Este estudo foi apoiado pelo NIHM conceder R01 e R21 MH091816 MH084043 para TDG.

1. Materiais 1. Box suspensão O teste de tail-suspensão (TST) envolve ratos suspensão acima do solo por suas caudas. No nível mais básico, o procedimento requer apenas uma barra de suspensão ou borda de prateleira, e fita. No entanto, o pesquisador deve considerar o uso de um fundo que proporciona um contraste perfeito. Além disso, é prudente tomar medidas para evitar ratos a partir da observação de outros animais que estão sendo testados. Em nosso laboratório, utilizamos caixas de cauda especialmente fabricados suspensão (Four-Hour Day, Baltimore MD), feito de plástico com as dimensões (55 altura X 60 largura X 11,5 cm de profundidade). A fim de evitar que os animais a partir da observação ou interagindo entre si, cada rato é suspenso dentro de seu compartimento de três paredes própria retangular (55 altura X 15 largura X 11,5 cm de profundidade). O mouse é suspenso no meio deste compartimento ea largura e profundidade são suficientemente dimensionada de modo que o mouse não pode fazer contact com as paredes. Neste cenário, a distância aproximada entre o nariz do rato e do piso aparelho é de 20-25 cm. Existem quatro compartimentos tais idênticos no aparelho que nos permite testar quatro camundongos de cada vez. Uma barra de suspensão de alumínio (1 cm. Altura X 1 cm. Largura x 60 cm comprimento.), A suspensão da cauda de cada rato, é posicionado na parte superior da caixa. As dimensões que usamos em nosso laboratório deve ser considerado como uma referência geral. Por exemplo, o tamanho de compartimentos individuais da caixa de cauda suspensão pode ser aumentada se uma cepa de rato grande outbred (por exemplo, CD-1) é usado. No fundo de cada compartimento, colocamos uma bandeja de alumínio destacável que recolhe as fezes ou urina dos animais. Usamos uma caixa cinza escuro para animais albinos e uma caixa de cor creme para os ratos de cores do revestimento outros. Este arranjo nos dá um melhor contraste e, portanto, mais confiável scoring comportamental do teste. 2. Fita <p class= &quot;Jove_content&quot;&gt; A fita deve aderir firmemente a ambos cauda do rato ea barra de suspensão, e ser forte o suficiente para suportar o peso do rato que está sendo testado (por exemplo Rotuladores TimeMed, Inc, Burr Ridge IL, 1,9 cm de largura). No entanto, a fita não deve ser excessivamente pegajoso já que no final da sessão, ele será removido da cauda. Nós cortamos 17 cm de fragmentos de fita e coloque uma marca de dois centímetros de uma ponta. Esta parte cm 2 foi usado para fixar a fita para o rabo, enquanto os restantes 15 cm foi usado para a suspensão do mouse. 3. Cronômetro 4. Dispositivo de gravação de vídeo Uma câmera de vídeo e um tripé (ou outra estrutura de apoio) são necessários. Dado que este teste geralmente envolve vários animais sendo testados ao mesmo tempo, marcando ao vivo vai ser difícil e não é aconselhado. A câmera de vídeo deve registrar em oigh resolução suficiente para gerar uma imagem de qualidade que será usada mais tarde para marcar comportamentais. Sempre a certeza de que não há memória de gravação suficiente na câmera antes de iniciar o teste. Usamos uma câmera de vídeo que grava digitalmente sem o uso de meios físicos (ou seja, fita de vídeo), permitindo a transferência direta de vídeos. 5. Gerador de ruído branco O gerador de ruído intermitente deve máscara sons ambientais. O uso de um gerador de ruído é particularmente recomendado em ambientes de laboratório, onde súbitos ruídos altos podem ser ouvidos que potencialmente assustar ratos. Na nossa sala experimental, o nível de ruído ambiente (sem o gerador de ruído branco activada) é em torno de 60 dB. O nível sonoro total com o gerador de ruído branco ativado no local onde o TST é conduzido é 70-72 dB. No entanto, deve-se notar que estes números são fornecidos como exemplo apenas, e cada laboratório deve selecionar odireito níveis de ruído de acordo com seu ambiente único e circunstâncias. 6. Materiais de limpeza A caixa de suspensão deve ser limpo após cada sessão com uma solução de esterilização (por exemplo, MB-10, Quip Laboratories Inc., Wilmington, DE, ou similar). 7. Climbstoppers (opcional: depende da cepa utilizada) Camundongos de alguns fundos, como C57BL / 6, pode subir suas caudas durante o teste 1. Claro cilindros ocos (4 cm de comprimento, 1,6 centímetros de diâmetro externo, 1,3 centímetros de diâmetro interno, 1,5 gramas), que são cortados a quatro cm de comprimento (por FourHourDay Inc, Baltimore MD) a partir de tubos de policarbonato (# 8585K41, McMaster-Carr, Santa Fe Springs , CA) são colocados em torno da cauda de camundongos para evitar a cauda como um comportamento escalar 2,3. Estes dispositivos podem ser feitos em qualquer laboratório com ferramentas e materiais comuns. 2. Procedimentos comportamentais <p class="jove_content"&gt; O projeto total experimental deve refletir contrabalançando adequado entre variáveis ​​específicas de seu experimento. Por exemplo, em nossos experimentos, tentamos representar cada grupo igualmente em todos os TST sessão (ou seja, se existem quatro grupos de tratamento, cada um será representado em cada sessão). Além disso, as posições dos ratos são girados de uma forma tal que os ratos de cada grupo de tratamento são colocados em uma posição diferente em cada sessão. <ol><li> Coloque a câmera na posição. A câmera deve ser o mais próximo possível, a fim de obter a maior resolução possível dos animais. </li><li> Fragmentos de fita que será usado durante a sessão deve ser cortado, marcado, e se preparou para a sessão. </li><li> Iniciar o gerador de ruído branco, se a ser utilizado, antes de os ratos são introduzidos para a sala de testes. O nível de ruído branco só deve ser suficiente para mascarar ruídos externos. Evitar um alto volume e certifique-se o mesmo nível de ruído branco é usado para todos os animais. </li><li> Traga a umaimals para a sala de testes. Se a sala onde os animais residem e sala de ensaios são adjacentes uns aos outros com as mesmas condições ambientais, sem período de aclimatação pode ser necessária. Caso contrário, colocar os animais na sala de ensaio durante um período de aclimatação (geralmente pelo menos uma hora). Esteja ciente de que os outros animais colocados na mesma sala pode sentir sinais olfativos e ultra-sônicos. </li><li> Se uma estirpe conhecida a subir as suas caudas, como C57BL6 / J, está sendo usado Climbstoppers lugar em torno da cauda antes de aplicar a fita. </li><li> Aderir a fita para as caudas de camundongos. Use a ponta da fita marcada e certifique-se da fita adere à cauda e sobre si mesmo. A fita deve ser aplicada até o fim da cauda com 2-3 milímetros de cauda permanecem fora da fita. </li><li> Uma vez que cada pedaço de fita está conectada a uma cauda de rato furar a parte do meio da fita para as paredes internas da gaiola. Isso ajudará a evitar o emaranhado das peças de fita uns aos outros. Note-se que confinement desta forma pode causar estresse e que é importante para completar o processo de aplicar a fita para cada animal o mais rápido possível. </li><li> Uma vez que toda a fita é aplicada, iniciar a gravação e identificar a sessão antes de os ratos estão suspensos. </li><li> Suspender os animais, colocando a extremidade livre da fita na barra de suspensão ou prateleiras em uma ordem que é contrabalançada entre os grupos de tratamento. Suspender os ratos de uma forma que é não obstruir a visão da câmera porque a sessão inteira será TST marcou e obstruindo a câmera vai levar à incapacidade para avaliar comportamentos durante esse tempo. Verifique se todos os fins de fita estão pendurados paralelamente à barra de suspensão ou prateleira com um comprimento similar de folga para cada rato. </li><li> No final da sessão (o que é tipicamente seis minutos), o retorno dos animais ao seu homecage e remova cuidadosamente a fita de cada cauda, ​​puxando-o fora. Não rasgar a fita do rabo pois isso pode causar dor ao microfonee. </li><li> Depois de voltar os ratos para sua sala de colônia descartar a boli fecal e urina a partir das bandejas de coleta e limpe o aparelho com uma solução esterilizante. </li></ol> 3. Análise do Comportamento <ol><li> Geralmente, o TST é do início ao fim seis minutos de duração. Ao contrário de outro procedimento amplamente utilizado eficácia antidepressiva, o teste de natação forçada, toda a sessão é marcado. Isto é devido à constatação de que os ratos tendem a imobilidade se manifestar no início do TST. </li><li> Em nosso laboratório nós fazer o upload dos arquivos de vídeo diretamente da câmera para um PC, onde a análise é conduzida. </li><li> Durante a análise do comportamento do tempo que passa cada rato como móveis é medido. Embora seja possível medir o tempo de imobilidade diretamente, nós descobrimos que é mais fácil de detectar e medir movimentos ativos e não a falta de tais movimentos. </li><li> O aspecto mais importante da análise comportamental TST é a identificação consistente de movimentos que são registrados como a mobilidade de boa-fé. Ratos, especialmente no início da sessão, os comportamentos manifesto que são abertamente escapar relacionados. Estes incluem tentando alcançar as paredes do aparelho e na barra de suspensão, forte tremor do corpo, e movimento dos membros semelhante à execução. Estes movimentos constituem claramente mobilidade. Esses comportamentos, em seguida, desaparecer e tornar-se mais sutis. Em movimentos de nosso laboratório de pequeno porte que estão confinados às pernas da frente, mas sem o envolvimento das patas traseiras não são contados como mobilidade. Além disso, as oscilações do pêndulo e como balanços que são devido à dinâmica adquirida durante os ataques de mobilidade anteriores também não são contados como mobilidade. </li><li> Em nosso laboratório usamos um software na tela do cronômetro para a medição do tempo (XNote cronômetro, dnSoft Research Group). Dois cronômetros separados são usados ​​na tela. O cronômetro primeiro faz a contagem regressiva de 360 ​​segundos e alerta o observador quando o período de análise comportamental termina. O segundo stopwatch controlado pelo observador-mede o tempo gasto móvel. Software cronômetro certos tem a capacidade de atribuir teclas para iniciar e parar funções, de modo que na tela o teclado pode controlar o cronômetro. Em vez de um teclado normal, nós usamos um dispositivo de entrada comumente conhecido como um &quot;gamepad&quot; para controlar os cronômetros. </li><li> Se houver mais de um rato testados e apresentar na tela é uma boa idéia para cobrir os outros animais, para que seus movimentos não vai distrair o observador. Isso pode ser feito usando outra janela do programa ou fisicamente cobrindo os outros ratos na tela com papel. </li><li> Pode haver algum viés que ocorre se a quantidade total de tempo decorrido a mobilidade de um mouse especial é visível antes do término da sessão de análise. Se um cronômetro na tela é usado, nós sugerimos para cobrir todas as casas decimais, mas o milésimo de segundo do cronômetro. Cobrindo o cronômetro o observador só sabe se o cronômetro éligado ou desligado a qualquer momento, mas não sabe o tempo total decorrido e, portanto, não pode ser afetada por qualquer preconceito. Usando essa abordagem o observador, enquanto cego para as atribuições do grupo dos animais, não terá uma idéia geral do nível de mobilidade em cada animal. </li><li> Um teste de confiabilidade interobservador deve ser conduzida para cada novo observador antes de começar a coletar dados de animais de laboratório. Em nosso laboratório a cada novo observador primeira assiste a um observador experiente enquanto ele ou ela está marcando. Após a novos observadores ganhar a confiança suficiente para diferenciar a mobilidade da imobilidade, eles então pontuação em tempo real com o observador experiente observando e apontando os erros. Uma vez que esta fase é concluída com êxito, os novos observadores irão analisar um conjunto específico de vídeos TST que mantemos em nosso laboratório para fins de treinamento. Só depois de um alto grau de correlação interobservador é obtido com o observador experiente faz um investigador analisar vídeos do TST realexperimentos. Nós arquivar os dados dessas análises de treinamento para constituir um padrão interno para o laboratório. Temos observado diferenças entre as linhagens na maneira pela qual eles expressam mobilidade (e imobilidade) comportamentos, eo tempo médio de imobilidade entre os sexos. Quando um modelo novo mouse tensão, sexo, ou geneticamente modificados é testado em laboratório é necessário novamente realizar este tipo de análise de confiabilidade. </li></ol> 4. Resultados representante Temos utilizado o TST para avaliar antidepressivo respostas a tratamento com lítio em várias linhagens de camundongos (Figura 1) 3. Detalhes experimentais desta experiência são publicados em Can et al., 2011 3. <img src="/files/ftp_upload/3769/3769fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Tempo de imobilidade no teste de suspensão da cauda após a administração de lítio crônica em cinco linhagens de camundongos inbred. Camundongos foram grupo casad, quatro ratos por gaiola. Ratos no grupo de tratamento com lítio receberam ração contendo lítio 4 g / kg LiCl por três semanas. Animais controle receberam alimentos idênticos sem o cloreto de lítio. **: P &lt;0,01, ***: p &lt;0,001 denotam uma significativa, teste t não pareado. Os dados são expressos como média ± SEM. n :10-12 animais por grupo para cada cepa. (Figura reproduzida a partir de 3). Neste exemplo, um efeito significativo do tratamento crônico de lítio entregues nos alimentos é observada apenas em linhagens C57BL/6J e DBA/2J. Nos outros três cepas, não houve diminuição estatisticamente significativa no tempo de imobilidade foi observada. Estes dados indicam que uma resposta antidepressiva semelhante ao tratamento de lítio tensão crônica é dependente como também tem sido observado com outros antidepressivos medicamentos 4-8.

<ol>
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Autores declaram que não há conflitos de interesse.

Desenvolvimento do TST por Steru et al. 9 foi influenciado pela desenvolvidos anteriormente teste de natação forçada 10-12. Semelhante ao teste de natação forçada, no TST ratos são colocados em uma situação inevitável, mas moderadamente estressantes. Falta de comportamento de fuga é considerada relacionadas imobilidade. Como o teste de natação forçada, o TST é um teste validado para a melhor avaliação de eficácia antidepressiva de drogas, mas também usado para avaliar os...

<ul><li> Fita </li><li> Cronômetro </li><li> Filmadora </li><li> Gerador de ruído branco (opcional) </li><li> Climbstoppers (opcional; dependendo cepa utilizada) </li></ul>

the tail suspension test

O teste de tail-suspensão é um teste comportamental do rato úteis na triagem de potenciais medicamentos antidepressivos e avaliação de outras manipulações que são esperados para influenciar os comportamentos relacionados com a depressão. Os ratos são suspensos por suas caudas com fita adesiva, em uma posição tal que não possa fugir ou agarrar a superfícies próximas. Durante este teste, normalmente seis minutos de duração, os comportamentos de fuga resultando orientados são quantificados. O teste de tail-suspensão é uma valiosa ferramenta na descoberta de medicamentos de alto throughput screening de potenciais compostos do antidepressivo. Aqui, descrevemos os detalhes necessários para a implementação deste teste, com ênfase adicional sobre potenciais problemas que podem ocorrer e como evitá-los. Nós também oferecemos uma solução para o comportamento da cauda de escalada, um problema comum que torna este teste inútil em algumas linhagens de camundongos, como o C57BL amplamente utilizado / 6. Especificamente, evitar comportamentos de cauda subindo, passando rabos de rato através de um plástico pequenocilindro antes da suspensão. Finalmente, detalhes como pontuação manualmente os comportamentos que se manifestam neste teste.

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The Tail Suspension Test

O teste de tail-suspensão é validado como um procedimento experimental para avaliar a eficácia antidepressiva de tratamentos com drogas em camundongos. Os ratos são suspensos por suas caudas de seis minutos e escapar comportamentos relacionados são avaliados. Descrevemos os procedimentos utilizados na condução do teste de suspensão da cauda.

O Teste de Suspensão da cauda

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

78.8K visualizações.  University of Maryland School of Medicine. O teste de tail-suspensão é validado como um procedimento experimental para avaliar a eficácia antidepressiva de tratamentos com drogas em camundongos. Os ratos são suspensos por suas caudas de seis minutos e escapar comportamentos relacionados são avaliados. Descrevemos os procedimentos utilizados na condução do teste de suspensão da cauda.

Vídeo: The Tail Suspension Test

One Dimensional Turing-Like Handshake Test for Motor Intelligence

In the Turing test, a computer model is deemed to "think intelligently" if it can generate answers that are not distinguishable from those of a human. However, this test is limited to the linguistic aspects of machine intelligence. A salient function of the brain is the control of movement, and the movement of the human hand is a sophisticated demonstration of this function. Therefore, we propose a Turing-like handshake test, for machine motor intelligence. We administer the test through a telerobotic system in which the interrogator is engaged in a task of holding a robotic stylus and interacting with another party (human or artificial). Instead of asking the interrogator whether the other party is a person or a computer program, we employ a two-alternative forced choice method and ask which of two systems is more human-like. We extract a quantitative grade for each model according to its resemblance to the human handshake motion and name it "Model Human-Likeness Grade" (MHLG). We present three methods to estimate the MHLG. (i) By calculating the proportion of subjects' answers that the model is more human-like than the human; (ii) By comparing two weighted sums of human and model handshakes we fit a psychometric curve and extract the point of subjective equality (PSE); (iii) By comparing a given model with a weighted sum of human and random signal, we fit a psychometric curve to the answers of the interrogator and extract the PSE for the weight of the human in the weighted sum. Altogether, we provide a protocol to test computational models of the human handshake. We believe that building a model is a necessary step in understanding any phenomenon and, in this case, in understanding the neural mechanisms responsible for the generation of the human handshake.

We present a Turing-like Handshake test administered through a telerobotic system in which the interrogator is holding a robotic stylus and interacting with another party (human or artificial). We use a forced choice method, and extract a measure for the similarity of the artificial model to a human handshake.

Um teste de Turing Handshake Dimensional-Like para Motor de Inteligência

In the Turing test, a computer model is deemed to "think intelligently" if it can generate answers that are not distinguishable from those of a human.  ...

Neurociência

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

O Mouse Teste de Natação Forçada

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Fibular Nerve Injury Method: A Reliable Assay to Identify and Test Factors That Repair Neuromuscular Junctions

The neuromuscular junction (NMJ) undergoes deleterious structural and functional changes as a result of aging, injury and disease. Thus, it is imperative to understand the cellular and molecular changes involved in maintaining and repairing NMJs. For this purpose, we have developed a method to reliably and consistently examine regenerating NMJs in mice. This nerve injury method involves crushing the common fibular nerve as it passes over the lateral head of the gastrocnemius muscle tendon near the knee. Using 70 day old female mice, we demonstrate that motor axons begin to reinnervate previous postsynaptic targets within 7 days post-crush. They completely reoccupy their previous synaptic areas by 12 days. To determine the reliability of this injury method, we compared reinnervation rates between individual 70 day old female mice. We found that the number of reinnervated postsynaptic sites was similar between mice at 7, 9, and 12 days post-crush. To determine if this injury assay can also be used to compare molecular changes in muscles, we examined levels of the gamma-subunit of the muscle nicotinic receptor (gamma-AChR) and the muscle-specific kinase (MuSK). The gamma-AChR subunit and MuSK to are highly upregulated following denervation and return to normal levels following reinnervation of NMJs. We found a close relationship between transcript levels for these genes and innervation status of muscles. We believe that this method will accelerate our understanding of the cellular and molecular changes involved in repairing the NMJ and other synapses.

We have developed a nerve injury method to reliably examine muscle reinnervation, and thus regeneration of neuromuscular junctions in mice. This technique involves injuring the common fibular nerve via a simple and highly reproducible surgery. Muscle reinnervation in then assessed by whole-mounting the extensor digitorum longus muscle.

O nervo fibular método de lesão: um ensaio confiável para identificar e testar fatores que o reparo Junções Neuromusculares

The neuromuscular junction (NMJ) undergoes deleterious structural and functional changes as a result of aging, injury and disease. Thus, it is imperative ...

Diffuse Reflectance Spectroscopy: Getting the Capillary Refill Test Under One's Thumb

The capillary refill test was introduced in 1947 to help estimate circulatory status in critically ill patients. Guidelines commonly state that refill should occur within 2 s after releasing 5 s of firm pressure (e.g., by the physician&#39;s finger) in the normal healthy supine patient. A slower refill time indicates poor skin perfusion, which can be caused by conditions including sepsis, blood loss, hypoperfusion, and hypothermia. Since its introduction, the clinical usefulness of the test has been debated. Advocates point out its feasibility and simplicity and claim that it can indicate changes in vascular status earlier than changes in vital signs such as heart rate. Critics, on the other hand, stress that the lack of standardization in how the test is performed and the highly subjective nature of the naked eye assessment, as well as the test&#39;s susceptibility to ambient factors, markedly lowers the clinical value. The aim of the present work is to describe in detail the course of the refill event and to suggest potentially more objective and exact endpoint values for the capillary refill test using diffuse polarization spectroscopy.

This protocol describes how the use of diffuse polarization spectroscopy can improve the clinical usefulness of the capillary refill test. We suggest a more detailed analysis of the course of the capillary refill in healthy volunteers using diffuse reflectance spectroscopy videos and new informatic endpoints.

Espectroscopia de reflectância difusa: Ficando o teste capilar sob o polegar

The capillary refill test was introduced in 1947 to help estimate circulatory status in critically ill patients. Guidelines commonly state that refill ...

Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion

In many endocrine systems, circulating factors or hormones are not released continuously, but are secreted as a discrete pulse in response to a releasing factor. Single-point sampling measures are inadequate to fully understand the biological significance of the secretory pattern of pulsatile hormones either under normal physiologic conditions or during conditions of dysregulation. Luteinizing hormone (LH) is synthesized by the anterior pituitary gonadotrope&#160;cells and secreted in a pulsatile pattern which requires frequent collection of blood samples for pulse assessment. This has not been possible in mice until recently, due to the development of a high-sensitivity LH assay and advancement in a technique for frequent low-volume sample collection, initially described by Steyn and colleagues.1 Here we describe a protocol for the frequent peripheral blood sample collection from mice with sufficient handling acclimatization to detect pulsatile secretion of LH. The current protocol details an expanded acclimatization period that allows assessment of robust and continuous pulses of LH over multiple hours. In this protocol, the tip of the tail is clipped&#160;and blood is collected from the tail using a hand-held pipette. For assessment of pulsatile LH in gonadectomized mice, serial samples are collected every 5-6 min for 90-180 min. Importantly, the collection of blood and measurement of robust pulses of LH can be accomplished in awake, freely behaving mice, given adequate handling acclimatization and effort to minimize environmental stressors. Sufficient acclimatization can be achieved within 4-5 weeks prior to blood collection. This protocol highlights advances in the methodology to ensure collection of whole blood samples for assessment of pulsatile LH secretion patterns over multiple hours in the mouse, a powerful animal model for neuroendocrine research.

Here we present a tail-tip blood sampling protocol for frequent sample collection in unrestrained mice. This method is useful for assessing patterns of pulsatile luteinizing hormone secretion and could be adapted for analysis of other circulating factors.

Frequente de amostra de sangue da cauda-ponta em camundongos para a avaliação da secreção pulsátil de hormônio luteinizante

In many endocrine systems, circulating factors or hormones are not released continuously, but are secreted as a discrete pulse in response to a releasing ...

A Metric Test for Assessing Spatial Working Memory in Adult Rats Following Traumatic Brain Injury

Impairments to sensory, short-term, and long-term memory are common side effects after traumatic brain injury (TBI). Due to the ethical limitations of human studies, animal models provide suitable alternatives to test treatment methods, and to study the mechanisms and related complications of the condition. Experimental rodent models have historically been the most widely used due to their accessibility, low cost, reproducibility, and validated approaches. A metric test, which tests the ability to recall the placement of two objects at various distances and angles from one another, is a technique to study impairment in spatial working memory (SWM) after TBI. The significant advantages of metric tasks include the possibility of dynamic observation, low cost, reproducibility, relative ease of implementation, and low stress environment. Here, we present a metric test protocol to measure impairment of SWM in adult rats after TBI. This test provides a feasible way to evaluate physiology and pathophysiology of brain function more effectively.

Traumatic brain injury (TBI) is commonly associated with memory impairment. Here, we present a protocol to assess spatial working memory after TBI via a metric task. A metric test is a useful tool to study spatial working memory impairment after TBI.

Um teste métrico para avaliar a memória espacial de trabalho em ratos adultos após lesão cerebral traumática

Impairments to sensory, short-term, and long-term memory are common side effects after traumatic brain injury (TBI). Due to the ethical limitations of ...

Líquido cefalorraquidiano e retirada de sangue de ratos com registro simultâneo de EEG

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure molecules of interest, such as hormones, growth factors, proteins, or small non-coding RNAs. A specific example is the sampling of biological liquids in the research of biomarkers for epilepsy. In these studies, it is desirable to compare the levels of molecules in cerebrospinal fluid (CSF) and in plasma, by withdrawing CSF and plasma in parallel and considering the time distance of the sampling from and to seizures. The combined CSF and plasma sampling, coupled with video-EEG monitoring in epileptic animals, is a promising approach for the validation of putative diagnostic and prognostic biomarkers. Here, a procedure of combined CSF withdrawal from cisterna magna and blood sampling from the lateral tail vein in epileptic rats that are continuously video-EEG monitored is described. This procedure offers significant advantages over other commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, and reduced time of anesthesia. Additionally, it can be used to obtain CSF and plasma samples in both tethered and telemetry EEG recorded rats, and it may be used repeatedly across multiple days of experiment. By minimizing the stress due to sampling by shortening isoflurane anesthesia, measures are expected to reflect more accurately the true levels of investigated molecules in biofluids. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, this technique may be used to measure the levels of multiple, different molecules while performing EEG recording at the same time.

Autor em destaque: Obtenção de amostras de sangue e LCR de alta qualidade para descoberta de biomarcadores de epilepsia 

The protocol shows repeated cerebrospinal fluid and blood collections from epileptic rats performed in parallel with continuous video-electroencephalogram (EEG) monitoring. These are instrumental for exploring possible links between changes in various body fluid molecules and seizure activity.

Amostragem de líquido cefalorraquidiano e sangue da veia lateral da cauda em ratos durante registros de EEG

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Quantificando o comprimento poli (A) dos genes do sistema nervoso da Drosophila

Measurement of Poly A Tail Length from Drosophila Larva Brain and Cell Line

Polyadenylation is a crucial posttranscriptional modification that adds poly(A) tails to the 3' end of mRNA molecules. The length of the poly(A) tail is tightly regulated by cellular processes. Dysregulation of mRNA polyadenylation has been associated with abnormal gene expression and various diseases, including cancer, neurological disorders, and developmental abnormalities. Therefore, comprehending the dynamics of polyadenylation is vital for unraveling the complexities of mRNA processing and posttranscriptional gene regulation. 
This paper presents a method for measuring poly(A) tail lengths in RNA samples isolated from Drosophila larval brains and Drosophila Schneider S2 cells. We employed the guanosine/inosine (G/I) tailing approach, which involves the enzymatic addition of G/I residues at the 3' end of mRNA using yeast poly(A) polymerase. This modification protects the RNA's 3' end from enzymatic degradation. The protected full-length poly(A) tails are then reverse-transcribed using a universal antisense primer. Subsequently, PCR amplification is performed using a gene-specific oligo that targets the gene of interest, along with a universal sequence oligo used for reverse transcription. 
This generates PCR products encompassing the poly(A) tails of the gene of interest. Since polyadenylation is not a uniform modification and results in tails of varying lengths, the PCR products display a range of sizes, leading to a smear pattern on agarose gel. Finally, the PCR products are subjected to high-resolution capillary gel electrophoresis, followed by quantification using the sizes of the poly(A) PCR products and the gene-specific PCR product. This technique offers a straightforward and reliable tool for analyzing poly(A) tail lengths, enabling us to gain deeper insights into the intricate mechanisms governing mRNA regulation.

Autor em destaque: Explorando a fronteira da pesquisa de mRNA com técnicas de análise de cauda Poly A

The protocol describes an efficient and reliable method for quantifying the poly(A) length of the gene of interest from the Drosophila nervous system, which can be easily adapted to tissues or cell types from other species.

Medição do comprimento da cauda de Poly A do cérebro da larva de Drosophila e da linha celular

Polyadenylation is a crucial posttranscriptional modification that adds poly(A) tails to the 3' end of mRNA molecules. The length of the poly(A) tail is ...