Nosso protocolo fornece um modelo fácil, econômico, reprodutível e clínico relevante para pesquisadores no campo da hiperplasia intimal venosa. Nosso protocolo é economicamente, clinicamente e tecnicamente equilibrado. Portanto, é altamente recomendado para pesquisadores que desejam aplicar seus resultados in vitro a um ambiente in vivo.
Acreditamos que nosso protocolo pode ser aplicado a um modelo animal maior para o desenvolvimento de novas estratégias de tratamento em doenças isquêmicas do coração e extremidades inferiores. Nosso protocolo é principalmente relevante para o campo da cirurgia cardiovascular. No entanto, também pode ser usado para lidar com alterações degenerativas nas fístulas arteriovenosas em pacientes com doença renal em estágio terminal.
Após anestésico local, e administração analgésico de antibióticos profiláticos, desinfete o local cirúrgico com 10% de povidona-iodo. E faça uma incisão de 50 a 60 milímetros com um bisturi cirúrgico na região cervical do coelho branco japonês anestoetizado. Dissecar sem rodeios os tecidos subcutâneos e a fáscia para expor um segmento de 20 a 30 milímetros da veia jugular.
E use suturas de seda 4-0 para ligar todos os ramos da veia exposta. Coloque uma sutura de seda 2-0 ao redor das veias jugulares internas e externas e faça uma incisão de um milímetro na parede venosa do lado distal da veia. Insira um cateter de balão 2-francês do corte em direção ao lado proximal da veia.
E ligadurar a sutura de seda 2-0 nos locais distais das veias jugulares. Infle o balão com 200 microliters de ar. E use o balão para desnudar a intima da veia três vezes para esfoliação endotelial.
Após a terceira passagem, liga a extremidade proximal da veia e corte a veia no local distal. Em seguida, insira um cateter intravenoso de 20 bitolas na veia colhida do distal para a direção proximal, e corte a veia no local proximal. Para interpor a artéria carótida com a veia jugular da colheita, exponha um segmento de 20 a 30 milímetros da artéria carótida ipsilateral.
E separe a artéria cuidadosamente da veia e nervo próximos. Ligate todos os ramos da veia exposta com sutura de seda 4-0. E administre por via intravenosa 200 Unidades Internacionais por quilograma de sódio heparina.
Fixar as extremidades proximal e distal da artéria com grampos de borracha cirúrgicos. E corte a artéria entre os grampos. Injete soro fisiológico normal na artéria carótida incisada proximicamente e distally para distend a artéria.
E coloque a veia de colheita perto da artéria para anastomose o vaso de uma forma invertida de ponta a ponta. Para anastomose a extremidade proximal da veia até a extremidade distal da artéria, coloque dois pontos de âncora de 8-0 polipropileno no local e no local oposto. Adicione pontos na parte superior da linha de anastomose entre os pontos de âncora.
Vire a artéria e o enxerto de veia de cabeça para baixo. E adicione pontos na parte restante da linha de anastomose. Em seguida, remova o cateter intravenoso da veia e fixe o enxerto venoso proximicamente.
Declamp a artéria carótida distally. E observe se o enxerto venoso se expande gradualmente. Usando 8-0 polipropileno interrompeu suturas, anastomose a extremidade distal da veia até a extremidade proximal da artéria.
E declamp a artéria para verificar o sangramento dos locais de anastomose. Por fim, liga a artéria carótida interna com uma sutura de seda 4-0 para simular uma condição de escoamento ruim e facilitar a hiperplasia intimal. Em seguida, limpe a ferida com soro fisiológico.
Feche a incisão com 3-0 poliglactina 910 em camadas. E permitir que o coelho se recupere totalmente com o monitoramento antes de devolver o animal à sua gaiola. Nesta imagem representativa, pode-se observar uma hiperplasia intimal bem sucedida às 2 semanas após a cirurgia de interposição venosa.
Aqui, podem ser observados os efeitos terapêuticos das nanopartículas poli(ácido clicíclico-coglicólico) carregadas na morfologia da hiperplasia intimal. De fato, o tratamento com microRNAs carregadas com nanopartículas poli (ácido láctico-coglicólico)resulta em atenuação significativa da hiperplasia intimal. Além disso, a imunostaining para Ki-67, um marcador proliferativo celular, revela menos células Ki-67 positivas dentro do grupo tratado microRNA-145 indicando uma alteração de fenótipo nas células musculares lisas vasculares do estado proliferativo imaturo para o estado contraítil maduro.
O principal objetivo do nosso protocolo é alcançar a patência do enxerto implantado. Também é importante confirmar que o enxerto se expande após a declamagem da artéria carótida.
