Лабораторные модели с участием эстрогена недостаточно мышей, представляя атеросклероз понс данных не хватает. Эта процедура особенно полезна для скрининга экзогенного эстрогена лечения сердечно-сосудистой дисфункции после менопаузы. Основным преимуществом этой методики является то, что яичникэктомия без двойного дорсолатерального разреза является более легким, менее трудоемким методом, который позволяет избежать тяжелой адгезии брюшной полости и воспаления.
Демонстрацией процедуры будет Yue-Чжан Инь, аспирант из моей лаборатории. Для выполнения двусторонней овязи в APOE нокаут мышей, сначала подтвердить отсутствие реакции на педаль рефлекс и поместить животное в положении склонны на грелку. Нанесите мазь на глаза животного и накройте животное хирургической драпировкой.
Сделайте один сантиметр разреза боковой к средней линии, и один сантиметр боковой к костальным ребрам, и использовать миппы, чтобы тупо вскрыть подкожной ткани. Используя рассечение очков, определите белую жировую ткань в брюшной полости. Используя микро-ножницы и микро-тибры, сделайте разрез на 0,5-1 сантиметр через фасцию до тех пор, пока не будет достигнута брюшная полость, и используйте микропостижки, чтобы аккуратно втянуть белую жировую ткань.
Розовый, шелковично-образный яичник, завернутый в жировую ткань, следует наблюдать в брюшной полости. Используйте монофиламентный шов, чтобы ligate 0,5 до одного сантиметра проксимального сосуда и рога матки, и использовать микро ножницы для сбора яичников. Верните оставшуюся ткань в брюшную полость и используйте отдельные монофильтрные швы, чтобы отдельно закрыть мышечные и кожные слои.
Затем урожай яичников на контралатеральной стороне животного, как только что продемонстрировано, и позволить мыши восстановиться на грелке с мониторингом, до полной лежачих. Раз в неделю, от недели до 12 недель после операции, измерять вес тела каждого фиктивного и экспериментального животного на балансе. Для измерения общего холестерина и триглицеридов плазмы, на 12 неделе, подготовить брюшной грудной клетки области с 70%этанола, и вставить 25-го калибра иглы в правый желудочек.
Аспират медленно, до тех пор, пока один миллилитр крови не впадает в шприц, и раздает образец в 1,5 миллилитровую трубку сбора, содержащую десять микролитров 0,5 моларной ЭДТА. Переверните трубку несколько раз тщательно, чтобы смешать ЭДТА в кровь, и сразу же поместить трубку на лед. В течение 30 минут после сбора, центрифуга образца в течение 20 минут при 400 раз G и четыре градуса по Цельсию.
Тщательно соберите плазменный супернатант для хранения при температуре минус 80 градусов по Цельсию. Чтобы изолировать аорту, на 12-й неделе прикрепите 25-калибровочный иглу к 50-миллилитровому шприцу, наполненному PBS, и вставьте иглу в левый желудочек экспериментального животного. Вырезать правое атриум, чтобы избежать высокого давления от перфузии, и perfuse сердечной ткани на 05 до 08 миллилитров PBS в минуту скорость потока.
Усваивать перфузиольной жидкости с лабораторными тканями и использовать ножницы и миппы для удаления ребер и легких. Откройте брюшную полость, чтобы удалить внутренние органы, для лучшего просмотра аорты. Возьмите сердце с микро типсов, чтобы разделение аорты dorsally, от позвоночника, до подвих бифуркации.
Затем исправить сердце и аорту в течение 48 часов в 4%paraformaldehyde, прежде чем хранить образец ткани в солевой при комнатной температуре или при температуре от двух до восьми градусов по Цельсию в течение нескольких часов. После двенадцати недель диеты с высоким содержанием холестерина, овязочные мыши демонстрируют значительное увеличение общего холестерина плазмы и концентрации триглицеридов. Овидэктомизированные мыши, на пераально вводят с 17-бета-эстрадиола, или PPD через фундук распространения, экспонат значительно ниже плазмы общей концентрации холестерина, чем фиктивные управляемых мышей.
Уровни триглицеридов в плазме снижаются у мышей, облеаированных в устной форме, вводимых с помощью 17-бета-эстрадиола, но не при PPD. В то время как тенденция к увеличению массы тела наблюдается у овязочные мыши, по сравнению с фиктивных мышей, никаких значительных изменений в массе тела не наблюдается в целом, между четырьмя группами животных. Максимальный налет восходящей аорты увеличивается у овязных мышей, по сравнению со всеми другими группами, в сочетании с общим снижением сердечной функции, наблюдается у этих животных.
Кроме того, средний процент области поражения аорты, по сравнению со всей областью аорты, значительно увеличивается у мышей- Как и ожидалось, наличие этих поражений снижается с 17-бета эстрадиола, или PPD лечения. Основным риском для операции по овязи является мочечная перевязка, что приводит к высокой смертности.
Также не забудьте разрезать глубоко вблизи почечной артерии ветвей, чтобы избежать повреждения аорты.
