Modelos de laboratório envolvendo camundongos deficientes de estrogênio apresentando dados de pons arteriosclerose. Este procedimento é especialmente útil para a triagem de tratamentos exógenos de estrogênio de disfunção cardiovascular após a menopausa. A principal vantagem dessa técnica é que a ovariectomia sem incisão dorsolateral dupla é um método mais fácil e demorado que evita a adesão e inflamação severas da cavidade abdominal.
Demonstrando o procedimento será Yue-Zhang Yin, um estudante de pós-graduação do meu laboratório. Para realizar uma ovaectomia bilateral em camundongos nocauteados APOE, primeiro confirme a falta de resposta ao reflexo do pedal e coloque o animal na posição propensa em uma almofada de aquecimento. Aplique pomada nos olhos do animal e cubra o animal com uma cortina cirúrgica.
Faça uma incisão de um centímetro lateral para a linha média, e um centímetro lateral para as costelas costais, e use fórceps para dissecar sem rodeios o tecido subcutâneo. Usando óculos de dissecação, identifique o tecido adiposo branco na cavidade abdominal. Usando micro tesouras e micro fórceps, faça uma incisão de 0,5 a um centímetro através da fáscia, até que a cavidade abdominal seja atingida, e use os micro fórceps para retrair suavemente o tecido adiposo branco.
Um ovário rosa em forma de amora, envolto em tecido adiposo, deve ser observado dentro da cavidade abdominal. Use uma sutura de monofilamento para ligar o vaso proximal de 0,5 a um centímetro e chifre uterino, e use a micro tesoura para colher o ovário. Devolva o tecido restante à cavidade abdominal e use suturas individuais de monofilamento para fechar separadamente as camadas musculares e de pele.
Em seguida, colde o ovário no lado contralateral do animal, como apenas demonstrado, e permita que o rato se recupere em uma almofada de aquecimento com monitoramento, até a recumbência total. Uma vez por semana, da semana anterior às 12 semanas após a cirurgia, meça o peso corporal de cada bicho falso e experimental em um equilíbrio. Para a medição total de colesterol e triglicerídeos plasmádricos, na semana 12, prepare a área do peito ventral com 70% de etanol, e insira uma agulha de calibre 25 no ventrículo direito.
Aspire lentamente, até que um mililitro de sangue flua para dentro da seringa, e distribua a amostra em um tubo de coleta de 1,5 mililitro contendo dez microlitres de 0,5 molar EDTA. Inverta o tubo várias vezes completamente para misturar o EDTA no sangue, e coloque imediatamente o tubo no gelo. Dentro de 30 minutos de coleta, centrifugar a amostra por 20 minutos a 400 vezes G e quatro graus Celsius.
Colete cuidadosamente o supernante de plasma para armazenamento a menos 80 graus Celsius. Para isolar a aorta, na semana 12, conecte uma agulha de calibre 25 a uma seringa de 50 mililitros cheia de PBS, e insira a agulha no ventrículo esquerdo do animal experimental. Corte o átrio direito para evitar alta pressão da perfusão, e perfunde o tecido cardíaco a uma taxa de fluxo de 05 a 08 mililitros de PBS por minuto.
Absorva o fluido de perfusão com tecidos de laboratório e use tesouras e fórceps para remover as costelas e pulmões. Abra a cavidade abdominal para remover os órgãos internos, para uma melhor visão da aorta. Segure o coração com micro fórceps para permitir a separação da aorta dorsalmente, da coluna vertebral, até a bifurcação ilícíaca.
Em seguida, fixar o coração e a aorta por 48 horas em 4% de paraformaldeído, antes de armazenar a amostra de tecido em soro fisiológico a temperatura ambiente ou a dois a oito graus Celsius por algumas horas. Após doze semanas de dieta de colesterol alto, camundongos ovariectomizados demonstram um aumento notável nas concentrações totais de colesterol e triglicerídeos plasmáticos. Camundongos ovariectomizados, por administrados oralmente com estradiol 17-beta, ou PPD via propagação de avelã, apresentam concentrações significativamente menores de colesterol total plasmático do que camundongos operados por vergonha.
Os níveis de triglicerídeos de plasma diminuem em camundongos ovariectomizados, por administrado oralmente com estradiol 17-beta, mas não com PPD. Embora uma tendência para um aumento do peso corporal seja observada em camundongos ovariectomizados, em comparação com camundongos operados por vergonha, não são observadas mudanças significativas no peso corporal no geral, entre os quatro grupos de animais. A placa máxima da aorta ascendente é aumentada em camundongos ovaectomizados, em comparação com todos os outros grupos, em conjunto com uma diminuição geral da função cardíaca, observada nesses animais.
Além disso, o percentual médio da área da lesão aórtica, em relação a toda a área aórtica, é significativamente aumentado em camundongos ovaectomizados. Como esperado, a presença dessas lesões é diminuída com tratamento de 17 beta oestradiol, ou TRATAMENTO PPD. O principal risco para a operação da ovariectomia é a ligadura ureteral, o que resulta em uma alta mortalidade.
Lembre-se também de cortar profundamente perto dos ramos da artéria renal, para evitar danos aórticos.
