Esses protocolos são importantes para estabelecer a integridade e o funcionamento normal do sistema autônomo para avaliar a funcionalidade autônoma do sistema nervoso e revelar distúrbios do sistema vestibular. Um déficit de funcionamento vestibular ou coordenação motora pode sinalizar danos ao sistema autônomo. Essas técnicas podem revelar a integridade do funcionamento autônomo.
As técnicas comportamentais podem ser suscetíveis a variabilidades introduzidas pelo experimentador. Recomendamos que o mesmo pesquisador conduza as técnicas durante todo o experimento e trate cada roedor de forma idêntica. Para análise de movimento vertical do elevador, coloque até quatro ratos de 200 a 250 gramas de dois meses de idade em uma caixa de plexiglass de 22,5 por 26 por 20 centímetros e forro a caixa com segurança.
Coloque a caixa na almofada do elevador de um dispositivo de movimento vertical do elevador e ligue o dispositivo na configuração mais baixa para aclimatação. Em seguida, defina a amplitude para 22 centímetros para cima e 22 centímetros para baixo do neutro e inicie o dispositivo com um período inicial de ciclo em 2.500 milissegundos por cinco minutos, 2.000 milissegundos por cinco minutos, e 1.500 milissegundos por cinco minutos. Em seguida, defina o dispositivo para 1.000 milissegundos por duas horas antes de desacelerar o dispositivo ao contrário usando períodos de 1.500 milissegundos por cinco minutos, 2.000 milissegundos por cinco minutos, e 2.500 milissegundos por cinco minutos.
Para um procedimento de rotação da roda gigante, coloque o recipiente de plexiglass em um banco de madeira e coloque os ratos no recipiente com o longo eixo de seus corpos perpendicular à haste de rotação horizontal da roda gigante. Depois de fechar a caixa com segurança, coloque um segundo conjunto de ratos com uma massa semelhante em um segundo recipiente de plexiglass com o longo eixo da carroceria perpendicular à haste de rotação horizontal no segundo braço do dispositivo de rotação da roda gigante. Depois de fechar a caixa com segurança, inicie a rotação da roda gigante em sentido horário a 16 graus por segundo ao quadrado para atingir uma velocidade angular de 120 graus por segundo.
Quando a roda gigante atingir a velocidade máxima, comece a desacelerar a 48 graus por segundo ao quadrado para atingir zero graus por segundo. Após uma pausa de um segundo, faça com que o recipiente continue a girar na direção anti-horário a 16 graus por segundo ao quadrado para atingir uma velocidade angular de 120 graus por segundo antes de desacelerar a 48 graus em segundo ao quadrado para atingir zero graus por segundo. Em seguida, continue a rotação no sentido horário-anti-horário por duas horas por sessão para aproximadamente 720 rotações.
Para o treinamento do feixe de equilíbrio, primeiro lugar dois bancos de madeira de 0,75 metros de altura no campo experimental aproximadamente 110 centímetros de distância. Coloque uma caixa de madeira de plástico 15 por 15 por oito centímetros na ferramenta de acabamento e coloque um feixe de madeira estreito de 2,5 por 130 centímetros entre os dois bancos deixando uma distância de 100 centímetros entre as bordas do banco do banco de partida até o banco de acabamento. Coloque uma lâmpada no banco de partida e ligue a lâmpada.
Em seguida, desligue a luz do quarto para que a sala fique o mais escura possível e introduza o primeiro rato ao feixe no canto iluminado. Se o rato não cruzar sua vontade, levemente solicitar que o animal cruze a viga. Após três dias consecutivos de treinamento, coloque o rato treinado no banco de partida perto da luz e inicie imediatamente um cronômetro.
O rato deve cruzar o feixe de equilíbrio rapidamente e entrar na caixa preta no banco de acabamento. Pare o cronômetro assim que o nariz do animal entrar na caixa escura no banco de acabamento. Para contar a defecação após o tratamento de movimento, transfira os ratos do recipiente de plexiglass para caixas de campo abertas individuais de 40 por 40 centímetros e conte o número de fezes de pelotas na caixa de plexiglass atribuídas a cada roedor.
Para um teste de comportamento de campo aberto, use uma câmera de vídeo infravermelha para gravar os animais por três minutos e use as imagens de vídeo resultantes para determinar a distância total percorrida para cada animal. Aqui, os resultados representativos do feixe de equilíbrio do tempo levado para atravessar a trave de equilíbrio após três dias consecutivos de treinamento são mostrados. Movimento vertical do elevador, mudanças no movimento vertical hertz, e rotação de rodas gigantes aumentaram significativamente a defecação.
Além disso, o movimento vertical do elevador, as mudanças no movimento vertical de Hertz e a rotação da roda gigante diminuíram significativamente a distância do campo aberto percorrida. O treinamento da viga de equilíbrio é fundamental, pois os ratos devem estar motivados e confiantes ao cruzar a trave. Caso contrário, seu saldo não será medido durante o período de avaliação.
Seguindo os procedimentos comportamentais, os efeitos de diferentes medicamentos de interesse no funcionamento autônomo e na sinalização celular podem ser avaliados utilizando-se esses ensaios de estimulação vestibular.
