Mancano modelli di laboratorio che coinvolgono topi carenti di estrogeni che presentano un'arteriosclerosi pons dati. Questa procedura è particolarmente utile per lo screening dei trattamenti estrogenici esogeni della disfunzione cardiovascolare dopo la menopausa. Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'ovariectomia senza doppia incisione dorsolaterale è un metodo più facile e meno dispendioso in termini di tempo che evita una grave adesione e infiammazione della cavità addominale.
A dimostrare la procedura sarà Yue-Zhang Yin, una studentessa laureata del mio laboratorio. Per eseguire un'ovariectomia bilaterale nei topi knockout APOE, prima confermare una mancanza di risposta al riflesso del pedale e posizionare l'animale nella posizione prona su una pastiglia riscaldante. Applicare un unguento agli occhi dell'animale e coprire l'animale con un drappo chirurgico.
Fare un'incisione di un centimetro laterale alla linea mediana e un centimetro laterale alle costole e utilizzare le forcelle per sezionare senza mezzi termini il tessuto sottocutaneo. Usando occhiali sezionanti, identificare il tessuto adiposo bianco nella cavità addominale. Utilizzando micro forbici e micro forcep, fare un'incisione da 0,5 a un centimetro attraverso la fascia, fino a raggiungere la cavità addominale, e utilizzare i micro forcep per ritrarre delicatamente il tessuto adiposo bianco.
Un'ovaia rosa a forma di gelso, avvolta nel tessuto adiposo, deve essere osservata all'interno della cavità addominale. Utilizzare una sutura monofilamento per ligare il vaso prossimale da 0,5 a un centimetro e il corno uterino e utilizzare le micro forbici per raccogliere l'ovaio. Riportare il tessuto rimanente nella cavità addominale e utilizzare singole suture monofilamento per chiudere separatamente gli strati muscolari e cutanei.
Quindi raccogliere l'ovaio sul lato contralaterale dell'animale, come appena dimostrato, e lasciare che il mouse si riprenda su una pastiglia riscaldante con monitoraggio, fino alla piena reclinabile. Una volta alla settimana, dalla settimana precedente alle 12 settimane dopo l'intervento chirurgico, misurare il peso corporeo di ogni animale fittizio e sperimentale su un equilibrio. Per la misurazione del colesterolo totale al plasma e del trigliceridi, alla settimana 12, preparare l'area ventrale del torace con il 70% di etanolo e inserire un ago calibro 25 nel ventricolo destro.
Aspirare lentamente, fino a quando un millilitro di sangue fluisce nella siringa, e erogare il campione in un tubo di raccolta da 1,5 millilitri contenente dieci microlitri di EDTA molare 0,5. Invertire il tubo più volte accuratamente per mescolare l'EDTA nel sangue e posizionare immediatamente il tubo sul ghiaccio. Entro 30 minuti dalla raccolta, centrifugare il campione per 20 minuti a 400 volte G e quattro gradi Celsius.
Raccogliere con cura il supernatante al plasma per la conservazione a meno 80 gradi Celsius. Per isolare l'aorta, alla settimana 12, attaccare un ago calibro 25 a una siringa da 50 millilitri riempita con PBS e inserire l'ago nel ventricolo sinistro dell'animale sperimentale. Tagliare l'atrio destro per evitare l'alta pressione dalla perfusione e perfondere il tessuto cardiaco a una velocità di flusso da 05 a 08 millilitri di PBS al minuto.
Assorbire il liquido perfusione con tessuti da laboratorio e utilizzare forbici e forcelle per rimuovere costole e polmoni. Aprire la cavità addominale per rimuovere gli organi interni, per una migliore visione dell'aorta. Afferrare il cuore con micro forcep per consentire la separazione dell'aorta dorsalmente, dalla colonna vertebrale, fino alla biforcazione iliaca.
Quindi fissare il cuore e l'aorta per 48 ore in paraformaldeide al 4%, prima di conservare il campione di tessuto in salina a temperatura ambiente o a due o otto gradi Celsius per alcune ore. Dopo dodici settimane di dieta ad alto colesterolo, i topi ovariectomizzati dimostrano un notevole aumento del colesterolo totale nel plasma e delle concentrazioni di trigliceridi. I topi ovariectomizzati, somministrati per via orale con estradiolo 17-beta, o PPD tramite diffusione di nocciole, presentano concentrazioni di colesterolo totale nel plasma significativamente inferiori rispetto ai topi a comando fittizio.
I livelli di trigliceridi plasmatiche diminuiscono nei topi ovariectomeizzati, somministrati per via orale con estradiolo 17-beta, ma non con PPD. Mentre si osserva una tendenza verso un aumento del peso corporeo nei topi ovariectomizzati, rispetto ai topi a farsa, nel complesso non si osservano cambiamenti significativi nel peso corporeo, tra i quattro gruppi di animali. La placca massima dell'aorta ascendente è aumentata nei topi ovariectomizzati, rispetto a tutti gli altri gruppi, insieme a una diminuzione complessiva della funzione cardiaca, osservata in questi animali.
Inoltre, la percentuale media di area di lesione aortica, rispetto all'intera area aortica, è significativamente aumentata nei topi ovariectomatici. Come previsto, la presenza di queste lesioni è diminuita con il trattamento con estradiolo 17-beta o PPD. Il rischio principale per l'operazione di ovariectomia è la legazione ureterale, che si traduce in un'alta mortalità.
Ricorda anche di tagliare profondamente vicino ai rami dell'arteria renale, per evitare danni aortici.
