Este método pode responder a perguntas-chave no crescimento e morfologia de estolons e rizomas de diferentes culturas, como gramas de grama, prados e pastagens. A principal vantagem desta técnica é que o comprimento do stolon e do rizoma pode ser medido em amostras com uma grande quantidade de biomassa para a qual o peso é o único parâmetro atualmente utilizado. Coletar amostras usando um amostrador do núcleo do solo.
Inclua a biomassa terrestre acima e uma camada de solo com profundidade adequada, dependendo das espécies para garantir a coleta de stolons e rizomas. Alternativamente, defina a área da superfície para coletar com uma estrutura e coletar as amostras com uma pá. Rotule cada amostra com fita de laboratório.
Para limpar as amostras de biomassa, coloque a amostra em uma peneira grande com aberturas de 0,5 a 1,5 milímetros, dependendo do tamanho de stolon ou rizoma. As aberturas devem ser pequenas o suficiente para reter todos os estolons e rizomas, mas grandes o suficiente para permitir que as partículas do solo sejam removidas. Limpe as amostras com um fluxo de água com energia suficiente para remover partículas do solo sem danificar as plantas.
Recupere as amostras limpas e coloque-as em uma bandeja com toalhas de papel, tomando o cuidado de rotular as bandejas adequadamente. Limpe ainda mais as amostras removendo raízes e folhas com tesouras. Durante esse processo, separe os estolons e rizomas, se necessário, e regise informações adicionais, como o número de plantas, lemes e estolons por planta.
Coloque os estolons e rizomas em sacos rotulados em papel. Coloque a amostra em uma bandeja de plástico transparente do equipamento de varredura padrão WinRHIZO. Coloque manualmente os estolons e rizomas usando fórceps de laboratório para minimizar a sobreposição.
Grandes amostras podem precisar ser divididas em subamostras. Coloque a bandeja na superfície do scanner, depois ligue o scanner e comece a executar o programa. Para obter mais controle em uma imagem salva, verifique a imagem dpi no menu Imagem por seleção do parâmetro de aquisição de imagens do comando.
Para uma boa classificação de pixels pertencentes aos órgãos digitalizados, verifique o limiar e a análise selecionando o comando Root Background Distinction. Verifique se toda a superfície da bandeja será digitalizada no menu Imagem selecionando o parâmetro de aquisição de imagens do comando. Agora, verifique a classe de diâmetro exibida para distribuição de órgãos por diâmetro na área gráfica acima da imagem digitalizada.
Selecione 20 classes de largura iguais com intervalos de 0,1 milímetros clicando no acesso horizontal do gráfico. Esta função permite a exclusão de dados pertencentes a raízes ou pequenos órgãos quando os estolons ou rizomas não foram perfeitamente limpos. A literatura relata que a maioria das raízes das espécies de grama tem diâmetro inferior a 0,2 milímetros.
Execute a primeira amostra e verifique se a edição permite uma boa análise. Siga as instruções de software para salvar a imagem. Por fim, processe a análise seguindo a opção de software e rotule a imagem e a análise com o rótulo da amostra.
Prossiga com a varredura de todas as amostras. Para realizar a medição do peso seco, coloque as amostras digitalizadas em uma bandeja de alumínio pedárido em um equilíbrio eletrônico preciso e regissuça sua piche. Repita esta etapa para todas as amostras digitalizadas.
Insira todas as amostras em um conjunto de 105 graus Celsius e seque-as por 24 horas. No dia seguinte, remova as amostras e espere até que o peso do tecido estabilize. Então, pese todas as amostras com o piche.
Subtraia a piche do peso registrado para obter o peso líquido de cada amostra. Exemplos de resultados de um estudo de campo comparando a densidade de comprimento de estolon e rizoma de quatro cultivares de bermudagrass tipo grama das bermudas. Há uma diferença significativa na densidade de comprimento do stolon entre as cultivares vegetativas Patriot e Tifway, e as cultivares semeadas La Paloma e Yukon em amostras coletadas em julho de 2014.
Para os rizomas, Patriot exibe a maior densidade de comprimento, seguida por Tifway, e as cultivares semeadas. O desenvolvimento da densidade de comprimento de stolon da cultivar Patriot ao longo do período de estudo mostra um aumento de março de 2014 a julho de 2014 e não variou de julho de 2014 a julho de 2015. Poucos rizomas foram encontrados em amostras coletadas em outubro de 2013 e março de 2014.
A densidade de comprimento de rizoma aumenta em julho de 2014, atingindo os valores mais altos. Mas diminui novamente em outubro de 2014. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de selecionar amostras representativas, limpar meticulosamente e rizomas antes da análise, e selecionar a largura das classes de diâmetro usando opções de software para incluir apenas stolons e rizomas na análise.
