Gostaríamos de estender a nossa gratidão ao pessoal da Agência de defesa sueca (FOI) e o centro de Linköping para desastre medicina e Traumatologia (KMC) pelo apoio gentil.

O estudo aqui descrito seguiu as diretrizes de ética local e foi aprovado pelo Comitê de revisão ética regional em Linköping (licença número 2015/99-31).
1. o consentimento informado e triagem
<ol><li>Obter o consentimento informado do sujeito.</li>
	<li>Tela de acordo com os critérios de inclusão/exclusão. Nota: Os critérios de inclusão foram: (i) adultos > 18 anos de idade, (ii) capaz de compreender a informação escrita e oral e (iii) fornece o consentimento oral e escrito. Critérios de exclusão foram: (i) incapaz ou não quer fornecer o consentimento informado, doenças da pele (ii) em curso, (iii) cardiovasculares, medicação (iv), o que pode interferir na função vascular. Contraceptivos orais são permitidos. Se o assunto usa contraceptivos orais deve ser anotada no arquivo do protocolo do sujeito, (v) cicatriz livre e não-machucado da pele da testa, (vi) sem ingestão de cafeína ou tabaco 2 h antes do início do teste e (vii) sem atividade física extenuante pelo menos 2h pr IOR para o início do teste.</li>
</ol>2. a aclimatação e instalação de equipamentos
<ol><li>Deixe o assunto de teste aclimatar pelo menos 20 min em uma posição supina antes do início do teste. Nota: Correto posicionamento do sujeito e equipamento é mostrado na figura suplementar 1.</li>
	<li>
Configure a gravação da câmera dos testes capilar usando o software designado e câmera digital (veja a tabela de materiais).
	<ol>
<li>Conecte o cabo USB para a câmera e o computador e ajustar as configurações da câmera para o modo de vídeo.</li>
		<li>Ligue a câmera e certifique-se de que ele se conecta ao computador.</li>
		<li>Inicie o software da câmera de controle remoto (veja a Tabela de materiais).</li>
		<li>Desligue a luz ambiente e virar a tela do computador longe da área de medição.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. aquisição de dados
<ol><li>Clique o "visão de vida" (Sic) botão e pressione "Start".</li>
	<li>Alternar entre o modo 'video' e 'TiVi' clicando nos botões de rádio (isto não afectará a gravação, apenas no ecrã apresentação). Certifique-se de que um fluxo de vídeo ao vivo da testa do sujeito é visível no visor da câmera e na tela do computador.</li>
	<li>Ajuste a câmera a uma altura de aproximadamente 15 cm acima da testa do sujeito.</li>
	<li>Certifique-se de que o foco da câmera é definido como "AF" (auto foco).</li>
	<li>Peça o assunto para manter sua cabeça ainda para a duração do teste e abster-se de falar. Informar o assunto que é Okey manter seu olhos fechados durante o teste, dizendo: "por favor, coloque a cabeça na almofada e mantenha sua cabeça ainda para a duração do teste. Por favor, não fale durante os 20 segundos que o teste vai durar. Você pode manter os olhos fechados o tempo todo, se você encontrar a luz muito brilhante ".</li>
	<li>Não mova a câmera durante a gravação.</li>
	<li>Na janela de "visão de vida" encontrar e clique em "record HD" para iniciar uma gravação contínua por 20 s. nota que a duração da gravação (segundos), pode ser visto na tela da câmera; os 5 primeiros s da gravação é adquirir a concentração normal de sangue capilar da testa.</li>
	<li>No final do 5 s da linha de base de gravação, aplicar uma empresa branqueamento de pressão para a área de medição para 5 s. Use o dedo indicador com uma colher de chá de plástico entre o dedo e a testa para isolamento de temperatura e equalização de pressão.</li>
	<li>Solte a pressão e rapidamente retirar o dedo do examinador e colher de chá de plástico da zona de medição.</li>
	<li>Continuar a gravar para outro 10 s para capturar a resposta subsequente hiperemiada.</li>
	<li>Pare de gravar clicando em "Stop" na janela de "visão de vida".</li>
	<li>Uma vez que a gravação parou, uma janela será aberta para salvar e nomear o arquivo (formato. mov); Escolha uma pasta e um nome para o vídeo. Não desconecte a câmera do computador enquanto o vídeo é o download para a pasta designada no computador.</li>
</ol>4. análise de dados
<ol><li>Proceder à construção de curva e análise de imagem com um software dedicado a análise de desempenho (ver Tabela de materiais).</li>
	<li>Inicie o software de análise clicando no ícone no desktop.</li>
	<li>Depois que o software foi iniciado, na tela principal, selecione "Página do filme."</li>
	<li>Na janela "Movie page", clique em "Carregar filme." Espere que o software carregar e analisar o filme. Isto pode demorar até alguns minutos dependendo do tamanho do arquivo de vídeo.</li>
	<li>Uma vez terminado o upload e análise do filme, clique em "Salvar como imagens" e esperar que o software para analisar o vídeo. Nota: Isto criará automaticamente uma nova pasta no computador que contém a sequência de vídeo dividida em imagens jpeg individuais.</li>
	<li>Finalizada a divisão do vídeo em imagens jpeg individuais, localize e selecione "Página de fotos de colheita" na janela do ecrã principal.</li>
	<li>Na "cultura imagens página", clique em "Primeira foto" e navegue até a pasta que contém as fotografias jpeg do vídeo e selecione a primeira foto a ser analisado; o software automaticamente irá selecionar as seguintes fotos desse lote.</li>
	<li>Clique no menu "Editar" e escolha entre marcadores circulares ou retangulares para a região de interesse.</li>
	<li>Na janela "Selecionar fotos", encontre a caixa de "Foto real" e digite o nome da primeira foto do lote onde o dedo do investigador é totalmente recolhido da área de medição. Para localizar esta foto, olhe para a pasta que contém as fotos individuais do vídeo.</li>
	<li>Selecione uma região de interesse, clicando e segurando o botão esquerdo do mouse e desenhar um círculo ou retângulo na janela de foto que está dentro das fronteiras da área branqueada. A região selecionada de interesse é aplicada automaticamente a todas as fotos do lote.</li>
	<li>Clique no menu "Arquivo" e escolha "Salvar ROI" para salvar a localização da região selecionado de interesse para referência futura.</li>
	<li>Clique no botão "Tracker de curva" e aguarde o software para analisar a região de interesse.</li>
	<li>Uma vez que abre a janela de rastreador de curva, a mudança na concentração de células vermelhas do sangue para a região selecionada de interesse para a duração do teste é exibida como uma curva. Na tela de apresentação pode ser alterada clicando nos botões de rádio diferentes. Isto não afetará os dados brutos.</li>
	<li>Clique em "Exportar dados" e salvar a transcrição de dados brutos para uma análise mais aprofundada.</li>
	<li>Na transcrição dados brutos, navegue para a coluna nomeada "Significa intensidade TiVi valores." Gerar três novas colunas ao lado dessa coluna para "número de imagem", "tempo total" e "tempo de Reenchimento capilar", começando em 1 0 s, s e 0 s e com uma incrementação de 1 s, 0,02 s e 0,02 s, respectivamente. Nota: "Tempo de Reenchimento capilar" se correlaciona com o tempo da reação subsequente para a liberação da pressão do branqueamento e começa com o valor médio que representa a primeira foto onde o dedo do investigador é totalmente recolhido da área de medição.</li>
	<li>Exclua os valores entre a linha de base e tempo de Reenchimento capilar, como estes apenas contenham o ruído gerado do investigador dedo indicador e colher de chá de plástico durante a manobra de branqueamento.</li>
	<li>Calcular um valor médio para a medição da linha de base (5 primeiros s da gravação).</li>
	<li>Encontre o primeiro valor que é igual ou ultrapassa o valor de base média calculada e nota o tempo na coluna "Tempo de Reenchimento capilar". Neste ponto do tempo representa o "tempo de retornar à linha de base 1".</li>
	<li>Encontre o mais elevado significa valor de intensidade dos valores gerados após a liberação de pressão e observe o ponto de tempo, na coluna "Tempo de Reenchimento capilar". Neste ponto do tempo representa a "hora de pico."</li>
	<li>O segundo valor que é menor ou igual ao valor médio calculado para a medição de referência e nota ponto de tempo na coluna "Tempo de Reenchimento capilar". Neste ponto do tempo representa o "tempo de retornar à linha de base 2".</li>
</ol>

<ol>
	<li>Strehlow, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+identification+of+shock+in+critically+ill+patients.">Early identification of shock in critically ill patients.</a> Emerg Med Clin North Am. 28 (1), 57-66 (2010).</li><li>Advanced Life Support, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Acute Medical Emergencies. , 67-84 (2010).</li><li>Brasel, K. J., Guse, C., Gentilello, L. M., Nirula, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+rate:+is+it+truly+a+vital+sign?.">Heart rate: is it truly a vital sign?.</a> J Trauma. 62 (4), 812-817 (2007).</li><li>De Backer, D., Ortiz, J. A., Salgado, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupling+microcirculation+to+systemic+hemodynamics.">Coupling microcirculation to systemic hemodynamics.</a> Curr Opin Crit Care. 16 (3), 250-254 (2010).</li><li>Mrgan, M., Rytter, D., Brabrand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+refill+time+is+a+predictor+of+short-term+mortality+for+adult+patients+admitted+to+a+medical+department:+an+observational+cohort+study.">Capillary refill time is a predictor of short-term mortality for adult patients admitted to a medical department: an observational cohort study.</a> Emerg Med J. 31 (12), 954-958 (2014).</li><li>Advanced Life Support, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Acute Medical Emergencies. , 55-65 (2010).</li><li>Lewin, J., Maconochie, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+refill+time+in+adults.">Capillary refill time in adults.</a> Emerg Med J. 25 (6), 325-326 (2008).</li><li>Lobos, A. T., Menon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multidisciplinary+survey+on+capillary+refill+time:+Inconsistent+performance+and+interpretation+of+a+common+clinical+test.">A multidisciplinary survey on capillary refill time: Inconsistent performance and interpretation of a common clinical test.</a> Pediatr Crit Care Med. 9 (4), 386-391 (2008).</li><li>Otieno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+bedside+features+of+shock+reproducible+between+different+observers?.">Are bedside features of shock reproducible between different observers?.</a> Arch Dis Child. 89 (10), 977-979 (2004).</li><li>Raju, N. V., Maisels, M. J., Kring, E., Schwarz-Warner, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+refill+time+in+the+hands+and+feet+of+normal+newborn+infants.">Capillary refill time in the hands and feet of normal newborn infants.</a> Clin Pediatr (Phila). 38 (3), 139-144 (1999).</li><li>Klupp, N. L., Keenan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+the+reliability+and+validity+of+capillary+refill+time+test.">An evaluation of the reliability and validity of capillary refill time test.</a> The Foot. 17, 15-20 (2007).</li><li>Gorelick, M. H., Shaw, K. N., Baker, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ambient+temperature+on+capillary+refill+in+healthy+children.">Effect of ambient temperature on capillary refill in healthy children.</a> Pediatrics. 92 (5), 699-702 (1993).</li><li>Schriger, D. L., Baraff, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+normal+capillary+refill:+variation+with+age,+sex,+and+temperature.">Defining normal capillary refill: variation with age, sex, and temperature.</a> Ann Emerg Med. 17 (9), 932-935 (1988).</li><li>Pandey, A., John, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+refill+time.+Is+it+time+to+fill+the+gaps?.">Capillary refill time. Is it time to fill the gaps?.</a> Med J Armed Forces India. 69 (1), 97-98 (2013).</li><li>Strozik, K. S., Pieper, C. H., Roller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+refilling+time+in+newborn+babies:+normal+values.">Capillary refilling time in newborn babies: normal values.</a> Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 76 (3), F193-F196 (1997).</li><li>Doherty, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-epidermal+imaging+using+polarized+light+spectroscopy+for+assessment+of+skin+microcirculation.">Sub-epidermal imaging using polarized light spectroscopy for assessment of skin microcirculation.</a> Skin Res Technol. 13 (4), 472-484 (2007).</li><li>Noguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+caffeine+contained+in+a+cup+of+coffee+on+microvascular+function+in+healthy+subjects.">Effect of caffeine contained in a cup of coffee on microvascular function in healthy subjects.</a> J Pharmacol Sci. 127 (2), 217-222 (2015).</li><li>Reus, W. F., Robson, M. C., Zachary, L., Heggers, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+effects+of+tobacco+smoking+on+blood+flow+in+the+cutaneous+micro-circulation.">Acute effects of tobacco smoking on blood flow in the cutaneous micro-circulation.</a> Br J Plast Surg. 37 (2), 213-215 (1984).</li><li>Lenasi, H., Strucl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+regular+physical+training+on+cutaneous+microvascular+reactivity.">Effect of regular physical training on cutaneous microvascular reactivity.</a> Med Sci Sports Exerc. 36 (4), 606-612 (2004).</li><li>Anderson, B., Kelly, A. M., Kerr, D., Clooney, M., Jolley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+patient+and+environmental+factors+on+capillary+refill+time+in+adults.">Impact of patient and environmental factors on capillary refill time in adults.</a> Am J Emerg Med. 26 (1), 62-65 (2008).</li><li>John, R. T., Henricson, J., Nilsson, G. E., Wilhelms, D., Anderson, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflectance+spectroscopy:+to+shed+new+light+on+the+capillary+refill+test.">Reflectance spectroscopy: to shed new light on the capillary refill test.</a> J Biophotonics. , (2017).</li><li>Blaxter, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+quasi-continuous+capillary+refill+timing+device.">An automated quasi-continuous capillary refill timing device.</a> Physiological measurement. 37, 83-99 (2016).</li><li>Bordoley, A., Irwin, R., Kalyani, V., MacDonald, C., Standish, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> D1GIT: Automated, temperature-calibrated measurement of capillary refill time. , (2012).</li><li>Kviesis-Kipge, E., Curkste, E., Spigulis, J., Eihvalde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+analysis+of+skin+capillary-refill+processes+using+blue+LED.">Real-time analysis of skin capillary-refill processes using blue LED.</a> Proc. of SPIE. 771523, (2010).</li><li>Shavit, I., Brant, R., Nijssen-Jordan, C., Galbraith, R., Johnson, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+imaging+technique+to+measure+capillary-refill+time:+improving+diagnostic+accuracy+for+dehydration+in+young+children+with+gastroenteritis.">A novel imaging technique to measure capillary-refill time: improving diagnostic accuracy for dehydration in young children with gastroenteritis.</a> Pediatrics. 118 (6), 2402-2408 (2006).</li><li>Cohen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitor+to+Measure+Dermal+Blood+Flow+in+Critically+Ill+Patients:+Study.">Monitor to Measure Dermal Blood Flow in Critically Ill Patients: Study.</a> International Scholarly Research Notices. 578316, e578316 (2013).</li></ol>

Sem apoio financeiro de WheelsBridge AB estava envolvido na condução do estudo. O autor JH é empregado pelo Conselho do Condado de Östergötland, mas tem um contrato de royalties com WheelsBridge AB. O autor sênior CDA tem uma posição acadêmica em tempo integral, mas também envolvimento limitado em WheelsBridge AB.

A fim de obter os melhores resultados com o sistema, variabilidade causada por fatores ambientais deve ser controlada. Toda a luz ambiente deve ser desligada. A câmera deve ser posicionada em alinhamento vertical com a área de medição. Para assegurar uma área de medição constante, temas não devem mover ou falar durante a medição. Pela mesma razão, a câmera é de preferência montada em um carrinho para evitar movimento e manter uma distância constante para a área de medição. Cobaias devem evitar cafeína<...

Avaliação e triagem dos centros pacientes criticamente doentes sobre a clássica sinais vitais pressão (BP), frequência cardíaca (FC), frequência respiratória (RR), saturação de oxigênio e de temperatura do corpo1. Alterações nesses parâmetros aparecem relativamente tarde no decurso da deterioração do sistema circulatória. Por exemplo, e em hemorragia, uma diminuição na BP não ocorrerá até que perda de sangue se torna moderada a grave2, HR aumento também pode ser um marcador insensível e inespecíficos3.
O teste capilar (teste de CR) pode oferecer uma indicação anterior de incipiente colapso circulatório, como o tempo de recarga é acreditado para mudar antes os sinais vitais, bem como a aparência clínica de pele fria, úmida e manchada de1,4 , 5. o teste capilar geralmente é executado pelo aplicativo e depois, liberte de um branqueamento firme pressão para a pele com o tempo (em segundos) do retorno do sangue à área branqueado. De acordo com diretrizes, recarga deve ocorrer dentro de 2 segundos após o lançamento de 5 segundos de pressão firme (por exemplo, pelo dedo do médico) no normal saudável supina paciente6. A justificativa para o teste é que um tempo de recarga mais lento indicaria a perfusão pobre pele, possível causada por um de uma série de eventos críticos, tais como sepse, perda de sangue, insuficiência cardíaca aguda ou hipotermia.
Neste momento, não há nenhum consenso sobre um método de última geração para realizar o CR teste6,7,8,9,10. Questões controversas incluem a falta de padronização da manobra de branqueamento real e a dependência subjetiva (ou seja, olho nu) avaliações do refil de ponto de extremidade7,9,11. Além disso, existem indicações de que o gênero influencia CR tempo12,13. A temperatura, ambiente e pele, é conhecida por afetar o tempo de Reenchimento capilar, mas até que ponto não é clara. Por último, o uso de sites de medição diferente, periféricos ou centrais, é provavelmente uma causa mais de variabilidade nos resultados com poucos estudos nesta área14,15.
No presente trabalho, usamos um sistema óptico de bioengenharia para gravar o curso do retorno do sangue e a subsequente resposta hiperemiada visto durante o teste de CR. O sistema utiliza a espectroscopia de polarização difusa para quantificar e descrever, em mais detalhe do que o possível com a olho nu, o tempo e o curso do reenchimento capilar. O sistema é composto por uma câmera digital padrão, equipada com um anel de luz externo com 92 LEDs brancos e software especialmente desenvolvido. A lente e os filtros de polarização de dois, anexados ortogonalmente na frente os LEDs, bloqueiam a luz que tem sido refletida diretamente da superfície da pele, permitindo que a única luz que tem tornar-se despolarizada no tecido para alcançar a câmara. Isso gera uma imagem "subepidérmica" do tecido a uma profundidade de cerca de 0,5 mm. A imagem é dividida em seus aviões de cor e o teor de vermelho e verde para cada pixel é calculado, gerando um valor que corresponde à concentração de tecido de células vermelhas do sangue,16. No modo de vídeo, a resolução temporal do sistema é de 0,02 s.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>TiVi701 Camera</td>
			<td>WheelsBridge AB</td>
			<td>TiVi701 Camera, version 1.5.1</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TiVi700</td>
			<td>WheelsBridge AB</td>
			<td>TiVi700 Analysis, version 1.2.9</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Canon EOS 700D</td>
			<td>Canon U.S.A., inc.</td>
			<td>Canon EOS 700D</td>
			<td>Digital SLR Camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera stand</td>
			<td>Manfrotto</td>
			<td>681B</td>
			<td>Modified camera stand to hold the digital camera in position</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera stand</td>
			<td>Disa Denmark</td>
			<td>9020B</td>
			<td>Modified camera stand to hold the digital camera in position</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

diffuse reflectance spectroscopy: getting the capillary refill test under one's thumb

O teste capilar foi introduzido em 1947 para ajudar a estimar o status circulatório em pacientes criticamente enfermos. Diretrizes do estado comumente essa recarga deve ocorrer dentro de 2 s após liberar 5 s de pressão firme (por exemplo, pelo dedo do médico) no paciente em decúbito dorsal saudável normal. Um tempo de recarga mais lento indica perfusão pobre pele, que pode ser causada por condições incluindo sepse, perda de sangue, hipoperfusão e hipotermia. Desde a sua introdução, tem sido debatida a utilidade clínica do teste. Os defensores salientar sua viabilidade e simplicidade e afirmam que ele pode indicar alterações no status vascular mais cedo do que as alterações nos sinais vitais como o ritmo cardíaco. Os críticos, por outro lado, salientam que a falta de padronização em como o teste é executado e a natureza altamente subjetiva da avaliação a olho nu, bem como a sensibilidade do teste de fatores de ambientes, reduzem acentuadamente o valor clínico. O objetivo do presente trabalho é descrever em detalhes o curso de recarga de evento e sugerir potencialmente mais objetivos e valores de ponto de extremidade exato para o capilar reabasteça teste usando espectroscopia de polarização difusa.

Filmar o curso do reenchimento capilar gera grandes quantidades de dados não é possíveis obter pela avaliação do olho nu. Aqui sugerimos novos pontos de extremidade para melhorar ainda mais a usabilidade do teste CR como um indicador precoce de deterioração do estado circulatório. Chamamos estes pontos de extremidade: "Baseline", "Sangue Zero" (ou "BZ"), "hora de voltar para a linha de base 1" (ou "tRtB1"), "Hora de pico" ou "Tpk." O valor "de base" é derivado calculando um valo...

Watch this Scientific Journal Video about Diffuse Reflectance Spectroscopy: Getting the Capillary Refill Test Under One's Thumb at JoVE.com

Diffuse Reflectance Spectroscopy: Getting the Capillary Refill Test Under One's Thumb

Este protocolo descreve como o uso da espectroscopia de polarização difusa pode melhorar a utilidade clínica do teste capilar. Sugerimos uma análise mais detalhada do curso do reenchimento capilar em voluntários saudáveis, usando vídeos de espectroscopia de reflectância difusa e novos pontos de extremidade de informáticos.

Espectroscopia de reflectância difusa: Ficando o teste capilar sob o polegar

The capillary refill test was introduced in 1947 to help estimate circulatory status in critically ill patients. Guidelines commonly state that refill ...

diffuse-reflectance-spectroscopy-getting-capillary-refill-test-under

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Medical-Surgical Nursing

Neuroscience

Unit 1

An Overview of the Cardiovascular System: Anatomy, Physiology, Assessment, and Abnormalities

SCIENTISTS IN ACTION

9.0K visualizações.  Region Östergötland. Este protocolo descreve como o uso da espectroscopia de polarização difusa pode melhorar a utilidade clínica do teste capilar. Sugerimos uma análise mais detalhada do curso do reenchimento capilar em voluntários saudáveis, usando vídeos de espectroscopia de reflectância difusa e novos pontos de extremidade de informáticos.

Vídeo: Diffuse Reflectance Spectroscopy: Getting the Capillary Refill Test Under One's Thumb

Imaging Odor-Evoked Activities in the Mouse Olfactory Bulb using Optical Reflectance and Autofluorescence Signals

In the brain, sensory stimulation activates distributed populations of neurons among functional modules which participate to the coding of the stimulus. Functional optical imaging techniques are advantageous to visualize the activation of these modules in sensory cortices with high spatial resolution. In this context, endogenous optical signals that arise from molecular mechanisms linked to neuroenergetics are valuable sources of contrast to record spatial maps of sensory stimuli over wide fields in the rodent brain.
Here, we present two techniques based on changes of endogenous optical properties of the brain tissue during activation. First the intrinsic optical signals (IOS) are produced by a local alteration in red light reflectance due to: (i) absorption by changes in blood oxygenation level and blood volume (ii) photon scattering. The use of in vivo IOS to record spatial maps started in the mid 1980's with the observation of optical maps of whisker barrels in the rat and the orientation columns in the cat visual cortex1. IOS imaging of the surface of the rodent main olfactory bulb (OB) in response to odorants was later demonstrated by Larry Katz's group2. The second approach relies on flavoprotein autofluorescence signals (FAS) due to changes in the redox state of these mitochondrial metabolic intermediates. More precisely, the technique is based on the green fluorescence due to oxidized state of flavoproteins when the tissue is excited with blue light. Although such signals were probably among the first fluorescent molecules recorded for the study of brain activity by the pioneer studies of Britton Chances and colleagues3, it was not until recently that they have been used for mapping of brain activation in vivo. FAS imaging was first applied to the somatosensory cortex in rodents in response to hindpaw stimulation by Katsuei Shibuki's group4.
The olfactory system is of central importance for the survival of the vast majority of living species because it allows efficient detection and identification of chemical substances in the environment (food, predators). The OB is the first relay of olfactory information processing in the brain. It receives afferent projections from the olfactory primary sensory neurons that detect volatile odorant molecules. Each sensory neuron expresses only one type of odorant receptor and neurons carrying the same type of receptor send their nerve processes to the same well-defined microregions of &tilde;100&mu;m3 constituted of discrete neuropil, the olfactory glomerulus (Fig. 1). In the last decade, IOS imaging has fostered the functional exploration of the OB5, 6, 7 which has become one of the most studied sensory structures. The mapping of OB activity with FAS imaging has not been performed yet.
Here, we show the successive steps of an efficient protocol for IOS and FAS imaging to map odor-evoked activities in the mouse OB.

This article presents the protocols of intrinsic optical signals and flavoproteins autofluorescence signals imaging to map odor-evoked activities at the surface of the olfactory bulb in mice.

Atividades de imagem Odor-Evocados no bulbo olfatório do rato usando reflectância óptica e Sinais de autofluorescência

In the brain, sensory stimulation activates distributed populations of neurons among functional modules which participate to the coding of the stimulus. ...

Neurociência

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

O Mouse Teste de Natação Forçada

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Tail Suspension Test

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that are expected to affect depression related behaviors. Mice are suspended by their tails with tape, in such a position that it cannot escape or hold on to nearby surfaces. During this test, typically six minutes in duration, the resulting escape oriented behaviors are quantified. The tail-suspension test is a valuable tool in drug discovery for high-throughput screening of prospective antidepressant compounds. Here, we describe the details required for implementation of this test with additional emphasis on potential problems that may occur and how to avoid them. We also offer a solution to the tail climbing behavior, a common problem that renders this test useless in some mouse strains, such as the widely used C57BL/6. Specifically, we prevent tail climbing behaviors by passing mouse tails through a small plastic cylinder prior to suspension. Finally, we detail how to manually score the behaviors that are manifested in this test.

The tail-suspension test is validated as an experimental procedure to assess antidepressant efficacy of drug treatments in mice. Mice are suspended by their tails for six minutes and escape-related behaviors are assessed. We describe procedures used in conducting the tail suspension test.

O Teste de Suspensão da cauda

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that ...

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

Only a few neuronal populations in the central nervous system (CNS) of adult mammals show local regrowth upon dissection of their axon. In order to understand the mechanism that promotes neuronal regeneration, an in-depth analysis of the neuronal types that can remodel after injury is needed. Several studies showed that damaged climbing fibers are capable of regrowing also in adult animals1,2. The investigation of the time-lapse dynamics of degeneration and regeneration of these axons within their complex environment can be performed by time-lapse two-photon fluorescence (TPF) imaging in vivo3,4. This technique is here combined with laser surgery, which proved to be a highly selective tool to disrupt fluorescent structures in the intact mouse cortex5-9.
This protocol describes how to perform TPF time-lapse imaging and laser nanosurgery of single axonal branches in the cerebellum in vivo. Olivocerebellar neurons are labeled by anterograde tracing with a dextran-conjugated dye and then monitored by TPF imaging through a cranial window. The terminal portion of their axons are then dissected by irradiation with a Ti:Sapphire laser at high power. The degeneration and potential regrowth of the damaged neuron are monitored by TPF in vivo imaging during the days following the injury.

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

Two-photon imaging, coupled to laser nanodissection, are useful tools to study degenerative and regenerative processes in the central nervous system with subcellular resolution. This protocol shows how to label, image, and dissect single climbing fibers in the cerebellar cortex in vivo.

Laser Nanocirurgia de cerebelo axônios<em&gt; In Vivo</em

Only a few neuronal populations in the central nervous system (CNS) of adult mammals show local regrowth upon dissection of their axon. In order to ...

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of the right type and quantity of food therefore has a major influence on quality of life. Research on feeding behavior focuses on the underlying processes that ensure actual feeding and unravels the role of factors regulating internal energy homeostasis and the neuronal bases of decision-making. The model organism Drosophila melanogaster, with its great variety of genetically traceable tools for labeling and manipulating single neurons, allows mapping of neuronal networks and identification of molecular signaling cascades involved in the regulation of food intake. This report demonstrates the CApillary FEeder assay (CAFE) and shows how to measure food intake in a group of flies for time spans ranging from hours to days. This easy-to-use assay consists of glass capillaries filled with liquid food that flies can freely access and feed on. Food consumption in the assay is accurately determined using simple measurement tools. Herein we describe step-by-step the method from setup to successful execution of the CAFE assay, and provide practical examples to analyze the food intake of a group of flies under controlled conditions. The reader is guided through possible limitations of the assay, and advantages and disadvantages of the method compared to other feeding assays in D. melanogaster are evaluated.

The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster

The CApillary FEeder (CAFE) assay is a simple, budget-friendly, highly reliable method for investigating mechanisms underlying food intake. Used with the highly versatile genetic model organism Drosophila melanogaster, it provides a powerful means of gaining new insights into regulatory mechanisms of food intake.

O capilar alimentador ensaio mede ingestão alimentar em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

For most animals, feeding is an essential behavior for securing survival, and it influences development, locomotion, health and reproduction. Ingestion of ...

Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system. This system is constructed from a broadband white light source, a motorized filter wheel with a set of narrowband interference filters, a light guide, a collecting lens, a video zoom lens, and a monochromatic charged-coupled device (CCD) camera. An ellipsoidal cranial window is made in the skull bone of a rat under isoflurane anesthesia to capture in vivo multispectral diffuse reflectance images of the cortical surface. Regulation of the fraction of inspired oxygen using a gas mixture device enables the induction of different respiratory states such as normoxia, hyperoxia, and anoxia. A Monte Carlo simulation-based multiple regression analysis for the measured multispectral diffuse reflectance images at nine wavelengths (500, 520, 540, 560, 570, 580, 600, 730, and 760 nm) is then performed to visualize the two-dimensional maps of hemodynamics and the light scattering properties of the in vivo rat brain.

Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system.

Avaliação simultânea de Cerebral Hemodinâmica e de espalhamento de luz Propriedades do<em&gt; In Vivo</em&gt; Cérebro de Rato Utilizando Imagem de Reflexão Difusa Multispectral

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional ...

Functional Magnetic Resonance Spectroscopy at 7 T in the Rat Barrel Cortex During Whisker Activation

Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy offers the opportunity to measure cerebral metabolite contents in vivo and noninvasively. Thanks to technological developments over the last decade and the increase in magnetic field strength, it is now possible to obtain good resolution spectra in vivo in the rat brain. Neuroenergetics (i.e., the study of brain metabolism) and, especially, metabolic interactions between the different cell types have attracted more and more interest in recent years. Among these metabolic interactions, the existence of a lactate shuttle between neurons and astrocytes is still debated. It is, thus, of great interest to perform functional proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) in a rat model of brain activation and monitor lactate. However, the methyl lactate peak overlaps lipid resonance peaks and is difficult to quantify. The protocol described below allows metabolic and lactate fluctuations to be monitored in an activated brain area. Cerebral activation is obtained by whisker stimulation and 1H-MRS is performed in the corresponding activated barrel cortex, whose area is detected using blood-oxygen-level-dependent functional magnetic resonance imaging (BOLD fMRI). All steps are fully described: the choice of anesthetics, coils, and sequences, achieving efficient whisker stimulation directly in the magnet, and data processing.

After checking by blood-oxygen-level-dependent functional magnetic resonance imaging (BOLD fMRI) that the corresponding somatosensory barrel field cortex area (called S1BF) is correctly activated, the main goal of this study is to quantify lactate content fluctuations in the activated rat brains by localized proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) at 7 T.

Funcionais de ressonância magnética espectroscopia em 7 T no córtex de barril de rato durante a ativação dos whiskers

Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy offers the opportunity to measure cerebral metabolite contents in vivo and noninvasively. Thanks to ...

Ex Vivo Pressurized Hippocampal Capillary-Parenchymal Arteriole Preparation for Functional Study

From subtle behavioral alterations to late-stage dementia, vascular cognitive impairment typically develops following cerebral ischemia. Stroke and cardiac arrest are remarkably sexually dimorphic diseases, and both induce cerebral ischemia. However, progress in understanding the vascular cognitive impairment, and then developing sex-specific treatments, has been partly limited by challenges in investigating the brain microcirculation from mouse models in functional studies. Here, we present an approach to examine the capillary-to-arteriole signaling in an ex vivo hippocampal capillary-parenchymal arteriole (HiCaPA) preparation from mouse brain. We describe how to isolate, cannulate, and pressurize the microcirculation to measure arteriolar diameter in response to capillary stimulation. We show which appropriate functional controls can be used to validate the HiCaPA preparation integrity and display typical results, including testing potassium as a neurovascular coupling agent and the effect of the recently characterized inhibitor of the Kir2 inward rectifying potassium channel family, ML133. Further, we compare the responses in preparations obtained from male and female mice. While these data reflect functional investigations, our approach can also be used in molecular biology, immunochemistry, and electrophysiology studies.

The present manuscript details how to isolate hippocampal arterioles and capillaries from the mouse brain and how to pressurize them for pressure myography, immunofluorescence, biochemistry, and molecular studies.

Ex Vivo pressurizado Hipocampal Capilar-Parenchymal Arteriole Preparação para estudo funcional

From subtle behavioral alterations to late-stage dementia, vascular cognitive impairment typically develops following cerebral ischemia. Stroke and ...

Induction of Diffuse Axonal Brain Injury in Rats Based on Rotational Acceleration

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large percentage of TBI patients requiring hospitalization. DAI involves widespread axonal damage from shaking, rotation or blast injury, leading to rapid axonal stretch injury and secondary axonal changes that are associated with a long-lasting impact on functional recovery. Historically, experimental models of DAI without focal injury have been difficult to design. Here we validate a simple, reproducible and reliable rodent model of DAI that causes widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

This protocol validates a reliable, easy-to-perform and reproducible rodent model of brain diffuse axonal injury (DAI) that induces widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

Indução de lesão cerebral axonal difusa em ratos com base na aceleração rotacional

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large ...

Culture of Brain Capillary Pericytes for Cytosolic Calcium Measurements and Calcium Imaging Studies

Pericytes are associated with endothelial cells and astrocytic endfeet in a structure known as the neurovascular unit (NVU). Brain capillary pericyte function is not fully known. Pericytes have been suggested to be involved in capillary development, regulation of endothelial barrier tightness and trancytosis activity, regulation of capillary tone and to play crucial roles in certain brain pathologies.
Pericytes are challenging to investigate in the intact brain due to the difficulties in visualizing processes in the brain parenchyma, as well as the close proximity to the other cells of the NVU. The present protocol describes a method for isolation and culture of primary bovine brain capillary pericytes and their following usage in calcium imaging studies, where effects of agonists involved in brain signaling and pathologies can be investigated. Cortical capillary fragments are allowed to attach to the bottom of culture flasks and, after 6 days, endothelial cells and pericytes have grown out from the capillary fragments. The endothelial cells are removed by gentle trypsinization and pericytes are cultured for 5 additional days before passaging.
Isolated pericytes are seeded in 96-well culture plates and loaded with the calcium indicator dye (Fura-2 acetoxymethyl (AM)) to allow for measurements of intracellular calcium levels in a plate reader setup. Alternatively, pericytes are seeded on coverslips and mounted in cell chambers. Following loading with the calcium indicator (Cal-520 AM), calcium live-imaging can be performed using confocal microscopy at an excitation wavelength of 488 nm and emission wavelength of 510-520 nm.
The method described here has been used to obtain the first intracellular calcium measurements from primary brain capillary pericytes, demonstrating that pericytes are stimulated via ATP and are able to contract in vitro.

Brain capillary pericytes are essential players in the regulation of blood-brain barrier properties and blood flow. This protocol describes how brain capillary pericytes can be isolated, cultured, characterized with respect to cell type and applied for investigations of intracellular calcium signaling with fluorescent probes.

Cultura de Pericytes Capilares Cerebrais para Medições citosóicas de cálcio e estudos de imagem de cálcio

Pericytes are associated with endothelial cells and astrocytic endfeet in a structure known as the neurovascular unit (NVU). Brain capillary pericyte ...