Faltan modelos de laboratorio que involucren ratones con deficiencia de estrógeno que presenten datos de pons de arteriosclerosis. Este procedimiento es especialmente útil para la detección de tratamientos de estrógeno exógenos de la disfunción cardiovascular después de la menopausia. La principal ventaja de esta técnica es que la ovariectomía sin incisión dorsolateral doble es un método más fácil y que consume menos tiempo que evita la adherencia e inflamación graves de la cavidad abdominal.
Demostrando el procedimiento estará Yue-Zhang Yin, un estudiante graduado de mi laboratorio. Para realizar una ovariectomía bilateral en ratones knockout APOE, primero confirme una falta de respuesta al reflejo del pedal y coloque al animal en la posición propensa en una almohadilla de calentamiento. Aplicar ung ón en los ojos del animal y cubrir al animal con una cortina quirúrgica.
Haga una incisión de un centímetro lateral a la línea media, y un centímetro lateral a las costillas costales, y use fórceps para diseccionar sin rodeos el tejido subcutáneo. Usando gafas diseccionentas, identifique el tejido adiposo blanco en la cavidad abdominal. Usando micro tijeras y microppps, haga una incisión de 0.5 a un centímetro a través de la fascia, hasta que se alcance la cavidad abdominal, y use los micro fórceps para retraer suavemente el tejido adiposo blanco.
Se debe observar un ovario rosado en forma de morera, envuelto en tejido adiposo, dentro de la cavidad abdominal. Utilice una sutura de monofilamento para ligar el vaso proximal de 0,5 a un centímetro y el cuerno uterino, y utilice las micro tijeras para cosechar el ovario. Devuelva el tejido restante a la cavidad abdominal y utilice suturas monofilamento individuales para cerrar por separado las capas musculares y cutáneas.
A continuación, cosechar el ovario en el lado contralateral del animal, como acaba de demostrar, y permitir que el ratón se recupere en una almohadilla de calentamiento con monitoreo, hasta la recumbencia completa. Una vez a la semana, desde la semana anterior hasta las 12 semanas después de la cirugía, mida el peso corporal de cada sham y animal experimental en equilibrio. Para la medición plasmática total de colesterol y triglicéridos, en la semana 12, prepare el área ventral del tórax con 70% de etanol e inserte una aguja de calibre 25 en el ventrículo derecho.
Aspirar lentamente, hasta que un mililitro de sangre fluya hacia la jeringa, y dispensar la muestra en un tubo de recogida de 1,5 mililitros que contenga diez microlitros de 0,5 molares EDTA. Invierta el tubo varias veces a fondo para mezclar el EDTA en la sangre, e inmediatamente coloque el tubo sobre hielo. Dentro de los 30 minutos de recolección, centrifugar la muestra durante 20 minutos a 400 veces G y cuatro grados Celsius.
Recoja cuidadosamente el sobrenadante de plasma para almacenarlo a menos 80 grados centígrados. Para aislar la aorta, en la semana 12, coloque una aguja de calibre 25 en una jeringa de 50 mililitros llena de PBS e inserte la aguja en el ventrículo izquierdo del animal experimental. Corte la aurícula derecha para evitar la alta presión de la perfusión, y perfunda el tejido cardíaco a un 05 a 08 mililitros de PBS por minuto de caudal.
Absorber el líquido de perfusión con tejidos de laboratorio y utilizar tijeras y fórceps para eliminar las costillas y los pulmones. Abra la cavidad abdominal para extraer los órganos internos, para una mejor vista de la aorta. Agarre el corazón con micro fórceps para permitir la separación de la aorta dorsalmente, de la columna vertebral, hasta la bifurcación ilíaca.
A continuación, fije el corazón y la aorta durante 48 horas en 4%paraformaldehído, antes de almacenar la muestra de tejido en solución salina o a dos a ocho grados centígrados durante unas horas. Después de doce semanas de una dieta alta en colesterol, los ratones ovariectomizados demuestran un aumento notable en las concentraciones plasmáticas totales de colesterol y triglicéridos. Los ratones ovariectomizados, administrados por vía oral con estradiol 17-beta, o PPD a través de la propagación de avellanas, presentan concentraciones de colesterol total plasmática significativamente más bajas que los ratones operados por sham.
Los niveles de triglicéridos plasmáticos disminuyen en ratones ovariectomizados, por vía oral administrada con estradiol 17-beta, pero no con PPD. Mientras que se observa una tendencia hacia un aumento del peso corporal en ratones ovariectomizados, en comparación con ratones operados por sham, no se observan cambios significativos en el peso corporal en general, entre los cuatro grupos de animales. La placa máxima de la aorta ascendente se incrementa en ratones ovariectomizados, en comparación con todos los demás grupos, junto con una disminución general de la función cardíaca, observada en estos animales.
Además, el porcentaje medio del área de lesiones aórticas, en relación con toda el área aórtica, aumenta significativamente en ratones ovariectomizados. Como era de esperar, la presencia de estas lesiones se reduce con 17-beta de estradiol, o tratamiento con PPD. El principal riesgo para la operación de la ovariectomía es la ligadura ureteral, que resulta en una alta mortalidad.
También recuerde cortar profundamente cerca de las ramas de la arteria renal, para evitar daños aórticos.
