Agradecemos Wendy Chao, pelo seu apoio na revisão crítica. Este trabalho foi financiado pela Bausch &amp; Lomb Vitreoretinal Fellowship (HM), Instituto Nacional do Olho concessão EY014104 (JWM), Investigação para Prevenir Fundação Cegueira (DGV), Fundo de Investigação Eye Lions (DGV), e uma generosa doação da família Yeatts (JWM e DGV).

Todos os experimentos em animais foram realizados de acordo com a Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia Declaração para o uso de animais em Ophthalmic and Vision Research, e as diretrizes e regulamentos estabelecidos pelo Massachusetts Eye and Ear Infirmary Comitê Animal Care. 1. O pré-tratamento <ol><li> Anestesiar um rato com 8 semanas de idade, com uma injecção intraperitoneal de uma mistura de 60 mg / kg de cetamina e 6 mg / kg de xilazina. </li><li> Cortar os bigodes. Isso é feito porque eles interferem com a visualização e colocação de instrumentos. </li><li> Dilatar a pupila com 5% de fenilefrina e 0,5% tropicamide. </li><li> Corte os cílios. Isto também é feito porque interferem com a visualização e a colocação do instrumento. </li><li> Aplicar anestesia tópica (solução oftálmica de 0,5% de cloridrato de proparacaína). </li></ol> 2. Cirurgia Sob o Microscópio <ol><li> Coloque o mouse em uma pos lateraisition com o nariz para o cirurgião. Uma pitada dedo do pé é realizado para confirmar a anestesia cirúrgica e luvas estéreis são vestiu antes de iniciar a cirurgia. </li><li> Incisão na conjuntiva temporais no limbo posterior e separar a conjuntiva da esclera. Evitar a penetração da esclerótica. Após este passo, compreender a conjuntiva no limbo com fórceps para controlar o olho. </li><li> Fazer uma incisão escleral de auto-selagem, utilizando a ponta de uma agulha G 30 com o chanfro apontada para cima. Fazer um túnel na esclerótica através da esclera e penetrar na esclerótica na coróide (Figura 1). Não penetrar a retina. Se o sangramento ocorre coróide e sai através da ferida escleral, realizar uma astriction com uma lança cirúrgico até que o sangramento pare. Esta ferida escleral será auto-selado com pressão intra-ocular. </li><li> Perfurar a córnea com uma agulha de 30 G para reduzir a pressão intra-ocular. Use a agulha paralela à íris para evitar ferir a íris e lente durante entry para a câmara anterior. A pressão intra-ocular vai fazer com que a ferida para auto-selagem. </li><li> Inserir uma agulha G 33 conectado a um mL da seringa no espaço sub-retiniano Hamilton 10, com o bisel apontado para baixo (em direção ao olho interno) e injetar o hialuronato de sódio 3,5 mL com cuidado para retirar a retina neurossensorial do EPR subjacente. Evite penetrar a retina com a agulha 33 G, porque o hialuronato de sódio vai para o espaço vítreo, mas não o espaço sub-retiniano, se a retina é penetrada. Além disso, evitar injeção rápida porque vai criar uma lágrima oral, e hialuronato de sódio vai vazar para a câmara anterior. </li><li> Deixe o fluxo do humor aquoso para fora do punção da córnea, empurrando a córnea em torno do furo da córnea com uma pinça para ajustar a pressão intra-ocular. </li><li> Confirmar a ausência de fuga a partir da ferida escleral usando uma lança cirúrgico. </li><li> Para reduzir o risco de fuga de hialuronato de sódio, colocar cianoacrilato cola cirúrgicaa ferida escleral. </li><li> Recoloque a conjuntiva à sua posição original, utilizando cianoacrilato cola cirúrgica. Isto irá reduzir ainda mais o risco de fuga de hialuronato de sódio. </li><li> Verifique o fundo usando uma tampa de vidro e confirme a criação de uma RD bolhosa sem hemorragia sub-retiniana. </li></ol> 3. Após tratamento <ol><li> Aplicar uma pomada antibiótica ao olho bacitracina para reduzir o risco de infecção. </li><li> Mantenha os ratos em uma almofada de aquecimento para evitar a anestesia (mistura de cetamina e xilazina) de causar baixa temperatura do corpo posterior à pressão arterial baixa. </li><li> Coloque os ratos de volta para a jaula de animais depois que eles despertam da anestesia. Monitorar os ratos diárias para complicações. Se surgir alguma complicação, eutanásia os ratos, conforme descrito abaixo. </li></ol> 4. Sacrifício <ol><li> Eutanásia dos ratinhos por deslocamento cervical depois de injecção intraperitoneal de 100 mg / kg de pentobarbital de sódio, e enucleate os olhos em pontos de tempo apropriados para cada experiência (não mostrado). Evite aplicar pressão sobre o olho durante a enucleação porque o hialuronato de sódio pode vazar. RDs bolhosas deve ser persistente durante pelo menos 14 dias. </li></ol>

<ol>
	<li>Anderson, D. H., Guerin, C. J., Erickson, P. A., Stern, W. H., Fisher, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+recovery+in+the+reattached+retina.">Morphological recovery in the reattached retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 168-183 (1986).</li><li>Cook, B., Lewis, G. P., Fisher, S. K., Adler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+photoreceptor+degeneration+in+experimental+retinal+detachment.">Apoptotic photoreceptor degeneration in experimental retinal detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 990-996 (1995).</li><li>Zacks, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+Activation+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Caspase Activation in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1262-1267 (2003).</li><li>Zacks, D. N., Han, Y., Zeng, Y., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Signaling+Pathways+and+Stress-Response+Genes+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Activation of Signaling Pathways and Stress-Response Genes in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 1691-1695 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cytokine+responses+to+retinal+detachment+in+rats.">Characterization of cytokine responses to retinal detachment in rats.</a> Mol. Vis. 12, 867-878 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Necrosis+Factor-Mediates+Photoreceptor+Death+in+a+Rodent+Model+of+Retinal+Detachment.">Tumor Necrosis Factor-Mediates Photoreceptor Death in a Rodent Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1384-1391 (2011).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relocalization+of+apoptosis-inducing+factor+in+photoreceptor+apoptosis+induced+by+retinal+detachment+in+vivo.">Relocalization of apoptosis-inducing factor in photoreceptor apoptosis induced by retinal detachment in vivo.</a> Am. J. Pathol. 158, 1271-1278 (2001).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+photoreceptor+apoptosis+in+functional+damage+after+retinal+detachment.">Critical role of photoreceptor apoptosis in functional damage after retinal detachment.</a> Curr. Eye Res. 24, 161-172 (2002).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+chemoattractant+protein+1+mediates+retinal+detachment-induced+photoreceptor+apoptosis.">Monocyte chemoattractant protein 1 mediates retinal detachment-induced photoreceptor apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 104, 2425-2430 (2007).</li><li>Trichonas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+interacting+protein+kinases+mediate+retinal+detachment-induced+photoreceptor+necrosis+and+compensate+for+inhibition+of+apoptosis.">Receptor interacting protein kinases mediate retinal detachment-induced photoreceptor necrosis and compensate for inhibition of apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 107, 21695-21700 (2010).</li><li>Roh, M. I., Murakami, Y., Thanos, A., Vavvas, D. G., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edaravone,+an+ROS+Scavenger,+Ameliorates+Photoreceptor+Cell+Death+after+Experimental+Retinal+Detachment.">Edaravone, an ROS Scavenger, Ameliorates Photoreceptor Cell Death after Experimental Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3825-3831 (2011).</li><li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tauroursodeoxycholic+acid+(TUDCA)+protects+photoreceptors+from+cell+death+after+experimental+retinal+detachment.">Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) protects photoreceptors from cell death after experimental retinal detachment.</a> PLoS One. 6, e24245 (2011).</li><li>Yang, L., Bula, D., Arroyo, J. G., Chen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+retinal+detachment-associated+photoreceptor+cell+loss+in+Bax-deficient+mice.">Preventing retinal detachment-associated photoreceptor cell loss in Bax-deficient mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 648-654 (2004).</li><li>Cebulla, C. M., Ruggeri, M., Murray, T. G., Feuer, W. J., Hernandez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+murine+retinal+detachment+model.">Spectral domain optical coherence tomography in a murine retinal detachment model.</a> Exp. Eye Res. 90, 521-527 (2010).</li><li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundus+Autofluorescence+Findings+in+a+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment.">Fundus Autofluorescence Findings in a Mouse Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li><li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina.">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am. J. Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li><li>Ross, W., Lavina, A., Russell, M., Maberley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+correlation+between+height+of+macular+detachment+and+visual+outcome+in+macula-off+retinal+detachments+of+&lt;+or+=+7+days'+duration.">The correlation between height of macular detachment and visual outcome in macula-off retinal detachments of &lt; or = 7 days' duration.</a> Ophthalmology. 112, 1213-1217 (2005).</li><li>Glatt, H., Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+subretinal+hemorrhage+in+rabbits.">Experimental subretinal hemorrhage in rabbits.</a> Am. J. Ophthalmol. 94, 762-773 (1982).</li><li>Toth, C. A., Morse, L. S., Hjelmeland, L. M., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+directs+early+retinal+damage+after+experimental+subretinal+hemorrhage.">Fibrin directs early retinal damage after experimental subretinal hemorrhage.</a> Arch. Ophthalmol. 109, 723-729 (1991).</li><li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration.">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. , 101-672 (1994).</li><li>Bhisitkul, R. 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Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li><li>Leon, S., Yin, Y., Nguyen, J., Irwin, N., Benowitz, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lens+injury+stimulates+axon+regeneration+in+the+mature+rat+optic+nerve.">Lens injury stimulates axon regeneration in the mature rat optic nerve.</a> J. Neurosci. 20, 4615-4626 (2000).</li><li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+choroidal+neovascularization+via+brief+subretinal+exposure+to+a+newly+developed+lentiviral+vector+pseudotyped+with+Sendai+viral+envelope+proteins.">Inhibition of choroidal neovascularization via brief subretinal exposure to a newly developed lentiviral vector pseudotyped with Sendai viral envelope proteins.</a> Hum. Gene Ther. 21, 199-209 (2010).</li><li>Kong, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+AAV5+vector+facilitates+quicker+transgene+expression+in+photoreceptor+and+retinal+pigment+epithelial+cells+of+normal+mouse.">Self-complementary AAV5 vector facilitates quicker transgene expression in photoreceptor and retinal pigment epithelial cells of normal mouse.</a> Exp. Eye Res. 90, 546-554 (2010).</li></ol>

O Olho de Massachusetts e Ear Infirmary tem uma participação acionária em três patentes norte-americanas voltadas para o uso de verteporfin. Além disso, Massachusetts Eye e Ear Infirmary tem participação em certas aplicações de patentes dirigidas para a destruição selectiva de neovascularização coroidal sub-retiniana para o tratamento de degeneração macular e outras doenças. O Olho de Massachusetts e Ear Infirmary recebe royalties como resultado dessas patentes e pedidos de patentes e Dr. Miller recebe uma parte do mesmo, de acordo com o Massachusetts Eye e Política Ear Infirmary do institucional de Patentes e Procedimentos, que inclui disposições relativas à partilha de royalties. O autor, Dr. Joan W. Miller, é membro do conselho do passado e ex-acionista da Alcon, Inc., e atualmente atua como consultor da Alcon; Imagen Biotech, Inc.; Isis Pharmaceuticals; Kalvista Pharmaceuticals; Regeneron Pharmaceuticals, Inc. e ONL Therapeutics, LLC. Dr. Demetrios G. Vavvas servecomo consultor para a Roche, Genentech, Kala Pharmaceuticals.

Vários métodos para o estabelecimento de um modelo de RD em roedores olhos foram relatados 3-15 de 22. A maioria deles utilizam a injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio porque é um material viscoso, utilizado durante a cirurgia intra-ocular em seres humanos, e não está associada com qualquer conhecida toxicidade ocular 1-15. Hialuronato de sódio, em vez de solução salina normal tamponada com fosfato (PBS) ou solução salina, aumenta a duração da RD. Os métodos para a injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio usar uma das duas abordagens: uma abordagem transvitreal 3-6 ou uma abordagem escleral 7-15. Ambos os métodos são realizados com a observação do fundo. Na abordagem transvitreal, um injector sub-retiniana é introduzida na cavidade vítrea, uma retinotomia é criada na periferia da retina, e o hialuronato de sódio é injectado no espaço sub-retiniano. Neste método, duas rasgaduras da retina são feitos, o que aumenta o risco da retinal hemorragia que pode ir para o espaço sub-retiniano. Além disso, existe o risco de lesão de lentes quando o retinotomia é criado. Existem vários métodos modificados para a abordagem escleral. Na maior parte destes métodos de 7-12, após a redução da pressão intra-ocular com um punção da câmara anterior, uma agulha de 30 G ligada a uma seringa cheia com hialuronato de sódio está directamente inserida no espaço sub-retiniano através da conjuntiva, esclerótica, coróide e RPE. O hialuronato de sódio é então injectado no espaço sub-retiniano. O risco de desgaste e danos da retina lente usando este método escleral é menor do que utilizando a abordagem transvitreal. No entanto, o furo feito na esclerótica com uma agulha de 30 G é grande, especialmente para os olhos de rato, e o hialuronato de sódio injectado no espaço sub-retiniano facilmente fugas para fora do olho através da ferida escleral. Isto leva a uma RD inferior a menos persistente e a morte celular de fotorreceptores mais variável. Além disso, se a hemorragia ocorre na coróideo passo de perfuração de esclerótica, a hemorragia irá propagar-se no espaço sub-retiniano por causa da pressão intra-ocular tem sido reduzido antes da injecção sub-retiniana hialuronato. Vários fatores podem influenciar o efeito de RD no descolamento de retina, incluindo a hemorragia sub-retiniana ea altura e persistência da RD 16-21. Células fotorreceptoras de morte aumenta com o aumento da altura da RD 16, 17, e danos às células fotorreceptoras podem ser mais extensa, devido à redução de difusão de oxigênio e nutrientes essenciais dos coriocapilares com maior RD comparação com RD superficial. Hemorragia sub-retiniana também é tóxico para as células fotorreceptoras 18-21; possíveis mecanismos dessa toxicidade no descolamento de retina incluem hipoxia e perturbação metabólica, hemorragia sub-retiniana como uma barreira de difusão, e neurotoxicidade direta induzida por componentes do sangue (como o ferro). Lesão Lens, que tem sido relatado para ter um efeito protetor sobre a reticélulas ganglionares nal 23, também podem afetar a morte das células fotorreceptoras após a indução da RD. Além disso, se o local da ferida de entrada não é selado, o hialuronato de sódio pode sair com a manipulação de olho durante a enucleação. Isso pode levar à classificação errônea de um RD como superficial, o que por sua vez pode afetar a interpretação dos resultados. Nós modificámos o método escleral para injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio para aumentar a reprodutibilidade de TR e reduzir o índice de hemorragia sub-retinal. O passo fundamental deste protocolo é a criação de uma incisão escleral auto-selante usando uma agulha 30 G, o que impede o vazamento de hialuronato de sódio após a injeção. Ao contrário dos métodos anteriores, este protocolo é realizada sem a observação do fundo de olho para que maior atenção é dada à ferida escleral. Aplicação de cola também impede o hialuronato de sódio de vazar para fora do olho. Em nossa experiência, a taxa de hemorragia sub-retiniana com este protocolo wcomo significativamente menor do que com outros protocolos. Se o sangramento coróide ocorre durante a etapa de incisão da esclerótica, irá sair do olho através da ferida de esclerótica porque este passo é executado antes de reduzir a pressão intra-ocular. Se o sangramento coróide ocorra após a redução da pressão intra-ocular e descolamento da retina neurosensorial, sangue dissecar para o espaço sub-retiniano. Descobrimos que isso aconteça em cerca de 5% dos casos, em contraste com cerca de 10-20% com as outras técnicas. Estes animais devem ser excluídos da análise. Esta técnica também pode ser usada para a injecção sub-retiniana de transferência de genes mediada por vector para atingir as células fotorreceptoras ou RPE 24, 25. Porque o veículo típico (PBS, solução salina) para essas injeções é significativamente menos viscoso do que o hialuronato de sódio, técnicas padrão são atormentados por mais vazamentos. A técnica aqui descrita, reduzindo este risco, faz experiências de transferência de vector mais reprodutível efiável.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Fotorreceptores da morte celular e subsequente declínio visuais ocorre quando as células fotorreceptoras são separados a partir do epitélio pigmentar da retina subjacente. A separação física dos fotorreceptores é visto em várias doenças da retina, incluindo a degeneração macular relacionada com a idade (AMD), coriorretinopatia serosa central, retinopatia diabética e retinopatia de prematuridade, bem como regmatogéneo (isto é causado por uma ruptura na retina) descolamento da retina ( RD). Injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio é um modelo amplamente aceito para criar uma RD que leva à morte das células fotorreceptoras, fornecendo informações sobre a fisiopatologia da degeneração dos fotorreceptores 1-15. Degeneração de fotorreceptores induzida por injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio, introduzido pela primeira vez em 2001, 7, tem a vantagem de um campo de tempo razoável (dias ou semanas). No entanto, ele pode ter uma variabilidade significativa da perda de células fotorreceptoras do animal ao animal devido a dois principais fatores que afetam a morte das células fotorreceptoras após RD: 1) de altura e duração da RD, e 2) a ocorrência de hemorragia sub-retiniana. Há uma curva de aprendizagem técnica íngreme para o método que contribui para ambos os factores. Degeneração de células fotorreceptoras aumenta com a altura da RD, como a distância entre o epitélio pigmentado da retina (RPE) da camada e fotorreceptores aumenta 16-17. De acordo com esses relatórios, nossas experiências anteriores mostraram mais morte de fotorreceptores em RDs bolhosas que RDs rasas. Também tem sido relatado que a hemorragia sub-retiniana é tóxico para as células fotorreceptoras e afecta a morte celular de fotorreceptores 18-21. Da mesma forma, temos observado mais a morte de fotorreceptores em RDs com hemorragia sub-retiniana de DRs sem hemorragia sub-retiniana. Assim, as técnicas para minimizar a variabilidade tem de se concentrar em alcançar alturas consistentes de RD, evitando hemorragia sub-retiniana. O nosso método de modificação emdução RD pode fazer bolhosa reprodutível e RD persistente na mesma posição do olho com rara ocorrência de hemorragia sub-retiniana. Foi realizada a cirurgia através de uma abordagem temporal, porque é mais fácil de conseguir um campo operatório mais largo em comparação com outros sites. Depois da incisão da conjuntiva, uma incisão escleral auto-selagem é feita utilizando uma agulha G 30. Um túnel na esclerótica é criado, seguido pela penetração de esclerótica para a coróide. Se o sangramento coróide ocorre neste passo, a hemorragia irá sair do olho através da ferida escleral, e o sangramento pode ser interrompido por astriction com uma lança cirúrgico. Uma punção da câmara anterior é, então, realizada a partir da córnea para reduzir a pressão intra-ocular. Este é um passo importante, pois a injeção sub-retiniana só vai levar ao aumento da pressão intra-ocular com oclusão da artéria da retina resultante e isquemia da retina interna. Uma agulha 33 G ligada a uma seringa Hamilton de 10 ul é então inserida no espaço sub-retiniano, e 3,5 μ, Hialuronato de sódio l é suavemente injetado para descolar a retina neurossensorial do EPR subjacente. Em contraste com outros métodos de induzir RD que são realizados sob a observação de fundo de olho, esta técnica é realizada sob observação directa. Desde a ferida escleral é auto-selante, hialuronato de sódio não vai vazar para fora após a injeção. Finalmente, a cola é colocado sobre a ferida de esclerótica e a conjuntiva é recolocado na sua posição original. Estes passos dura também reduzir o risco de fuga de hialuronato de sódio. A injecção de 3,5 mL de hialuronato de sódio cria DRs reprodutíveis (50%) da retina nos olhos de ratinhos de 8 semanas de idade. Criando a ferida auto-selante é o passo mais importante no nosso procedimento modificado, pois evita que o hialuronato de sódio injetado vaze para fora do olho, permitindo assim bolhosa reprodutível e RDs persistentes.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketaject</td>
 <td>Phoenix</td>
 <td>2010025</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed</td>
 <td>LLOYD</td>
 <td>4004821</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5% Phenylephrine / 0.5% Tropicamide</td>
 <td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.5% Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution</td>
 <td>AKORN</td>
 <td>17478-263-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Provics</td>
 <td>Alcon</td>
 <td>8065183085</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Webglue</td>
 <td>Patterson Veterinary</td>
 <td>07-8566128</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MG90</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G1/2 PrecisionGlide Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Weck-Cel Eye Spears</td>
 <td>Beaver-Visitec</td>
 <td>0008685</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 Microliter Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7635-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>33 gauge, 0.5 inch needle</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18x18mm Cover Glass</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>18-548A</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate

Injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio é um método amplamente aceito de induzir o descolamento de retina (DR). No entanto, a altura e tempo de RD ou a ocorrência de hemorragia sub-retinal pode afectar a morte celular de fotorreceptores na retina descolada. Por isso, é vantajoso criar DRs reprodutíveis sem hemorragia sub-retiniana para avaliar a morte celular de fotorreceptores. Nós modificamos um método previamente relatado para criar bolhosa e RDs persistentes em um local reprodutível com rara ocorrência de hemorragia sub-retiniana. O passo crítico deste método modificado é a criação de uma incisão escleral auto-vedante, o que pode impedir a fuga de hialuronato de sódio, após injecção no espaço sub-retiniano. Para fazer a incisão escleral de auto-selagem, um túnel na esclerótica é criado, seguido pela penetração de esclerótica para a coróide, com uma agulha G 30. Apesar de hemorragia de coróide podem ocorrer durante esta etapa, astriction com uma lança cirúrgica reduz a taxa de hem coróideorrhage. Este método permite que um modelo mais reprodutível e fiável de morte de fotorreceptores em doenças que envolvem RD como regmatogéneo RD, retinopatia da prematuridade, retinopatia diabética, coriorretinopatia serosa central, e degeneração macular relacionada com a idade (AMD).

Para avaliar a persistência da RD feito por este protocolo, criosecções foram feitas nos dias 3, 7 e 14 após a indução da RD. Seis olhos foram utilizadas para cada ponto de tempo. Hematoxilina e eosina (HE) foi usado para visualizar as seções. Todas as secções mostraram uma RD bolhosa aproximando a lente (Figura 2). Um olho mostrou hemorragia sub-retiniana no dia 7. Não há olhos mostrou quaisquer sinais de infecção ou lesão lente. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> Figura 1. Criando uma incisão escleral de auto-selagem. Este esquema mostra uma imagem em corte transversal de um olho normal de rato. Linha vermelha indica a incisão escleral auto-selante. Um túnel na esclerótica, seguido pela penetração de esclerótica para a coróide, com uma agulha G 30, cria uma incisão escleral de auto-selagem. Esta ferida escleralvai ser auto-selado com pressão intra-ocular, o que pode impedir a fuga de hialuronato de sódio após a injecção para dentro do espaço sub-retinal e alcançar os descolamentos de retina bolhosas persistentes. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> Figura 2. Curso do tempo de descolamento de retina. Esta foto de fundo de olho mostra um descolamento de retina bolhosa sem hemorragia sub-retiniana imediatamente após a cirurgia. Criosecções com hematoxilina e eosina (HE) show de descolamento de retina bolhosa persistente sem hemorragia sub-retiniana por pelo menos 14 dias.

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Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Criação de descolamento de retina experimentais com uma altura reprodutível e sustentada de desapego, e sem hemorragia sub-retiniana, é importante para o estudo da fisiopatologia da perda de células fotorreceptoras da retina na doença e avaliar intervenções terapêuticas potenciais. Relatamos tal método em detalhes.

Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

retinal-detachment-model-rodents-subretinal-injection-sodium

Research

JoVE Journal

Medicine

20.6K visualizações.  Massachusetts Eye and Ear Infirmary, Harvard Medical School.  Criação de descolamento de retina experimentais com uma altura reprodutível e sustentada de desapego, e sem hemorragia sub-retiniana, é importante para o estudo da fisiopatologia da perda de células fotorreceptoras da retina na doença e avaliar intervenções terapêuticas potenciais. Relatamos tal método em detalhes. 

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Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

Injeção de sub-retiniana de Vetores da terapia genética e células-tronco no olho do rato

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Medicina

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

Realizando Subretinal Injeções em roedores para entregar epitélio pigmentar da retina células em suspensão

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

A Passo a Passo Protocolo de Cirurgia sub-retiniana em Coelhos

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Medição de contratilidade isométrica da artéria mesentérica Mouse usando fio miografia

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Studying Left Ventricular Reverse Remodeling by Aortic Debanding in Rodents

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, mice undergo RR upon removal of the aortic constriction. In this paper, we describe a step-by-step procedure to perform a minimally invasive surgical aortic debanding in mice. Echocardiography was subsequently used to assess the degree of cardiac hypertrophy and dysfunction during LV remodeling and RR and to determine the best timing for aortic debanding. At the end of the protocol, terminal hemodynamic evaluation of the cardiac function was conducted, and samples were collected for histological studies. We showed that debanding is associated with surgical survival rates of 70-80%. Moreover, two weeks after debanding, the significant reduction of ventricular afterload triggers the regression of ventricular hypertrophy (~20%) and fibrosis (~26%), recovery of diastolic dysfunction as assessed by the normalization of left ventricular filling and end-diastolic pressures (E/e&#39;&#160;and LVEDP). Aortic debanding is a useful experimental model to study LV RR in rodents. The extent of myocardial recovery is variable between subjects, therefore, mimicking the diversity of RR that occurs in the clinical context, such as aortic valve replacement. We conclude that the aortic banding/debanding model represents a valuable tool to unravel novel insights into the mechanisms of RR, namely the regression of cardiac hypertrophy and the recovery of diastolic dysfunction.

Here we describe a step-by-step protocol of surgical aorta debanding in the well-established mice model of aortic-constriction. This procedure not only allows studying the mechanisms underlying the left ventricular reverse remodeling and regression of hypertrophy but also to test novel therapeutic options that might accelerate myocardial recovery.

Estudando remodelagem reversa ventricular esquerda por debandagem aórtica em roedores

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, ...

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the pathophysiological changes of human OA. However, as the main symptom in the late stage of OA, pain affects the patients&#39; daily life, and there are not many available models. The mono-iodoacetate (MIA)-induced model is the most widely used OA pain model, mainly used in rodents. MIA is an inhibitor of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, which causes chondrocyte death, cartilage degeneration, osteophyte, and measurable changes in animal behavior. Besides, expression changes of matrix metalloproteinase (MMP) and pro-inflammatory cytokines (IL1 &#946; and TNF &#945;) can be detected in the MIA-induced model. Those changes are consistent with OA pathophysiological conditions in humans, indicating that MIA can induce a measurable and successful OA pain model. This study aims to describe the methodology of intra-articular injection of MIA in rats and discuss the resulting pain-related behaviors and histopathological changes.

This study describes the method of intra-articular injection of mono-iodoacetate in rats and discusses the resulting pain-related behaviors and histopathological changes, which provide references for future applications.

Modelo de Dor da Osteoartrite Induzida pela Injeção Intra-Articular de Mono-Iodoacetato em Ratos

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

Modelo de Retinopatia Induzida por Oxigênio para Doenças Isquêmicas da Retina em Roedores

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. To investigate pathological mechanisms of retinal ischemia, relevant experimental models need to be developed. Anatomically, a main retinal blood supplying vessel is the ophthalmic artery (OpA) and OpA originates from the internal carotid artery of the common carotid artery (CCA). Thus, disruption of CCA could effectively cause retinal ischemia. Here, we established a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion (tBCCAO) to tie the right CCA with 6-0 silk sutures and to occlude the left CCA transiently for 2 seconds via a clamp, and showed that tBCCAO could induce acute retinal ischemia leading to retinal dysfunction. The current method reduces reliance on surgical instruments by only using surgical needles and a clamp, shortens occlusion time to minimize unexpected animal death, which is often seen in mouse models of middle cerebral artery occlusion, and maintains reproducibility of common retinal ischemic findings. The model can be utilized to investigate the pathophysiology of ischemic retinopathies in mice and further can be used for in vivo drug screening.

Here, we describe a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion using simple sutures and a clamp. This model can be useful for understanding the pathological mechanisms of retinal ischemia caused by cardiovascular abnormalities.

Um modelo murino de lesão isquêmica da retina induzida pela oclusão da artéria da carótida comum bilateral transitória

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

Transplante de Epitélio de Pigmento De Retina em um modelo de primata não humano para doenças degenerativas da retina

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.