b. do pedículo da porção esquerda do lobo mediano. c. O fígado antes da ressecção de 50%. d. O fígado após ressecção de 50%. <img alt="Figura 8" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig8.jpg" /> Figura 8. Ex vivo plastia da veia cava supra-hepática. a. O fígado é fixado por aperto as duas bordas do diafragma com a pinça de mosquitos. b. Estadia sutura com fio de polipropileno 7-0 estão ligados em ambos os cantos. <img alt="Figura 9" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4376/4376fig9highres.jpg" src = &quot;files/ftp_upload/4376/4376fig9.jpg /&quot; /&gt; Figura 9. Esquema de implantação do enxerto no rato receptor. Os procedimentos de reconstrução são realizados para a supra-infra e veia cava (SHVC e IHVC) com um fio de sutura 7-0 contínua, a veia porta (VP), por uma técnica de manga, e a hepática artéria (HA) e das vias biliares (BD) por uma técnica de stent. <img alt="Figura 10" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig10.jpg" /> Figura 10. Operação beneficiário até à remoção do fígado nativo. um. O abdômen é aberto por uma incisão na linha. b. A veia adrenal direita é ligada. c. nativa O fígado é extirpado. As abreviaturas são explicados na figura 2. <img alt="Figura 11" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig11.jpg" /> Figura 11. Anastomose da suprahehepáticas veia cava. a, b. O grampo vascular periférico para a veia cava supra-hepática é fixado em um pedaço de argila à base de óleo. As suturas de ancoragem em ambos os cantos são mantidos com leve tração superiolaterally para ampliar a anastomose. C. Fio intraluminal contínua da linha posterior em andamento. D. Sutura contínua da linha anterior em andamento. <img alt="Figura 12" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig12.jpg" /> Figura 12. Reconstrução da veia portal. a, b. A pinça de aperto de mosquitos da veia portal é fixa em argila à base de óleo e puxado para o hilo do fígado. cf. Inserção da bainha para dentro da veia portal. <img alt="Figura 13" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig13.jpg" /> Figura 13. Reconstrução da artéria hepática. a, b. </stron<html> g&gt; A inserção de um stent na artéria hepática receptor comum (CHA) a bifurcação da artéria hepática própria (PHA) e da artéria gastroduodenal (GDA). <img alt="Figura 14" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig14.jpg" /> Figura 14. Anastomose da veia cava infrahepatic. um Reperfusão. As suturas de ancoragem em ambos os cantos. b. sutura contínua da linha posterior. c. sutura contínua da linha anterior. d. infrahepatic da veia cava. As abreviaturas são explicados na figura 2. <img alt="Figura 15" src="/files/ftp_upload/4376/4376fig15.jpg" /> Figura 15. Todos os procedimentos de reconstrução terminar. As abreviaturas são explicados na figura 2. <img alt="&lt;/ Html">&quot;Figura 16&quot; src = &quot;files/ftp_upload/4376/4376fig16.jpg /&quot; /&gt; Figura 16 pós-operatória curso temporal das alterações de níveis séricos de alanina-aminotransferase (ALT) (n = 20, n = 5 em cada ponto de tempo).. Os dados são expressos como médias com barras de erro que indicam os desvios padrão. Os níveis de ALT atingiu um pico às 24 h (212,6 ± 67,9 UI / L) e, em seguida, desceu para dentro dos limites normais em 168 hr (33,6 ± 6,8 UI / L).

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Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction

O transplante hepático em ratos é um modelo indispensável experimental para a pesquisa biomédica. Aqui apresentamos nossos procedimentos cirúrgicos para transplante ortotópico do fígado do rato com a reconstrução da artéria hepática utilizando um enxerto parcial de 50%.

Procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de Transplante de Fígado parcial ortotópico com reconstrução arterial hepática

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats using a whole or partial graft is an indispensable experimental model for transplantation research, such as ...

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