Generalitat Valenciana, PROMETEOII / 2014/063; Ministério da saúde, serviços sociais e igualdade. Delegação do governo para o plano nacional sobre drogas, projetos de pesquisa sobre drogas dependências, 2014I007; Ministério da economia e competitividade (MINECO), Instituto de saúde Carlos III, rede de viciante transtornos (RTA) RD12 / 0028/0005 e RD16 / 17/07/00 e da União Europeia, FEDER fundos "una manera de hacer Europa" e PSI2014-51847-R.

Todos os procedimentos envolvendo ratos e seus cuidados cumprido com as leis nacionais, regionais e locais e regulamentos, que estão em conformidade com a Directiva 2010/63/UE do Parlamento Europeu e do Conselho, de 22 de setembro de 2010, relativa à protecção dos animais utilizados para fins científicos. O Comité conta da Universidade de Valência e uso Animal aprovaram o presente protocolo.
1. materiais e set-up para a preferência de lugar condicionado:
<ol><li>Lidar com ratos 3 dias antes do teste de 1-2 min cada. A base da cauda deve ser aproveitada. O corpo deve ser apoiado, se possível. Isso é feito para minimizar a dor e a angústia ao lidar com um animal e para evitar variáveis interferentes, tais como o stress. Nota: De camundongos machos 1 60 dias de idade (jovens adultos) pesando 35-40 g foram empregados nas experiências de presente. Reintegração induzida por drogas pode ser realizada em camundongos de ambos os sexos. No entanto, sobre reintegração induzida por estresse, o paradigma social derrota projetado somente para roedores do sexo masculinos, como fazem as fêmeas não induzir uma resposta agressiva nos ratos residentes.</li>
	<li>Para o condicionamento de lugar, use caixas iguais, feitas com dois compartimentos idênticos (30,7 cm comprimento 31,5 cm largura × × 34,5 cm de altura), separados por uma zona cinzenta central menor (13,8 longo 31,5 cm largura × × alta de 34,5). Nota: Compartimentos têm piso diferentes texturas e cores de parede (um piso liso no compartimento preto e um chão áspero em branco). Cada compartimento da caixa CPP contém quatro feixes de luz infravermelhas e seis no compartimento central. Isto permite a gravação das travessias entre compartimentos e a posição do animal.</li>
	<li>Definir se as luzes da sala (desligadas ou abaixadas) cada dia. Use luzes vermelhas (recomendadas), como os animais não percebê-lo e ele é atenuado para o experimentador (aproximadamente 40 lux medido a 1 m acima do nível do piso).</li>
	<li>Configurar o programa para registrar 15 min para o condicionamento de pré e pós-teste (veja a Tabela de materiais para software) (Figura 2)</li>
	<li>Prepare a solução de cocaína necessária para todo o experimento. Dissolver o hidrocloreto de cocaína em 0,9% NaCl (soro fisiológico) em um volume de 0,1 mL/10 g de massa corporal. Mistura de vórtice e loja a 4 ° C, no final do dia. Nota: Concentrações de cocaína podem variar dependendo da finalidade do estudo. Se o objetivo é avaliar as doses abaixo do limite de cocaína, uma concentração de 1 mg/kg pode ser usada, que é ineficaz em animais de controle, como visto em anteriores estudos24,35. Se uma dose eficaz é o objectivo, uma concentração de 6 mg/kg pode ser escolhido, que é eficaz, mas não induz a reintegração24, ou por uma concentração de 25 mg/kg, que é eficaz e induz a reintegração da preferência19.</li>
	<li>Teste os animais durante a fase escura e usar a mesma caixa para cada animal em dias.</li>
	<li>Trazer animais todos os dias para a sala de testes nas jaulas em casa e deixá-los sem ser perturbado por 15 min como um período de habituação para todos os barulhos relacionados ao teste.</li>
</ol>2. teste
<ol><li>Aquisição Nota: O procedimento de condicionamento de lugar, imparcial em termos de preferência espontânea inicial, consiste em três fases: pré-condicionamento, condicionamento e pós-condicionado (Figura 1).<ol>
<li>
Pré-condicionamento (Pre-C) (3 dias) (Figura 2, Figura 3, Figura 4) Nota: Aqui, o valor neutro dos compartimentos na caixa CPP é avaliado. Medida que o tempo gasto em cada compartimento e depois compará-lo com o que gastou no mesmo compartimento no teste pós-condicionado.<ol>
<li>Trazer os animais para a sala de teste e deixá-los habituados por 15 min.</li>
			<li>Verifique guilhotinas são removidos da gaiola.</li>
			<li>Configure o computador e o programa. Insira o animal IDs e pressione o comando "Experimental" e "Start" (Figura 2).</li>
			<li>Coloque o mouse suavemente na câmara média (compartimento cinza) e deixar a sala de testes com o mínimo de ruído.</li>
			<li>Trazer todos os animais em jaulas em casa e salvar os dados, quando o julgamento for concluído.</li>
			<li>Permitir que os ratos acessar ambos os compartimentos do aparelho por 15 min (900 s) por dia em 3 dias consecutivos.</li>
			<li>No dia 3, anote o tempo gasto em cada compartimento durante um período de s 900 e guarde-o para a atribuição dos compartimentos na fase seguinte (Figura 3).</li>
			<li>Atribua a metade dos animais em cada grupo para receber a droga ou o veículo em um compartimento (por exemplo, preto) e a outra metade no outro compartimento (por exemplo, branco) (Figura 4). Nota: A distribuição final dos animais deve garantir que metade dos animais são atribuídos para o compartimento inicialmente preferencial e a outra metade para o compartimento não-preferenciais. Além disso, metade dos animais recebeu a droga em um compartimento (por exemplo, aquele preto) e a outra metade no outro (no caso, o branquinho).</li>
			<li>Golo de equilíbrio no grupo dentro ambos os compartimentos, bem como em grupos (diferenças de grupo de teste com análise de variância (ANOVA)). Como orientação aproximada, os valores devem ser em torno de 360-370 s no teste de pré-C (Figura 4). Nota: não houve diferença significativa deve ser detectada entre o tempo gasto em compartimentos do droga-emparelhado e veículo-emparelhado durante o teste de pré-C.</li>
			<li>Exclua os animais que apresentem uma forte aversão ou preferência para qualquer compartimento. Considere aversão como gastando menos tempo do que 33% no compartimento e considerar a preferência quando o animal passou mais de 67% do tempo total naquele compartimento.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
(4 dias) de condicionamento (Figura 5)
		<ol>
<li>Pesar os animais e usar estes pesos para doses de cocaína durante o condicionamento.</li>
			<li>Prepare as seringas com cocaína ou soro fisiológico com base no peso corporal.</li>
			<li>Injetar um rato em um momento intraperitonealmente (ip) e imediatamente, coloque-a suavemente no compartimento preto ou branco atribuído de sua caixa.</li>
			<li>Após um intervalo de 4h, injete a dose da droga, imediatamente antes que o mouse está confinado ao compartimento da droga-emparelhado por 30 min (Figura 5).</li>
			<li>Este procedimento alternativo cada dia, começando com cocaína nos dias 1 e 3 e salinos nos dias 2 e 4.</li>
			<li>Verifique que o confinamento é realizado em ambos os casos, fechando a porta de guilhotina que separa os dois compartimentos, tornando a área central inacessíveis. Nota: Nesta fase, não há nenhuma necessidade de configurar o programa do PC.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Pós-condicionado (Post-C) (1 dia)
		<ol>
<li>Trazer os animais para a sala de teste e deixá-los habituados por 15 min.</li>
			<li>Remova a porta de guilhotina, separando os dois compartimentos.</li>
			<li>Configure o computador e o programa. Insira o animal IDs e pressione o comando "start".</li>
			<li>Registrar o tempo gasto pelos ratos não tratados em cada compartimento durante um período de observação de s 900.</li>
			<li>Quando o julgamento for concluído, trazer todos os animais em jaulas em casa e salvar os dados.</li>
			<li>Considere que a droga tem induzido preferência de lugar se o tempo gasto no compartimento do droga-emparelhado durante o Post-C é significativamente maior do que no teste de pré-C. Se ocorre o contrário, considere uma aversão para o compartimento de droga-emparelhado.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Extinção
	<ol>
<li>Realizar uma sessão semanal de extinção em todos os grupos/animais que desenvolveu uma preferência para o compartimento de droga-emparelhado.</li>
		<li>Coloque o animal no aparelho (sem guilhotinas) por 15 min (mesmo que os testes pré e Post-C) (Figura 1). Nota: Se a dose empregada no CPP é alto (25 mg/kg), executar 1 sessão de extinção por semana. Se uma dose abaixo do limite é usado (1 mg/kg), em seguida, execute 2 extinção sessões por semana (por exemplo, segunda-feira e quinta-feira).</li>
		<li>Considere a preferência extinguida quando dados de teste a extinção não mostram diferenças em relação ao teste pré-C, mas eles mostram diferenças em relação ao teste Post-C.</li>
		<li>Repita o teste 24h mais tarde para confirmar a extinção.</li>
	</ol></li>
	<li>Restabelecimento do CPP
	<ol>
<li>
Reintegração de escorva-induzido
		<ol>
<li>Avalie os efeitos de uma dose de escorva de cocaína 24h após extinção tenha sido confirmada. Nota: Doses de Priming são metade da dose anterior que o animal tenha recebido durante o condicionamento. O teste de reintegração sofre o mesmo protocolo como Pre-C e testes Post-C, exceto que os animais recebem a dose de cocaína em um contingente de não colocar 15 min antes do teste. A eficácia de escorva de drogas na indução de reintegração pode ser reforçada após extinção/reintegração repetida experiências23, embora a ordem das doses não parece desempenhar um papel nos resultados obtidos36.</li>
			<li>Trazer os animais para um quarto diferente da sala de testes (não-contingentes lugar) (Figura 6).</li>
			<li>Injetá-las com metade da dose anterior de cocaína (por exemplo, se os animais foram condicionados com 25 mg/kg de cocaína, uma dose de escorva seria 12,5 mg/kg).</li>
			<li>Trazê-los de volta para seu viveiro durante 15 min.</li>
			<li>Levá-los para a sala de testes e colocar os animais no aparelho imediatamente (sem as portas de guilhotina separando os compartimentos) por 15 min (mesmo que o pré e Post-C testes).</li>
			<li>Considere a diferença em segundos entre o tempo gasto no compartimento do droga-emparelhado durante a última sessão de extinção e o teste de reintegração como uma medida do grau de restabelecimento da preferência induzida pela droga.</li>
			<li>Repita o procedimento de extinção-reintegração cada vez com a diminuição de doses até que ele é confirmado para ser ineficaz. Nota: Um controle de injeção de solução salina pode ser usado para controlar a capacidade de escorva de cocaína (e não de injeção em si) para induzir a reintegração.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Reintegração induzida por estresse
		<ol>
<li>Avaliar os efeitos de uma reintegração de estresse induzido por 24 h após extinção foi confirmada Nota: Testes de reintegração são os mesmos que os realizados em Post-C (livre deambulação por 15 min), exceto que os animais são testados 15 min após a derrota social em uma agonística encontro (Figura 6)</li>
			<li>Leve os animais para um quarto diferente da sala de CPP.</li>
			<li>Coloque o mouse experimental com um sexo agressivo oponente correspondido de igual idade e peso corporal na gaiola plástica (Figura 6). Nota: O encontro agonístico consiste em um teste de 10 min em uma gaiola plástica transparente (23x13.5x13cm) neutro com um resultado de derrota para o mouse experimental. Para preparar o adversário agressivo, primeiro Isole animais diferentes que correspondem na idade e peso corporal, como os ratos experimentais por 3 semanas. Treiná-los para adquirir experiência de combate e testá-los para ter altos níveis de agressividade territorial. Para obter coespecíficos agressivos, ratos devem ser isolados pelo menos 3 semanas e em seguida, treinou em agressivo e comportamentos de ataque. Os animais são treinados em um ambiente neutro, enfrentando-os em pares. Deixamo-los morder as vezes adversário 2 ou 3 e tirar-lhes a gaiola, sempre terminando o treinamento antes de um dos dois ratos mostra submissão, para que a experiência do encontro reforça o comportamento agressivo. Após sofrer agressão (ameaça e ataque do conspecific agressivo), ratos experimentais devem apresentar evasão/fugir e comportamento defensivo/submisso. O critério é adotar uma postura específica da derrota, caracterizada por uma posição ereta e submissa, mancar dianteiras, cabeça angular ascendente e retraído orelhas (Figura 6). De acordo com Burke et al, 2016, consideramos que o encontro social é encerrado antes, se o intruso exibe uma postura submissa supina para > 8 s ou se 13 mordidas de ataque ocorreram. Outra opção para animais de tela sem risco de lesão significativa poderia ser ao ritmo do animal em um gabinete de malha com um buraco, não é grande o suficiente para qualquer animal passar.  Agressão pode ser detectado sem submeter animais para direcionar o comportamento agressivo.  Se um animal sustenta uma lesão com um ferimento de 1cm de diâmetro e/ou exposição direta do músculo, ele é excluído do estudo e deve ser sacrificado.</li>
			<li>Após 10 min de encontro agonístico, levar os ratos em sala de testes e colocar os animais no aparato de CPP imediatamente (sem as portas de guilhotina separando os compartimentos) por 15 min (mesmo que o pré e Post-C testes).</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>3. análise estatística
Nota: O tamanho de amostra Ideal deve ser um mínimo de 15 animais por grupo.
<ol><li>Analisar o tempo médio gasto no compartimento do droga-emparelhado do grupo através de uma ANOVA mista com um entre variável, tratamento, com dois níveis (grupo controle, Grupo Experimental, a exemplo dos dois grupos está na Figura 7C) e um dentro variável – dias, com 2 níveis (Pre-C e Post-C). Nota: No grupo controle, animais recebem a droga mas tem sem manipulações ambientais. Por outro lado, no grupo experimental, os animais estão expostos a diferentes condições ambientais. Compare o tempo gasto no compartimento do droga-emparelhado no dia Post-C com respeito a Pre-C teste para ver se existem diferenças significativas de sensibilidade à droga.</li>
	<li>Além disso, realize análises post-hoc de Bonferroni para verificar qualquer um dos escores significativos.</li>
	<li>Analisar dados relacionados a valores de extinção e reintegração dos grupos que preferência desenvolvida por meio de testes t Student´s para continuar com o processo de extinção-reintegração no decorrer do experimento, mas no momento final, analisá-los com uma ANOVA com um dentro variável (dias) com o número de níveis, dependendo de cada grupo. Nota: Quando o número de comparações é aumentado, o número daqueles que será significativo por acaso também aumentou. Como tal, para evitar falsos positivos (erros de tipo 1) nós 'corrigir' o p-valor, tornando o teste mais conservadores com a correção de Bonferroni para vários t-testes. No entanto, para o teste de reintegração, a comparação deve ser feita entre o teste de reintegração e o último teste de extinção. Portanto, não há nenhuma necessidade de correção.</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

O ponto-chave de pesquisa de dependência de drogas é o desenvolvimento de tratamentos que diminuem o desejo e, consequentemente, reduzir a vulnerabilidade para uma recaída. Graças ao modelo de reintegração do paradigma CPP, é possível estudar a influência de diferentes fatores ambientais e processuais que modulam a recaída, o que constitui uma prioridade de pesquisa futura. Existem alguns pontos importantes a considerar, como o paradigma do CPP é um teste altamente sensível a fatores ambientais.
<p class=...

O paradigma de preferência de lugar condicionado (CPP) oferece uma maneira simples de avaliar a recompensa condicionada induzida por estímulos diversos1,2e tem sido usado amplamente para estudar os efeitos condicionados gratificantes de drogas que viciam3 . É baseado no condicionamento pavloviano, avaliando o valor motivacional de pistas ambientais associadas a drogas para manter comportamento viciante4. Neste modelo, pistas ambientais adquirem Propriedades repetido secundário (acondicionados recompensadores efeitos) quando emparelhado com um reforçador primário3. Por exemplo, um lugar inicialmente neutro (como a cor de um compartimento na gaiola CPP) é combinado com os efeitos específicos de uma droga de abuso durante algumas sessões5, enquanto outro compartimento está associado com a injeção de um veículo de condicionamento. Após o condicionamento, se o animal passa mais tempo no compartimento anteriormente associado com a droga, presume-se que o CPP desenvolveu3. O estabelecimento da preferência é alcançado quando o animal dá um valor positivo para as pistas ambientais ligadas à droga, que é o reforçador primário. Consequentemente, animais irão executar respostas comportamentais de remédios em resposta a essas pistas contextuais6. O modelo do CPP permite a avaliação das propriedades gratificantes de doses abaixo do limite da droga, mostrando-se os animais em uma condição específica (por exemplo, tendo sofrido de derrota social anteriormente) são mais vulneráveis e sensíveis às doses que são Não é eficaz em ingênuo animais7.
O modelo CPP também tem sido usado para avaliar extinção/reintegração como um modelo animal para estudar a recaída3, qual é o objectivo do presente protocolo. Existem três diferentes fases: aquisição, extinção e reintegração (Figura 1). No modelo de reintegração de CPP, animais primeiro adquirem o CPP para um compartimento de droga-emparelhado, e então eles executam várias sessões de extinção. Definimos a extinção como o momento em que o animal reduz suas respostas comportamentais de aproximação a um estímulo gratificante condicionado que tenha sido removido (por exemplo, a droga)8. Durante as sessões de extinção, animais explorar os compartimentos na ausência da droga, para que a preferência adquirida é gradualmente atenuada9. Uma questão importante a considerar é que a mudança de comportamento que o animal apresenta durante a extinção (a diminuição progressiva do tempo gasto no compartimento do droga-emparelhado) pode ser devido a novos processos de aprendizagem que competir com a anterior resposta aprendida, ou devido a uma diminuição no estado motivacional interno do sujeito3. Finalmente, o restabelecimento da preferência local através do contexto ou drogas sinais seria o nosso modelo de reintegração1.
Administrar uma injecção de escorva da droga associada pode restabelecer a preferência, que é considerada um restabelecimento da aproximação para as pistas contextuais. Reintegração de drogas escorva ocorre devido à memória persistente dos efeitos prazerosos da droga, que induziu o desejo e motiva os animais a procurar as pistas ambientais relacionadas à recompensa.
Algumas vantagens do modelo de reintegração de CPP são de que o procedimento não-invasivo (em contraste com a automedicação, que requer cirurgia), barato e simples. Além disso, este modelo tem uma validade de critério de bom, como ele imita bem o que ocorre em seres humanos10,11, induzindo a reintegração com estímulos que induzem a recaída, tais como re-exposição à droga12,13 ou estresse14.
Existem outras técnicas, como a extinção – modelo de reintegração de auto-administração intravenosa. Aqui, os animais pressionar uma alavanca para auto-administrar a droga, o que permite a avaliação da resposta operante do animal, compulsivity e motivação14,15,16. A principal vantagem do CPP sobre procedimentos de auto-administração é que a reintegração do CPP é considerada para refletir a reativação do valor incentivo motivacional dos estímulos contexto emparelhado com a droga, consistindo o reaparecimento da abordagem comportamento para o contexto de17. Além disso, estímulos não-farmacológicos, tais como estresse, também podem induzir a reintegração18,19. Por exemplo, um estudo de auto-administração descrito sem efeitos na reintegração do consumo de heroína em ratos depois de um choque de pé ou retenção stress20. Autores discutiram que era mal sucedida porque esses estressores foram testadas fora da câmara de auto-administração em um contexto diferente. Em contraste, quando usando o modelo CPP de reintegração, havia um claro re-establishment da CPP induzida pela morfina depois de usar as mesmas estressores e aplicado em um contexto diferente do CPP e em momentos diferentes (0 e 15 min depois da exposição de estresse)18 .
Vários estudos na literatura têm demonstrado maneiras diferentes de drogas e reintegração induzida por estresse. Por um lado, a reintegração induzida por drogas tem sido relatada em ratos e camundongos usando morfina5,21,22,23, cocaína24,25, anfetamina26, 27, etanol28,29e 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA)30. Por outro lado, a exposição ao estresse pode ser um factor determinante na vulnerabilidade ao abuso de drogas. Stress é conhecida por aumentar os efeitos gratificantes de drogas7,31,32 e seu papel na recaída é bem estabelecida33,34. Por exemplo, a derrota em interações sociais com um conspecific reabilita morfina e cocaína CPP18,19. Além disso, animais expostos a repetida derrota social são mais vulneráveis aos efeitos condicionados gratificantes de doses abaixo do limite de cocaína e restabelecer a preferência com muito baixas doses de cocaína,7.
Aplicação do modelo de reintegração de CPP é uma maneira útil e sensível para avaliar a vulnerabilidade para a recaída em animais e permite a avaliação de diferentes manipulações ambientais sutis, que são os principais gatilhos que ameaçam recaída humana, tais como reintegração ou estresse-induzido.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>MONPRE 2Z software</td>
			<td>CIBERTEC S.A., Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Identical Plexiglas boxes with two equal sized compartments separated by a grey central area.</td>
			<td>CIBERTEC S.A., Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td>The compartments have different colored walls (black vs white) and distinct floor textures (fine grid in the black compartment and wide grid in the white one). All boxes are equipped with four infrared light beams in each compartment of the box and six in the central area which allow the recording of the position of the animal and its crossings from one compartment to the other.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cocaine hydrochloride</td>
			<td>Laboratorios Alcaliber S.A., Madrid, Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animals: mice of the OF1 outbred strain</td>
			<td>Charles River, Barcelona Spain</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Male mice who arrive to the laboratory on PND 42 and on PND 60 perform the CPP test. These animals are specially indicated for social defeat and aggression models.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Diet- Teklad Global Diet 2014</td>
			<td>Supplied by Harlan Laboratories Models, S. L. (Barcelona, Spain)</td>
			<td></td>
			<td>13 kcal % fat, 67 kcal % carbohydrates and 20% kcal protein; 2.9 kcal/g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High fat diet TD.06415</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>45 kcal % fat, 36 kcal % carbohydrates and 19% kcal protein; 4.6 kcal/g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reinstatement of drug-seeking in mice using the conditioned place preference paradigm

O presente protocolo descreve a preferência de lugar condicionado (CPP) como um modelo de recaída no vício em drogas. Neste modelo, animais primeiro são treinados para adquirir uma preferência de lugar condicionados em um compartimento de droga-emparelhado, e após o teste post-condicionado, eles realizam várias sessões para extinguir a preferência estabelecida. O CPP permite a avaliação dos efeitos condicionados gratificantes de pistas relacionadas ao meio ambiente de drogas. Em seguida, o CPP extinto pode ser robustamente restabelecido pela administração de uma dose de escorva da droga não-contingentes e pela exposição aos estímulos estressantes. Ambos os métodos serão explicados aqui. Quando o animal reinicia a resposta comportamental, é considerado um restabelecimento da recompensa condicionado tiveram lugar.
As principais vantagens do presente protocolo são que é não-invasivo, barato e simples, com critérios de validade boa. Além disso, permite o estudo de diferentes manipulações ambientais, tais como o stress ou a dieta, que pode modular a recaída em comportamentos de busca de drogas. No entanto, uma limitação é que, se o pesquisador pretende explorar a motivação e os efeitos de reforçados primários da droga, deve ser complementado com procedimentos de auto-administração, envolvem respostas operante de animais.

Em primeiro lugar, resultados representativos da reintegração de escorva - e induzida por estresse são mostrados na Figura 7 usando ratos machos adultos de OF1.
Os dados na Figura 7a-b , que representa o tempo gasto no compartimento de droga-emparelhado no pré e Post-C teste foram analisados com um medidas repetidas ANOVA com um dias variável dentr...

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Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

Este protocolo descreve a preferência de lugar condicionado (CPP) como um modelo de recaída. Este procedimento permite a medição de recaída em animais de laboratório, considerando o impacto das drogas associadas Dicas ambientais como desejo e recaída em viciados em ausência é, atualmente, o foco dos programas de tratamento do abuso de drogas.

Reintegração de busca de drogas em ratos utilizando o paradigma de preferência lugar condicionado

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

reinstatement-drug-seeking-mice-using-conditioned-place-preference

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Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Behavior

Unit 1

Pharmacotherapy of Depression and Anxiety Disorders

SCIENTISTS IN ACTION

11.3K visualizações.  Universitat de València. Este protocolo descreve a preferência de lugar condicionado (CPP) como um modelo de recaída. Este procedimento permite a medição de recaída em animais de laboratório, considerando o impacto das drogas associadas Dicas ambientais como desejo e recaída em viciados em ausência é, atualmente, o foco dos programas de tratamento do abuso de drogas.

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The Crossmodal Congruency Task as a Means to Obtain an Objective Behavioral Measure in the Rubber Hand Illusion Paradigm

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden hand is touched. If the viewed and felt touches are given at the same time then this is sufficient to induce the compelling experience that the rubber hand is one's own hand. The RHI can be used to investigate exactly how the brain constructs distinct body representations for one's own body. Such representations are crucial for successful interactions with the external world. To obtain a subjective measure of the RHI, researchers typically ask participants to rate statements such as "I felt as if the rubber hand were my hand". Here we demonstrate how the crossmodal congruency task can be used to obtain an objective behavioral measure within this paradigm.
The variant of the crossmodal congruency task we employ involves the presentation of tactile targets and visual distractors. Targets and distractors are spatially congruent (i.e. same finger) on some trials and incongruent (i.e. different finger) on others. The difference in performance between incongruent and congruent trials - the crossmodal congruency effect (CCE) - indexes multisensory interactions. Importantly, the CCE is modulated both by viewing a hand as well as the synchrony of viewed and felt touch which are both crucial factors for the RHI.
The use of the crossmodal congruency task within the RHI paradigm has several advantages. It is a simple behavioral measure which can be repeated many times and which can be obtained during the illusion while participants view the artificial hand. Furthermore, this measure is not susceptible to observer and experimenter biases. The combination of the RHI paradigm with the crossmodal congruency task allows in particular for the investigation of multisensory processes which are critical for modulations of body representations as in the RHI.

We demonstrate how an objective measure can be employed in the widely employed rubber hand illusion paradigm. This measure is obtained by modifying the well-established crossmodal congruency task. This task allows the investigation of multisensory processes which are critical for modulations of body representations as in the rubber hand illusion.

A Task Congruência Crossmodal como um meio para se obter uma medida comportamental Objetivo no Rubber Mão Illusion Paradigm

The rubber hand illusion (RHI) is a popular experimental paradigm. Participants view touch on an artificial rubber hand while the participants' own hidden ...

Comportamento

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes of interest allows for enhanced temporally- and regionally-specific control of gene deletion, compared to existing methods. While conditional deletion can also be achieved by mating mice that express Cre recombinase under the control of specific gene promoters with mice carrying a floxed gene, stereotaxic microinjection allows for targeting of discrete brain areas at experimenter-determined time points of interest. In the context of cocaine conditioned place preference, and other cocaine behavioral paradigms such as self-administration or psychomotor sensitization that can involve withdrawal, extinction and/or reinstatement phases, this technique is particularly useful in exploring the unique contribution of target genes to these distinct phases of behavioral models of cocaine-induced plasticity. Specifically, this technique allows for selective ablation of target genes during discrete phases of a behavior to test their contribution to the behavior across time. Ultimately, this understanding allows for more targeted therapeutics that are best able to address the most potent risk factors that present themselves during each phase of addictive behavior.

This article describes how to microinject viral vectors into mouse brain and then test in a conditioned place preference paradigm that includes an acquisition, extinction and reinstatement phase.

Microinjeção estereotáxica de vetores virais Expressando Cre Recombinase para estudar o papel de genes alvo em cocaína condicionado Lugar de Preferência

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence2. In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

Avaliação da sensibilização comportamental induzida por cocaína e preferência por lugar condicionado em Ratos

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for examining how rats learn to use a place- or response-learning to successfully navigate in an open-field arena. Additionally, this protocol describes how the OFTM differs from other behavioral maze paradigms that are commonly used to study spatial learning in rodents. The OFTM described in this article was adapted from the one previously described by Cole, Clipperton, and Walt (2007). Specifically, the OFTM was created to test spatial learning in rodents without the experimenter having to consider how &#8220;stress&#8221; might play a role as a confounding variable. Experiments have shown that stress-alone can significantly affect cognitive function1. The representative results section contains data from an experiment that used the OFTM to examine the effects of estradiol treatment on place- and response-learning in adult female Sprague Dawley rats2. Future studies will be designed to examine the role of the hippocampus and striatum in place- and response-learning in the OFTM.

The Open-field Tower Maze (OFTM) is a maze created to study the behavioral and neural mechanisms of spatial learning (e.g., place- or response-learning) in rats. This maze is especially useful for experimenters who want to use a non-stressful maze paradigm to investigate spatial learning in their research.

Coloque e Aprendizagem Response no Open-campo Torre Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Examining Recall Memory in Infancy and Early Childhood Using the Elicited Imitation Paradigm

The ability to recall the past allows us to report on details of previous experiences, from the everyday to the significant. Because recall memory is commonly assessed using verbal report paradigms in adults, studying the development of this ability in preverbal infants and children proved challenging. Over the past 30 years, researchers have developed a non-verbal means of assessing recall memory known as the elicited or deferred imitation paradigm. In one variant of the procedure, participants are presented with novel three-dimensional stimuli for a brief baseline period before a researcher demonstrates a series of actions that culminate in an end- or goal-state. The participant is allowed to imitate the demonstrated actions immediately, after a delay, or both. Recall performance is then compared to baseline or to performance on novel control sequences presented at the same session; memory can be assessed for the individual target actions and the order in which they were completed. This procedure is an accepted analogue to the verbal report techniques used with adults, and it has served to establish a solid foundation of the nature of recall memory in infancy and early childhood. In addition, the elicited or deferred imitation procedure has been modified and adapted to answer questions relevant to other aspects of cognitive functioning. The broad utility and application of imitation paradigms is discussed, along with limitations of the approach and directions for future research.

The elicited imitation procedure was established to examine the development of recall memory in infancy and early childhood. This procedure has been widely used to establish a solid foundation of the nature of recall memory in infancy and early childhood.

Examinando Chamada de Memória na infância e primeira infância Usando o provocou Imitação Paradigm

The ability to recall the past allows us to report on details of previous experiences, from the everyday to the significant. Because recall memory is ...

Using Eye Movements Recorded in the Visual World Paradigm to Explore the Online Processing of Spoken Language

In a typical eye tracking study using the visual world paradigm, participants' eye movements to objects or pictures in the visual workspace are recorded via an eye tracker as the participant produces or comprehends a spoken language describing the concurrent visual world. This paradigm has high versatility, as it can be used in a wide range of populations, including those who cannot read and/or who cannot overtly give their behavioral responses, such as preliterate children, elderly adults, and patients. More importantly, the paradigm is extremely sensitive to fine grained manipulations of the speech signal, and it can be used to study the online processing of most topics in language comprehension at multiple levels, such as the fine grained acoustic phonetic features, the properties of words, and the linguistic structures. The protocol described in this article illustrates how a typical visual world eye tracking study is conducted, with an example showing how the online processing of some semantically complex statements can be explored with the visual world paradigm.

The visual world paradigm monitors participants' eye movements in the visual workspace as they are listening to or speaking a spoken language. This paradigm can be used to investigate the online processing of a wide range of psycholinguistic questions, including semantically complex statements, such as disjunctive statements.

Usando movimentos oculares gravados no paradigma Visual do mundo para explorar o processamento on-line de língua falada

In a typical eye tracking study using the visual world paradigm, participants' eye movements to objects or pictures in the visual workspace are recorded ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

Um protocolo de preferência condicionada lugar para medir a incubação do desejo em ratos

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Using the Visual World Paradigm to Study Sentence Comprehension in Mandarin-Speaking Children with Autism

Sentence comprehension relies on the ability to rapidly integrate different types of linguistic and non-linguistic information. However, there is currently a paucity of research exploring how preschool children with autism understand sentences using different types of cues. The mechanisms underlying sentence comprehension remains largely unclear. The present study presents a protocol to examine the sentence comprehension abilities of preschool children with autism. More specifically, a visual world paradigm of eye-tracking is used to explore the moment-to-moment sentence comprehension in the children. The paradigm has multiple advantages. First, it is sensitive to the time course of sentence comprehension and thus can provide rich information about how sentence comprehension unfolds over time. Second, it requires minimal task and communication demands, so it is ideal for testing children with autism. To further minimize the computational burden of children, the present study measures eye movements that arise as automatic responses to linguistic input rather than measuring eye movements that accompany conscious responses to spoken instructions.

We present a protocol to examine the use of morphological cues during real-time sentence comprehension by children with autism.

Usando o paradigma de mundo Visual para estudar a compreensão da frase em língua Mandarim de crianças com autismo

Sentence comprehension relies on the ability to rapidly integrate different types of linguistic and non-linguistic information. However, there is ...

Exploring Infant Sensitivity to Visual Language using Eye Tracking and the Preferential Looking Paradigm

We discuss the use of the preferential looking paradigm in eye tracking studies in order to study how infants develop, understand, and attend to the world around them. Eye tracking is a safe and non-invasive way to collect gaze data from infants, and the preferential looking paradigm is simple to design and only requires the infant to be attending to the screen. By simultaneously showing two visual stimuli that differ in one dimension, we can assess whether infants show different looking behavior for either stimulus, thus demonstrating sensitivity to that difference. The challenges in such experimental approaches are that experiments must be kept brief (no more than 10 min) and be carefully controlled such that the two stimuli differ in only one way. The interpretation of null results must also be carefully considered. In this paper, we illustrate a successful example of an infant eye tracking study with a preferential looking paradigm to discover that 6-month-olds are sensitive to linguistic cues in a signed language despite having no prior exposure to signed language, suggesting that infants possess intrinsic or innate sensitivities to these cues.

Eye tracking studies using a preferential looking paradigm can be used to study infants&#39;&#160;emerging understanding of, and attention to, their external visual world.

Explorando a sensibilidade infantil à linguagem visual usando o rastreamento de olhos e o paradigma de aparência preferencial

We discuss the use of the preferential looking paradigm in eye tracking studies in order to study how infants develop, understand, and attend to the world ...

A System for Tracking the Dynamics of Social Preference Behavior in Small Rodents

Exploring the neurobiological mechanisms of social behavior requires behavioral tests that can be applied to animal models in an unbiased and observer-independent manner. Since the beginning of the millennium, the three-chamber test has been widely used as a standard paradigm to evaluate sociability (social preference) and social novelty preference in small rodents. However, this test suffers from multiple limitations, including its dependence on spatial navigation and negligence of behavioral dynamics. Presented and validated here is a novel experimental system that offers an alternative to the three-chamber test, while also solving some of its caveats. The system requires a simple and affordable experimental apparatus and publicly available open-source analysis system, which automatically measures and analyzes multiple behavioral parameters at individual and population levels. It allows detailed analysis of the behavioral dynamics of small rodents during any social discrimination test. We demonstrate the efficiency of the system in analyzing the dynamics of social behavior during the social preference and social novelty preference tests as performed by adult male mice and rats. Moreover, we validate the ability of the system to reveal modified dynamics of social behavior in rodents following manipulations such as whisker trimming. Thus, the system allows for rigorous investigation of social behavior and dynamics in small rodent models and supports more accurate comparisons between strains, conditions, and treatments.

Described here is a novel automated experimental system that offers an alternative to the three-chamber test and also solves several caveats. This system supplies multiple behavioral parameters that enable rigorous analysis of small rodent behavioral dynamics during the social preference and social novelty preference tests.